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1.
Invest. clín ; 54(2): 206-225, jun. 2013.
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: lil-740349

RESUMO

La micrometástasis o enfermedad mínima residual ha adquirido una importancia trascendental en oncología al representar un verdadero problema clínico que debe ser solucionado, ya que aún se desconoce la respuesta de estos focos tumorales a los diferentes tratamientos que se usan para el control del cáncer. Aun cuando este es un problema específico fundamental a ser solucionado, ya existen métodos de ensayo inmunohistoquímicos y de biología molecular, que han permitido la ubicación de microfocos de células tumorales en diferentes órganos y tejidos, existiendo diferentes técnicas para determinar y cuantificar estas lesiones. Dentro de estas técnicas destacan la citometría de flujo y diferentes técnicas moleculares que van desde las ya tradicionales hasta las más nuevas y sofisticadas. El objetivo de la presente revisión está dirigido evaluar los nuevos métodos de diagnóstico que permitan la identificación de esta enfermedad residual, lo cual serviría para establecer tratamientos individualizados que pudieran prevenir la recurrencia de la enfermedad en los pacientes de cáncer bajo tratamiento.


Micrometastasis or minimal residual disease has become critically important in oncology since it represents a true clinical problem that must be solved, as the response of these tumor foci to the different treatments that are used for the control of cancer, is still unknown. Even though this is a fundamental specific problem to be solved, there are already immunohistochemical and molecular biology diagnostic methods that have allowed microfoci location of tumor cells in various organs and tissues, and different techniques are available to determine and quantify these lesions. Within these techniques, flow cytometry and different molecular methods are included, and they range from the traditional to the newest and most sophisticated. The goal of this review was aimed to evaluate new diagnostic methods that permit the identification of this residual disease, which would serve to establish individualized treatments and prevent the recurrence of the disease in cancer patients under treatment.


Assuntos
Humanos , Micrometástase de Neoplasia/diagnóstico , Biomarcadores Tumorais , DNA de Neoplasias/análise , Citometria de Fluxo/métodos , Técnicas Genéticas , Técnicas de Sonda Molecular , Biologia Molecular/métodos , Hibridização de Ácido Nucleico , Micrometástase de Neoplasia/genética , Micrometástase de Neoplasia/patologia , Proteínas de Neoplasias/análise , Neoplasia Residual/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , RNA Neoplásico/análise , Análise Serial de Tecidos
2.
J. bras. pneumol ; 34(11): 922-926, nov. 2008. ilus, tab
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-623380

RESUMO

OBJETIVO: O aparecimento da co-infecção tuberculose/HIV e o aumento de casos de doenças provocadas por micobactérias não-tuberculosas (MNT) exigem repostas laboratoriais rápidas tanto no isolamento como na identificação das micobactérias. O objetivo deste trabalho foi avaliar a identificação das micobactérias através de sonda genética em comparação com os métodos bioquímicos clássicos. MÉTODOS: Entre 2002 e 2004, foram analisadas 178 culturas de micobactérias, confirmadas como bacilos álcool-ácido resistentes e obtidas de isolados clínicos de pacientes sintomáticos respiratórios ou com suspeita clínica de tuberculose pulmonar e/ou micobacterioses, atendidos nas Unidades de Saúde da Baixada Santista. RESULTADOS: A sonda genética identificou 137 amostras (77%) como complexo Mycobacterium tuberculosis e 41 (23%) como MNT. A discordância observada de 3% entre os métodos ocorreu apenas no ano de implantação (2002). Ao comparar os métodos, a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo da sonda genética foram 98%, 93%, 98% e 93%, respectivamente. CONCLUSÕES: Apesar do custo elevado, a identificação de micobactérias pela técnica molecular é mais rápida: máximo de 3 h vs. 28-30 dias para os métodos clássicos. A utilização de sondas genéticas é uma técnica molecular validada, simples e disponível no mercado, com elevada especificidade, sensibilidade e rapidez, o que justifica sua implantação e uso rotineiro em laboratórios de referência, facilitando o diagnóstico e permitindo uma intervenção clínica ágil.


