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1.
Einstein (Säo Paulo) ; 13(1): 79-88, Jan-Mar/2015. graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-745885

RESUMO

Objective To establish whether the mutation in the Immp2L gene induces renal fibrosis and whether aging exacerbates renal morphology in mice. Methods Female mutant mice with mutation in the inner mitochondrial membrane peptidase 2-like protein at 3 and 18 months of age were used. Renal fibrosis was analyzed using classic fibrosis score, Masson’s trichrome staining, and analysis of profibrotic markers using real time polymerase chain reaction (superoxide dismutase 1, metalloproteinase-9, erythropoietin, transforming growth factor beta), and immunostaining (fibroblasts and Type IV collagen). Oxidative stress markers were determined by immunohistochemistry. The number of renal apoptotic cells was determined. Renal function was estimated by serum creatinine. Results Young mutant mice had significantly more glomerulosclerosis than age-matched mice (p=0.034). Mutant mice had more tubular casts (p=0.025), collagen deposition (p=0.019), and collagen type IV expression (p<0.001). Superoxide dismutase 1 expression was significantly higher in young mutants (p=0.038). Old mutants exhibited significantly higher expression of the fibroblast marker and macrophage marker (p=0.007 and p=0.012, respectively). The real time polymerase chain reaction of metalloproteinase-9 and erythropoietin were enhanced 2.5- and 6-fold, respectively, in old mutants. Serum creatinine was significantly higher in old mutants (p<0.001). Conclusion This mutation altered renal architecture by increasing the deposition of extracellular matrix, oxidative stress, and inflammation, suggesting a protective role of Immp2L against renal fibrosis. .


Objetivo Estabelecer se a mutação no gene Immp2L induz à fibrose renal e se o envelhecimento exacerba a morfologia renal em camundongos. Métodos Foram usadas fêmeas de camundongos mutantes para proteína semelhante à peptidase 2 da camada interna da mitocôndria, com 3 e 18 meses de idade. Para analisar a fibrose renal, foram usados o escore clássico de fibrose, a coloração com tricrômio de Masson, e a análise de marcadores profibróticos, por meio da reação em cadeia de polimerase em tempo real (superóxido dismutase 1, metalonoproteinase-9, eritropoietina e fator transformador de crescimento beta), e a imunocoloração (fibroblastos e colágeno IV). Marcadores de estresse oxidativo foram determinados por imuno-histoquímica. O número de células apoptóticas renais foi analisado. A função renal foi estimada por creatinina sérica. Resultados Camundongos mutantes jovens apresentaram glomeruloesclerose em quantidade significativamente maior que animais da mesma idade (p=0,034). Os mutantes mostraram maior formação de cilindros tubulares (p=0,025), deposição de colágeno (p=0,019) e maior expressão de colágeno do tipo IV (p<0,001). A expressão de superóxido dismutase 1 foi maior em mutantes jovens (p=0,038). Mutantes idosas exibiram maior expressão dos marcadores de fibroblastos e macrófagos (p=0,007 e p=0,012, respectivamente). As reações da cadeia de polimerase em tempo real da metalanoproteinase-9 e da eritropoietina estavam aumentadas em 2,5 e 6 vezes, respectivamente, em mutantes idosas. A creatinina sérica foi significantemente maior em animais idosos mutantes (p<0,001). Conclusão Essa mutação alterou a arquitetura renal pelo aumento da deposição de matriz extracelular, estresse oxidativo e inflamação, sugerindo papel de proteção de Immp2L contra a fibrose renal. .


Assuntos
Animais , Feminino , Camundongos , Modelos Animais de Doenças , Endopeptidases/genética , Endopeptidases/metabolismo , Rim/metabolismo , Rim/patologia , Mutação/fisiologia , Superóxidos/metabolismo , Apoptose/genética , Apoptose/fisiologia , Colágeno/análise , Creatinina/sangue , Eritropoetina/análise , Fibrose/genética , Fibrose/metabolismo , Metaloproteinase 9 da Matriz/análise , Estresse Oxidativo/genética , Estresse Oxidativo/fisiologia , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real , Insuficiência Renal Crônica/genética , Insuficiência Renal Crônica/metabolismo , Superóxido Dismutase/análise , Superóxidos/análise , Fator de Crescimento Transformador beta/análise
2.
Rev. bras. ginecol. obstet ; 37(1): 42-51, 01/2015. tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-732870

RESUMO

Gestational trophoblastic neoplasia (GTN) is the term to describe a set of malignant placental diseases, including invasive mole, choriocarcinoma, placental site trophoblastic tumor and epithelioid trophoblastic tumor. Both invasive mole and choriocarcinoma respond well to chemotherapy, and cure rates are greater than 90%. Since the advent of chemotherapy, low-risk GTN has been treated with a single agent, usually methotrexate or actinomycin D. Cases of high-risk GTN, however, should be treated with multiagent chemotherapy, and the regimen usually selected is EMA-CO, which combines etoposide, methotrexate, actinomycin D, cyclophosphamide and vincristine. This study reviews the literature about GTN to discuss current knowledge about its diagnosis and treatment.


Neoplasia trofoblástica gestacional (NTG) é o termo que descreve o conjunto de anomalias malignas da placenta, incluindo a mola invasora, coriocarcinoma, tumor trofoblástico do sítio placentário e tumor trofoblástico epitelióide. Ambos a mola invasora e o coriocarcinoma respondem bem à quimioterapia, com taxas de cura superiores a 90%. Desde o advento da quimioterapia, NTG de baixo risco tem sido tratada com monoquimioterapia, pelo geral methotrexate ou actinomicina-D. Casos de NTG de alto risco, contudo, devem ser tratados com poliquimioterapia, e o regime usualmente escolhido é o EMA-CO que combina etoposide, methotrexate, actinomicina-D, ciclofosfamida e vincristina. Esse estudo revê a literatura sobre NTG a fim de discutir os conhecimentos atuais sobre seu diagnóstico e tratamento.


