RESUMEN
Phlorizin (PHZ) is one of the main pharmacologically active ingredients in Lithocarpus polystachyus. We have previously shown that PHZ inhibits the replication of bovine viral diarrhea virus (BVDV), but the exact antiviral mechanism, especially in vivo, is still unknown. Here, we further confirm that PHZ has good protective effects in BVDV-infected mice. We analyzed BVDV-induced CD3+, CD4+, and CD8+ T cells among peripheral blood lymphocytes and found that PHZ significantly restored their percentage. Metagenomic analyses revealed that PHZ markedly improved the richness and diversity of intestinal microbiota and increased the abundance of potentially health-related microbes (families Lachnosipiraceae, Ruminococcaceae, and Oscillospiraceae). Specifically, the relative abundance of short chain fatty acid (SCFA)-producing bacteria, including Lachnospiraceae_UCG-006, unclassified_f_Ruminococcaceae, Oscillibacter, Intestinimonas, Blautia, and Lachnoclostridium increased significantly after PHZ treatment. Interestingly, BVDV-infected mice that received fecal microbiota from PHZ-treated mice (PHZ-FMT) had a significantly lower viral load in the duodenum and jejunum than untreated mice. Pathological lesions of duodenum and jejunum were also greatly reduced in the PHZ-FMT group, confirming a significant antiviral effect. These findings show that gut microbiota play an important role in PHZ's antiviral activity and suggest that their targeted intervention might be a promising endogenous strategy to prevent and control BVDV.
Asunto(s)
Bacterias , Diarrea Mucosa Bovina Viral , Virus de la Diarrea Viral Bovina , Microbioma Gastrointestinal , Animales , Microbioma Gastrointestinal/efectos de los fármacos , Ratones , Bovinos , Bacterias/clasificación , Bacterias/aislamiento & purificación , Bacterias/genética , Bacterias/efectos de los fármacos , Virus de la Diarrea Viral Bovina/efectos de los fármacos , Antivirales/farmacología , Antivirales/administración & dosificación , Heces/microbiología , Heces/virología , Femenino , Ratones Endogámicos BALB C , MasculinoRESUMEN
Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is a widespread pathogen of cattle and other mammals that causes major economic losses in the livestock industry. N4-TSC and 6NO2-TSC are two thiosemicarbazones derived from 1-indanone that exhibit anti-BVDV activity in vitro. These compounds selectively inhibit BVDV and are effective against both cytopathic and non-cytopathic BVDV-1 and BVDV-2 strains. We confirmed that N4-TSC acts at the onset of viral RNA synthesis, as previously reported for 6NO2-TSC. Moreover, resistance selection and characterization showed that N4-TSCR mutants were highly resistant to N4-TSC but remained susceptible to 6NO2-TSC. In contrast, 6NO2-TSCR mutants were resistant to both compounds. Additionally, mutations N264D and A392E were found in the viral RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) of N4-TSCR mutants, whereas I261 M was found in 6NO2-TSCR mutants. These mutations lay in a hydrophobic pocket within the fingertips region of BVDV RdRp that has been described as a "hot spot" for BVDV non-nucleoside inhibitors.
Asunto(s)
Antivirales , Farmacorresistencia Viral , Genotipo , Indanos , Tiosemicarbazonas , Antivirales/farmacología , Antivirales/química , Animales , Bovinos , Tiosemicarbazonas/farmacología , Tiosemicarbazonas/química , Indanos/farmacología , Indanos/química , Farmacorresistencia Viral/genética , Virus de la Diarrea Viral Bovina Tipo 1/efectos de los fármacos , Virus de la Diarrea Viral Bovina Tipo 1/genética , Virus de la Diarrea Viral Bovina/efectos de los fármacos , Virus de la Diarrea Viral Bovina/genética , Línea Celular , ARN Polimerasa Dependiente del ARN/genética , ARN Polimerasa Dependiente del ARN/antagonistas & inhibidores , ARN Polimerasa Dependiente del ARN/metabolismo , Virus de la Diarrea Viral Bovina Tipo 2/genética , Virus de la Diarrea Viral Bovina Tipo 2/efectos de los fármacos , Replicación Viral/efectos de los fármacos , Mutación , ARN Viral/genéticaRESUMEN
ABSTRACT Bovine viral diarrhea virus can cause acute disease in livestock, leading to economic losses. We show that Prostaglandin A1 inhibits bovine viral diarrhea virus replication in Madin-Darby bovine kidney cells (94% inhibition using 5 µg/mL). Light and electron microscopy of infected cells shows that Prostaglandin A1 also prevents virus-induced vacuolization, but at higher concentrations (10 µg/mL).