OBJECTIVE: The emergence of tuberculosis/HIV co-infection and the increase in the number of cases of infection with nontuberculous mycobacteria (NTM) require rapid laboratory test results in the isolation and identification of mycobacteria. The objective of this study was to evaluate the identification of mycobacteria by means of gene probes in comparison with that obtained using classical biochemical methods. METHODS: Between 2002 and 2004, 178 mycobacterial cultures, all testing positive for acid-fast bacilli, were analyzed. Samples were obtained from clinical specimens of patients with respiratory symptoms or with clinical suspicion of pulmonary tuberculosis/mycobacteriosis who were treated in the greater metropolitan area of Santos. RESULTS: The gene probe identified 137 samples (77%) as Mycobacterium tuberculosis complex and 41 (23%) as NTM. Discordant results between the methods (3%) were obtained only in the year of implementation (2002). When comparing the methods, the sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of the gene probe method were 98%, 93%, 98% and 93%, respectively. CONCLUSIONS: Despite the cost, the identification of mycobacteria using the molecular technique is faster: maximum 3 h vs. 28-30 days for classical methods. The use of gene probes is a validated molecular technique. It is fast, easy to use and readily available on the market. It has high specificity and sensitivity, which justifies its implementation and routine use in referral laboratories, since it facilitates the diagnosis providing agile clinical interventions.


Assuntos
Humanos , Técnicas Bacteriológicas/normas , Sondas de DNA/normas , Técnicas de Sonda Molecular/normas , Mycobacterium/genética , Tuberculose Pulmonar/diagnóstico , Infecções por HIV/complicações , Mycobacterium tuberculosis/classificação , Mycobacterium tuberculosis/genética , Mycobacterium tuberculosis/isolamento & purificação , Mycobacterium/classificação , Mycobacterium/isolamento & purificação , Valor Preditivo dos Testes , Estudos Retrospectivos , Sensibilidade e Especificidade , Tuberculose Resistente a Múltiplos Medicamentos/complicações , Tuberculose Resistente a Múltiplos Medicamentos/diagnóstico , Tuberculose Pulmonar/complicações
3.
J. bras. pneumol ; 33(6): 707-711, nov.-dez. 2007. ilus, tab
Artigo em Inglês, Português | LILACS | ID: lil-471294

RESUMO

OBJETIVO: O Mycobacterium tuberculosis, sob certas condições apropriadas, cresce em cordões de serpentinas, denominados de fator corda, ou crescimento em cordas. O objetivo deste estudo é avaliar a detecção do fator corda como método de identificação presuntiva do complexo M. tuberculosis, comparando-o aos testes de tipificação (TIP) convencionais. MÉTODO: Foram analisadas 743 cepas, de janeiro de 2002 a dezembro de 2005, na Área de Micobactérias do Instituto Adolfo Lutz - Santos, obtidas de isolados clínicos coletados de pacientes sintomáticos respiratórios ou com suspeita clínica de tuberculose pulmonar e/ou micobacterioses, atendidos nas Unidades Básicas de Saúde da Baixada Santista. Foram feitos esfregaços das cepas de micobactérias isoladas em meio líquido MB/BacT e meio sólido, Lowenstein-Jensen ou Ogawa-Kudoh, sendo 301 (40,5 por cento) cepas em meio líquido e 442 (59,5 por cento) em meio sólido. RESULTADOS: Os resultados de sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivos e negativos, obtidos com a comparação do desempenho do método em ambos os meios de isolamento e TIP convencionais, foram respectivamente 98,5, 88, 97 e 93 por cento. Observou-se maior sensibilidade do método em meio sólido (100 por cento), com uma diferença de sensibilidade entre os meios analisados de apenas 2,7 por cento. CONCLUSÕES: Conclui-se, pelos resultados obtidos, que o fator corda é um critério real e rápido na identificação do complexo M. tuberculosis; além disso, em laboratórios com alta prevalência do complexo M. tuberculosis e que não dispõem de técnicas que permitam a precocidade de sua identificação, o fator corda possibilita o direcionamento aos testes conclusivos de identificação e adicionais de sensibilidade que se façam necessários.