Assuntos
Animais , Masculino , Ratos , Catepsinas/análise , Cistatinas/análise , Inibidores de Cisteína Proteinase/metabolismo , Endopeptidases , Leucina/análogos & derivados , Osteoclastos/química , Osteoclastos/enzimologia , Proteínas e Peptídeos Salivares/análise , Matriz Óssea/química , Matriz Óssea/enzimologia , Catepsina L , Cisteína Endopeptidases , Catepsinas/antagonistas & inibidores , Catepsinas/metabolismo , Cistatinas/metabolismo , Inibidores de Cisteína Proteinase/toxicidade , Leucina/metabolismo , Leucina/toxicidade , Lisossomos/enzimologia , Microscopia Imunoeletrônica , Osteoclastos/efeitos dos fármacos , Osteoclastos/ultraestrutura , Ratos Wistar , Cistatinas Salivares
3.
Hist. ciênc. saúde-Manguinhos ; 21(4): 1131-1149, Oct-Dec/2014.
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-732507

RESUMO

Associadas a projetos de construção da ideia de nação, no Brasil monárquico foram encaminhadas, pelo governo imperial, algumas iniciativas no sentido de materializar propostas de educação física. O objetivo deste artigo é investigar os sentidos e significados atribuídos ao tema na legislação e nos relatórios anuais do Ministério dos Negócios do Império (1831-1889), com especial interesse pelo que se refere ao Rio de Janeiro. A abordagem do assunto nas fontes pesquisadas evidencia que as visões sobre a educação física se deram a partir de uma matriz que articulava concepções de moral, saúde e civilização, tendo que lidar com as condições concretas de um país recém-independente, periférico e com uma burocracia ainda em formação.


In association with its nation building projects, the imperial government in Brazil under monarchic rule took some concrete actions based on proposals for physical education. The aim of this article is to investigate the meanings and significations attributed to this subject in the legislation and the annual reports issued by the Ministry of Business of the Empire (1831-1889), giving special attention to Rio de Janeiro. The approach to the subject in the sources researched demonstrates that the views of physical education took shape through a web of ideas that associated moral, health and civilization conceptions, in a bid to deal with the concrete circumstances of a newly independent peripheral nation with a bureaucratic structure in the process of formation.


Assuntos
Animais , Feminino , Camundongos , Carcinoma Pulmonar de Lewis/secundário , Catepsina B/antagonistas & inibidores , Catepsinas/antagonistas & inibidores , Endopeptidases , Leucina/análogos & derivados , Neoplasias Hepáticas Experimentais/prevenção & controle , Neoplasias Hepáticas Experimentais/secundário , Invasividade Neoplásica/prevenção & controle , Catepsina L , Colágeno , Cisteína Endopeptidases , Carcinoma Pulmonar de Lewis/metabolismo , Combinação de Medicamentos , Ensaios de Seleção de Medicamentos Antitumorais , Laminina , Leucina/farmacocinética , Leucina/farmacologia , Neoplasias Hepáticas Experimentais/enzimologia , Proteoglicanas , Células Tumorais Cultivadas
4.
Braz. j. microbiol ; 45(3): 903-910, July-Sept. 2014. ilus, graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-727019

RESUMO

A soil screened Bacillus flexus XJU-1 was induced to simultaneously produce alkaline amylase, alkaline lipase and alkaline protease at their optimum levels on a common medium under submerged fermentation. The basal cultivation medium consisted of 0.5% casein, 0.5% starch and 0.5% cottonseedoil as an inducer forprotease, amylase, and lipase, respectively. The casein also served as nitrogen source for all 3 enzymes. The starch was also found to act as carbon source additive for both lipase and protease. Maximum enzyme production occurred on fermentation medium with 1.5% casein, 1.5% soluble starch, 2% cottonseed oil, 2% inoculum size, initial pH of 11.0, incubation temperature of 37 °C and 1% soybean meal as a nitrogen source supplement. The analysis of time course study showed that 24 h was optimum incubation time for amylase whereas 48 h was the best time for both lipase and protease. After optimization, a 3.36-, 18.64-, and 27.33-fold increase in protease, amylase and lipase, respectively was recorded. The lipase was produced in higher amounts (37.72 U/mL) than amylase and protease about 1.27 and 5.85 times, respectively. As the 3 enzymes are used in detergent formulations, the bacterium can be commercially exploited to secrete the alkaline enzymes for use in detergent industry. This is the first report for concomitant production of 3 alkaline enzymes by a bacterium.


Assuntos
Amilases/metabolismo , Bacillus/enzimologia , Bacillus/metabolismo , Proteínas de Bactérias/metabolismo , Detergentes/metabolismo , Endopeptidases/metabolismo , Inibidores Enzimáticos/metabolismo , Lipase/metabolismo , Bacillus/crescimento & desenvolvimento , Bacillus/isolamento & purificação , Carbono/metabolismo , Meios de Cultura/química , Fermentação , Concentração de Íons de Hidrogênio , Nitrogênio/metabolismo , Microbiologia do Solo , Temperatura , Fatores de Tempo
5.
Mem. Inst. Oswaldo Cruz ; 109(1): 1-8, 02/2014. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-703649

RESUMO

Several genes related to the ubiquitin (Ub)-proteasome pathway, including those coding for proteasome subunits and conjugation enzymes, are differentially expressed during the Schistosoma mansoni life cycle. Although deubiquitinating enzymes have been reported to be negative regulators of protein ubiquitination and shown to play an important role in Ub-dependent processes, little is known about their role in S. mansoni . In this study, we analysed the Ub carboxyl-terminal hydrolase (UCHs) proteins found in the database of the parasite’s genome. An in silico ana- lysis (GeneDB and MEROPS) identified three different UCH family members in the genome, Sm UCH-L3, Sm UCH-L5 and Sm BAP-1 and a phylogenetic analysis confirmed the evolutionary conservation of the proteins. We performed quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction and observed a differential expression profile for all of the investigated transcripts between the cercariae and adult worm stages. These results were corroborated by low rates of Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC hydrolysis in a crude extract obtained from cercariae in parallel with high Ub conjugate levels in the same extracts. We suggest that the accumulation of ubiquitinated proteins in the cercaria and early schistosomulum stages is related to a decrease in 26S proteasome activity. Taken together, our data suggest that UCH family members contribute to regulating the activity of the Ub-proteasome system during the life cycle of this parasite.


