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1.
Arq. bras. med. vet. zootec ; 69(2): 391-397, mar.-abr. 2017. tab
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-833836

RESUMO

With the objective of detecting the presence of caprine lentivirus (CLV) in ewe milk and in ram semen, ten matrixes and four reproducers experimentally infected with CLV were used. Samples of ewe milk were collected during the four months of lactation, five collections per animal, totaling 50 samples. Regarding the rams, eight semen collections were made per animal, during one year of experimentation, totaling 32 samples. The milk and semen samples were submitted to DNA extraction and the nested polymerase chain reaction test (nPCR) to detect CLV proviral DNA. Eight (16%) of the milk samples were positive in nPCR originating from two ewes. Only one (3.12%) semen sample was positive. The amplification products were sequenced, and were confirmed to be a CLV genomic sequence. Thus, the presence of CLV proviral DNA in sheep milk and semen was demonstrated, confirming the feasibility of infection between species, and alerting to the risk of spreading infections.(AU)


Com o objetivo de detectar a presença do lentivírus caprino (LVC) no leite de ovelhas e no sêmen de carneiros, utilizaram-se 10 matrizes e quatro reprodutores infectados experimentalmente com o LVC. Foram coletadas amostras de leite das ovelhas durante os quatro meses de lactação, ocorrendo cinco coletas por animal, totalizando 50 amostras. Quanto aos carneiros, realizaram-se oito coletas de sêmen por animal, durante um ano de experimentação, totalizando 32 amostras. As amostras de leite e de sêmen foram submetidas à extração de DNA e à prova de reação em cadeia da polimerase do tipo nested (nPCR) visando à detecção de DNA proviral do LVC. Oito (16%) amostras de leite foram positivas na nPCR oriundas de duas ovelhas. Apenas uma (3,12%) amostra de sêmen apresentou positividade. Produtos da amplificação foram sequenciados, confirmando-se tratar de sequência genômica do LVC. Dessa forma, demonstrou-se a presença do DNA proviral do LVC em leite e sêmen de ovinos, confirmando a viabilidade da infecção entre espécies e, assim, alertando sobre o risco de que a infecção seja disseminada.(AU)


Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Lentivirus/isolamento & purificação , Leite/virologia , Ruminantes/virologia , Sêmen/virologia , Transmissão de Doença Infecciosa/veterinária , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária
2.
Braz. j. microbiol ; 48(1): 125-131, Jan.-Mar. 2017. graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: biblio-839349

RESUMO

Abstract Small ruminant lentiviruses isolated from peripheral blood leukocytes and target organs can be propagated in vitro in fibroblasts derived from goat synovial membrane cells. These cells are obtained from tissues collected from embryos or fetuses and are necessary for the establishment of the fibroblast primary culture. A new alternative type of host cells, derived from goat umbilical cord, was isolated and characterized phenotypically with its main purpose being to obtain cell monolayers that could be used for the diagnosis and isolation of small ruminant lentiviruses in cell culture. To accomplish this goal, cells were isolated from umbilical cords; characterized phenotypically by flow cytometry analysis; differentiate into osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineage; and submitted to viral challenge. The proliferation of goat umbilical cord cells was fast and cell monolayers formed after 15 days. These cells exhibited morphology, immunophenotype, growth characteristics, and lineage differentiation potential similar to mesenchymal stem cells of other origins. The goat umbilical cord derived cells stained positive for vimentin and CD90, but negative for cytokeratin, CD34 and CD105 markers. Syncytia and cell lysis were observed in cell monolayers infected by CAEV-Cork and MVV-K1514, showing that the cells are permissive to small ruminant lentivirus infection in vitro. These data demonstrate the proliferative competence of cells derived from goat umbilical cords and provide a sound basis for future research to standardize this cell lineage.


Assuntos
Animais , Cordão Umbilical/citologia , Lentivirus/fisiologia , Células-Tronco Mesenquimais/virologia , Osteogênese , Replicação Viral , Técnicas In Vitro , Cabras , Biomarcadores , Diferenciação Celular , Células Cultivadas , Imunofenotipagem , Técnicas de Cultura de Células , Condrogênese , Efeito Citopatogênico Viral , Adipogenia , Células-Tronco Mesenquimais/citologia , Células-Tronco Mesenquimais/metabolismo , Células-Tronco Mesenquimais/patologia
3.
Arq. Inst. Biol ; 84: e0552016, 2017. mapas
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-887857

RESUMO

Small ruminant lentiviruses, caprine arthritis encephalitis virus, and Maedi-Visna virus cause diseases that result in significant productive losses, mostly in dairy animals. These viruses belong to the Retroviridae family, Lentivirus genus, and constitute a heterogeneous group, which may generate implications for the diagnosis and control of small ruminant lentiviruses. Losses caused by them are associated with reproductive failure, short productive life, and decreased milk production by the infected animals. In addition, these viruses may reduce milk quality, affecting the production of dairy products such as cheese. Small ruminant lentiviruses lead to indirect losses, decreasing herd value and forcing the development of epidemiological trade barriers for animal germplasm. Control of small ruminant lentiviruses is important to promote optimal milk production and to reduce costs with medicine and technical assistance. This control may vary in caprine and ovine populations of each country, according to seroprevalence, variety of breeds, and peculiarities of the practiced management.(AU)


