Metodología de pesquisa primaria de actividad antidengue a partir de productos naturales / Methodology for primary screening of antidengue activity based on natural products

Introducción: El virus dengue, transmitido por mosquitos del género Aedes ha reemergido en los últimos años produciendo la enfermedad transmitida por artrópodos con mayor prevalencia en humanos, y no existe una terapia antiviral específica ni vacunas, para su tratamiento y prevención. Ello ha motivado la búsqueda de productos y compuestos naturales con actividad antiviral, lo cual trae consigo la necesidad de establecer un sistema de evaluación de productos naturales y sintéticos mediante una metodología de pesquisa rápida in vitro. Objetivo: Proponer un sistema de pesquisa primaria de actividad antiviral contra el virus dengue basado en células. Métodos: Se utilizaron como fuentes primarias de información trabajos publicados en revistas nacionales e internacionales registradas en las bases de datos SciELO o PubMed. Los ejemplos seleccionados en las figuras y tabla proceden de las publicaciones conjuntas del Grupo de Virología de la Facultad de Biología de la Universidad de La Habana y del Laboratorio de Arbovirus del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. Información, análisis y síntesis: Se presentan las principales metodologías basadas en células, y se enfatiza en aquellas asumidas por nuestro grupo (evaluación de la citotoxicidad y el ensayo primario de actividad antiviral). Se muestra el algoritmo de evaluación de un producto. La metodología descrita ha permitido poner en marcha un programa de búsqueda de fármacos antidengue, teniendo en cuenta los criterios de la evaluación de la eficacia antiviral y la toxicidad, para realizar un estudio posterior de mecanismo de acción de los diferentes compuestos o productos evaluados.

Introduction: Dengue virus, transmitted by Aedes specie mosquitos, has re-emerged in the last years causing the arthropod-borne disease with higher prevalence in humans, to which there is no specific antiviral therapy or vaccine for its treatment and prevention. This has motivated the search for natural-based products with antiviral activity, which implies the need to establish an evaluation system of natural and synthetic products through a rapid in vitro screening methodology. Objective: To propose a primary screening cell-based antiviral activity system against dengue virus. Methods: Papers published in national and international journals indexed in SciELO or PubMed were used as primary sources of information. The examples selected in the figures and table were retrieved from the joint publications of the Virology Group of the School of Biology of the University of Havana and the Arbovirus Laboratory of the Institute of Tropical Medicine Pedro Kourí. Information, Analysis and Synthesis: The main cell-based methodologies are presented, with emphasis on those assumed by our research group (evaluation of cytotoxicity and the primary antiviral activity assay). The algorithm for product evaluation is presented. The methodology described has allowed initiating a search program for antidengue drugs, taking into account the criteria for evaluating antiviral efficacy and toxicity, in order to carry out a subsequent study on the mechanisms of action of the different compounds or products evaluated.

Actividad citotóxica y antiproliferativa in vitro del extracto acuoso de Phyllanthus comosus

RESUMEN Introducción: Desde los inicios de la medicina antigua, las plantas han sido utilizadas como tratamiento en diversas enfermedades incluyendo las de naturaleza infecto-contagiosa y el cáncer. Son numerosos los informes sobre las propiedades biológicas del género Phyllanthus. Objetivo: Evaluar la actividad citotóxica y antiproliferativa de un extracto acuoso de Phyllanthus comosus en tres líneas celulares, dos de origen tumoral (SiHa y HeLa) y una no tumoral (Vero). Métodos: La actividad citotóxica se evaluó mediante el método del MTT y la capacidad antiproliferativa mediante el ensayo de detección de inhibición de colonias o clonogénico. Se tuvieron en cuenta valores como la concentración citotóxica media (CC50), índice selectivo y porcentaje de disminución de la proliferación celular. Resultados: En el ensayo de citotoxicidad se obtuvieron CC50 similares para ambas líneas tumorales; mientras que el valor para la línea Vero resultó tres veces menos tóxico, con valores de índice de selectividad mayor que tres. El ensayo clonogénico demostró inhibición de la proliferación en las líneas tumorales, mientras que en células Vero no se observó inhibición de la capacidad de formación de colonias. Conclusiones: El extracto de P. comosus es más citotóxico para las líneas tumorales SiHa y HeLa que para las células Vero, no tumorales. Además, la inhibición de la formación de clonos celulares en ambas líneas tumorales evidencia su acción antiproliferativa y selectiva, lo que argumenta su potencialidad antitumoral in vitro

