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1.
Electron. j. biotechnol ; 28: 20-26, July. 2017. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: biblio-1015729

RESUMO

Background: Infectious Pancreatic Necrosis Virus (IPNV) is the etiological agent of a highly contagious disease that affects salmonids. In Chile, the second worldwide salmon producer, IPNV causes great economic loss and is one of the most frequently detected pathogens. Due to its high level of persistence and the lack of information about the efficiency of its diagnostic techniques, the National Reference Laboratory (NRL) for IPNV in Chile performed the first inter-laboratory ring trial, to evaluate the sensitivity, specificity and repeatability of the qRT-PCR detection methods used in the country. Results: Results showed 100% in sensitivity and specificity in most of the laboratories. Only three of the twelve participant laboratories presented problems in sensitivity and one in specificity. Problems in specificity (false positives) were most likely caused by cross contamination of the samples, while errors in sensitivity (false negatives) were due to detection problems of the least concentrated viral sample. Regarding repeatability, many of the laboratories presented great dispersion of the results (Ct values) for replicate samples over the three days of the trial. Moreover, large differences in the Ct values for each sample were detected among all the laboratories. Conclusions: Overall, the ring trial showed high values of sensitivity and specificity, with some problems of repeatability and inter-laboratory variability. This last issue needs to be addressed in order to allow harmonized diagnostic of IPNV within the country. We recommend the use of the NRL methods as validated and reliable qRT-PCR protocols for the detection of IPNV.


Assuntos
Animais , Salmonidae/virologia , Vírus da Necrose Pancreática Infecciosa/isolamento & purificação , Infecções por Birnaviridae/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/normas , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/normas , Doenças dos Peixes/diagnóstico , RNA Viral/genética , Variações Dependentes do Observador , Chile , Sensibilidade e Especificidade , Vírus da Necrose Pancreática Infecciosa/genética , Infecções por Birnaviridae/virologia , Aquicultura , Reações Falso-Negativas , Reações Falso-Positivas , Doenças dos Peixes/virologia , Laboratórios
2.
Braz. j. microbiol ; 45(4): 1521-1525, Oct.-Dec. 2014. graf, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-741308

RESUMO

The immune response elicited by the oral inoculation of an intermediate strain of infectious bursal disease virus was studied in chickens. A strong over expression of IL-6, IL-8, IFNα and IFNγ was observed in bursa at 3 days post inoculation together with an increase in splenic NO2 release. An influx of T-lymphocytes was also detected.


Assuntos
Animais , Infecções por Birnaviridae/veterinária , Galinhas , Vírus da Doença Infecciosa da Bursa/imunologia , Doenças das Aves Domésticas/imunologia , Administração Oral , Infecções por Birnaviridae/imunologia , Bolsa de Fabricius/patologia , Citocinas/análise , Citocinas/genética , Perfilação da Expressão Gênica , Óxido Nítrico/análise , Baço/patologia , Linfócitos T/imunologia
3.
Biol. Res ; 46(2): 183-188, 2013. graf, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-683996

RESUMO

The effects of Dangguibuxue Tang (DBT) on growth performance and immunity response in immunosuppressed broiler chicks were investigated in this study. 240 one-d-old broiler chicks (DaHeng S01) were randomly divided into 4 groups, 2.0% DBT-treatment (A), 0.5% DBT-treatment (B), cyclophosphamide-control (C), and control group (D). From 4 d to 7 d of age, chicks in group A, B and C were given cyclophosphamide (CY) at a dosage of 100mg/kg body weight (BW) daily by intraperitoneal injection to induce immunosuppression. Chicks in group D were given an equal volume of physiological saline daily by intraperitoneal injection and considered normal chicks. Groups A and B were supplemented with 2.0% or 0.5% of DBT in the drinking water from 8 d to 42 d of age. Groups C and D did not receive any additional medication. The results revealed that chicks from group B had lower feed:gain rate (FGR), lower total mortality, higher immunity organ indexes, higher levels of Newcastle disease (ND) antibody and infectious bursal disease (IBD) antibody, higher interleukin-2 and interleukin-6 levels, and greater lymphocyte proliferative responses to concanavalin A (ConA) during the experiment than those from group C. However, no significant difference in the immunity status in the two levels of DBT-treatment was observed. These results indicate that supplementation of 0.5% of DBT can improve both cellular immunity and humoral immunity in immunosuppressed broiler chicks.


