Excretion product of shigella dysenteriae (sdyep) induced cell death in early larval stage of zebrafish (danio rerio): acridine orange and ethidium bromide (AO/EB) in vivo staining / Producto de excreción de shigella dysenteriae (pesdy) induce muerte celular en larvas de pez cebra (danio rerio): marcaje in vivo con naranja de acridina y bromuro de etidio (NA/BE)

In the field of studies of acute toxicity induced by bacterial agents, Shiga toxins have been relevant due to the severity of the extra-intestinal diseases they cause. Numerous studies have shown that Shiga toxin induced apoptosis in different cell types; however, this important process has been little studied in vivo experimental models. In this study, the effects of excretion products of Shigella dysenteriae, in which Shiga toxin is present, were investigated on early larval stages of Zebrafish, an animal model with many advantages over other in vivo experimental models traditionally used. Both the collection of eggs and larvae of Zebrafish, and the product from excretion from Shigella dysenteriae (SdyEP) were performed according to laboratory standards. Also, toxicity bioassay, larvae treatment with pure and diluted solution, 10-1, 10-2, 10-3 , 10-4 and 10-5, v/v SdyEP and cell death in vivo using Acridine Orange (AO) and Ethidium Bromide (EB) were applied. The excretion product of Shigella dysenteriae (SdyEP) effect was expressed in terms of larval mortality and dependent dilution rather than incubation time. The larval population surviving treatment with Shigella excretion product presents severe morphological effects. The larval population generally presents notable severe morphological damage, the necrosis state is represented by the opacity of the larvae after being treated for 24 h (b) compared to control. Other changes associated with larval anatomy were also observed; particularly the caudal end curvature was significant into 10%. The use of AO/EB revealed a distribution pattern from fluorescence into green and orange in surviving larvae SdyEP poisoning, there was a large population of dead cells around the anal and caudal region as evidenced by the presence of orange nuclei in greater numbers as controls in the larvae. The results support the application of coloring AO/EB in Zebrafish experimental models for the evaluation of the toxic action of new molecules and new products with therapeutic potential.

En el campo de los estudios de toxicidad aguda inducida por agentes bacterianos, las toxinas Shiga resultan relevantes debido a la severidad de las enfermedades extra-intestinales que causan. Numerosos estudios han demostrado que la toxina Shiga induce la apoptosis en diferentes tipos de células, sin embargo, este importante proceso ha sido poco estudiado en modelos experimentales in vivo. En este estudio, fueron evaluados los efectos del productos de excreción de Shigella dysenteriae (PESdy), sobre estadios larvarios de pez cebra (Danio rerio), un modelo animal con muchas ventajas sobre otros modelos experimentales in vivo utilizados tradicionalmente. Tanto la recolección de los huevos y larvas de pez cebra, así como la obtención del producto de la excreción, se realizaron de acuerdo a los estándares de laboratorio. Poblaciones larvarias, fueron tratadas con distintas soluciones; pura y diluidas, 101, 10-2, 10-3, 10-4 y 10-5, v/v de PESdy. La muerte celular in vivo, usando naranja de acridina (NA) y bromuro de etidio (BE) fue evaluada. El efecto del SdyEP, se expresó como dependiente de la concentracion y del tiempo de exposición. La población de larvas sobrevivientes, presentaron curvatura troncal en un 10%, en relación a los controles. La necrosis se puso en evidencia a través de la opacidad de las larvas después de 24 h. El uso de NA/BE reveló un patrón de distribución de la fluorescencia en verde y naranja en larvas sobrevivientes al tratamiento. Una granpoblación de células muertas, alrededor de la región anal y caudal, se ponen en evidencia por la presencia de núcleos de naranja en mayor número que en los controles. Los resultados apoyan la aplicación de la coloración NA/BE en modelo experimental de pez cebra, para la evaluación de la acción tóxica de nuevas moléculas y nuevos productos de excreción bacterial con potencial terapéutico.