Assuntos
Animais , Endopeptidases/genética , Schistosoma mansoni/enzimologia , Ubiquitina Tiolesterase/genética , Cercárias/enzimologia , Cercárias/genética , Sequência Conservada/genética , Evolução Molecular , Expressão Gênica , Genoma Helmíntico/genética , Genoma/genética , Estágios do Ciclo de Vida/genética , Camundongos Endogâmicos BALB C , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/métodos , Alinhamento de Sequência , Schistosoma mansoni/genética , Schistosoma mansoni/crescimento & desenvolvimento , Transcriptoma/fisiologia , Transcitose/fisiologia , Ubiquitina Tiolesterase/classificação , Proteases Específicas de Ubiquitina/genética , Ubiquitinação/fisiologia
6.
An. venez. nutr ; 26(2): 78-85, dic. 2013. tab, graf
Artigo em Espanhol | LILACS, LIVECS | ID: lil-746258

RESUMO

Entre los efectos no clásicos de la Vitamina D destaca su asociación con el sistema cardiovascular y su disminución, se relaciona con factores de riesgo que definen al Síndrome Metabólico (SM). Es por ello que el objetivo de este estudio fue evaluar los niveles de Vitamina D en pacientes con SM y relacionarlos con sus componentes. Fueron estudiados 31 individuos con SM que acudieron a consultas de medicina interna en el Instituto Venezolano de Seguro Social “Dr. Luis Guada Lacau” y el Ambulatorio Urbano “Dr. Miguel Franco” del Municipio Naguanagua, Edo. Carabobo durante el primer trimestre del año 2011. A los mismos les fueron medidos los niveles de 25-(OH)-Vitamina D, circunferencia abdominal, presión arterial, perfil lipídico y glicemia, así como los índices aterogénicos y la relación TG/HDL-c. 54% de los participantes presentó niveles insuficientes de Vitamina D, asociándose estadísticamente a LDL-c elevado (chi-cuadrado=3,77; p-valor=0,052), mostrando además una correlación media y positiva con los valores de esta lipoproteína (r=0.3813; p-valor=0.0350) y con la relación LDL-c/HDL-c (r=0.3820; p-valor=0,0340). No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los parámetros evaluados al dividir la muestra según la presencia o no de insuficiencia de vitamina D (prueba t de Student y Prueba de Wilcoxon-U-Mann Whitney). Los resultados obtenidos confirman la hipótesis de que la hipovitaminosis D puede ser considerada como un factor de riesgo para desarrollar SM, sugiriendo la realización de futuras investigaciones que contribuyan a profundizar la participación de la insuficiencia de esta vitamina y su posible interacción con otros factores no clásicos de riesgo cardiovascular(AU)


Among the nonclassical effects of vitamin D highlights its association with cardiovascular system, strongly associating your decline to risk factors that define the metabolic syndrome (MS). That is why the aim of this study was to assess vitamin D levels in patients with MS and link components. Was study 31 subjects with MS attending internal medicine clinics at the Venezuelan Institute of Social Security, “Dr. Luis Guada Lacau” and the Ambulatory Urban “Dr. Miguel Franco” of Naguanagua, Edo. Carabobo during the first quarter of 2011. At the same they were measured the levels of 25 - (OH)-vitamin D, waist circumference, blood pressure, lipid profile and glucose, and the atherogenic index and the ratio TG/HDL-c. 54% of participants had insufficient levels of Vitamin D, associated statistically elevated LDL-c (chi-square=3.77, p-value=0.052), also showing average and positive correlation with the values of this lipoprotein (r=0.3813, p-value=0.0350) and LDL-C/HDL-C relationship (r=0.3820, p-value=0.0340). No statistically significant differences were found between the parameters evaluated by dividing the sample according to the presence or absence of vitamin D insufficiency (Student’s t and Wilcoxon- U Mann-Whitney test). The results confirm the hypothesis that vitamin D deficiency may be considered a risk factor for developing MS, suggesting future conducting research that contributes to deepen the involvement of the failure of this vitamin and its possible interaction with other factors nonclassical cardiovascular risk(AU)


Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Vitamina D/análise , Deficiência de Vitamina D/complicações , Linfócitos B/ultraestrutura , Doenças Cardiovasculares/fisiopatologia , Síndrome Metabólica/fisiopatologia , Endopeptidases , Resistência à Insulina , Gordura Abdominal , Doenças Metabólicas
7.
Braz. j. microbiol ; 44(2): 529-537, 2013. graf, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-688598

RESUMO

The potentiality of 23 bacterial isolates to produce alkaline protease and carboxymethyl-cellulase (CMCase) on Ficus nitida wastes was investigated. Bacillus pumillus ATCC7061 was selected as the most potent bacterial strain for the production of both enzymes. It was found that the optimum production of protease and CMCase were recorded at 30 °C, 5% Ficus nitida leaves and incubation period of 72 h. The best nitrogen sources for protease and CMCase production were yeast extract and casein, respectively. Also maximum protease and CMCase production were reported at pH 9 and pH 10, respectively. The enzymes possessed a good stability over a pH range of 8-10, expressed their maximum activities at pH10 and temperature range of 30-50 °C, expressed their maximum activities at 50 °C. Ions of Hg2+, Fe2+ and Ag+ showed a stimulatory effect on protease activity and ions of Fe2+, Mg2+, Ca2+, Cu2+ and Ag+ caused enhancement of CMCase activity. The enzymes were stable not only towards the nonionic surfactants like Triton X-100 and Tween 80 but also the strong anionic surfactant, SDS. Moreover, the enzymes were not significantly inhibited by EDTA or cystein. Concerning biotechnological applications, the enzymes retained (51-97%) of their initial activities upon incubation in the presence of commercials detergents for 1 h. The potential use of the produced enzymes in the degradation of human hair and cotton fabric samples were also assessed.