Os lentivírus de pequenos ruminantes, o vírus da artrite encefalite caprina e o vírus Maedi-Visna causam enfermidades que ocasionam perdas produtivas significativas, principalmente em animais com aptidão leiteira. Esses vírus pertencem à família Retroviridae e ao gênero Lentivirus e formam um grupo genético heterogêneo, o que pode ocasionar implicações para o diagnóstico e o controle dos lentivírus de pequenos ruminantes. As perdas causadas pelos lentivírus de pequenos ruminantes estão relacionadas com falhas reprodutivas, vida produtiva curta e diminuição da produção leiteira dos animais infectados. Além disso, esses vírus podem promover a redução da qualidade do leite, afetando a produção de laticínios, tal como o queijo. Os lentivírus de pequenos ruminantes levam a perdas indiretas, reduzindo o valor dos rebanhos e forçando o desenvolvimento de barreiras comerciais epidemiológicas para germoplasma animal. O controle dos lentivírus de pequenos ruminantes é importante para promover uma maior produção de leite e reduzir os custos com medicamentos e assistência técnica. Esse controle pode variar de acordo com a população caprina e ovina de cada país em termos de soroprevalência, variedade de raças e particularidades do manejo adotado.(AU)


Assuntos
Animais , Ruminantes , Vírus Visna-Maedi , Vírus da Artrite-Encefalite Caprina , Lentivirus , Controle , Leite , Agroindústria
4.
Rio de Janeiro; s.n; 2016. ilus.
Tese em Português | LILACS, Inca | ID: biblio-943281

RESUMO

Integrinas são proteínas envolvidas na migração e adesão celular. Estudos recentes mostraram que a integrina α4β7 interage com a proteína gp120 do HIV-1, auxiliando a entrada do vírus na célula hospedeira através de sinapses virológicas. Já foi demonstrada uma maior prevalência do genótipo C-C do SNP rs1449263, localizado na região promotora do gene itga4 (que codifica a subunidade α4 da integrina), em pacientes com esclerose múltipla. Estes pacientes apresentam uma alta expressão de integrina, sugerindo o envolvimento deste SNP na superexpressão da mesma. A interação de α4β7 com seu ligante natural, MAdCAM, pode ser uma importante fonte de estímulo, capaz de gerar sinais intracelulares culminando com a ativação de linfócitos T. Diversos estudos tem avaliado o papel da integrina α4β7 na transmissão do HIV em mucosas, bem como a utilização de anticorpos bloqueadores desta proteína como novas terapias para prevenção e tratamento da infecção. Neste sentido, a utilização de primatas não-humanos como modelos de estudo da infecção por SIV/HIV é de suma importância e utilidade. Neste estudo, avaliamos a prevalência dos diferentes genótipos do SNP rs1449263 e o perfil de expressão da integrina α4 em indivíduos de três coortes diferentes que compreendem adultos HIV+ e HIV-, e em crianças HIV+ ou expostas ao vírus e não-infectadas. A partir de PBMCs foram isolados DNA genômico e RNA para a avaliação dos genótipos encontrados e expressão relativa dos genes itga4, itgb7 e itgae. Esta última pode também se ligar a subunidade β7 e competir com α4. Não foram observadas associações entre os genótipos e alelos do SNP estudado e a aquisição do HIV ou progressão para a Aids...


Integrins are transmembrane glycoproteins found in many vertebrate cell types. Recent studies show that HIV gp120 can bind the α4β7 integrin, providing a favorable environment for virus transmission between cells. α4β7 is a homing molecule to the gut-associated lymphocyte tissue (GALT). This protein has an important role during the initial course of HIV infection, since intense viral replication and lymphocyte depletion is observed in the GALT during this phase. A higher prevalence of the C-C genotype in the SNP rs1449263, located in the promoter region of the itga4 gene (that encodes α4 integrin), has been shown in multiple sclerosis patients, possibly related to a higher expression of this gene. The interaction between α4β7 and its natural ligand MAdCAM can lead to cell activation, promoting proliferation of T lymphocytes. Several studies highlight the role of α4β7 in the mucosal transmission of HIV as well as its possible use as a target for HIV prevention and antiviral therapy. Studies with non-human primates are useful in this field, as these animals have similarities with humans and can be infected with SIV. In the present study, we assessed the prevalence of different SNP rs1449263 genotypes in three different cohorts harboring HIV+ and HIV- adults, as well as HIV+ or exposed-uninfected children. SNP genotyping and gene expression analysis were carried out from DNA and RNA isolated from PBMCs. No association between SNP genotype and HIV acquisition or progression to AIDS was observed in the cohorts. With respect to itga4, itgb7 (β7) and itgae (αE) gene expression, a higher level of itga4 mRNA was observed in allele C carriers, compared to non-carriers...


Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , HIV , Integrinas , Lentivirus , Membrana Mucosa
5.
Arq. Inst. Biol ; 83: e0462015, 2016. tab
Artigo em Português | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1006868

RESUMO

A soroprevalência da infecção por lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR) foi determinada em amostras de soros sanguíneos de caprinos e ovinos de aptidão cárnea provenientes de abatedouros de dez municípios do estado de Pernambuco, Brasil. O diagnóstico sorológico ocorreu por meio da imunodifusão em gel de agarose (micro-IDGA) com antígenos dos vírus artrite encefalite caprina (CAE)/Maedi-Visna. Entre as 369 amostras de caprinos, 7(1,89%) (0,8-3,9%) eram soropositivas, e, entre as 383 de ovinos, 1 (0,26%) (0,0-1,4%) estava infectada. Os 7 caprinos soropositivos procederam dos abatedouros públicos dos municípios de Gravatá (n=2), Sertânia (n=4) e Timbaúba (n=1), e o ovino soropositivo veio do abatedouro público de Serra Talhada. A soroprevalência da infecção por LVPR em pequenos ruminantes oriundos de abatedouros do estado de Pernambuco, de 1,06% (8/752), é considerada baixa.(AU)