ABSTRACT Introduction: Ever since the onset of ancient medical practice, plants have been used to treat a variety of conditions, including infectious communicable diseases and cancer. A large number of reports are available about the biological properties of the genus Phyllantus. Objective: Evaluate the cytotoxic and antiproliferative activity of an aqueous extract of Phyllanthus comosus on three cell lines: two of tumoral origin (SiHa and HeLa) and one of non-tumoral origin (Vero). Methods: Cytotoxic activity was evaluated by the MTT method, and antiproliferative capacity by colony inhibition detection or clonogenic assay. Mean cytotoxic concentration (CC50), selective index and cell proliferation reduction percentage were some of the values taken into account. Results: The cytotoxicity assay obtained similar CC50 values for both tumor cell lines, whereas the value for the Vero line was three times less toxic, with a selectivity index above three. The clonogenic assay revealed proliferation inhibition in the tumor cell lines, whereas no inhibition of colony forming capacity was observed in Vero cells. Conclusions: The P. comosus extract is more cytotoxic for tumoral cell lines SiHa and HeLa than for non-tumor Vero cells. Additionally, inhibition of the formation of cell clones in both tumor cell lines is evidence of its antiproliferative and selective action, substantiating its in vitro antitumor potential.

Evaluación preliminar de la actividad antiviral de Ageratina havanensis frente al virus dengue-2 utilizando ensayos inmunoenzimáticos

RESUMEN Introducción: Se presenta la evaluación preliminar de la actividad antiviral de extractos de Ageratina havanensis (etanólico de tallo, AH-T-EtOH; butanólico de hoja, AH-H-ButOH y acetato de etilo de hoja, AH-H-AcEtO) utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos, un ELISA celular (ELISAc) y la técnica de inmunoperoxidasa. Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de los extractos de Ageratina havanensis utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos. Métodos: Se normalizó y empleó un ELISAc y la técnica de inmunoperoxidasa en evaluar de forma preliminar la actividad antiviral de tres extractos de Ageratina havanensis a diferentes concentraciones y tiempos de adición mediante la detección de la expresión de la proteína E del virus dengue. Resultados: El ELISAc logró como parámetros óptimos: línea celular Vero, antígeno viral en cultivo de células, tiempo de expresión de la proteína E de 96 h, compuesto fijador metanol-acetona y bloqueador leche descremada al 1 %. La menor expresión de la proteína E (mayor inhibición sobre la replicación viral), fue al adicionar el extracto AH-T-EtOH a su mayor concentración y 1 h antes de inocular el virus dengue-2 cepa A15 (VDEN-2 A15). El extracto AH-H-ButOH a concentraciones de 125 µg/mL y 250 µg/mL presentó una ligera limitación de expresión de E 1 h después de la inoculación viral. El extracto AH-H-AcEtO a las concentraciones empleadas, no mostró difererencia añadido antes y después de la inoculación. El ensayo de inmunoperoxidasa exhibió resultados análogos para los extractos. Conclusiones: La mayor inhibición de la replicación viral fue obtenida con el extracto AH-H-ButOH, a su mayor concentración y ambos tiempos de adición. Los ensayos inmunoenzimáticos aplicados son herramientas útiles para evaluar extractos de Ageratina havanensis con posible actividad antiviral.

ABSTRACT Introduction: A preliminary evaluation is presented of the antiviral activity of Ageratina havanensis extracts (stem ethanolic, AH-T-EtOH; leaf butanolic, AH-H-ButOH; and leaf ethyl acetate, AH-H-AcEtO) using two enzyme immunoassays, cellular ELISA (C-ELISA) and immunoperoxidase technique. Objective: Evaluate the antiviral activity of Ageratine havanensis extracts using two enzyme immunoassays. Methods: C-ELISA and immunoperoxidase technique were standardized for use in the preliminary evaluation of the antiviral activity of three Ageratina havanensis extracts at different concentrations and addition times through detection of the expression of the E protein of dengue virus. Results: C-ELISA achieved the following optimal parameters: Vero cell line, viral antigen in cell culture, protein E expression time 96 h, methanol-acetone fixation compound and 1% skimmed milk blocker. The smallest expression of protein E (greatest inhibition over viral replication) was achieved at addition of extract AH-T-EtOH at its highest concentration and 1 h before inoculating dengue-2 virus strain A15 (VDEN-2 A15). Extract AH-H-ButOH at concentrations of 125 µg/ml and 250 µg/ml presented a slight limitation in the expression of E 1 h after viral inoculation. Extract AH-H-AcEtO at the concentrations used did not show any difference when added before and after inoculation. The immunoperoxidase assay exhibited similar results for the extracts. Conclusions: The greatest inhibition of viral replication was obtained with extract AH-H-ButOH at its highest concentration and at both addition times. The enzyme immunoassays applied are useful tools to evaluate Ageratine havanensis extracts with potential antiviral activity.