OBJECTIVE: Virulent strains of the Mycobacterium tuberculosis complex, under certain appropriate conditions, grow as characteristic ropes, bundles or serpentine cords known as cord factor or growth in cords. The objective of the present study was to evaluate cord factor detection as a method of achieving presumptive identification of the M. tuberculosis complex, comparing it to conventional typing tests. METHODS: A total of 743 strains were analyzed from January of 2002 to December of 2005 in the Mycobacteria Sector of the Adolfo Lutz Institute, located in the city of Santos, Brazil. Samples were obtained from clinical specimens collected from patients with respiratory symptoms treated at basic health clinics in the greater metropolitan area of Santos. Ziehl-Neelsen-stained smears were prepared, 301 (40.5 percent) in MB/BacT broth and 442 (59.5 percent) on solid media, either Lowenstein-Jensen or Ogawa-Kudoh. RESULTS: The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value obtained during the performance comparison of the two methods (cord factor detection and conventional typing) using both isolation media were, respectively, 98.5, 88, 97 and 93 percent. The method was more sensitive on solid medium (100 percent), and the difference in sensitivity between the two media types was only 2.7 percent. CONCLUSIONS: Taking into consideration the results obtained, we conclude that, in laboratories with a high incidence of M. tuberculosis complex isolation and limited economic resources, cord factor detection is a fast and valid criterion for identifying these mycobacteria using liquid or solid medium. It also enables subsequent conclusive identification tests, as well as additional sensitivity tests when necessary.


Assuntos
Humanos , Fatores Corda/análise , Mycobacterium tuberculosis/isolamento & purificação , Tuberculose Pulmonar/microbiologia , Técnicas de Tipagem Bacteriana/métodos , Meios de Cultura , Técnicas de Sonda Molecular , Mycobacterium tuberculosis/classificação , Valor Preditivo dos Testes , Escarro/microbiologia
4.
Rev. biol. trop ; 53(supl.1): 1-10, maio 2005. ilus
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-456490

RESUMO

Abstract: One of the current problems in the field of coral disease research is that of tracking coral pathogens in the natural environment.A promising method to do this is by use of pathogen-specific molecular probes. However,this approach has been little used to date.We constructed,and validated in the laboratory,a fluoro-chrome-labeled molecular probe specific to Aurantimonas coralicida ,the bacterial pathogen of the Caribbean coral disease white plague type II (WPII).We then used the probe to test field samples of diseased coral tissue for the presence of this pathogen.Probe design was based on a unique subset (25 nucleotides)of the complete16S rRNA gene sequence derived from a pure culture of the pathogen.The pathogen-specific probe was labeled with the fluorochrome GreenStar*™FITC (fluorescein isothiocyanate,GeneDetect Ltd,New Zealand).As a control, we used the universal eubacterial probe EUB 338,labeled with a different fluorochrome (TRITC,tetra-methyl-rhodamine isothiocyanate).Both probes were applied to laboratory samples of pure cultures of bacteria, and field samples collected from the surface of the disease line of corals exhibiting signs of white plague (types I and II),healthy controls,and corals with an uncharacterized disease ("patchy necrosis ").All samples were analyzed using fluorescence in situ hybridization (FISH).We have determined that the probe is specific to our laboratory culture of the coral pathogen,and does not react with other bacterial species (the eubacterial probe does).The WPII pathogen was detected in association with diseased coral samples collected from coral colonies on reefs of the Bahamas (n=9 samples)exhibiting signs of both WPI and WPII.Diseased (and healthy)tissue samples (n=4)from corals exhibiting signs of "patchy necrosis "were also assayed.In this case the results were negative, indicating that the same pathogen is not involved in the two diseases.Incorporation and use of pathogen-specific probes can...


Assuntos
Animais , Antozoários/microbiologia , /análise , Corantes Fluorescentes/análise , Técnicas de Sonda Molecular/instrumentação , Rhizobiaceae/isolamento & purificação , Antozoários/química , Antozoários/genética , Contagem de Colônia Microbiana , Hibridização in Situ Fluorescente/métodos , Sondas Moleculares/genética , Necrose/genética , Necrose/patologia , /genética , Rhizobiaceae/patogenicidade , Sensibilidade e Especificidade
5.
Rev. méd. Chile ; 131(2): 145-154, 2003. tab, graf
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: lil-342235