The prevalence of lentivirus infection of small ruminants (LVPR) was determined in samples of serum from goats and sheep in slaughterhouses from ten districts of Pernambuco State. The serological test was used in agarose gel immunodiffusion (AGID) with antigen caprine arthritis and encephalitis virus (CAE)/Maedi Visna virus. Among the 369 blood serum samples of goats examined, seven (1.89%) (0.8-3.9%) were seropositive, and among the 383 sheep samples examined, just one (0.26%) (0.0-1.4%) was infected. The seven seropositive goats came from public slaughterhouses from Gravatá (n=2), Sertânia (n=4) and Timbaúba (n=1), and the soropositive sheep was from a public slaughterhouse of Serra Talhada. The soroprevalence of LVPR infection in small ruminants from Pernambuco's slaughterhouses, of 1.06% (8/752), is considered low.(AU)


Assuntos
Animais , Ruminantes , Estudos Soroepidemiológicos , Vírus Visna-Maedi , Vírus da Artrite-Encefalite Caprina , Lentivirus , Ovinos
6.
Arq. Inst. Biol ; 83: e0542014, 2016. tab
Artigo em Português | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1006871

RESUMO

Maedi-Visna (MV) é uma enfermidade causada por lentivírus de pequenos ruminantes com evolução crônica e em grande parte dos casos sinais clínicos inaparentes. O diagnóstico da doença é baseado em sinais clínicos e dados epidemiológicos, sendo a imunodifusão em gel de ágar (IDGA) o método padrão para a detecção sorológica de anticorpos contra o lentivírus. Sabendo que o estado do Tocantins possui potencial para o desenvolvimento da ovinocultura e que grande parte dos produtores de Colinas do Tocantins, no referido estado, possui interesse em estabelecer criação racional, esta pesquisa teve por objetivo a realização de um estudo acerca da soroprevalência da doença. Foram coletadas 369 amostras de sangue de ovinos, independentemente de raça, sexo e idade, de diferentes propriedades rurais do município para diagnóstico de MV utilizando a técnica de IDGA. Após as análises laboratoriais, para avaliação dos resultados no tocante às categorias, foi utilizado o teste exato de Fisher e também foi calculado o odds ratio , com intervalo de confiança de 95% para verificação da idade como possível fator de risco ou de proteção. Constatou-se que 6 animais (1,62%) se apresentaram positivos no IDGA. Diante desses resultados, foi possível concluir que a frequência de ovinos soropositivos no município é baixa.(AU)


Maedi-Visna is a disease caused by a small ruminant lentivirus, with a chronic evolution and, in most cases, unapparent signs. Its diagnosis is based on clinical signs and epidemiological data, with the agar gel immunodiffusion (AGID) test being the classical method for detecting antibodies against lentiviruses. Considering that the state of Tocantins has the potential to develop sheep breeding and that the majority of producers from Colinas do Tocantins city has shown an interest in establishing a rational breeding, this study aimed to determine the prevalence of such disease in that region. A total of 369 blood samples was drawn from sheep bred in several farms of that town, regardless of breed, gender, and age. Every sample underwent an AGID to test for Maedi-Visna. After the laboratory analyses were concluded, the Fisher's exact test was used to evaluate the results against the categories. Also, the odds ratio, with 95% confidence interval, was calculated to check whether age played a role as either a risk or protective factor in these results. It was found that six animals (1.62%) were positive in AGID, therefore concluding that the frequency of seropositivity in that region is low.(AU)


Assuntos
Animais , Ovinos , Inquéritos Epidemiológicos , Vírus Visna-Maedi , Lentivirus , Infecções por Lentivirus
7.
Arch. endocrinol. metab. (Online) ; 59(3): 210-214, 06/2015. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-751317

RESUMO

Objective The aim of this study was to evaluate the genetic expression of adipokines in the adipocytes of monosodium glutamate (MSG)-treated obese rats submitted to physical activity.Materials and methods Obesity was induced by neonatal MSG administration. Exercised rats (MSG and control) were subjected to swim training for 30 min for 10 weeks, whereas their respective controls remained sedentary. Total RNA was obtained from sections of the mesenteric adipose tissue of the rats. mRNA levels of adiponectin (Adipoq), tumor necrosis factor alpha (Tnf), peroxisome proliferator-activated receptor alpha (Ppara), and peroxisome proliferator-activated receptor gamma (Pparg) adipokines were quantified by quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR).Results In the exercise-trained control group, the expression of Adipoq increased compared to the sedentary control, which was not observed in the MSG-obese rats. Increased levels of Tnf in MSG-obese rats were not reversed by the swim training. The expression of Ppara was higher in sedentary MSG-obese rats compared to the sedentary control. Swimming increased this adipokine expression in the exercise-trained control rats compared to the sedentary ones. mRNA levels of Pparg were higher in the sedentary MSG-rats compared to the sedentary control; however, the exercise did not influenced its expression in the groups analyzed.Conclusions In conclusion, regular physical activity was not capable to correct the expression of proinflammatory adipokines in MSG-obese rat adipocytes.


Assuntos
Animais , Humanos , Adjuvantes Imunológicos , Mimetismo Molecular/imunologia , Fatores de Necrose Tumoral , Vacinas Sintéticas/imunologia , Vacinas/química , Vacinas/imunologia , Adjuvantes Imunológicos/química , /imunologia , /química , /metabolismo , Vacinas Anticâncer/química , Vacinas Anticâncer/imunologia , Vetores Genéticos/genética , Vetores Genéticos/imunologia , Imunoterapia , Ligantes , Lentivirus/genética , Lentivirus/imunologia , Macaca mulatta , Neoplasias/imunologia , Neoplasias/terapia , Multimerização Proteica , Ligante Indutor de Apoptose Relacionado a TNF/química , Receptores Toll-Like/agonistas , Fatores de Necrose Tumoral/química , Vacinas Sintéticas/química , Proteínas da Matriz Viral/imunologia
8.
Braz. j. med. biol. res ; 47(12): 1044-1049, 12/2014. graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-727666

