Generation and Characterization of Murine Monoclonal Antibodies anti-PBP2a of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus.

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is a multidrug-resistant bacterium that causes serious infections worldwide. This pathogen is resistant to all beta lactam antibiotics due the presence of PBP2a, a transpeptidase enzyme that presents very low beta-lactam affinity. Here we report the generation and characterization of mouse monoclonal antibodies to PBP2a of MRSA strains. Two clones were obtained and characterized by immunoassays (ELISA, avidity index determination, and immunoblotting), isotyping, association/dissociation rate constants by surface plasmon resonance (SPR), and flow cytometry. Clone 38, which showed the best avidity and affinity, bound to PBP2a located on the bacterial surface by flow cytometry. Further studies are warranted in order to evaluate if these antibodies may help inhibit bacterial growth and be used to treat infections by MRSA.

Avaliaçåo de testes sorológicos aplicados para a detecçåo de infecçåo pelo Trypanosoma cruzi / Evaluation of sorological tests applied for the detection of Trypanosoma cruzi infection

Diferentes testes sorológicos foram avaliados frente a um painel de 235 soros de indivíduos residentes em área endêmica para doença de Chagas (Virgem da Lapa, M.G.). Foram utilizadas como testes de referência a imunofluorescência indireta (IFI) e a hemaglutinaçåo indireta (Chagas-HAI-Imunserum), os quais definiram 160 (68 por cento) soros positivos para o T. cruzi e 75 (32 por cento) negativos. A partir desses resultados, foi avaliado o teste de HAI da Biolab (Hemacruzi), onde se observou discordância de resultados em 5 amostras de soros positivos. A seguir foram avaliados 3 ensaios imunoenzimáticos indiretos: 2 de origem comercial (Hemobio-Chagas da Empresa Brasileira de Biotecnologia e Biozima-Chagas da Biótica) e um desenvolvido em nosso laboratório (ELISA-IM-UFRJ-Chagas). Os três testes apresentaram alta sensibilidade, sendo que somente o ensaio Biozima-Chagas deixou de detectar um soro positivo. A especificidade dos diferentes testes foi avaliada com as 75 amostras de soros de indivíduos nåo infectados pelo T. cruzi, oriundos de área endêmica e com 37 amostras de soros de indivíduos oriundos de regiöes nåo endêmicas, com outras afecçöes. Os testes de IFIe de HAI (Chagas HAI-Imunoserum e Hemacruzi) apresentaram, respectivamente, uma especificidade de 94 por cento, 99 por cento e 100 por cento, sendo que, este último foi avaliado somente em relaçåo aos soros de indivíduos nåo infectados pelo T. cruzi, oriundos de área endêmica. Entre os ensaios imunoenzimáticos indiretos, o IM-UFRJ-Chagas apresentou menor índice de especificidade (90 por cento). Já nos testes comerciais (Hemobio-Chagas e Biozima-Chagas) foram encontrados alguns resultados positivos somente entre as amostras de soros de indivíduos com leishmaniose viceral e cutânea, demonstrando-se, respectivamente, 96 por cento e 95 por cento de especificidade. Foi determinado o índice Kappa de cada teste. Aplicando-se esta análise nåo foi possível determinar diferenças significativas entre os testes, já que todos apresentaram elevada eficiência com valores de índice Kappa maiores do que 0,90