Excretion product of shigella dysenteriae (sdyep) induced cell death in early larval stage of zebrafish (danio rerio): acridine orange and ethidium bromide (ao/eb) in vivo staining / El producto de excreción de la shigella dysenteriae (pesdy) Induce muerte celular en larvas de pez cebra (danio rerio): marcaje in vivo con naranja de acridina y bromuro de etidio (na/be)

In the field of studies of acute toxicity induced by bacterial agents, Shiga toxins have been relevant due to the severity of the extra-intestinal diseases they cause. Numerous studies have shown that Shiga toxin induced apoptosis in different cell types; however, this important process has been little studied in vivo experimental models. In this study, the effects of excretion products of Shigella dysenteriae, in which Shiga toxin is present, we investigated on early larval stages of Zebrafish, an animal model with many advantages over other in vivo experimental models traditionally used. Both the collection of eggs and larvae of Zebrafish, and the product from excretion from Shigella dysenteriae (SdyEP) were performed according to laboratory standards. Also, toxicity bioassay, larvae treatment with pure and diluted solution, 10-1, 10-2, 10-3 , 10-4 and 10-5 v/v SdyEP and cell death in vivo using Acridine Orange (AO) and Ethidium Bromide (EB) were applied. The excretion product of Shigella dysenteriae (SdyEP) effect was expressed in terms of larval mortality and dependent dilution rather than incubation time. The larval population surviving treatment with Shigella excretion product presents severe morphological effects. The larval population generally presents notable severe morphological damage, the necrosis state is represented by the opacity of the larvae after being treated for 24 h (b) compared to control. Other changes associated with larval anatomy were also observed; particularly the caudal end curvature was significant into 10%. The use of AO/EB revealed a distribution pattern from fluorescence into green and orange in surviving larvae SdyEP poisoning, there was a large population of dead cells around the anal and caudal region as evidenced by the presence of orange nuclei in greater numbers as controls in the larvae. The results support the application of coloring AO/EB in Zebrafish experimental...

En el campo de los estudios de toxicidad aguda inducida por agentes bacterianos, las toxinas Shiga resultan relevantes debido a la severidad de las enfermedades extra-intestinales que causan. Numerosos estudios han demostrado que la toxina Shiga induce la apoptosis en diferentes tipos de células, sin embargo, este importante proceso ha sido poco estudiado en modelos experimentales in vivo. En este estudio, fueron evaluados los efectos del productos de excreción de Shigella dysenteriae (PESdy), sobre estadios larvarios de pez cebra (Danio rerio), un modelo animal con muchas ventajas sobre otros modelos experimentales in vivo utilizados tradicionalmente. Tanto la recolección de los huevos y larvas de pez cebra, así como la obtención del producto de la excreción, se realizaron de acuerdo a los estándares de laboratorio. Poblaciones larvarias, fueron tratadas con distintas soluciones; pura y diluidas, 10-1, 10-2, 10-3 , 10-4 and 10-5 v/v de PESdy. La muerte celular in vivo, usando naranja de acridina (NA) y bromuro de etidio (BE) fue evaluada. El efecto del PESdy, se expresó como dependiente de la concentración y del tiempo de exposición. La población de larvas sobrevivientes, presentaron curvatura troncal en un 10 por ciento, en relación a los controles. La necrosis se puso en evidencia a través de la opacidad de las larvas después de 24 h. El uso de NA/BE reveló un patrón de distribución de la fluorescencia en verde y naranja en larvas sobrevivientes al tratamiento. Una gran población de células muertas, alrededor de la región anal y caudal, se ponen en evidencia por la presencia de núcleos de naranja en mayor número que en los controles. Los resultados apoyan la aplicación de la coloración NA/BE en modelo experimental...