Assuntos
Bacillus/enzimologia , Bacillus/crescimento & desenvolvimento , Proteínas de Bactérias/metabolismo , Carboximetilcelulose Sódica/metabolismo , Endopeptidases/metabolismo , Ficus/microbiologia , Resíduos Industriais , Proteínas de Bactérias/química , Carboximetilcelulose Sódica/química , Estabilidade Enzimática , Endopeptidases/química , Ativadores de Enzimas/metabolismo , Concentração de Íons de Hidrogênio , Metais/metabolismo , Temperatura , Fatores de Tempo
8.
Rev. colomb. psiquiatr ; 41(1): 26-47, ene.-abr. 2012. tab
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: lil-639930

RESUMO

Objetivos: Determinar la probabilidad de riesgo suicida y/o enfermedad mental y factores asociados en estudiantes de secundaria de tres colegios bogotanos. Métodos: Estudio de corte transversal con 309 adolescentes. Resultados: El promedio de edad fue de 13,83 ± 0,9 años, predominó el género femenino (58,6%) y el estrato socioeconómico 3 (68,3%). La probabilidad de riesgo para comportamiento suicida y/o síntomas mentales fue de 47,6%; 26,5% tuvo alguna manifestación suicida; 14,23% tuvo ideación suicida en los últimos tres meses; 3,55% tuvo intentos suicidas alguna vez en la vida, y 8,73% tuvo ideación suicida e intentos suicidas en los últimos tres meses. El riesgo de comportamiento suicida y/o enfermedad mental fue explicado conjuntamente por la depresión (OR = 27,9, IC95% = 3,5-223,1), la baja autoestima (OR = 11,8, IC95% = 2,5-56,5), la disfunción familiar severa (OR = 3,4, IC95% = 1,2-9,7), el sexo femenino (OR = 2,1, IC95% = 1,2-3,8) y la edad mayor o igual a 15 años (OR = 1,9, IC95% = 0,9-3,9). El maltrato psicológico seguido del abuso físico se asociaron con manifestación suicida y/o enfermedad mental, y la buena relación familiar, con menor probabilidad. Conclusión: La depresión, la baja autoestima, la disfuncionalidad familiar, el género femenino, la edad > 15 y la violencia intrafamiliar son factores asociados al riesgo suicida y/o enfermedad mental en adolescentes, y las buenas relaciones familiares se asocian con menor riesgo.


Objective: To establish the probability for suicide risk and/or mental disorders, together with related factors among high school students in 3 schools in Bogota. Methods: Cross sectional study of 309 adolescents. Results: The average age was 13.83 ± 0.9, female dominance (58.6%) and a 3rd socioeconomic stratum (68.3%). The suicidal risk behavioral probability and/or mental symptoms was 47.6%, 26.5% exhibited some suicide manifestations, 14.23% had experienced suicidal ideas in the last 3 months, 3.55% had had suicide attempts at least once in life, and 8.73% had suicidal ideas in the last 3 months with suicide attempts. The risk of suicidal behavior and /or mental disorders was explained jointly by depression (OR=27.9, 95% CI: 3.5-223. 1), low self-esteem (OR=11.8, 95% CI: 2.5-56.5), severe family dysfunction (OR=3.4, 95%CI 1.2-9.7), being female (OR=2.1, 95% CI: 1.2-3.8) and being 15 or older (OR=1.9, 95% CI: 0.967-3.9). Psychological abuse followed by physical mistreatment was associated with suicidal behavior and /or mental illness while good family relationships were associated to lower probability. Conclusion: Depression, low self-esteem, severe family dysfunction, female gender, older age (> 15) and domestic violence are risk factors associated with suicide and/or mental disorders in adolescents; good family relationships are associated with lower risk.


Assuntos
Feminino , Humanos , Endopeptidases/química , Proteínas do Leite/química , Leite Humano/química , Peptídeos/análise , Proteoma/química , Sequência de Aminoácidos , Endopeptidases/metabolismo , Dados de Sequência Molecular , Proteínas do Leite/metabolismo , Mapeamento de Peptídeos , Proteólise , Peptídeos/química , Peptídeos/metabolismo , Proteoma/metabolismo , Especificidade por Substrato
9.
Arq. bras. oftalmol ; 72(5): 650-654, set.-out. 2009. ilus, graf, tab
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-534185

RESUMO

OBJETIVOS: Induzir a produção de membranas vitreorretinianas em modelo de trauma ocular animal. Avaliar a inibição do desenvolvimento da proliferação vitreorretiniana (PVR) com o uso de hiperecina. MÉTODOS: Estudo Experimental. Foram utilizados 19 coelhos machos pigmentados adultos com peso entre 2.000 e 3.000 gramas. Todos submetidos a modelo de trauma com dispase associada à diatermia da retina para indução de membranas de PVR. Separados randomicamente para receberem hiperecina (10 µM em 0,1 ml) ou solução salina (0,1 ml) como placebo. Avaliados clinicamente no sétimo, décimo quarto, vigésimo primeiro e vigésimo oitavo dias de pós-operatório com oftalmoscopia indireta e retinografia colorida digitalizada. O grau de PVR foi classificado em estágios (de 0 a 7) segundo Hida e colaboradores. RESULTADOS: A formação de membranas esteve presente em 79 por cento dos olhos, sendo 100 por cento nos olhos do grupo placebo e 60 por cento nos olhos do grupo tratamento (hiperecina). A comparação entre as médias dos estágios de PVR entre os grupos mostrou diferença estatisticamente significativa, com valor p=0,0321 pelo teste Wilcoxon. CONCLUSÕES: O modelo de trauma com uso de dispase e diatermia da retina produz membranas vitreorretinianas. A hiperecina mostrou-se eficaz na diminuição do aparecimento e progressão do PVR.


PURPOSE: To produce proliferative vitreoretinopathy (PVR) in an animal ocular trauma model. To evaluate the inhibition of (PVR) emergence and progression by hypericin. METHODS: Experimental Study. Nineteen pigmented male adult rabbits weighing between 2,000 and 3,000 grams were used in this study. All of them were submitted to trauma model with dispase and retinal diathermy to induce PVR membranes formation. They were randomly assigned to receive hypericin (10 µM in 0.1 ml) or saline solution (0.1 ml) as placebo. They were evaluated clinically in the seventh, fourteenth, twenty-first and twenty-eighth postoperative days with indirect ophthalmoscopy and digital color retinography. The PVR degree was classified according to Hida (0 to 7). RESULTS: Membranes formation was present in 79 percent of the eyes; being 100 percent in the eyes of placebo group and 60 percent in the eyes of treatment group (hypericin). The comparison between PVR phases averages within the groups showed a statistically significant difference between the two groups, with a p value of 0.0321 for Wilcoxon test. CONCLUSIONS: The trauma model with dispase and retinal diathermy produces vitreoretinal membranes. Hypericin was considered effective in PVR emergence and progression decrease.