RESUMO

Group A Streptococcal (GAS) infections have increased in frequency and severity worldwide. During April 1996, a nosocomial outbreak associated to GAS infections affected seven patients admitted to a pediatric burn unit. The causative organism was likely disseminated from the source patient to another child in the emergency room before he was transferred to the burn unit. Patients developed burn infections or invasive disease. One of them died due to a toxic shock syndrome and 3 other lost their skin grafts. Perineal and nasal microbiological surveillance of 42 related health care workers identified only one of them as carrier of S pyogenes. Aim: To report a molecular analysis of an apparently clonal outbreak. Material and methods: The available isolates were analyzed by molecular methods including random amplified polymorphic DNA analysis (RAPD) with 4 different primers, Sma-I pulsed field gel electrophoresis (PFGE) analysis, and speA, speB and speC detection by polymerase chain reaction (PCR). Results: Two phylogenetically distant and sequentially isolated bacterial groups were identified either by RAPD analysis with selected primers or by Smal-PFGE analysis. The first group involved isolates identified in two patients that included the lethal case. The second bacterial group comprised 5 clinical isolates and the perineal and nasal isolates obtained from a health care worker. Only strains belonging to the first group harbored the speA gene and were associated with invasive disease. The second group could be split further in two subgroups according to their speB profile. Conclusions: RAPD analysis with selected primers can reproduce the PFGE-discriminating ability on the epidemiological analysis of GAS infections


Assuntos
Humanos , Unidades de Queimados , Queimaduras , Infecções Estreptocócicas/epidemiologia , Streptococcus pyogenes , Surtos de Doenças , Técnicas de Sonda Molecular , Dados de Sequência Molecular , Superantígenos/isolamento & purificação
7.
Rev. psiquiatr. clín. (São Paulo) ; 25(4): 166-75, 1998. tab
Artigo em Português | LILACS | ID: lil-225871

RESUMO

Os autores discorrem neste artigo sobre as investigacoes em genetica do transtorno bipolar, abordando os estudos genetico-epidemiologicos com familias, gemeos e adotados, passando pelas estrategias de genetica molecular, e por fim apresentam as novas hipoteses para explicar o modo de transmissao desse disturbio


Assuntos
Humanos , Transtorno Bipolar/genética , Fatores de Risco , Adoção , Transtorno Bipolar/epidemiologia , Estudos de Casos e Controles , Depressão/genética , Transmissão de Doença Infecciosa , Entrevistas como Assunto , Técnicas de Sonda Molecular/classificação , Estudos em Gêmeos como Assunto/classificação
8.
Rev. chil. pediatr ; 66(1): 36-9, ene.-feb. 1995. ilus
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: lil-164931

RESUMO

El síndrome del cromosoma X-frágil es la causa más frecuente de retardo mental hereditario en el varón y se asocia a un marcador citogenético ubicado en la banda Xq 27.3 (FRAXA) del cromosoma X. Durante muchos años el diagnostico estuvo basado en la identificación citogenética del marcador; sin embargo, este método no ha resultado confiable para el diagnóstico prenatal y la detección de portadores masculinos o femeninos clínicamente normales. El descubrimiento de las bases moleculares de este síndrome ha permitido desarrollar sondas que posibilitan la identificación confiable de los afectados y los portadores por análisis directo del ADN. Se describen los resultados de un estudio clínico, citogenético y molecular en la familia de una probando X frágil. En el afectado un varón de 2 años 4 meses con retraso mental y dismorfias se comprobó un sitio X frágil, pero su madre y una tía no tenían signos clínicos y sitio frágil. El análisis molecular mostró, en el paciente, una banda de 6,5 Kb, que indicaba la presencia de la mutación causal, mientras la madre exhibía dos bandas, una de 5,2 y otra de 6,0 Kb, que la identifican como heterocigota. En contraste, la tía presentó una sola banda de 5,2 Kb característica de los individuos normales


Assuntos
Humanos , Masculino , Pré-Escolar , Adulto , Citogenética/métodos , Núcleo Familiar , Síndrome do Cromossomo X Frágil/genética , Análise Mutacional de DNA , DNA/genética , Ligação Genética/genética , Deficiência Intelectual/genética , Cariotipagem , Marcadores Genéticos/genética , Técnicas de Sonda Molecular , Hibridização de Ácido Nucleico , Cromossomo X/genética
9.
Medicina (B.Aires) ; 53(2): 151-66, mar.-abr. 1993. ilus, tab
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: lil-128000