Evaluación de la coloración diferencial de fluorescencia modificada en Pseudomonas spp. aisladas de suelo / Evaluation of the modified flourescence staining differential on Pseudomonas spp. isolated from soil

Se evaluó la coloración diferencial de fluorescencia modificada en Pseudomonas spp. aisladas de suelos de cultivos agrícolas del estado Sucre, a fin de observar eventos microscópicos relacionados con el ciclo celular. Cada especie de Pseudomonas identificada bioquímicamente se sembró en caldos incubados a temperatura ambiente, aerobiosis, durante 15, 20, 30 y 45 minutos, y 1, 24, 48 y 72 horas; luego, se elaboraron y colorearon los extendidos. En las 24 cepas de Pseudomonas identificadas, P. mendocina (41,67 por ciento), P. aeruginosa (37,50 por ciento) y P. putida (20,83 por ciento), se observaron variaciones de tinción en los diferentes tiempos de incubación como verde, amarilla y anaranjada, fluorescentes y de baja fluorescencia. La coloración emplea naranja de acridina que se intercala al ADN, provocando fluorescencia verde, e interactúa con el ARN provocando fluorescencia anaranjada; el decolorante remueve el naranja de acridina no unido al material genético y la fluoresceína de sodio produce color amarillo en bacterias que retienen suficiente cantidad de naranja de acridina. Las variaciones de tinción citoplasmática en Pseudomonas spp., están asociadas a la cantidad de ARN y ADN presente en la célula de acuerdo a la fase de su ciclo celular.

The modified fluorescence staining differential was evaluated using Pseudomonas spp. isolated from cultivated agricultural soils in the State of Sucre, in order to observe microscopic events related to the cellular cycle. Each species of biochemically identified Pseudomonas was inoculated into a broth and incubated at room temperature, aerobiosis, for 15, 20, 30 and 45 minutes and 1, 24, 48 and 72 hours; then, slides were made and stained. For the 24 identified strains of Pseudomonas, P. mendocina (41.67 percent), P. aeruginosa (37.50 percent) and P. putida (20.83 percent), staining variations such as green, yellow and orange, fluorescent and low fluorescence were observed for the different incubation times. The stain uses acridine orange that interacts with DNA by intercalation, causing green fluorescence; it interacts with RNA by electrostatic attraction causing orange fluorescence; the alcohol-acetone decolorant removes the acridine orange not united with the genetic material and sodium fluorescein produces a yellow color in bacteria that retain a sufficient amount of acridine orange. Cytoplasmatic staining variations in Pseudomonas spp., are associated with the amount of RNA and DNA present in the cells according to the phase of their cellular cycle.

Capacidade antioxidante de frutas / Antioxidant capacity of the fruits

Extratos aquoso e acetônico de 15 frutas foram submetidos a ensaios para investigar a habilidade de seqüestrar o radical estável 1,1-difenil-2-picrilhidrazil (DPPH) e a capacidade de inibir a oxidação em sistema modelo β-caroteno/ácido linoléico. Todas as frutas exibiram propriedade antioxidante, entretanto a ação foi diferenciada entre elas. O extrato aquoso da acerola, caju, mamão "Formosa", mamão Havaí, laranja pêra e goiaba foram os mais eficazes (superior a 70 por cento), enquanto que o do abacaxi, laranja cravo, manga rosa, melão espanhol, melão japonês, melão orange flesh e pinha apresentaram ação moderada (60-70 por cento) e o da manga espada e melancia exibiram a mais fraca capacidade de seqüestrar o radical DPPH. Os extratos acetônico da acerola, caju, pinha e goiaba exibiram uma forte capacidade de seqüestrar o radical DPPH (superior a 70 por cento). Em sistema modelo β-caroteno/ácido linoléico, o extrato aquoso da pinha e o acetônico da goiaba exibiram moderada capacidade antioxidante (60-70 por cento) enquanto que a acerola (extrato aquoso) e o mamão formosa (extrato acetônico) os menores percentuais. Frente à capacidade antioxidante exibida, as frutas podem ser apontadas como fontes de antioxidantes naturais, destacando-se a acerola, caju, mamão Formosa, mamão Havaí, goiaba, laranja pêra, e a pinha por terem apresentado uma potente capacidade antioxidante.