RESUMO

Protein phosphatase magnesium/manganese-dependent 1D (PPM1D) is a p53-induced phosphatase that functions as a negative regulator of stress response pathways and has oncogenic properties. However, the functional role of PPM1D in bladder cancer (BC) remains largely unknown. In the present study, lentivirus vectors carrying small hairpin RNA (shRNA) targeting PPM1D were used to explore the effects of PPM1D knockdown on BC cell proliferation and tumorigenesis. shRNA-mediated knockdown of PPM1D significantly inhibited cell growth and colony forming ability in the BC cell lines 5637 and T24. Flow cytometric analysis showed that PPM1D silencing increased the proportion of cells in the G0/G1 phase. Downregulation of PPM1D also inhibited 5637 cell tumorigenicity in nude mice. The results of the present study suggest that PPM1D plays a potentially important role in BC tumorigenicity, and lentivirus-mediated delivery of shRNA against PPM1D might be a promising therapeutic strategy for the treatment of BC.


Assuntos
Animais , Humanos , Masculino , Fosfoproteínas Fosfatases/fisiologia , Interferência de RNA/fisiologia , RNA Interferente Pequeno/farmacologia , Neoplasias da Bexiga Urinária/patologia , Linhagem Celular Tumoral , Carcinogênese/efeitos dos fármacos , Proliferação de Células/efeitos dos fármacos , Regulação para Baixo , Citometria de Fluxo , Técnicas de Silenciamento de Genes , Vetores Genéticos , Lentivirus/genética , Camundongos Endogâmicos BALB C , Camundongos Nus , Fosfoproteínas Fosfatases/genética , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real , Estresse Fisiológico/genética , Ensaio Tumoral de Célula-Tronco , Neoplasias da Bexiga Urinária/terapia
9.
Braz. j. med. biol. res ; 47(6): 445-451, 06/2014. graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-709443

RESUMO

Current studies find that degenerated cartilage endplates (CEP) of vertebrae, with fewer diffusion areas, decrease nutrient supply and accelerate intervertebral disc degeneration. Many more apoptotic cells have been identified in degenerated than in normal endplates, and may be responsible for the degenerated grade. Previous findings suggest that inhibition of apoptosis is one possible approach to improve disc regeneration. It is postulated that inhibition of CEP cell apoptosis may be responsible for the regeneration of endplates. Caspase-3, involved in the execution phase of apoptosis, is a candidate for regulating the apoptotic process. In the present study, CEP cells were incubated in 1% fetal bovine serum. Activated caspases were detected to identify the apoptotic pathway, and apoptosis was quantified by flow cytometry. Lentiviral caspase-3 short hairpin RNA (shRNA) was employed to study its protective effects against serum deprivation. Silencing of caspase-3 expression was quantified by reverse transcription-polymerase chain reaction and Western blots, and inhibition of apoptosis was quantified by flow cytometry. Serum deprivation increased apoptosis of rat CEP cells through activation of a caspase cascade. Lentiviral caspase-3 shRNA was successfully transduced into CEP cells, and specifically silenced endogenous caspase-3 expression. Surviving cells were protected by the downregulation of caspase-3 expression and activation. Thus, lentiviral caspase-3 shRNA-mediated RNAi successfully silenced endogenous caspase-3 expression, preventing inappropriate or premature apoptosis.


Assuntos
Animais , Bovinos , Apoptose/fisiologia , /metabolismo , Condrócitos/metabolismo , Lentivirus/genética , Interferência de RNA/fisiologia , Inanição/metabolismo , Western Blotting , Cartilagem/metabolismo , Caspase 9/metabolismo , /metabolismo , Citometria de Fluxo , Vetores Genéticos/metabolismo , Microscopia de Fluorescência , Cultura Primária de Células , Propídio , Ratos Sprague-Dawley , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa , Soro/fisiologia , Transfecção
10.
Braz. j. med. biol. res ; 47(4): 273-278, 8/4/2014. graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-705769

RESUMO

Overexpression of cytokine-induced apoptosis inhibitor 1 (CIAPIN1) contributes to multidrug resistance (MDR) in breast cancer. This study aimed to evaluate the potential of CIAPIN1 gene silencing by RNA interference (RNAi) as a treatment for drug-resistant breast cancer and to investigate the effect of CIAPIN1 on the drug resistance of breast cancer in vivo. We used lentivirus-vector-based RNAi to knock down CIAPIN1 in nude mice bearing MDR breast cancer tumors and found that lentivirus-vector-mediated silencing of CIAPIN1 could efficiently and significantly inhibit tumor growth when combined with chemotherapy in vivo. Furthermore, Western blot analysis showed that both CIAPIN1 and P-glycoprotein expression were efficiently downregulated, and P53 was upregulated, after RNAi. Therefore, we concluded that lentivirus-vector-mediated RNAi targeting of CIAPIN1 is a potential approach to reverse MDR of breast cancer. In addition, CIAPIN1 may participate in MDR of breast cancer by regulating P-glycoprotein and P53 expression.