Assuntos
Animais , Masculino , Coelhos , Inibidores Enzimáticos/farmacologia , Perileno/análogos & derivados , Vitreorretinopatia Proliferativa/prevenção & controle , Endopeptidases/administração & dosagem , Modelos Animais , Perileno/farmacologia , Retina/efeitos dos fármacos , Retina/lesões , Retina/patologia , Vitreorretinopatia Proliferativa/induzido quimicamente , Vitreorretinopatia Proliferativa/patologia
10.
Braz. j. microbiol ; 38(3): 568-572, July-Sept. 2007. tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-464792

RESUMO

Radial growth rate, intracellular laccases and proteases activities, and protein content were evaluated in five strains of Pleurotus ostreatus, grown on starch-based and glucose-based agar media containing different concentrations of the glucose analogue 2-deoxyglucose (2-DG). Productivity of the strains in pilot scale cultivation was also determined. The mycelium of four strains had approximately between 0.6- to 3-fold higher protein content when grown on glucose medium containing 0.01 g/L of 2-DG than when grown on glucose medium. The radial growth rate and intracellular laccases activity of some strains showed a positive and a negative correlation with the productivity, respectively. These results suggest that the strains with high radial growth rate and low intracellular laccases activity on glucose without 2-DG, on starch without 2-DG or on glucose containing 0.01 g/L of 2-DG are highly productive in pilot production farm.


Avaliou-se o crescimento radial, as atividades de proteases e lacases e o conteúdo protéico de cinco cepas de Pleurotus ostreatus cultivado em agar à base de amido e à base de glicose contendo diferentes concentrações de 2-deoxiglicose (2-DG), um análogo da glicose. A produtividade das cepas em cultivo em escala piloto foi também determinada. Em quatro cepas o conteúdo protéico do micélio foi aproximadamente 0,6 a 3 vezes maior quando foram cultivadas em meio à base de glicose contendo 0,01g/L de 2-DG. O crescimento radial e a atividade de lacases apresentaram correlação positiva e negativa, respectivamente, com a produtividade. Esses resultados sugerem que as cepas com elevada taxa de crescimento radial e baixa atividade de lacases em glicose sem 2-DG, ou em amido sem 2-DG, ou em glicose com 0,01 g/L de 2-DG, são altamente produtivas em cultivo em escala piloto.


Assuntos
Ágar , Agaricales , Endopeptidases , Glucose , Técnicas In Vitro , Micélio/crescimento & desenvolvimento , Pleurotus , Meios de Cultura , Métodos , Amostragem
11.
Arq. bras. oftalmol ; 70(3): 407-411, maio-jun. 2007. ilus
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-459825

RESUMO

OBJETIVO: Avaliar as características morfológicas da membrana amniótica desepitelizada por diferentes técnicas. MÉTODOS: A membrana amniótica humana foi coletada no momento do parto, fixada em concentrações crescentes de glicerol (0-50 por cento em DMEM) e preservada a 80°C até a hora de ser usada. O estudo consistiu de 4 grupos: epitélio intacto (controle) e membranas desepitelizadas pela tripsina (2 mg/mL a 1:250), dispase (1,2 U/mL em solução salina balanceada de Hank livre de Mg2+ e Ca2+) e ácido etilenodiaminotetra-acético (EDTA), 0,02 por cento). As amostras foram submetidas à análise por microscopia eletrônica (de varredura e de transmissão). RESULTADOS: A microscopia eletrônica de varredura mostrou epitélio intacto no grupo controle e sua ausência nas membranas amnióticas desepitelizadas pela tripsina e pela dispase. Naquelas tratadas com o ácido etilenodiaminotetra-acético, havia áreas com e sem epitélio. Quando avaliadas pela microscopia eletrônica de transmissão, o epitélio estava intacto e firmemente aderido à membrana basal através de hemidesmossomos nos grupos controle e em parte do ácido etilenodiaminotetra-acético. Havia apenas fibras colágenas nas membranas tratadas com dispase e tripsina. CONCLUSÕES: O tratamento da membrana amniótica com tripsina e dispase pode causar completa retirada do epitélio e da membrana basal, ao passo que o ácido etileno- diaminotetra-acético pode preservar áreas com epitélio intacto e parcialmente destruir a membrana basal em outras.


PURPOSE: To evaluate the morphological features of the amniotic membrane denuded by different techniques. METHODS: Human amniotic membrane was collected at the time of delivery, fixed in increasing concentrations of glycerol (0-50 percent in DMEM) and preserved at -80°C until the time of use. The study consisted of 4 groups: intact epithelium (control) and denuded by trypsin (2 mg/mL at 1:250), dispase (1.2 U/mL in Mg2+ and Ca2+ free Hank's balanced salt solution) or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 0.02 percent. Specimens were submitted to electron (scanning and transmission) microscopy analysis. RESULTS: Scanning electron microscopy disclosed intact epithelium in the control group and its absence in the amniotic membranes denuded by trypsin and dispase. In those denuded by ethylenediaminetetraacetic acid there were areas with and without epithelium. When assessed by transmission electron microscopy, the epithelium was intact and firmly adhered to the basement membrane by hemidesmossomes in controls and in parts of ethylenediaminetetraacetic acid group. There were only collagen fibers in the dispase- and trypsin-treated groups. CONCLUSIONS: Trypsin and dispase treatment of the amniotic membrane may cause complete denuding of the epithelium and basement membrane whereas ethylenediaminetetraacetic acid may leave some intact epithelium-areas and partially destroy the basement membrane in others.


