Evaluación de cuatro métodos rápidos para la investigación de la capacidad toxigénica de las cepas de clostridium difficile aisladas en un medio selectivo / Evaluation of four rapid methods for the investigation of the toxigenic capacity of Clostridium difficile strains isolated in a selective medium

RESUMEN

Fundamento: El diagnóstico por cultivo de la enfermedad asociada a Clostridium difficile requiere confirmar la capacidad toxigénica de los aislamientos. La técnica de referencia es la detección de la citotoxina por cultivo celular tras el crecimiento del microorganismo durante 3-5 días en medio líquido, implicando una demora en el diagnóstico final. En este estudio, se comparan de forma retrospectiva 4 métodos rápidos para la investigación de la toxigenicidad in vitro de las cepas de C. difficile. Métodos: Se han utilizado 106 aislamientos clínicos de C. difficile (72 toxigénicos y 34 no toxigénicos), y 16 de otras especies de Clostridium. Los cuatro métodos se llevaron a cabo directamente a partir de las colonias aisladas en medio sólido. Los métodos evaluados fueron: a) detección directa de la citotoxina; b) dos técnicas de amplificación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de los genes codificantes de toxina A y B, respectivamente, y c) detección de la toxina A por enzimoinmunoanálisis (VIDAS CDA2). En todos ellos, el tiempo total de procesamiento fue inferior al de una jornada laboral. Resultados: Sólo las 72 cepas de C. difficile toxigénicas mostraron resultados positivos por cultivo celular y por las técnicas de PCR (sensibilidad y especificidad del 100 por ciento). En cuanto a la técnica de VIDAS, hubo 14 resultados falsos negativos entre las 49 cepas de C. difficile toxigénicas investigadas, aunque todas estas cepas fueron positivas en pruebas repetidas. Conclusiones: Aunque todos los métodos fueron eficaces, la detección de citotoxina directa de colonias es una técnica sencilla, rápida y adecuada para aquellos laboratorios que dispongan de cultivos celulares (AU)