Identifying human pre-mRNA cleavage and polyadenylation factors by genome-wide CRISPR screens using a dual fluorescence readthrough reporter.

Messenger RNA precursors (pre-mRNA) generally undergo 3' end processing by cleavage and polyadenylation (CPA), which is specified by a polyadenylation site (PAS) and adjacent RNA sequences and regulated by a large variety of core and auxiliary CPA factors. To date, most of the human CPA factors have been discovered through biochemical and proteomic studies. However, genetic identification of the human CPA factors has been hampered by the lack of a reliable genome-wide screening method. We describe here a dual fluorescence readthrough reporter system with a PAS inserted between two fluorescent reporters. This system enables measurement of the efficiency of 3' end processing in living cells. Using this system in combination with a human genome-wide CRISPR/Cas9 library, we conducted a screen for CPA factors. The screens identified most components of the known core CPA complexes and other known CPA factors. The screens also identified CCNK/CDK12 as a potential core CPA factor, and RPRD1B as a CPA factor that binds RNA and regulates the release of RNA polymerase II at the 3' ends of genes. Thus, this dual fluorescence reporter coupled with CRISPR/Cas9 screens reliably identifies bona fide CPA factors and provides a platform for investigating the requirements for CPA in various contexts.

An Examination of Utilization Rates Over Time of Nerve and Tendon Transfers in Canada to Improve Upper Limb Function in Cervical Spinal Cord Injury.

Introduction: Upper limb function loss in cervical spinal cord injury (SCI) contributes to substantial disability, and negatively impacts quality of life. Nerve transfer and tendon transfer surgery can provide improved upper limb function. This study assessed the utilization of nerve and tendon transfer surgery for individuals with tetraplegia in Canada. Methods: Data from the Canadian Institute for Health Information's Discharge Abstracts Database and the National Ambulatory Care Reporting System were used to identify the nerve and tendon transfer procedures performed in individuals with tetraplegia (2004-2020). Cases were identified using cervical SCI ICD-10-CA codes and Canadian Classification of Intervention codes for upper extremity nerve and tendon transfers. Data on sex, age at time of procedure, province, and hospital stay duration were recorded. Results: From 2004 to 2020, there were ≤80 nerve transfer procedures (81% male, mean age 38.3 years) and 61 tendon transfer procedures (78% male, mean age 45.0 years) performed (highest in Ontario and British Columbia). Using an estimate of 50% eligibility, an average of 1.3% of individuals underwent nerve transfer and 1.0% underwent tendon transfer. Nerve transfers increased over time (2004-2009, n = <5; 2010-2015, n = 27; 2016-2019, n = 49) and tendon transfers remained relatively constant. Both transfer types were performed as day-surgery or single night stay. Conclusions: Nerve and tendon transfer surgery to improve upper limb function in Canadians with tetraplegia remains low. This study highlights a substantial gap in care for this vulnerable population. Identification of barriers that prevent access to care is required to promote best practice for upper extremity care.

Introduction : La perte de fonction du membre supérieur en cas de lésion de la moelle épinière cervicale (SCI0 contribue à un handicap substantiel avec des répercussions négatives sur la qualité de vie. La chirurgie de transfert des nerfs et des tendons peut apporter une amélioration du fonctionnement du membre supérieur. Cette étude a évalué l'utilisation de la chirurgie de transfert de nerfs et de tendons pour les patients tétraplégiques au Canada. Méthodes : Des données issues de la base de données des résumés de congés de l'Institut canadien d'information sur la santé du système national d'information sur les soins ambulatoires ont été utilisées pour identifier les procédures de transfert de nerfs et de tendons pratiquées sur des patients tétraplégiques entre 2004 et 2020. Les cas ont été identifiés en utilisant les codes de SCI cervicales du CIM-10-CA et des codes canadiens de classification des interventions pour les transferts de nerfs et de tendons du membre supérieur. Les données sur le sexe et l'âge au moment de la procédure, la province et la durée de séjour à l'hôpital ont été consignées. Résultats : Entre 2004 et 2020, il y a eu ≤ 80 procédures de transferts de nerfs (hommes : 81 %, âge moyen : 38,3 ans) et 61 procédures de transfert de tendons (hommes : 78 %, âge moyen : 45,0 ans) pratiquées (principalement en Ontario et en Colombie-Britannique). En estimant une admissibilité de 50 %, une moyenne de 1,3 % des patients a subi un transfert de nerfs et 1,0 % des patients a subi un transfert tendineux. Les transferts de nerfs ont augmenté au fil des années (2004-2009, n = < 5; 2010-2015, n = 27; 2016-2019, n = 49) tandis que le nombre de transferts tendineux est resté relativement stable. Les deux types de transferts ont été pratiqués das le cadre de la chirurgie d'un jour ou avec une hospitalisation d'une seule nuit. Conclusions : La chirurgie de transfert de nerfs et de tendons pour l'amélioration des fonctions des membres supérieurs reste peu utilisée pour les Canadiens tétraplégiques. Cette étude souligne une lacune substantielle des soins pour cette population vulnérable. Il est nécessaire d'identifier les obstacles qui empêchent l'accès aux soins afin de promouvoir une meilleure pratique pour les soins du membre supérieur.