Assuntos
Humanos , Âmnio/ultraestrutura , Células Epiteliais/ultraestrutura , Âmnio/efeitos dos fármacos , Técnicas de Cultura de Células , Ácido Edético/farmacologia , Endopeptidases/farmacologia , Microscopia Eletrônica , Tripsina/farmacologia
12.
Braz. j. microbiol ; 38(1): 110-112, Jan.-Mar. 2007.
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-449378

RESUMO

Opportunistic mycoses have been increasingly observed among immunocompromised patients. We describe a case in which Engyodontium album was isolated and cultured from the blood of a patient with the Acquired Immunodeficiency Syndrome. E. album grew at 37°C and showed proteinase activity, both indicators of pathogenicity. This is the first time that this organism has been reported as agent of fungaemia.


Micoses oportunistas têm sido progressivamente observadas entre pacientes imunocomprometidos. Nós descrevemos um caso no qual Engyodontium album foi isolado e crescido do sangue de um paciente com a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida. E. album cresceu a 37°C e exibiu atividade proteásica, ambos indicadores de patogenicidade. Esta é a primeira vez que este organismo foi reportado como agente de fungemia.


Assuntos
Humanos , Masculino , Adulto , Síndrome de Imunodeficiência Adquirida , Endopeptidases , Fungemia , Técnicas In Vitro , Micoses , Meios de Cultura , Métodos , Amostragem , Virulência
13.
Genet. mol. res. (Online) ; 6(4): 846-858, 2007. ilus, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-520062

RESUMO

Bowman-Birk inhibitors (BBIs) are cysteine-rich and highly cross-linked small proteins that function as specific pseudosubstrates for digestive proteinases. They typically display a "double-headed" structure containing an independent proteinase-binding loop that can bind and inhibit trypsin, chymotrypsin and elastase. In the present study, we used computational biology to study the structural characteristics and dynamics of the inhibition mechanism of the small BBI loop expressing a 35-amino acid polypeptide (ChyTB2 inhibitor) which has coding region for the mutated chymotrypsin-inhibitory site of the soybean BBI. We found that in the BBI-trypsin inhibition complex, the most important interactions are salt bridges and hydrogen bonds, whereas in the BBI-chymotrypsin inhibition complex, the most important interactions are hydrophobic. At the same time, ChyTB2 mutant structure maintained the individual functional domain structure and excellent binding/inhibiting capacities for trypsin and chymotrypsin at the same time. These results were confirmed by enzyme-linked immunosorbend assay experiments. The results showed that modeling combined with molecular dynamics is an efficient method to describe, predict and then obtain new proteinase inhibitors. For such study, however, it is necessary to start from the sequence and structure of the mutant interacting relatively strongly with both trypsin and chymotrypsin for designing the small BBI-type inhibitor against proteinases.


Assuntos
Animais , Endopeptidases/metabolismo , Inibidor da Tripsina de Soja de Bowman-Birk/química , Modelos Moleculares , Sequência de Aminoácidos , Bovinos , Análise por Conglomerados , Desenho de Fármacos , Inibidor da Tripsina de Soja de Bowman-Birk/farmacologia , Inibidores da Tripsina/química , Quimotripsina/antagonistas & inibidores
14.
Braz. j. microbiol ; 37(3): 230-236, July-Sept. 2006. ilus, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-442123

RESUMO

Thirty-two clinical isolates of Enterococcus faecalis were screened for virulence factors. Twenty-four (75 percent) isolates produced hemolysin on Mueller-Hinton blood agar plates with sheep erythrocytes. However, the cell free heat-stable hemolysin was detected in all isolates (100 percent) of E. faecalis when grown in BHI-GA (BHI medium supplemented with 1 percent glucose and 0.03 percent L-arginine), but not in BHI broth alone. Twenty-four isolates (75 percent) produced caseinase and 23 (71.9 percent) lipase, but none of the isolates produced gelatinase. Fifteen (46.9 percent) culture filtrates caused rounding and membrane alterations with blebbing formation followed by death in HeLa and HEp-2 cells, but not in Vero cells. Thirteen isolates (40.6 percent) agglutinated rabbit erythrocytes, but did not produce hemagglutination in other bloods, containing or not 1 percent D-manose. Sixteen (50 percent) E. faecalis isolates adhered to HeLa cells and thirteen (40.6 percent) to HEp-2 cells, but all isolates adhered to polypropylene microtiter plates, indicating that clinical E. faecalis possess the ability to form biofilm in vitro. All the isolates were resistant to the bactericidal action of normal serum and did not produce aerobactin. These findings suggest that adherence and consequently biofilm formation on ephitelial host cells are the first steps in the E. faecalis virulence and that hemolysin, lipase, caseinase and other virulence factors act as causative of human epithelial cell damages.


Foram estudados os fatores de virulência de trinta e duas amostras de Enterococcus faecalis, isolados de casos clínicos. Vinte e quatro amostras (75 por cento) produziram hemolisina em ágar sangue preparado com hemácias de carneiro. No sobrenadante da cultura em BHI nenhuma amostra produziu hemolisina, no entanto quando cultivadas em meio BHI suplementado com 1 por cento de glucose e 0,03 por cento de L-arginina (BHI-GA), 100 por cento das amostras lisaram hemácias de carneiro. Vinte e quatro (75 por cento) amostras produziram caseinase e 23 (71,9 por cento) lipase, mas nenhuma amostra produziu gelatinase. Dezesseis (46,9 por cento) causaram arredondamento e alteração na membrana das células, com formação de vesículas e, em seguida, a morte das células HeLa e HEp-2. Treze amostras (40,6) aglutinaram eritrócitos de coelhos, mas não aglutinaram outros eritrócitos na presença ou na ausência de 1 por cento de D-manose. Dezesseis (50 por cento) aderiram em células HeLa e 13 (40,6 por cento) em células HEp-2, mas todas as amostras de E. faecalis aderiram na microplaca de polipropileno, indicando que E. faecalis isolados de casos clínicos possuem capacidade de formar biofilme "in vitro". Todos os isolados mostraram-se resistentes à ação bactericida do soro normal e não produziram aerobactina. Esses resultados sugerem que, inicialmente, a colonização ou infecção por E. faecalis ocorre pela aderência e formação de biofilme nas células epiteliais e a produção de hemolisina, lípase e caseinase pode atuar como fatores de virulência na infecção por E. faecalis.