Asunto(s)
Animales , Bovinos , Antivirales/farmacología , Prostaglandinas A/farmacología , Diarrea Mucosa Bovina Viral/virología , Virus de la Diarrea Viral Bovina/efectos de los fármacos , Antivirales/análisis , Prostaglandinas A/análisis , Replicación Viral/efectos de los fármacos , Diarrea Mucosa Bovina Viral/tratamiento farmacológico , Línea Celular , Virus de la Diarrea Viral Bovina/fisiología , Virus de la Diarrea Viral Bovina/genética , DiarreaRESUMEN
Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is an important cause of economic losses worldwide. E2 is an immunodominant protein and a promising candidate to develop subunit vaccines. To improve its immunogenicity, a truncated E2 (tE2) was fused to a single chain antibody named APCH, which targets to antigen-presenting cells. APCH-tE2 and tE2 proteins were expressed in the baculovirus system and their immunogenicity was firstly compared in guinea pigs. APCH-tE2 vaccine was the best one to evoke a humoral response, and for this reason, it was selected for a cattle vaccination experiment. All the bovines immunized with 1.5Ag of APCH-tE2 developed high levels of neutralizing antibodies against BVDV up to a year post-immunization, demonstrating its significant potential as a subunit vaccine. This novel vaccine is undergoing scale-up and was transferred to the private sector. Nowadays, it is being evaluated for registration as the first Argentinean subunit vaccine for cattle
El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) es causante de importantes pérdidas económicas a nivel mundial. La proteína E2 es la inmunodominante del virus y es la candidata para desarrollar vacunas de subunidad. Para mejorar su inmunogenicidad, una versión truncada de la E2 (tE2) se fusionó a un anticuerpo de cadena simple (APCH), que se dirige a las células presentadoras de antígeno. Se expresaron las proteínas APCH-tE2 y tE2 en el sistema de baculovirus y su inmunogenicidad fue evaluada y comparada en cobayos; la proteína APCH-tE2 fue la que indujo la mejor respuesta humoral. Por dicha razón se la evaluó en bovinos utilizando 1,5µg de antígeno. Los animales presentaron altos títulos de anticuerpos neutralizantes contra BVDV hasta un año posinmunización. Esta nueva vacuna está en proceso de escalado y se transfirió al sector privado. Actualmente se está evaluando para su registro como la primera vacuna argentina de subunidad para bovinos
Asunto(s)
Animales , Bovinos , Cobayas , Virus de la Diarrea Viral Bovina/inmunología , Vacunas de Subunidad/biosíntesis , Células Presentadoras de Antígenos/efectos de los fármacos , Baculoviridae/inmunología , Inmunización/veterinaria , Proteínas E2 de Adenovirus/inmunología , Virus de la Diarrea Viral Bovina/efectos de los fármacos , Anticuerpos Neutralizantes/análisisRESUMEN
Se realizó un estudio para evaluar la eficiencia de la espiramicina en el tratamiento de la diarrea causada por infecciones naturales de cryptosporidium parvum. Para ello se emplearon 48 terneros diarreicos, de los cuales 30 estaban infectados y 18 eran negativos al protozoo. Los infectados se distribuyeron en dos grupos: Grupo 1=20 terneros fueron tratados con espiramicina (20 mg/kg i.m., 2 aplic. cad 36 horas) y Grupo 2=10 terneros sometidos al tratamiento habitual de la lechería correspondiente. La mitad de los 18 negativos al protozoo fueron tratados con espiramicina (Grupo 3) y los 9 restantes (Grupo 4), recibieron el tratamiento convencional. La eficiencia del tratamiento se midió a través de la evolución de la diarrea y monitoreo de la presencia de ooquistes mediante observación de frotis de excrementos teñidos con Ziehl-Neelsen modificado, a los 2, 5 y 8 días post tratamiento (p.t). Se observaron diferencias significativas a los 2 y 5 días p.t. entre los 20 terneros tratados con espiramicina (Grupo 1) versus aquéllos que recibieron el tratamiento convencional (Grupo 2; p< 0,05). No hubo diferencia en el número de terneros diarreicos negativos a C. parvum del Grupo 3 y 4 (p> 0,05). La proporción de terneros que eliminaban ooquistes fue más baja en aquéllos tratados con espiramicina que los que recibieron el tratamiento convencional (p< 0,05). Se concluye que la espiramicina aunque no fue totalmente efectiva, ella demostró un mejor efecto que los tratamientos habituales para controlar en forma oportuna la diarrea del ternero causada por C. parvum