Development of a multilocus microsatellite typing approach for discriminating strains of Leishmania (Viannia) species.

A multilocus microsatellite typing (MLMT) approach based on the analysis of 15 independent loci has been developed for the discrimination of strains belonging to different Viannia species. Thirteen microsatellite loci were isolated de novo from microsatellite-enriched libraries for both Leishmania braziliensis and L. guyanensis. Two previously identified markers, AC01 and AC16, were modified and added to our marker set. Markers were designed to contain simple dinucleotide repeats flanked by the minimal possible number of nucleotides in order to allow variations in repeat numbers to be scored as size variations of the PCR products. The 15 markers in total were amplified for almost all of the strains of Viannia tested; one marker did not amplify from the two L. peruviana strains included in the study. When 30 strains of L. braziliensis, 21 strains of L. guyanensis, and 2 strains of L. peruviana were tested for polymorphisms, all strains except two strains of L. guyanensis had individual MLMT types. Distance-based analysis identified three main clusters. All strains except one strain of L. guyanensis grouped together. Two clusters consisted of strains of L. braziliensis according to their geographical origins. The two strains of L. peruviana grouped together with strains of L. braziliensis from Peru and the adjacent Brazilian state of Acre. MLMT has proven capable of individualizing strains even from the same areas of endemicity and of detecting genetic structures at different levels. MLMT is thus applicable for epidemiological and population genetic studies of strains within the subgenus Viannia.

Mucocutaneous leishmaniasis: knowledge, attitudes, and practices among paraguayan communities, patients, and health professionals.

Cutaneous leishmaniasis (CL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL) due to Leishmania (V.) braziliensis are endemic in Paraguay. We performed a series of knowledge, attitudes, and practice (KAP) surveys simultaneously with individuals in endemic communities in San Pedro department (n = 463), health professionals (n = 25), and patients (n = 25). Results showed that communities were exposed to high risk factors for transmission of L. braziliensis. In logistic regression analysis, age was the only factor independently associated with having seen a CL/MCL lesion (P = 0.002). The pervasive attitude in communities was that CL was not a problem. Treatment seeking was often delayed, partly due to secondary costs, and inappropriate remedies were applied. Several important cost-effective measures are indicated that may improve control of CL. Community awareness could be enhanced through existing community structures. Free supply of specific drugs should continue but ancillary support could be considered. Health professionals require routine and standardised provision of diagnosis and treatment algorithms for CL and MCL. During treatment, all patients could be given simple information to increase awareness in the community.

Comparative microsatellite typing of new world leishmania infantum reveals low heterogeneity among populations and its recent old world origin.

Leishmania infantum (syn. L. chagasi) is the causative agent of visceral leishmaniasis (VL) in the New World (NW) with endemic regions extending from southern USA to northern Argentina. The two hypotheses about the origin of VL in the NW suggest (1) recent importation of L. infantum from the Old World (OW), or (2) an indigenous origin and a distinct taxonomic rank for the NW parasite. Multilocus microsatellite typing was applied in a survey of 98 L. infantum isolates from different NW foci. The microsatellite profiles obtained were compared to those of 308 L. infantum and 20 L. donovani strains from OW countries previously assigned to well-defined populations. Two main populations were identified for both NW and OW L. infantum. Most of the NW strains belonged to population 1, which corresponded to the OW MON-1 population. However, the NW population was much more homogeneous. A second, more heterogeneous, population comprised most Caribbean strains and corresponded to the OW non-MON-1 population. All Brazilian L. infantum strains belonged to population 1, although they represented 61% of the sample and originated from 9 states. Population analysis including the OW L. infantum populations indicated that the NW strains were more similar to MON-1 and non-MON-1 sub-populations of L. infantum from southwest Europe, than to any other OW sub-population. Moreover, similarity between NW and Southwest European L. infantum was higher than between OW L. infantum from distinct parts of the Mediterranean region, Middle East and Central Asia. No correlation was found between NW L. infantum genotypes and clinical picture or host background. This study represents the first continent-wide analysis of NW L. infantum population structure. It confirmed that the agent of VL in the NW is L. infantum and that the parasite has been recently imported multiple times to the NW from southwest Europe.