RESUMO

En la mujer, el cáncer de mama representa el 25-30 por ciento de los tumores malignos siendo la enfermedad con mayor índice de mortalidad. Para identificar pacientes con carcinomas de mama de mal pronóstico, se usan diferentes parámetros relacionados con el tumor primario. De todos los parámetros usados rutinariamente, el grado de invasión tumoral en los ganglios linfáticos axilares es considerado uno de los más importantes. A pesar de ello, 30 por ciento de los pacientes con ganglios linfáticos libres de metástasis (considerados como de buen pronóstico) presentam recurrencia y mueren dentro de los 10 años de realizado el diagnóstico. Esto, al igual que otras observaciones, permiten concluir que los parámetros usados de rutina no serían suficientes - por sí solos - para predecir el curso de la enfermedad tumoral. Gracias a los últimos avances de la biología celular y molecular los eventos cruciales de la carcinogenesis, progresión tumoral y la metástasis están siendo analizados a nivel molecular. En algunos tumores estos adelantos ya están siendo incorporados a la páctica clínica. Recientemente se ha observado que, en determinados tumores, anormalidades de varios genes están correlacionados con el pronóstico de cada paciente. Por medio de la determinación de diferentes macromoléculas marcadoras, los laboratorios de biología molecular puedem brindar importante información pronóstica y de ayuda en al selección de las estrategias terapéuticas. Entre estos nuevos marcadores podemos citar: amplificación y/o sobreexpresión de oncogenes, secreción aumentada de factores de crecimiento, el índice de proliferación celular y la ploidía, proteinas inducidas por los estrógenos, expresión de moléculas relacionadas con el proceso de matástasis, proteínas asociadas con la resistencia farmacológica, etc. En este artículo realizamos un breve análisis de la metodología utilizada para evaluar estos marcadores tumorales y mencionamos algunas de sus aplicaciones clínicas. Nos acercamos al momento en el cual el diagnóstico clínico deberá realizarse a nivel molecular. Esto será posible combinando la histopatología convencional con las técnicas modernas de biología celular y molecular. Esta nueva información llevará a una reevaluación de los sistemas de los tumores, que no estarán basados en la aparencia morfológica o en el origen de las células, sino por la caracterización de sus genes asociados con estadios particulares de cada tumor


Assuntos
Humanos , Feminino , Neoplasias da Mama/diagnóstico , Metástase Neoplásica/diagnóstico , Sondas Moleculares , Neoplasias da Mama/patologia , Divisão Celular , Receptores ErbB/análise , Fator de Crescimento Epidérmico/fisiologia , Citometria de Fluxo , Técnicas de Sonda Molecular
10.
Rev. chil. infectol ; 8(2): 75-82, 1991. ilus
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: lil-119747

RESUMO

Escherichia coli constituye el agente etiológico más importante de la diarrea aguda infantil en los países en vías de desarrollo. Para la identificación de las distintas categorías y determinación de su importancia relativa en grandes poblaciones se ha requerido de técnicas sofisticadas y engorrosas. Como una respuesta a la necesidad de contar con una técnica de alta sensibilidad y especificidad, que no requiere de instalaciones costosas, ni un tiempo largo de procesamiento, se han desarrollado las sondas genéticas, como un aporte más del avance en la tecnología del ADN recombinante. De gran importancia fue poder reemplazar el uso de radioisótopos por sistemas de marca más simples y fáciles de manipular, como la biotina. Nuestro interés fue dar a conocer la experiencia de la implementación de esta tecnología en la identificación de las diversas categorías de E. coli diarreogénico en muestras de deposiciones de niños con diarrea y controles sanos, comoparte de un estudio de campo de la diarrea aguda. Demostrándose que es posible desarrollar esta tecnología en Chile y que los resultados obtenidos constituyen un aporte al conocimiento de la epidemiología de E. coli diarreogénico


Assuntos
Humanos , Biotina , Diarreia Infantil/microbiologia , Sondas de DNA/normas , Escherichia coli/genética , Técnicas de Sonda Molecular , Escherichia coli/isolamento & purificação
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