Evaluación preliminar de la actividad de Ageratina havanensis contra virus dengue 2 / Preliminary evaluation of the activity of Ageratina havanensis against the dengue 2 virus

. Introducción: El dengue es la enfermedad viral transmitida por mosquitos de más rápida propagación en el mundo. A pesar de la alta incidencia de la enfermedad no existe tratamiento antiviral efectivo ni vacuna aprobada para su uso contra esta infección. La planta Ageratina havanensis ha sido ampliamente utilizada por nuestra cultura popular y en otros países debido a sus diversas propiedades biológicas. Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de cuatro extractos provenientes de Ageratina havanensis y dos flavonoides aislados de dicha planta frente al virus dengue 2. Métodos: La pesquisa primaria de actividad antiviral de cada extracto y flavonoide se realizó mediante el ensayo de detección de la productividad vírica, y se evaluó la acción virucida de los extractos etanólico de tallo y butanólico de hoja. Resultados: Todos los extractos inhibieron la replicación viral al evidenciarse disminución del número de placas de lisis, sin embargo, no se evidenció disminución del título infectivo viral en el ensayo virucida. El tratamiento con la sakuranetina mostró valores de inhibición de la productividad viral entre 61-91 por ciento, y para la 7-metoxiaromadendrina se registraron valores de reducción viral entre 64-86 por ciento. Conclusiones: Los extractos y flavonoides aislados de Ageratina havanensis mostraron acción antiviral. Los extractos etanólico de tallo y butanólico de hojas no poseen acción virucida sobre la cepa viral empleada. El presente trabajo constituye el primer informe respecto a la evaluación de extractos y compuestos aislados de A. havanensis frente al virus dengue(AU)

Introduction: Dengue is the fastest spreading mosquito-borne viral disease worldwide. Despite its high incidence, no effective antiviral treatment or vaccine has been approved for use against this infection. The plant Ageratina havanensis has been widely used in our folk culture and in other countries due to its various biological properties. Objective: Evaluate the antiviral activity of four extracts from Ageratina havanensis and two flavonoids isolated from that plant against the dengue 2 virus. Methods: Primary screening of the antiviral activity of each extract and flavonoid was conducted by viral productivity detection assay, and an evaluation was carried out of the virucidal action of the stem ethanolic extract and the leaf butanolic extract. Results: All the extracts inhibited viral replication by a reduction in the number of lysis plates. However, no evidence was found of a reduced viral infective titer in the virucidal assay. Treatment with sakuranetin achieved viral productivity inhibition values of 61 percent-91 percent, whereas 7-methoxyaromadendrin obtained viral reduction values of 64 percent-86 percent Conclusions: The extracts and flavonoids isolated from Ageratina havanensis displayed antiviral activity. The stem ethanolic extract and the leaf butanolic extract do not have a virucidal action against the viral strain used. The paper is the first report about the effect of extracts and compounds isolated from A. havanensis against the dengue virus(AU)

Evaluación preliminar de la actividad antiviral del extracto de Laurencia obtusa frente a herpesvirus y virus dengue / Preliminary evaluation of the antiviral activity of Laurencia obtuse extract against herpesvirus and dengue virus

Introducción: los virus del herpes simplex y el virus dengue se encuentran entre los patógenos humanos de mayor importancia dados los altos niveles de morbilidad y mortalidad que provocan. El fallo en el desarrollo de vacunas para ambos virus, así como la ausencia de fármacos para el tratamiento del dengue y el surgimiento de nuevas variantes virales resistentes a las drogas existentes para los herpesvirus, incrementa la necesidad de buscar nuevas fuentes de compuestos con actividad antiviral. En este sentido las algas son una alternativa interesante debido a la diversidad de compuestos con actividad biológica que se han aislado de estos organismos. Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto hidroalcohólico del alga roja Laurencia obtusa frente a virus herpes simplex tipo1, herpes simplex tipo 2 y virus dengue. Métodos: se determinó el valor de concentración citotóxica media empleando el ensayo de reducción de MTT en células Vero y C6/36HT. El cálculo de la concentración efectiva media se realizó mediante inhibición del efecto citopático en células Vero o C6/36HT, dependiendo del virus. El índice selectivo se calculó a partir de la relación IS=CC50/CE50. Resultados: el extracto hidroalcohólico de L obtusa no es tóxico en las células Vero y C6/36HT, en el rango de concentraciones evaluadas. El extracto inhibió la replicación in vitro de los virus HHV 1 y HHV 2 en células Vero con valores de IS>29 y 42, respectivamente. Por otra parte no se observó inhibición de la replicación de DENV-2 en células C6/36HT. Conclusiones: el extracto hidroalcohólico de L. obtusa posee actividad antiviral frente a HHV 1 y HHV 2 pudiera ser empleado en el desarrollo de fármacos antiherpéticos novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