Aqueous and acetone extracts from 15 fruits have been screened for antioxidant activity using DPPH method and ß-carotene/linoleic acid model. All fruits studied showed antioxidant activity, but in different extent. Acerola, cashew-apple, papaya "formosa", papaya "solo", orange and guava showed the higher antioxidant activity (>70 percent) in DPPH method, followed by pineapple, bergamont, mango "rosa", melon "reticulares", melon "inodorus", melon "orange flesh" and sugar-apple aqueous extract (moderate, 60-70 percent) and mango "espada" and watermelon aqueous extract, the lowest activity. Acerola, cashew-apple, sugar-apple and guava acetone extracts exhibited higher scavenging activity toward DPPH radicals (>70 percent).β-carotene/linoleic acid model index of sugar-apple aqueous extract and guava acetone extract demonstrated moderate antioxidant activity (60-70 percent), meanwhile acerola aqueous extract and papaya "formosa" acetone extract the lower. According to antioxidant activity, fruits can be indicated as natural antioxidants sources, pointing out acerola, cashew-apple, papaya "solo", papaya "formosa", guava, orange and sugar-apple as the highest in antioxidant capacity.

Programmed cell death in salivary glands of Drosophila arizonae and Drosophila mulleri

Programmed cell death (PCD) in insect metamorphosis assumes a great diversity of morphology and controlling processes that are still not well understood. With the objective of obtaining information about the PCD process, salivary glands of Drosophila arizonae and D. mulleri were studied during larval-pupal development. From the results, it can be concluded that the type of the PCD that occurs in these organs is morphologically typical of apoptosis (formation of apoptotic nuclei, followed by fragmentation into apoptotic bodies). Histolysis happens in both species, between 22 and 23 h after pupation. There were no significant differences between the species studied. Apoptosis does not occur simultaneously in all cells. Cytoplasmic acid phosphatase activity gradually increases during development, suggesting the existence of acid phosphatases that are only expressed during the apoptotic stage. Twenty hours after pupation, salivary glands already show biochemical alterations relative to nuclear permeability such as acidification, possibly due to the fusion of lysosomes with the nucleus a few hours before apoptosis. Autophagy seems to act together with apoptosis and has a secondary role in cell death.

Evaluación y mejoramiento del ensayo inmunoenzimático (ELISA) para el diagnóstico de la anaplasmosis bovina, utilizando las MSP5 recombinante como antígeno / Evaluation and improvement of an immunoenzimatic assay (ELISA) for diagnosis of bovine anaplasmosis, using recombinant MSP5 as antigen

La anaplasmosis, es una enfermedad producida por la bacteria Anaplasma marginale que está ampliamente distribuida en Venezuela, originando efectos negativos en la salud y productividad de los rebaños bovinos. Hasta el presente se han caracterizado 6 proteínas mayoritarias de superficie (MSP) de esta bacteria, de las cuales la MSP5, ha sido señalada como un excelente polipéptido para el diagnóstico de la enfermedad, debido a que esta proteína es altamente conservada e inmunogénica. Esto ha motivado su clonamiento e inserción en un plásmido de E. coli, para usarla purificada como antígeno en ensayos inmunoenzimáticos. Sin embargo, estudios posteriores, indican que proteínas de E. coli recombinante que eluyen conjuntamente con la MSP5 durante el proceso de purificación, interfieren en el ELISA originando falsos positivos. En el presente trabajo se estandarizó un ELISA indirecto, utilizando la MSP5 como antígeno y se logró disminuir las uniones inespecíficas a las proteínas contaminantes de E. coli, por adición de un suero de conejo anti E. coli que bloquea los epítopes de estas proteínas. A través de un cuadro de contingencia de doble entrada, se determinaron los parámetros de validación del ELISA al compararla con la técnica de naranja de acridina-bromuro de etídio, obteniéndose como resultado que la técnica de ELISA mejorada es 96,1 por ciento sensible, 9 por ciento específica y presenta un valor predictivo del 88,6 por ciento. Además, se estudió una población bovina de 48 mautes de la Estación Experimental La Iguana (estado Guárico), utilizando ambas técnicas, obteniendo una seroprevalencia de 93,7 por ciento por ELISA y una prevalencia de 54,1 por ciento por naranja de acridina-bromuro de etidio. Estos resultados muestran que el bloqueo de los epítopes de las proteínas de E. coli contaminates, utilizando para ello un suero de conejo anti-E. coli, permite disminuir los falsos negativos cuando se utilizan proteínas recombinantes.