Assuntos
Animais , Feminino , Humanos , Antibióticos Antineoplásicos/uso terapêutico , Neoplasias da Mama/tratamento farmacológico , Doxorrubicina/uso terapêutico , Resistencia a Medicamentos Antineoplásicos/genética , Inativação Gênica , Peptídeos e Proteínas de Sinalização Intracelular/genética , Western Blotting , Neoplasias da Mama/genética , Carcinoma/tratamento farmacológico , Carcinoma/genética , Modelos Animais de Doenças , Genes MDR , Vetores Genéticos/genética , Inibidores do Crescimento/genética , Peptídeos e Proteínas de Sinalização Intracelular/metabolismo , Lentivirus/genética , Camundongos Endogâmicos BALB C , Camundongos Nus , Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/efeitos dos fármacos , Interferência de RNA , RNA Interferente Pequeno/genética , /efeitos dos fármacos
11.
Arq. Inst. Biol ; 81(1): 9-15, mar. 2014. tab
Artigo em Português | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-909140

RESUMO

As Lentiviroses de Pequenos Ruminantes (LVPR) incluem a Maedi-Visna (MV) em ovinos e a Artrite Encefalite Caprina (CAE). Essas enfermidades estão difundidas no mundo e são responsáveis por grandes perdas na produtividade destes animais. Os LVPR são vírus RNA da subfamília Lentivirinae que causam uma infecção persistente, sendo a detecção precoce uma das formas mais eficientes para limitar sua disseminação no rebanho. Visando contribuir com essas questões, este experimento foi realizado na Universidade Federal do Piauí (UFPI) em parceria com a Embrapa Caprinos e Ovinos, com o objetivo de padronizar a técnica de ensaio imunoenzimático indireto e compará-lo com a imunodifusão em gel de agarose no diagnóstico da CAE. Foram utilizadas 696 amostras de soros de caprinos machos e fêmeas oriundas do banco de soros da Unidade de Pesquisa de LVPR do Centro de Ciências Agrárias da UFPI. As amostras foram coletadas no período de janeiro de 2007 a março de 2010. Na padronização, verificou-se que 0,25 µg de proteína/poço, diluição de 1:200 do soro e concentração de 1:3.000 do conjugado anticorpo anti-IgG cabra apresentaram os melhores resultados. O ponto de corte obtido foi de 0,36. Na comparação, o Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA) detectou 128 (18,4%) amostras positivas, e o ELISA indireto (ELISA-i), 259 (37,2%). A sensibilidade e a especificidade do teste ELISA-i com relação ao IDGA foi de 94,5% e 75,7%, respectivamente. Verificou-se maior índice de positividade em caprinos acima de seis meses (p < 0,05), e nos machos obteve-se prevalência de 56,7% em comparação às fêmeas, 35,4%, (p < 0,01).(AU)


The Small Ruminant Lentiviruses (SRLVs) include Maedi-Visna (MV) of sheep and Caprine Arthritis-Encephalitis (CAE). These diseases are widespread and responsible for major production losses regarding sheep and goats. The SRLV is a RNA virus of the subfamily Lentivirus genus that causes persistent infections in goats. Early detection is one of the best ways to limit its spread in the herd. To contribute to these issues, this experiment was conducted at Universidade Federal do Piauí in partnership with Embrapa Goats and Sheep, with the objective of standardizing the technique of indirect ELISA (i-ELISA) and to compare it with Immunodiffusion in Agarose Gel to diagnose Caprine Lentiviruses (LC). Six hundred ninety six serum samples were used from the University Veterinary Hospital, Universidade Federal do Piauí, from January 2007 to March 2010. Standardization showed that 0.25 µg protein/well, a 1:200 dilution of the serum and concentration of 1:3,000 of the conjugated anti-goat IgG presented the best results. It was observed that the Agar Gel Immunodiffusion (AGID) detected 128 (18.4%) positive samples, and ELISA, 259 (37.2%). The sensitivity and specificity of i-ELISA regarding AGID were 94.5% and 75.7%, respectively. A higher prevalence was observed among animals older than six months (p < 0.05). The prevalence among males was of 56.7%, and among females, 35.4% (p < 0.01).(AU)


Assuntos
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Imunodifusão/métodos , Lentivirus , Diagnóstico , Vírus Visna-Maedi , Vírus da Artrite-Encefalite Caprina
12.
Arq. bras. med. vet. zootec ; 64(6): 1577-1583, Dec. 2012. ilus, tab
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-660227

RESUMO

Avaliou-se a influência do vírus da CAE nas características físico-químicas de amostras de leite de 54 cabras, sem predileção racial, distribuindo-as em dois grupos: cabras positivas e negativas para o teste de imunodifusão em gel de agarose. As amostras de leite foram submetidas à análise ultrassônica para obtenção de parâmetros físico-químicos - gordura, extrato seco, proteínas, lactose e densidade; realização de microbiologia - bactérias mesófilas (UCF/mL). Foram coletadas amostras de tecido mamário para exame histopatológico e imunohistoquímica. Não houve diferença significativa das características avaliadas entre os dois grupos; no microbiológico, não houve relação direta da presença de mesófilas associada à infecção pelo CAEV. Na histopatologia, observaram-se áreas com infiltração celular de monócitos, polimorfonucleares, plasmócitos, fibrose, ausência de morfologia normal do parênquima mamário, denotando processo inflamatório crônico; e foi confirmada a presença do vírus na glândula pela imunohistoquímica. Os resultados não mostraram relação direta da incidência da CAE como fator negativo no desenvolvimento do rebanho.


Aiming to evaluate the influence of CAE viruses in the chemical and physical characteristics of milk, the samples were collected from 54 goats, without racial predilection, these were divided into two groups: goats positive and negative according results of test Agarose Gel Immunodiffusion. Milk samples were ultrasonic analyzed to obtain physicochemical parameters (fat, solids, protein, lactose and density); performance microbiology (mesophilic bacteria - CFU/mL) and mammary gland samples were collected for evaluation histopathology and immunohistochemistry. The results of physical-chemical analysis showed no significant difference between the milk samples of two groups. In the microbiological analysis showed the presence of aerobic mesophilic bacteria, but this change is not associated with the presence of CAEV infection. On histopathology, there were areas with infiltration of mononuclear-leukocyte and polymorph nuclear, plasma cells, fibrosis and absence of normal morphology of the mammary tissue, indicating a chronic inflammatory process; and confirmed the presence of virus, in the gland, by immunohistochemistry. The results showed no direct relationship between incidence of CAE in the herd as a negative factor for its development, however it is known that the disease in its chronic nature, causes reduction in the productivity of the herd.