Aplicación de la PCR para la detección de género y complejos de Leishmania en diferentes tipos de muestras biológicas / Application of PCR for detection of Leishmania genus and complexes in different types of biological samples

La leishmaniosis es una enfermedad producida por diferentes especies del protozoario Leishmania agrupados en complejos, es transmitida por flebótomos presentando una variedad de síntomas clínicos. La técnica reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permite amplificar regiones blanco específicas del género Leishmania y de los complejos Leishmania donovani y Leishmania braziliensis, directamente en muestras biológicas sin cultivos in vitro previo. En este estudio se realizó una evaluación descriptiva, durante el periodo 2001 a 2006, analizando 169 biopsias (piel y mucosas) y 31 aspirados de médula ósea en pacientes con sospecha clínica de leishmaniosis, además se evaluaron 44 muestras de bazo de caninos. Las muestras procedían de distintas zonas endémicas del país. Se detectó género Leishmania en el 71% de las biopsias (piel y mucosas), en 68% en los aspirados de médula ósea y en 82% de los bazos de caninos. Se identificó el complejo L. braziliensis en los pacientes con leishmaniosis cutánea y mucosa y el complejo L. donovani en pacientes con la forma visceral. Estos resultados han demostrado la utilidad de la técnica de PCR para la detección y caracterización de los parásitos de Leishmania en distintas muestras biológicas.

La prueba cutánea de la Candidina como control de Anergia en la reacción de Montenegro / Annual reports 1998 / The Candidin skin test as a control of anergy in the Montenegro test

En este estudio de un total de 185 paciente con Leishmaniasis Tegumentaria y otras patologías, dos manifestaron alergia en las pruebas. El hecho de haber demostrado en ellos este fenomeno de alergia, ha contribuido a su diagnóstico de Leishmaniasis. Aunque la selección de pacientes ha sido consecutiva, se revela una sensibilidad de la prueba del 98,9 por ciento

Caso de Leishmaniasis cutanea diseminada detectado en el distrito de Capiata / Annual reports 1997 / A case pf disseminated cutaneous Leishmaniasis detected in the Capiata district

Se presenta un caso poco frecuente de leihmaniasis cutánea en un individuo adulto, japonés, residente en una zona periférica de Capiatá, a la altura del km 24 de la ruta 2. El paciente presentaba diversas lesiones en distintas zonas del cuerpo. En todas ellas se identificaron amastigotes de Leihmania a través de frotis, biopsias y cultivo. También las pruebas indirectas (intradermorreacción de Montenegro e inmunofluorescencia indirecta para leishmaniasis) resultaron positivas. El paciente respondió eficazmente al tratamiento con antimoniales. De acuerdo a las características clínicas y resultados laboratoriales, estimamos que el caso, poco común, corresponde a una leishmaniasis cutánea diseminada por metástasis. Se plantea una discusión acerca del origen geográfico de la infección

Producción de anticuerpos policlonales / Policlonal antibody production / Annual reports 1998

El interés actual por técnicas inmunológicas para evaluación serológica en humanos con fines diagnòsticos, y el costo elevado de los reactivos de procedencias extrajera nos ha motivado a comunicar el proceso empleado en la producción de anticuerpos policlonales en el Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Para lo cual desarrollamos la obtención de anticuerpos anti-IgG humano, anti-Trypanosoma cruzi y antiToxoplasma gondii, por inmunización en cabras y purificación por cromatografía de intercambio iónico en Dietilaminoetil Celulosa. Se considera como esquema óptimo de inmunización un periodo de seis meses, con refuerzos periódicos mensuales y uno final de mayor concentración de inmunógeno, previo al sangrado total de las cabras. Esto se recomienda comparando los resultados obtenidos con los esquemas de inmunización 4 y 6 meses realizados en el presente trabajo. Se obtuvieron inmunoglobulinas especificas con este protocolo, de manera a utilizarlos con distintos propósitos como son la producción de reactivos de Inmunoenzimáticos para T. cruzi y T. gondii, así como también en preparación de inmunoconjugados para usos en inmunofluorescencia. Esto nos llevó a desarrollar técnicas que en esta primera etapa nos servirá para aumentar y mantener la producción de reactivos del IICS. Al mismo tiempo elaborar nuevos anticuerpos que serán utilizados en el desarrollo de métodos de captura de IgM para detección de T. cruzi y T. gondii en fase aguda