Anaplasmosis, is a disease produced by Anaplasma marginale widely distributed in Venezuela, causing negative effects on the health and productivity of bovine herds. Until now, 6 constitutive Anaplasma marginale Mayor Surface Proteins (MSPs) have been characterized, including MSP5 which appears to be an excellent polypeptide for the diagnosis of this disease since it is highly conserved and immunogenic. This has motivated its cloning and insertion into a plasmid in E. coli and the use of the purified antigen in immunoenzymatic assays. However, subsequent indicated that E. coli recombinant proteins, that copurify with MSP5, interfere with the ELISA giving rise to false positives. In the present study, it was accomplished the standardization of an indirect ELISA, using MSP5 as the antigen and it was also diminishing the non-specific unions to the contaminating proteins of E. coli by adding anti-E. coli rabbit serum that blocks the epitopes of these proteins. With the use of a double entry contingency table, the parameters of validation of the ELISA were determined, comparing it to the acridine orange-ethidium bromide technique. The result indicate that the improve MSP5 indirect ELISA has a 96.1% sensitivity, 9% specificity and a predictive value of 88.6%. It was also studied a bovine population of 48 cattle from the Experimental Station “La Iguana” (Guárico State), using both techniques, obtaining a seroprevalence of 93.7% with ELISA and a prevalence of 54.1% with orange acridine-ethidium bromide. These results show that the blockage of the contaminating E. coli protein epitopes using an anti-E. coli rabbit serum permits the diminishment of false negatives when using recombinant proteins.

Antimalarial drugs disrupt ion homeostasis in malarial parasites

Plasmodium chabaudi malaria parasite organelles are major elements for ion homeostasis and cellular signaling and also target for antimalarial drugs. By using confocal imaging of intraerythrocytic parasites we demonstrated that the dye acridine orange (AO) is accumulated into P. chabaudi subcellular compartments. The AO could be released from the parasite organelles by collapsing the pH gradient with the K+/H+ ionophore nigericin (20 µM), or by inhibiting the H+-pump with bafilomycin (4 µM). Similarly, in isolated parasites loaded with calcium indicator Fluo 3-AM, bafilomycin caused calcium mobilization of the acidic calcium pool that could also be release with nigericin. Interestingly after complete release of the acidic compartments, addition of thapsigargin at 10 µM was still effective in releasing parasite intracellular calcium stores in parasites at trophozoite stage. The addition of antimalarial drugs chloroquine and artemisinin resulted in AO release from acidic compartments and also affected maintenance of calcium in ER store by using different drug concentrations.

Determination of micronucleus frequency by acridine orange fluorescent staining in peripheral blood reticulocytes of mice treated topically with different lubricant oils and cyclophosphamide

To ascertain whether used and re-refined lubricant oil absorbed through the skin can produce a genotoxic effect or cytotoxicity in mouse bone marrow cells, we examined the induction of micronucleated erythrocytes of peripheral blood after cutaneous application. Both re-refined and used lubricant oils showed a weak but significant induction of micronucleated polychromatic erythrocytes compared with control, while virgin oil did not show micronucleus induction. Cyclophosphamide (CP) was used not only as positive control but also to compare the sensitivity between intraperitoneal and dermal routes of administration of the test compounds in mice. The efficacy of intraperitoneal injection of CP is well known. On the other hand, dermal exposure is not so common and when CP was diluted in glycerin statistically significant values (P = 0.0036) of micronuclei were also found. Topically applied lubricant oils (virgin, re-refined and used) have the capacity to interfere with mouse bone marrow hematopoiesis evidenced by a statistically significant decrease in the proportion of polychromatic erythrocytes in the peripheral blood. Physical and chemical analysis revealed that used oil is more viscous than other lubricants, suggesting the presence of insoluble compounds, oxidized products and water as well as aromatic hydrocarbons. Used oil differs from other lubricant oils in metal and polyaromatic hydrocarbon content. Re-refined oil revealed a neutral value typical of pure mineral oil. This assay is an important tool to evaluate environmental pollutants that cause genotoxicity and/or cytotoxicity through skin exposure.