Assuntos
Animais , Cabras , Glândulas Mamárias Animais/anormalidades , Imuno-Histoquímica/veterinária , Lentivirus , Fenômenos Químicos , Técnicas Histológicas/veterinária
13.
Rio de Janeiro; s.n; 2012. xix,91 p. graf, tab, ilus, mapas.
Tese em Português | LILACS | ID: lil-691484

RESUMO

O Vírus do Oeste do Nilo (WNV) é um flavivírus que se mantém na natureza em ciclos alternados de infecção entre aves silvestres e mosquitos hematófagos, principalmente do gênero Culex. Ocasionalmente, o vírus pode ser transmitido aos mamíferos por mosquitos que se alimentaram previamente de aves viremicas. Humanos e equinos são altamente suscetíveis a infecção pelo WNV, e frequentemente desenvolvem febre, que pode ser seguida por infecção do sistema nervoso central e meningoencefalite, podendo ser fatal. Já houve registros do vírus na África, Oriente Médio e Ásia desde 1937. Foi detectado em Nova York em 1999 e se disseminou rapidamente pelos Estados Unidos e mais tarde para o Canadá. A rápida disseminação da infecção em direção ao sul sugere que novas evidências sorológicas e virológicas serão relatadas nos próximos anos na América Central e do Sul. No ano passado, evidências sorológicas do virus foram registradas em equinos na região do Pantanal do Brasil. Este trabalho teve como objetivo desenvolver um pseudotipo repórter para o WNV com base em um vetor retroviral a ser utilizado em testes de neutralização. Para tanto, foi desenvolvido um plasmídeo recombinante capaz de expressar as glicoproteínas do envelope do WNV. Este plasmídeo foi co-transfectado em células eucarióticas junto a outros dois plasmídeos (pHP e pTY-GFP), o que permitiu a formação das partículas. Estas possuem o capsídeo e o genoma defectivo do vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 (HIV-1), um gene repórter gfp (green fluorescente protein) e as glicoproteínas do envelope do WNV. Nossos resultados mostraram que as glicoproteínas do envelope do WNV foram expressas, e que as partículas pseudotipo foram formadas. Essas partículas poderão ser uma ferramenta molecular muito eficiente para estudos morfofuncionais das glicoproteínas do envelope, tais como, tropismo, mecanismos de entrada (inibidores e facilitadores). Uma melhor compreensão destes mecanismos é essencial para o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico, profilaxia e tratamento.


Assuntos
Genes Reporter , Lentivirus , Vírus do Nilo Ocidental
14.
Arq. bras. med. vet. zootec ; 63(3): 757-760, June 2011. tab
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-595597

RESUMO

The prevalence of anti-lentiviruses antibodies of small ruminants was investigated in goat herds in the city of Teresina, PI, Brazil. A seroepidemiological survey was conducted involving 480 animals, apparently healthy, belonging to six rural properties. The diagnostic test was the agar gel immunodiffusion (AGID), using antigens produced from cellular cultures infected with caprine arthritis encephalitis virus (CAEV Cork). Prevalences by gender and age were estimated considering sampling fractions for each farm. A general prevalence of 4.2 percent, was observerved, being 4.2 percent for females and 3.6 percent for males. Prevalences were higher among older goats. Regarding the breed standard, 23.5 percent were of the Anglo Nubian, 5.9 percent of the Boer, 35.3 percent Anglo Nubian x Boer crossbred, and 35.3 percent of undefined breed. It is concluded that small ruminant lentiviruses are endemic among goat herds of Teresina.


Assuntos
Animais , Vírus da Artrite-Encefalite Caprina , Infecções por Lentivirus/epidemiologia , Infecções por Lentivirus/imunologia , Infecções por Lentivirus/prevenção & controle , Infecções por Lentivirus/transmissão , Infecções por Lentivirus/veterinária , Lentivirus , Estudos Soroepidemiológicos
15.
Arq. bras. oftalmol ; 73(5): 447-453, Sept.-Oct. 2010. graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-570508

RESUMO

PURPOSE: To evaluate the transfer of heterologous genes carrying a Green Fluorescent Protein (GFP) reporter cassette to primary corneal epithelial cells ex vivo. METHODS: Freshly enucleated rabbit corneoscleral tissue was used to obtain corneal epithelial cell suspension via enzymatic digestion. Cells were plated at a density of 5×10³ cells/cm² and allowed to grow for 5 days (to 70-80 percent confluency) prior to transduction. Gene transfer was monitored using fluorescence microscopy and fluorescence activated cell sorter (FACS). We evaluated the transduction efficiency (TE) over time and the dose-response effect of different lentiviral particles. One set of cells were dual sorted by fluorescence activated cell sorter for green fluorescent protein expression as well as Hoechst dye exclusion to evaluate the transduction of potentially corneal epithelial stem cells (side-population phenotypic cells). RESULTS: Green fluorescent protein expressing lentiviral vectors were able to effectively transduce rabbit primary epithelial cells cultured ex vivo. Live cell imaging post-transduction demonstrated GFP-positive cells with normal epithelial cell morphology and growth. The transduction efficiency over time was higher at the 5th post-transduction day (14.1 percent) and tended to stabilize after the 8th day. The number of transduced cells was dose-dependent, and at the highest lentivirus concentrations approached 7 percent. When double sorted by fluorescence activated cell sorter to isolate both green fluorescent protein positive and side population cells, transduced side population cells were identified. CONCLUSIONS: Lentiviral vectors can effectively transfer heterologous genes to primary corneal epithelial cells expanded ex vivo. Genes were stably expressed over time, transferred in a dose-dependence fashion, and could be transferred to mature corneal cells as well as presumable putative stem cells.