Assuntos
Coelhos , Citotoxinas , Endopeptidases , Enterococcus faecalis , Proteínas Hemolisinas , Técnicas In Vitro , Infecções por Bactérias Gram-Positivas , Lipase , Fatores de Virulência , Métodos , Amostragem , Ovinos
15.
Braz. j. microbiol ; 37(3): 276-282, July-Sept. 2006. graf, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-442131

RESUMO

The present study deals with the isolation and characterization of the moderately halophilic-alkaliphilic bacteria from a saline habitat in western India. Eight different bacterial strains were isolated using enrichment techniques at 20 percent (w/v) NaCl and pH 10. The isolates exhibited diversity towards gram's reaction, colony and cell morphology. They were able to grow and produce alkaline protease over a broad range of NaCl, 5-20 percent (w/v) and pH, 8-10. None of the isolates could grow at pH 7, and one could not grow even at pH 8. Crude and partially purified proteases from strain S5 were subjected to characterization with reference to pH, salt stability and protein folding. Optimum protease activity and stability was recorded at 10 percent salt and pH 9-9.5. Denaturation kinetics of S5 alkaline protease along with a reference protease was studied at 8M urea followed by renaturation. The S5 alkaline protease could be partially renatured up to 32 percent of the original activity. Despite of the fact that all the 8 isolates were from the same site, they displayed significant diversity with respect to their salt requirement for growth and enzyme secretion. While the effect of pH was less demarcated on growth, the protease production was significantly affected. Isolate S5 produced substantial amount of halotolerant and alkaline protease. The activity and stability of the alkaline protease in a broader range of pH and salt would definitely make this enzyme an important candidate for various industrial applications.


O presente estudo relata o isolamento e caracterização de bactérias moderadamente halofilicas e alcalífilicas de um habitat salino no oeste da índia. Oito cepas diferentes de bactérias foram isoladas empregando técnicas de enriquecimento em NaCl a 20 por cento (p/v) e pH 10. As cepas apresentaram diversidade em relação à coloração de Gram e à morfologia das colônias e células. As cepas foram capazes de multiplicar e produzir protease alcalina em uma ampla faixa de concentração de NaCl (5 a 20 por cento) e pH (8 a 10). Nenhuma das cepas foi capaz de se multiplicar em pH 7, e uma não se multiplicou nem em pH 8.0. Proteases naturais e parcialmente purificadas da cepa S5 foram submetidas à caracterização com relação ao pH, estabilidade salina, e estrutura protéica. Atividade e estabilidade ótimas da protease foram obtidas com 10 por cento de sal e pH 9-9,5. A cinética de denaturação da protease de S5, juntamente com uma protease de referencia, foi avaliada com uréia 8M seguida de renaturação. A protease alcalina de S5 foi renaturada a 32 por cento da atividade original. Apesar de provenientes do mesmo local, as oito cepas mostraram grande diversidade em relação à exigência de sal para multiplicação e secreção enzimática. Enquanto o efeito do pH na multiplicação foi menos marcante, o efeito na produção de protease foi significativamente afetada. A cepa S5 produziu uma quantidade substancial de protease alcalina e halotolerante. A atividade e estabilidade da protease alcalina em uma faixa mais ampla de pH e sal tornam essa enzima uma importante candidata para diversas aplicações industriais.


Assuntos
Bactérias/isolamento & purificação , Secreções Corporais , Endopeptidases , Halobacteriales , Técnicas In Vitro , Solos Salitrosos , Métodos , Amostragem
16.
Braz. j. microbiol ; 37(3): 307-311, July-Sept. 2006. graf, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-442135

RESUMO

Enzymes, and particularly proteases, have become an important and indispensable part of industrial processes such as laundry detergents, pharmaceuticals and food products. Detergents such as Tide®, Ariel® and Biz® contain proteolytic enzymes, most of them produced by members of the genus Bacillus. This paper describes the compatibility of protease produced by the thermophilic Bacillus sp, with commercial laundry detergent. Stability studies indicated that this enzyme retained about 95 percent and 74 percent of its maximum activity after 1h at 60°C in the presence of glycine in combination with MnSO4 and CaCl2, respectively. No inhibitory effect was observed at 1.0-5.0 mM of EDTA. Triton X-100 inhibited the enzyme in all the concentrations tested. The enzyme was unstable in a 5 percent (v/v) concentration of peroxide solution. The protease retained more than 80 percent and 65 percent of its activity after 30 min incubation at 60°C in the presence of Tide® and Cheer® detergents, respectively. After supplementation of CaCl2 (10 mM) and glycine (1 mM), the enzyme in Tide® detergent retained more than 85 percent of its activity after 1h. Based on these findings, Bacillus sp. protease shows a good potential for application in laundry detergents.


As enzimas, principalmente as proteases, têm uma participação importante e indispensável em muitos processos industriais tais como na indústria farmacêutica, de alimentos e de detergentes. Alguns detergentes como Tide®, Ariel® e Biz® contem enzimas proteolíticas em sua formulação, sendo a maioria produzida por bactérias do gênero Bacillus sp. Neste artigo, foi avaliada a compatibilidade de uma protease produzida por um microrganismo termofílico, Bacillus sp., com alguns detergentes comerciais. Estudos sobre a estabilidade mostraram que a enzima reteve cerca de 95 por cento e 74 por cento de sua máxima atividade após 1h a 60°C na presença de glicina em combinação com MnSO4 e CaCl2 respectivamente. A enzima não foi inibida em presença de 1.0 - 5.0 mM de EDTA. A adição de Triton X-100 inibiu a atividade enzimática em todas as concentrações estudadas. A enzima não foi estável na presença de uma solução a 5 por cento (v/v) de peróxido de hidrogênio. A protease manteve mais de 80 por cento e 65 por cento de atividade após 30 min de incubação na presença dos detergentes Tide® e Cheer® respectivamente. Após adição de CaCl2 (10 mM) e glicina (1 mM), a enzima manteve mais de 85 por cento de atividade após 1 hora de incubação em presença do detergente Tide®. Considerando estas propriedades, a protease de Bacillus sp., pode ser útil na indústria de detergentes.