Evaluación de 4 medios de cultivo para aislamiento primario de trichomonas vaginalis / Evaluation of four media the primary isolation of trichomonas vaginalis

The incidence sexually transmitted diseases (STD) is a global public health problem, highly complicated by infections produced by the human immunodeficiency virus. Parasitic etiological agents of STD in Chile are limited to trichomonas vaginalis, sarcoptes scabiei and phthirus pubis. Only T. vaginalis has a trophozoite stage which can be diagnosed with a high degree of success in the laboratory. The present study reports on four culture methods which facilitate the primary isolation of this protozoan from clinical samples. The best results for primary isolation of T. vaginalis were obtained using modified diamond media. It was demonstrated that Kupferberg-Agar medium was the best for growth of T. vaginalis without re-inoculation. The optimal pH for the growth of T. vaginalis in the cultures was 6.5, and 10 percent horse serum gave the best yields in development and viability of T. vaginalis over time.

La incidencia de las enfermedades de transmisión sexual (ETS) se mantiene como problema de salud pública a nivel mundial, agravado por las infecciones por los virus de la inmunodeficiencia humana. Los agentes etiológicos parasitarios de ETS que existen en Chile se limitan a Trichomonas vaginalis, Sarcoptes scabiei y Phthirus pubis. T. vaginalis sólo posee estadio de trofozoito por lo que el diagnóstico de laboratorio es de alta exigencia. En este trabajo se evaluaron 4 medios de cultivo para facilitar el aislamiento primario de este protozoo a partir de muestras clínicas. Con el medio Diamond Modificado se obtuvo los mejores resultados para el aislamiento primario de T. vaginalis. Se comprobó que el medio Kupferberg-Agar fue el más adecuado para el crecimiento sin repique de T. vaginalis. Se determinó que el pH del medio de cultivo para el crecimiento óptimo de T. vaginalis, fue dr 6,5, y suero quino al 10 por ciento fue la concentración de mejor rendimiento para desarrollo y viabilidad en el tiempo de T. vaginalis.

Comparison between morphological and staining characteristics of live and dead eggs of Schistosoma mansoni

Schistosoma mansoni eggs are classified, according to morphological characteristics, as follows: viable mature and immature eggs; dead mature and immature eggs, shells and granulomas. The scope of this study was to compare the staining characteristics of different morphological types of eggs in the presence of fluorescent labels and vital dyes, aiming at differentiating live and dead eggs. The eggs were obtained from the intestines of infected mice, and put into saline 0.85 percent. The fluorescent labels were Hoechst 33258 and Acridine Orange + Ethidium Bromide and vital dyes (Trypan Blue 0.4 percent and Neutral Red 1 percent). When labelled with the probe Hoechst 33258, some immature eggs, morphologically considered viable, presented fluorescence (a staining characteristic detected only in dead eggs); mature eggs did not present fluorescence, and the other types of dead eggs, morphologically defined, showed fluorescence. As far as Acridine Orange + Ethidium Bromide are concerned, either the eggs considered to be live, or the dead ones, presented staining with green color, and only the hatched and motionless miracidium was stained with an orange color. Trypan Blue was not able to stain the eggs, considered to be dead but only dead miracidia which had emerged out of the shell. Neutral Red stained both live and dead eggs. Only the fluorescent Hoechst 33258 can be considered a useful tool for differentiation between dead and live eggs.

