Hydroxyurea (hydroxycarbamide) genotoxicity in pediatric patients with sickle cell disease.

BACKGROUND: Hydroxyurea (HU) reduces the severity of sickle cell disease (SCD) in children; nevertheless, its long-term safety is an important concern. This paper evaluates HU genotoxicity at dose ≤ 30 mg/kg/day after over 2 years of treatment. PROCEDURE: The study included 76 children: 32 SCD patients treated with HU, 27 SCD patients not treated with HU, and 17 unaffected children. HU patients were classified as good or poor responders according to their clinical response. Comet assay allows the comparison of DNA damage between both groups of patients and unaffected children. Maximal concentration (Cmax ) of HU in plasma was determined after drug administration. RESULTS: Mean values of DNA in the comet tail were 5.13 ± 6.84 for unaffected children, 5.80 ± 7.78 for patients with SCD treated with HU, and 5.61 ± 6.91 for patients with SCD not treated with HU. Significant differences were observed between unaffected children and children with SCD. No difference was evident between comets from SCD patients treated and not treated with HU. In the case of HU, mean DNA in the comet tail was significantly lower in good responders than in poor responders: 5.54 ± 7.77 and 6.69 ± 8.43, respectively. Mean Cmax value on plasma was 39.08 ± 15.65 mg/l; N = 31. CONCLUSIONS: SCD increases, slightly but significantly, DNA damage in lymphocytes from patients with SCD. Patients with SCD treated with HU do not present more nucleoid damage than patients with SCD not treated with HU. Good responders to the HU treatment have significantly less nucleoid damage than poor responders. HU treatment at ≤30 mg/kg/day does not expose patients to a genotoxic plasma concentration.

Two assays to evaluate potential genotoxic effects of hydroxyurea in sickle cell disease patients.

Hydroxycarbamide, well known in clinical settings as hydroxyurea (HU), is an antineoplastic agent inhibiting the ribonucleotide reductase enzyme, and thus, the conversion of ribonucleotides into deoxyribonucleotides. A concern about long term side effects of HU treatment in sickle cell disease patients, particularly genotoxicity, has often been evoked. The present study assessed two suitable methods to evaluate oxidative DNA damage associated with HU: the comet assay on blood lymphocytes and the quantification of urinary excretion of 8-oxodeoxyguanosine (8-oxodG). Both methods were applied in a preliminary study including seven sickle cell disease patients treated with HU, seven untreated sickle cell disease patients and five healthy volunteers. Concerning DNA damage, the comet assay and the 8-oxodG assay did not reveal any significant differences among the three groups. Methodologies used in this pilot study could be suitable to carry out further research in this area including a larger size sample setting.

Influencia de diferentes factores en el crecimiento de bacterias endófitas de caña de azúcar / Influence of different factors in the growth of endophytic bacteria of sugarcane

En Cuba, entre los esfuerzos por lograr la sostenibilidad en la agricultura se han empleado biopreparados a gran escala, los cuales han tenido un gran impacto económico, ecológico y social. La caña de azúcar constituye uno de los principales cultivos agrícolas para nuestro país y tiene gran importancia desde los puntos de vista económico y ecológico a nivel mundial. En el presente trabajo se demostró el efecto de diferentes fuentes de carbono y nitrógeno en el crecimiento de 5 cepas endófitas de caña de azúcar, 3 de Gluconacetobacter diazotrophicus, una de Bacillus licheniformis y una de Enterobacter agglomerans. De igual forma, se estudió la influencia de jugos provenientes de cinco variedades, así como diferentes concentraciones de las fitohormonas ácido 3 indolacético (AIA) y ácido giberélico (GA) en el crecimiento. Se demostró que la asparagina y el sulfato de amonio como fuentes de nitrógeno adicionadas al medio LGI posibilitan un mayor crecimiento de las bacterias endófitas estudiadas. El medio LGI suplementado con jugo de caña de azúcar favorece significativamente (p≤0,05) el crecimiento de los microorganismos endófitos y no existe relación directa entre el origen varietal del jugo y de las cepas. Por otra parte las fitohormonas en bajas concentraciones favorecieron el crecimiento, no ocurriendo así cuando se encuentran a elevadas concentraciones en el medio de cultivo. Es necesario estudiar todos los factores que pueden influir en la interacción entre la planta y los endófitos para poder utilizar sus potencialidades como promotores del crecimiento vegetal.