OBJETIVO: Avaliar a transferência de genes heterólogos expressando a proteí­na "Green Fluorescent Protein" (GFP) para células corneanas epiteliais primárias ex vivo utilizando vetor lentivírus. MÉTODOS: Tecido corneoescleral de coelhos foi usado para obtenção de suspensão de células corneanas epitelias. As células foram semeadas na densidade de 5×10³ células/cm² e expandidas por 5 dias até uma confluência de 70-80 por cento antes de serem transduzidas. A transferência genética foi monitorada por microscopia fluorescente e por um separador de células ativadas por fluorescência. Foram avaliadas a eficiência de transdução ao longo do tempo e o efeito dose-resposta de diferentes quantidades de partículas virais. Um grupo de células foi analisado pelo separador de células ativadas por fluorescência para avaliar a transdução de células com fenótipo de cé­lulas tronco do epitélio corneano (baseado na exclusão do corante "Hoechst dye"). RESULTADOS: Os vetores lentivírus foram efetivos na transdução de cé­lulas corneanas epiteliais primárias de coelhos ex vivo. Fotodocumentação das células vivas demonstrou células epiteliais de morfologia normal e expressando o gene fluorescente (GFP). A eficiência de transdução ao longo do tempo foi maior no quinto dia após a transdução (14,1 por cento) e demonstrou uma tendência à estabilidade a partir do oitavo dia após a transdução. O número de células transduzidas foi dose-dependente e atingiu 7 por cento com as maiores concentrações de partículas virais. Quando analisadas pelo separador de células ativadas por fluorescência para detecção de células transduzidas e também de células que excluíram o corante "Hoechst dye", foi detectado que células com fenótipo de células tronco do epitélio corneano ("side-population") também foram transduzidas. CONCLUSÕES: Os vetores lentivirais podem transferir genes heterolólogos para células corneanas epiteliais primárias expandidas ex vivo de forma eficiente. Os genes foram expressos de forma estável ao longo do tempo e puderam ser transferidos tanto para células epiteliais maduras como para presumíveis células tronco epiteliais. A eficiência de transdução foi obtida de forma dose-dependente.


Assuntos
Animais , Coelhos , Epitélio Anterior/metabolismo , Vetores Genéticos/administração & dosagem , Proteínas de Fluorescência Verde/genética , Lentivirus/genética , Transdução Genética/métodos , Análise de Variância , Epitélio Anterior/citologia , Terapia Genética/métodos , Proteínas de Fluorescência Verde/administração & dosagem , Modelos Animais
16.
Pesqui. vet. bras ; 30(10): 877-880, out. 2010. ilus
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-567928

RESUMO

Feline Immunodeficiency Virus is a worldwide infection and is considered a significant pathogen. The diagnosis of FIV infections is mainly based on commercially available rapid tests that are highly expensive in Brazil, hence it is rarely performed in the country. Furthermore, lentiviruses grow slowly and poorly in tissue cultures, making the production of viral antigen by classic means and thus the establishment of FIV immunodiagnosis impracticable. In order to deal with this, recombinant DNA techniques were adopted to produce the protein p24, a viral capsid antigen. The protein's reactivity evaluation analyzed by Western blot indicated that this recombinant antigen can be a useful tool for the immunodiagnostic of FIV infections.


O vírus da imunodeficiência felina tem distribuição mundial e é considerado um patógeno significativo. No Brasil, a prática diagnóstica é baseada principalmente em teste rápidos, importados e de custo elevado, disponíveis comercialmente. Devido ao seu custo proibitivo em nosso país, o diagnóstico da infecção pelo FIV é raramente realizado. Ademais, os lentivírus se multiplicam lenta e pobremente em cultura de células, o que torna a produção de antígeno por meios clássicos e o estabelecimento do imunodiagnóstico impraticável. Com o objetivo de lidar com esta questão, técnicas de DNA recombinante foram utilizadas para produção de um antígeno do capsídeo viral, a proteína p24. A avaliação da reatividade realizada por Western blot indicou que este antígeno recombinante pode ser útil para o imunodiagnóstico de infecções pelo FIV.


Assuntos
Isopropiltiogalactosídeo/administração & dosagem , Isopropiltiogalactosídeo/biossíntese , Vírus da Imunodeficiência Felina , Capsídeo , Lentivirus
17.
Braz. j. med. biol. res ; 43(7): 634-644, July 2010. ilus, graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-550731

RESUMO

The effectiveness of the caspase-9-based artificial "death switch" as a safety measure for gene therapy based on the erythropoietin (Epo) hormone was tested in vitro and in vivo using the chemical inducer of dimerization, AP20187. Plasmids encoding the dimeric murine Epo, the tetracycline-controlled transactivator and inducible caspase 9 (ptet-mEpoD, ptet-tTAk and pSH1/Sn-E-Fv’-Fvls-casp9-E, respectively) were used in this study. AP20187 induced apoptosis of iCasp9-modified C2C12 myoblasts. In vivo, two groups of male C57BI/6 mice, 8-12 weeks old, were injected intramuscularly with 5 µg/50 g ptet-mEpoD and 0.5 µg/50 g ptet-tTAk. There were 20 animals in group 1 and 36 animals in group 2. Animals from group 2 were also injected with the 6 µg/50 g iCasp9 plasmid. Seventy percent of the animals showed an increase in hematocrit of more than 65 percent for more than 15 weeks. AP20187 administration significantly reduced hematocrit and plasma Epo levels in 30 percent of the animals belonging to group 2. TUNEL-positive cells were detected in the muscle of at least 50 percent of the animals treated with AP20187. Doxycycline administration was efficient in controlling Epo secretion in both groups. We conclude that inducible caspase 9 did not interfere with gene transfer, gene expression or tetracycline control and may be used as a safety mechanism for gene therapy. However, more studies are necessary to improve the efficacy of this technique, for example, the use of lentivirus vector.