Uso de laranja de acridina e azul de Toluidina na avaliaçäo da fertilidade masculina / The use of Acridine orange and Toluidine blue in the evaluation of male fertility

Sabendo que alterações no complexo DNA-proteína de espermatozóides humanos têm grandes repercusões sobre a fertilidade masculina, objetivou-se avaliar a eficácia das colorações com Laranja de Acridina (LA) e Azul de Toluidina (AT) na identificaçäo de tais alterações, além de verificar possíveis relações com outros parâmetros seminais. Avaliou-se sêmem de indivíduos férteis e subférteis utilizando-se os seguintes parâmetros: concentraçäo, morfologia, motilidade e anomalias do comlexo DNA-proteína. As colorações utilizando AT obtiveram maior correlaçäo com os parâmetros seminais convencionais quando comparados com as colorações utilizando LA. Obteve-se diferença significante entre o grupo de pacientes férteis e subférteis quanto a concentraçäo de espermatozóides, morfologia, motilidade A e colorações com AT. Concluiu-se que, apesar de serem variáveis independentes, os parâmetros seminais convencionais e as metodologias de coloraçäo com AT säo úteis na avaliaçäo da fertilidade masculina

Impacto del ácido ascórbico y su correlación con la reacción acrosomal, movilidad espermática, acridina naranja y prueba de penetrancia en huevo de hámster / Relation betwen acrosomal reaction, sperm motility, acridine orange and sperm penetration essay with ascorbic acid

Objetivo: Determinar si el uso del ácido ascórbico (AA) actúa como tratamiento protector antioxidante de la integridad del ADN del espermatozoide. Se valoró la movilidad espermática, la reacción acrosomal, la prueba de penetrancia en huevo de hámster y la integridad del ADN con la tinción de acridina naranja. Material y método: La muestra de esperma de 10 pacientes bajo estudio de infertilidad fue suplementada con AA a diferentes concentraciones con la finalidad de encontrar la dosis terapéutica y tóxica en el espermatozoide. Durante 48 horas de incubación se analizaron la muestra de esperma de 52 pacientes estudiados por infertilidad. Se realizó una dilución de 40 millones de espermas móviles/mL y se dividió en cuatro grupos: control (grupo 1), 300 µM AA (grupo 2), 50 por ciento líquido folicular de paciente donadora de óvulos (grupo 3), 50 por ciento líquido folicular de paciente con IVF sin éxito (grupo 4). Resultados: La supervivencia y movilidad espermática, 67 + 3 por ciento, lograda con la suplementación de 300 µM de AA mostraron una significativa relación positiva en la movilidad después de 24 horas (p < 0.005) con el suplemento de AA. El porcentaje de reacción acrosomal después de 24 horas de incubación fue de 35.35 + 2.2 y de 50.1 + 3.1 después de 48 horas (p < 0.001) sin diferencia estadísticamente significativa entre los tratamientos. A las 24 horas de tratamiento, el porcentaje de integridad del ADN fue de 82.72 + 1.78 y después de 48 horas de 92.66 + 1.76 (p < 0.001), no siendo estadísticamente significativo con el tratamiento. Después de 24 horas, en el 60 por ciento de los casos el número de huevos penetrados y el número de penetraciones fue mayor en el grupo de AA que en el control; sin embargo, no existió diferencia estadísticamente significativa con el tratamiento. Conclusiones: Después de 24 horas de incubación en el medio con AA, se incrementa la movilidad espermática y la reacción acrosomal. Es posible el uso de AA como inductor de reacción acrosomal y como protector de la integridad del ADN. La diferencia en la prueba de penetrancia en huevo de hámster no fue estadísticamente significativa en el grupo de AA; sin embargo, el efecto en el número de huevos penetrados y el número de penetraciones está presente. Nosotros consideramos que al incrementar el número de pacientes la diferencia será significativa.