Assuntos
Animais , Feminino , Infecções por Birnaviridae/veterinária , Galinhas , Medicamentos de Ervas Chinesas/farmacologia , Vírus da Doença Infecciosa da Bursa/imunologia , Doença de Newcastle/imunologia , Angelica sinensis , Astrágalo (Planta) , Infecções por Birnaviridae/imunologia , Galinhas/crescimento & desenvolvimento , Galinhas/imunologia , Ciclofosfamida/farmacologia , Imunossupressão/métodos , Imunossupressão/veterinária , Imunossupressores/farmacologia , /sangue , /sangue , Distribuição Aleatória
4.
Braz. j. microbiol ; 43(3): 1015-1021, July-Sept. 2012. ilus, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-656667

RESUMO

Infectious bursal disease virus (IBDV) is classified according to the antigenicity and virulence into classical virulent (cv), very virulent (vv), and antigenic variant strains. The molecular basis for the IBDV antigenic variation is well established and is associated to the capsid protein, VP2 (gene VP2 of segment A), whereas both VP2 and the RNA-dependent RNA polymerase, VP1 (gene VP1 of segment B), have been correlated with the virulence. In this study, seventeen Brazilian IBDV samples previously characterized by the VP2 gene as cv (three) and vv (fourteen) strains were genetically and molecularly analyzed for their VP1 gene. All of the strains kept with the same cv or vv classification except one sample, Br/03/DR. This sample was classified as vv by its VP2 gene, but it was most closely related to the cv strains by its VP1 partial sequence and phylogeny. Studies on the phylogeny of VP1 have suggested a possible reassortment event that originated the vvVP1. In this case, the sample carrying vvVP2 and cvVP1 could be a descendant of IBDV ancestors prior to the reassortment of vvVP1; alternatively, it could be the result of a genetic exchange between the segments of different strains or with a live attenuated vaccine. Nevertheless, this is the first report of natural genetic reassortment of IBDV in Brazil.


Assuntos
Animais , Infecções por Birnaviridae , Variação Genética , Técnicas In Vitro , Filogenia , Reação em Cadeia da Polimerase , Recombinação Genética , Vírus da Doença Infecciosa da Bursa/genética , Vírus da Doença Infecciosa da Bursa/patogenicidade , Genótipo , Métodos , Virulência
5.
Electron. j. biotechnol ; 14(1): 11-12, Jan. 2011. ilus, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-591929

RESUMO

A method for counting Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) through epifluorescence microscopy was analyzed in detail. Image processing and statistic considerations are included. The particle size of viruses was compared in different experimental conditions such as the staining of the virus with SYBR-Green I or with antibodies for specific fluorescence labeling of viral proteins. The type of surface used as mounting support was assayed as well. The results indicated that the most suitable method involves the mounting of the viral-containing suspension on a membrane filter followed by the staining with a monoclonal antibody specific for a viral protein combined with a FITC (fluorescein isothiocyanate)-conjugated secondary antibody.


Assuntos
Aquabirnavirus , Aquabirnavirus/patogenicidade , Infecções por Birnaviridae/diagnóstico , Infecções por Birnaviridae/genética , Infecções por Birnaviridae , Salmonidae , Imunofluorescência/métodos
6.
Braz. j. microbiol ; 35(4): 352-358, Oct.-Dec. 2004. ilus, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-402623

RESUMO

Para identificar e caracterizar o agente causador de um quadro clínico sugestivo de doença de Gumboro (DG) que afetou um plantel de frangos de corte com 34 dias de idade, em Buriti Alegre (estado de Goiás, centro-oeste do Brasil), no ano de 2001, procedeu-se uma combinação de métodos virológicos clássicos e modernos. Análises histopatológicas de bursas revelaram necrose, depleção de folículos linfóides, infiltração de heterófilos, edema e formação de cistos, lesões compatíveis com DG. A inoculação em ovos embrionados de galinhas SPF (specific pathogen-free) de uma suspensão de macerado de amostras de bursas resultou em mortalidade embrionária e lesões macroscópicas compatíveis com aquelas provocadas pelo VDIB. Amostras de bursas foram submetidas à técnica de transcrição reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR), utilizando-se oligonucleotídeos específicos para amplificação da região hipervariável do gene da VP2. Essa reação produziu um fragmento do tamanho esperado, que foi digerido pelas enzimas de restrição TaqI, StyI e SspI, mas não foi digerido com SacI. Este padrão foi o mesmo observado com cepas de VDIB hipervirulentas (vvVDIB). Análise da seqüência nucleotídica revelou a presença dos aminoácidos alanina, isoleucina e isoleucina nas posições 222, 256 e 294, respectivamente, característica dessas cepas. Além disso, análise filogenética realizada agrupou a cepa encontrada, denominada de BR-GO, com outras cepas de vvVDIB.