Assuntos
Animais , Masculino , Camundongos , Anemia/terapia , Caspase 9/genética , Dimerização , Eritropoetina , Expressão Gênica/genética , Terapia Genética/métodos , Tacrolimo/análogos & derivados , Caspase 9/administração & dosagem , Eritropoetina , Vetores Genéticos/genética , Hematócrito , Injeções Intramusculares , Lentivirus/genética , Plasmídeos/uso terapêutico , Tacrolimo/uso terapêutico
18.
Rev. Soc. Bras. Clín. Méd ; 6(6): 260-267, nov.-dez. 2008. ilus, tab
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-502528

RESUMO

Os lentivírus, bem como os oncovírus e os spumavírus, pertencem à família Retroviridae. Essa família possui genoma composto por duas fitas simples de RNA e enzima transcriptase reversa. Os vírus de imunodeficiência humana (HIV), felina (FIV) e simiana (SIV) são os representantes mais bem conhecidos dos lentivírus, devido aos seus efeitos patológicos. O genoma dos lentivírus apresenta uma organização mais complexa do que dos oncovírus e muitos dos seus processos moleculares já estão descritos OU já são conhecidos. Além disso, são capazes de infectar inclusive células quiescentes, características essa que se opõe ao tropismo dos oncovírus. Essas propriedades levaram ao desenvolvimento de vetores lentivirais para terapia gênica e a perspectiva do emprego terapêutico dos mesmos na clínica – por exemplo, para síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA). Uma série de modificações de engenharia genética no lentivetor baseado em HIV levou ao desenvolvimento do primeiro protocolo clínico de terapia gênica lentiviral contra a SIDA, nos EUA. Atualmente, existem vários protocolos clínicos com lentivetores em andamento, seguindo a tendência de empregá-los também em outras doenças.(AU)


Lentivirus, oncovirus and spumavirus belong to the Retroviridae family. The genome of this family is composed of two single strands of RNA and reverse transcriptase enzyme. The human, feline and simian immunodeficiency virus (HIV, FIV, SIV) are well known lentivirus in our society due to their pathological effects. The Lentiviral genome is more complex than the oncovira and much of its molecular mechanisms are already known. In addition, they are able to infect also quiescent cells, in opposition to oncovirus tropism. These properties lead to the development of gene therapy lentiviral vectors and to their possible therapeutic use at clinical level – acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), for example. After intense genetic engineering, a HIV based lentivector was first used in a clinical trial in a gene therapy protocol for AIDS, in USA. Currently, there are several clinical trials in progress using lenviral vectors, following the tendency of evaluating their potential to treat many other diseases.(AU)


Assuntos
Humanos , Terapia Genética , Lentivirus/patogenicidade , Retroviridae/patogenicidade , HIV/patogenicidade , Spumavirus/patogenicidade , Vírus da Imunodeficiência Felina/patogenicidade
19.
São Paulo; s.n; 2008. 124 p. ilus.
Tese em Português | LILACS | ID: lil-553331

RESUMO

Galectina-3 (Gal-3) é uma proteína com atividades pleiotrópicas expressa em uma grande variedade de células e tecidos. Suas diversas atividades variam de acordo com o compartimento celular em que esta é encontrada. Estudos recentes demonstram que a expressão e distribuição intracelular de Gal-3 em melanoma está correlacionada com a progressão tumoral. .... O silenciamento de Gal-3 nas células WM793 é acompanhado da diminuição da ativação de AKT e o aumento da expressão de proteínas pró-apoptóticas. Concomitantemente, é observado o aumento da expressão de p16 e hipofosforilação de Rb. Análises por microscopia confocal demonstram que Gal-3 co-localiza com β-catenina em células de melanoma e que o silenciamento de Gal-3 diminui a presença de β-catenina nuclear. Entretanto, em melanócitos e células de crescimento radial, a ausência de Gal-3 nuclear não impede a distribuição nuclear de β-catenina. Os dados apresentados aqui indicam que Gal-3 possui um papel crucial em melanomas de crescimento vertical. O silenciamento de Gal-3 não parece ser suficiente para afetar melanomas metastáticos, que possivelmente adquirem estratégias complementares de sobrevivência para o escape de mecanismos supressores de tumor.


Assuntos
Melanoma , Neoplasias , /genética , Lentivirus , Interferência de RNA
20.
Arq. bras. med. vet. zootec ; 58(5): 947-949, out. 2006. tab
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-441547

RESUMO

The prevalence of small ruminant lentivirus (SRL) infection was evaluated in goats and sheep in two counties of Pernambuco State, Brasil. Seriological examinations were performed from a total of 672 goats and 325 sheep, one year of age and older, at two abattoirs. Sera were analyzed by agar gel immunodiffusion using Maedi-Visna K-1514 antigens. There were 42 reactive samples (95 percent confidence interval 3.6 percent to 4.9 percent) in both slaughter houses. In São Lourenço da Mata county, 3.2 percent and 4.0 percent of goat and sheep sera were responsive, whereas in Paulista county, 5.1 percent of goat samples and 8.2 percent of sheep were reactive. Thus, the prevalence of small ruminant lentivirus was low in goats and sheep sampled from the region.


Assuntos
Anticorpos Antivirais/isolamento & purificação , Cabras , Infecções por Lentivirus/epidemiologia , Infecções por Lentivirus/veterinária , Lentivirus/isolamento & purificação , Ovinos
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