Among the efforts done in Cuba to the sustainability in the agricultural system, one of them is the use of bioproducts, which have a relevant economic, ecological and social impact. The sugarcane is one of main crops in our country and it has a great importance at world level. In the present work is demonstrated the effect of different carbon and nitrogen sources in the growth of 5 entophytic bacteria (three of Gluconacetobacter diazotrophicus, one of Bacillus licheniformis and one of Enterobacter agglomerans) were demonstrated. As the same form are studied the influence of juices from five varieties, as well as, different concentrations of fitohormones indole3acetic acid and giberelic acid on the growth. Was demonstrated that asparagine and ammonium sulfate as nitrogen sources added to LGI medium enhance the growth a major growth of the studied endophytic bacteria. The LGI medium supplied with juices of sugarcane enhance the growth of microorganisms (p≤0,05) and don't exist any relationships among the origin of the juice and the strains. On the other hand, the fitohormones at low concentrations don't affect the growth but at high levels of these hormones inhibit the growth. It's necessary to study the factors that have influence on the interaction between the plant and endophytes to use their potentialities as plant growth promoters.

Relación de la fijación de nitrógeno y la producción de auxinas en cepas de Gluconacetobacter dizotrophicus / Relationships between nitrogen fixation and auxins production in Gluconacetobacter diazotrophicus strains from different crops

Se determinó la capacidad de fijar nitrógeno mediante la actividad reductora de acetileno para 8 cepas de G. diazotrophicus aisladas de diferentes ecosistemas empleando el medio LGI-P. Además, se determinó la producción de auxinas a través del método de Salkowski y se analizó la influencia del aminoácido triptófano y del AIA en la actividad de la nitrogenasa. El triptófano, al igual que otros aminoácidos y las diferentes concentraciones de AIA, inhiben en distinta medida la actividad de la enzima solo parcialmente. Se demostró que las condiciones de nitrofijación no afectan la producción de AIA en esta bacteria. Esta relación entre ambas capacidades fisiológicas beneficiosas para los cultivos agrícolas pudiera tener gran importancia ya que pueden desarrollarse paralelamente, y potenciar la acción beneficiosa hacia la planta, basada en la dinitrofijación y la producción de auxinas estimuladoras del crecimiento vegetal.

The capacity to fix nitrogen of 8 strains of G. diazotrophicus from different ecosystems was determined by acetylene reduction assay using LGIP medium. Moreover, auxins production was determined by Salkowski’s method and the influence of triptophan and indoleacetic acid (IAA) in the nitrogenase activity were analyzed. The triptophan as other aminoacids and different concentrations of IAA, inhibit at different levels the nitrogen fixation only partially. There were demonstrated that the nitrogen fixation conditions do not affect the auxins production of this bacteria. This relationship between both crop beneficial physiological capacities should be a great importance since they may be parallely developed, and enhance the beneficial action to the plant, based on dinitrogen fixation and stimulating plant growth auxins production.

Normalización de técnicas inmunohistoquímicas para la detección de antígenos del virus dengue en tejidos embebidos en parafina / Standarization of immunohistochemical techniques for the detection of dengue virus antigens in paraffin-embedded tissues

Las técnicas inmunohistoquímicas (IHQ) pueden ser de gran utilidad para la detección de antígenos del virus del dengue en tejidos infectados. En este trabajo se muestran los resultados obtenidos con el empleo de 2 métodos IHQ: uno directo y otro indirecto amplificado con un anticuerpo universal biotinilado y un sistema estreptavidina peroxidasa (LSAB) (en ambos se utiliza la enzima peroxidasa). Estos métodos fueron aplicados en tejidos embebidos en parafina procedentes de ratones inoculados intracerebralmente con el virus del dengue. El objetivo es contar con una técnica en el laboratorio que permita identificar estos antígenos en los tejidos para ser aplicados en el diagnóstico y los estudios relacionados con la obtención de inmunógenos

Detección de micobacterias en muestras clínicas mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa / Detection by polimerase chain reaction of mycobacteria in clinical samples

Introducción. Las micobacteriosis constituyen un importante problema de salud a nivel mundial, siendo aún mayor en pacientes con el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). En este trabajo utilizamos la Reacción en Cadena de la Polimerasa (RCP) para el diagnóstico de las principales micobacteriosis, y comparamos los resultados obtenidos con los del diagnóstico convencional.Material y métodos. Se procesaron cepas controles y 15 muestras: 14 esputos y 1 líquido cefalorraquídeo provenientes de pacientes con sospecha clínica de tuberculosis. El procesamiento de las muestras para la RCP se realizó por calentamiento. Se emplearon oligonucleótidos que amplifican un fragmento del gen de la proteína de 65 kDa de los complejos Mycobacterium tuberculosis y Mycobecterium avium intracellulare (MAI).Resultados. Ocho muestras resultaron positivas a la RCP revelada por electroforesis sobre gel de agarosa, y 7 resultaron negativas. Los resultados de la RCP y del cultivo micobacteriológico coincidieron en 10 casos.Discusión. La RCP es una técnica que reduce a horas el tiempo de diagnóstico de micobacteriosis.