Assuntos
Bacillus , Detergentes , Endopeptidases , Técnicas In Vitro , Peptídeo Hidrolases , Métodos , Amostragem
17.
Rev. MED ; 14(1): 80-87, jul. 2006. tab
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: lil-441290

RESUMO

El Inter-Alfa-Inhibidor (IAI) es un complejo proteico sanguíneo con actividad anti-inflamatoria que consiste de una cadena liviana del interinhibidor llamada bikunina (ITIL) y dos cadenas pesadas del inter inhibidor (ITIHs). La bikunina es una serpina (Serina-Proteasa Inhibidora) y las ITIHs posiblemente son cistininas (Cisteína-Proteasa Inhibidoras). Las ITIHs pueden ser transferidas desde IAI a molÚculas de ßcido hialurénico y unirse a estas covalentemente para formar complejos de ácido-hialurónico-ITIHs en la matriz extracelular, requeridos para garantizar su estabilidad. Este artículo de revisión considera la información actual relacionada a IAI.Palabras clave: Ácido hialurónico, alfa-1-microglobulina, bikunina, CD44, cistininas (cisteínaproteasas inhibidores), matriz extracelular, HAS (acido hialurónico-sintetasas), hialuroadherinas, hialuronidasas, inflamación, inmunidad, inter-alfa-inhibidor (IAI), ITIL (cadena liviana del interinhibidor), ITIH (cadena pesada del inter inhibidor), lipocalinas, proteasas, serpinas (serina-proteinasa- inhibidores), TSG6 gen 6 regulado por factores de necrosis tumoral


Assuntos
Humanos , Cistina , Endopeptidases , Matriz Extracelular , Ácido Hialurônico , Imunidade , Inflamação , Serpinas , Adjuvantes Imunológicos , Anti-Inflamatórios
18.
Braz. j. microbiol ; 37(1): 26-32, Jan.-Mar. 2006. ilus, graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-430976

RESUMO

Cepas orais de Candida albicans coletadas de crianças saudáveis cárie ativas e livres de cárie com idade variando de 24 a 36 meses, foram estudadas. O propósito do estudo foi determinar a atividade da proteinase e da fosfolipase produzida por Candida albicans nos dois grupos e comparar com a diversidade genotípica usando o método AP-PCR. As cepas identificadas como C. albicans por testes morfológicos e de fermentação, foram cultivadas em meio ágar proteinase e fosfolipase a 37ºC por 7 e 4 dias, respectivamente. Após o período de incubação, a atividade enzimática das cepas proteinase e fosfolipase positiva foram medidas. Todas as cepas foram submetidas a técnica genotípica AP-PCR, usando o primer arbitrário AP-3. A análise enzimática demonstrou que não há diferença entre os dois grupos estudados. O método AP-PCR foi eficiente em demonstrar o polimorfismo genético de C. albicans intra indivíduos demonstrando uma maior diversidade clonal em crianças cárie ativas em relação as livres de cárie. Dendogramas de similaridade demonstraram semelhança na linhagem clonal apenas intra-indivíduos. Os resultados sugerem que o perfil enzimático não depende das características genotípicas das cepas.


Assuntos
Humanos , Lactente , Criança , Candida albicans , Candidíase Bucal , Endopeptidases , Ativação Enzimática , Técnicas In Vitro , Fosfolipases , Genótipo , Métodos , Reação em Cadeia da Polimerase , Virulência
19.
Braz. j. microbiol ; 37(1): 42-46, Jan.-Mar. 2006. graf
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-430979

RESUMO

Actinobacillus actinomycetemcomitans produz protease ativa sobre imunoglobulina G humana, sendo um dos mecanismos importantes de escape do microrganismo. No presente trabalho, foi analisada a atividade proteolítica de sobrenadante de cultivo de A. actinomycetemcomitans ATCC 43718 sobre imunoglobulina G humana em função de concentração, tempo de cultivo do microrganismo e tempo de incubação com IgG, por ensaio imunoenzimático. Adicionalmente, foi determinada a fração com atividade de protease por meio de análise de eluatos de cromatografia em coluna de Sephadex G 150. Os resultados obtidos demonstraram que A. actinomycetemcomitans liberou protease ativa sobre imunoglobulina G humana em sobrenadante de cultivo, sendo a sua maior atividade evidenciada na concentração de 27,5 mg proteína/mL, com tempo de cultivo de 72 horas e com 24 horas de incubação com IgG. A massa molecular da fração ativa de protease foi compreendida entre 43 a 150 kDa.


Assuntos
Ensaios Enzimáticos Clínicos , Endopeptidases , Imunoglobulina G , Técnicas In Vitro , Peptídeo Hidrolases , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Técnicas Imunoenzimáticas , Métodos
20.
Rev. SOCERJ ; 18(6): 542-546, nov.-dez. 2005. tab, graf
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-434784

RESUMO

A disponibilidade da terapia anti-retroviral tem resultado em um enorme declínio nas taxas de morbidade e mortalidade dos pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana. entretanto, tal terapia tem sido associada a efeitos metabólicos adversos, como a dislipidemia; sendo assim, indivíduos com doença arterial coronariana devem ser identificados e tratados. Este artigo faz uma revisão das anormalidades dos lipídios e das lipoproteínas associadas ao uso dos inibidores de proteases, sobre o possível mecanismo da dislipidemia associada a estes inibidores e usa o protocolo do programa de educação para tratamento do colesterol em adultos(National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III Guidelines) para o acompanhamento do paciente com dislipidemia.


Assuntos
Terapia Antirretroviral de Alta Atividade , Hiperlipidemias , Síndrome de Imunodeficiência Adquirida/diagnóstico , Síndrome de Imunodeficiência Adquirida/fisiopatologia , Síndrome de Imunodeficiência Adquirida/terapia , Endopeptidases/biossíntese , Endopeptidases/metabolismo , Lipídeos/biossíntese , Lipoproteínas/biossíntese , Lipoproteínas/metabolismo
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