La coloración fluorescente con naranja de acridina y el PAP: validación de ambas técnicas para la detección de trichomonas vaginalis / Fluorescent staining with acridine orange and PAP smear: validation tests of both tecniques for the detection of trichomonas vaginalis

Se efectuó la validación de la colorización de Papanicolaou, utilizada para citología vaginal, frente a la colorización fluorescente con naranja de acridina, a fin de evaluar el valor de un resultado negativo para Trichomonas vaginalis obtenido en un PAP. Se estudiaron 80 muestras de flujo vaginal de mujer entre 18 y 45 años, pacientes de consultorios externos de Ginecología del Hospital Municipal de la ciudad de Bahía Blanca, Provincia de Buenos Aires (Argentina). Las muestras se colorearon paralelamente por la técnica de Papanicolaou y por la coloración fluorescente con naranja de acridina. Los resultados mostraron que el PAP presenta una sencibilidad del 54,5 por ciento para la detección de T. vaginalis, validación efectuada frente a la coloración fluorescente con naranja de acridina, para una prevalencia de enfermedad en el grupo de mujeres estudiadas del 13,75 por ciento y un nivel de confianza del 95 por ciento. Para ensayos "en paralelo" con ambas coloraciones, el valor global de la prueba fue del 93,8 por ciento, con un valor predictivo del resultado negativo del 93,2 por ciento. Concluimos que si bien T. vaginalis es detectada en el PAP, éste no presenta sencibilidad significativamente elevada como para ser considerada como única prueba, debiéndose complementar siempre con una coloración fluorescente con naranja acridina, u otra prueba de similar valor

Tentativa de evidenciar o Trypanosoma cruzi no sangue periférico de pacientes com doença de Chagas, em fase crônica, por meio do Quantitative Buffy coat (QBC) / An attempt to detect Trypanosoma cruzi in the peripheral blood of patients with Chagas' disease, in chronic phase, using quantitative buffy coat (QBC)

Taking for granted the sensitivity of the Quantitative Buffy Coat (QBC) system, as documented in a murine experimental model, we assayed to detect Trypanosoma cruzi in the peripheral blood of 100 patients with Chagas disease in its chronic phase. By means of the method, no positivity occurred, evently as a consequence of small parasitemias, undetectable by this technique as assessed by the cases in consideration.

Valorizando a sensibilidade do sistema Quantitative Buffy Coat (QBC), documentada em modelo experimental murino, estando os animais com infecção aguda pelo Trypanosoma cruzi houve tentativa de evidenciar esse parasita no sangue periférico de 100 pacientes com doença de Chagas, em fase crônica. Com o emprego desse método, nenhuma positividade ocorreu, evidentemente em virtude das pequenas parasitemias, não reveláveis pela técnica, pelo menos conforme o verificado através da casuística considerada.

Electroforesis de aminoácidos a alto y bajo voltaje en agarosa / Electrophoresis of aminoacid in agarose at high and low voltage

Se ha desarrollado una nueva técnica para la separación electroforética de una solución de aminoácidos, compuesta por: taurina, ácido glutámico, serina, glicina, histidina, lisina y ß-alanina; que utiliza agarosa C como medio soporte y buffer fórmico-acético (pH=2,2). Las separaciones se realizan en bajo y alto voltaje (100-150 V y 350-800 V, respectivamente) obteniéndose en este último caso una mejor resolución, el tiempo empleado varía de acuerdo con las condiciones esperimentales y no supera los treinta minutos. El método proporciona información equivalente a la obtenida por la electroforesis tradicional, en papel a alto voltaje, con un menor costo, instrumental sencillo y, además, permite la densitometría directa de las separaciones coloreadas con nihidrina; se lo aplica a la separación de aminoácidos urinarios

Acridine orange metachromasia in the cytoplasm of simian rotavirus (SA-11)-infected MA-104 cell cultures

Acridine orange metachromasia was used to determine the distribution of simian rotavirus double-stranded RNA in cultured MA-104 cells 0 to 72 h post-infection. Correlations were made among time of detection and amount of viral antigens, virus yield and the ultrastructural aspects of infected cells. RNAase-resistant cytoplasmic metachromasia appeared 48 h post-infection, 36 h after the initial detection of viral antigens or infectious virions and 24 h after the appearance of the cytopathic effect. Acridine orange staining is thus useful for monitoring the progress of rotaviral infection in cell cultures due to its simplicity and low cost, in spite of its lower sensitivity compared to other techniques evaluated