Assuntos
Embrião de Galinha , Infecções por Birnaviridae , Embrião de Galinha , Técnicas In Vitro , Vírus da Doença Infecciosa da Bursa , Métodos , Virologia
7.
Vet. Méx ; 30(1): 7-18, ene.-mar. 1999. tab
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: lil-266714

RESUMO

Se aislaron tres virus de la infección de la bolsa de Fabricio (VIBF) a partir de muestras obtenidas de muestras en granjas avícolas en México, aquéllos se denominaron H, P y G. Se determinaron sus propiedades antigénicas mediante la técnica de ELISA por captura de antígenos, utilizando los anticuerpos monoclonales (Mab) B-29, R-63, BK-9, B-69 y 57. Se evaluó su virulencia en aves inoculadas mediante la observación de signos clínicos, mortalidad, proporción del peso bursal con el peso corporal, lesiones microscópicas, persistencia de los virus en tejidos linfoides, serología contra VIBF y medición de la respuesta inmune hacia Brucella abortus y eritrocitos de ovino. Los virus P y G presentaron los epítopes reconocidos por lo B-29, R-63 y B-69, que están presentes en las cepas clásicas de VIBF, el virus H no pudo ser reconocido por ningún Mab. Los tres aislamientos indujeron la presentación subclínica de la IBF en las aves inoculadas, se observó marcada atrofia bursal con deplesión linfoide severa, persistencia del VIBF en bolsa hasta los catorce días posinoculación y seroconversión de las aves a partir de la segunda semana después de la inoculación. A pesar de que no se detectó plenamente un estado de inmunodepresión mediante la respuesta a los dos antígenos utilizados, no se puede descartar un eventual efecto inmunodepresor por el aislamiento "H". Tampoco se detectaron diferencias en la virulencia de los tres VIBF aislados


Assuntos
Animais , Infecções por Birnaviridae/mortalidade , Infecções por Birnaviridae/patologia , Infecções por Birnaviridae/fisiopatologia , Birnaviridae/isolamento & purificação , Birnaviridae/patogenicidade , Bolsa de Fabricius/virologia , Galinhas/virologia , Anticorpos Monoclonais , Antígenos Virais , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Doenças das Aves Domésticas/imunologia , Doenças das Aves Domésticas/virologia
8.
Braz. j. med. biol. res ; 31(5): 671-4, May 1998. ilus, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-212406

RESUMO

In order to evaluate the use of a Western blot methodology for the diagnosis of infectious bursal disease virus (IBDV) infection, chickens were experimentally infected with IBDV strains and tested for the presence of viral antigens and antibodies by a blocking Western blot test (bWB). The viral proteins obtained from the bursa of Fabricius (BF) were transferred to a nitrocellulose membrane after sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and the chicken sera obtained by heart puncture were used for the detection of these proteins. In order to eliminate nonspecific reactions, we used a rabbit anti-chicken serum (blocking tool). By the use of the bWB test, two distinct viral proteins of 43-kDa (VP2) and 32-kDa (VP3) were detected. We suggest the use of this methodology for the detection of IBDV infection in animals suspected of having IBDV reinfection and a chronic subclinical form of the disease. With the use of the rabbit anti-chicken sera for blocking, this method is practical, sensitive and less time consuming.


Assuntos
Animais , Infecções por Birnaviridae/diagnóstico , Galinhas/virologia , Vírus da Doença Infecciosa da Bursa/isolamento & purificação , Doenças das Aves Domésticas/diagnóstico , Anticorpos Antivirais/isolamento & purificação , Antígenos Virais/isolamento & purificação , Western Blotting , Vírus da Doença Infecciosa da Bursa/imunologia , Proteínas da Matriz Viral/isolamento & purificação
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