Introduction: herpes simplex and dengue viruses are the most important human pathogens with high levels of morbidity and mortality. Lack of vaccine development for these viruses, non-existence of drugs for dengue treatment and the emergence of new herpes virus variants resistant to drugs currently in use reinforce the need for new sources of antiviral drugs. Algae remain an interesting alternative in this regard, due to the diversity of compounds with biological activity found in these organisms. Objective: to evaluate the in vitro antiviral activity of a hydroalcoholic extract of the red seaweed Laurencia obtusa against herpes simplex type 1, herpes simplex type 2 and dengue virus. Methods: the mean cytotoxic concentration was determined by using the MTT reduction assay in Vero and C6/36HT cells. Mean effective concentration was estimated with the cytopathic effect inhibition in Vero or C6/36HT cells depending on the virus. Selective index (SI) =CC50/EC50 was calculated. Results: hydroalcoholic extract from L.obtusa was not toxic at the evaluated concentrations The extract managed to inhibit HHV 1 y HHV 2 virus replication in Vero cells with SI values higher than 29 and 42, respectively. On the other hand there was no inhibition of DENV-2 replication in C6/36HT cells.Conclusions: hydroalcoholic extract from L. obtusa showed in vitro antiviral activity against HHV 1 and HHV 2 and could be employed as a source for new antiviral compounds. This is the first report on the antiviral activity of this alga species(AU)

Evaluación preliminar de la actividad antiviral del extracto de Laurencia obtusa frente a herpesvirus y virus dengue / Preliminary evaluation of the antiviral activity of Laurencia obtuse extract against herpesvirus and dengue virus

Introducción: los virus del herpes simplex y el virus dengue se encuentran entre los patógenos humanos de mayor importancia dados los altos niveles de morbilidad y mortalidad que provocan. El fallo en el desarrollo de vacunas para ambos virus, así como la ausencia de fármacos para el tratamiento del dengue y el surgimiento de nuevas variantes virales resistentes a las drogas existentes para los herpesvirus, incrementa la necesidad de buscar nuevas fuentes de compuestos con actividad antiviral. En este sentido las algas son una alternativa interesante debido a la diversidad de compuestos con actividad biológica que se han aislado de estos organismos. Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto hidroalcohólico del alga roja Laurencia obtusa frente a virus herpes simplex tipo1, herpes simplex tipo 2 y virus dengue. Métodos: se determinó el valor de concentración citotóxica media empleando el ensayo de reducción de MTT en células Vero y C6/36HT. El cálculo de la concentración efectiva media se realizó mediante inhibición del efecto citopático en células Vero o C6/36HT, dependiendo del virus. El índice selectivo se calculó a partir de la relación IS=CC50/CE50. Resultados: el extracto hidroalcohólico de L obtusa no es tóxico en las células Vero y C6/36HT, en el rango de concentraciones evaluadas. El extracto inhibió la replicación in vitro de los virus HHV 1 y HHV 2 en células Vero con valores de IS>29 y 42, respectivamente. Por otra parte no se observó inhibición de la replicación de DENV-2 en células C6/36HT. Conclusiones: el extracto hidroalcohólico de L. obtusa posee actividad antiviral frente a HHV 1 y HHV 2 pudiera ser empleado en el desarrollo de fármacos antiherpéticos novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

Introduction: herpes simplex and dengue viruses are the most important human pathogens with high levels of morbidity and mortality. Lack of vaccine development for these viruses, non-existence of drugs for dengue treatment and the emergence of new herpes virus variants resistant to drugs currently in use reinforce the need for new sources of antiviral drugs. Algae remain an interesting alternative in this regard, due to the diversity of compounds with biological activity found in these organisms. Objective: to evaluate the in vitro antiviral activity of a hydroalcoholic extract of the red seaweed Laurencia obtusa against herpes simplex type 1, herpes simplex type 2 and dengue virus. Methods: the mean cytotoxic concentration was determined by using the MTT reduction assay in Vero and C6/36HT cells. Mean effective concentration was estimated with the cytopathic effect inhibition in Vero or C6/36HT cells depending on the virus. Selective index (SI) =CC50/EC50 was calculated. Results: hydroalcoholic extract from L.obtusa was not toxic at the evaluated concentrations The extract managed to inhibit HHV 1 y HHV 2 virus replication in Vero cells with SI values higher than 29 and 42, respectively. On the other hand there was no inhibition of DENV-2 replication in C6/36HT cells. Conclusions: hydroalcoholic extract from L. obtusa showed in vitro antiviral activity against HHV 1 and HHV 2 and could be employed as a source for new antiviral compounds. This is the first report on the antiviral activity of this alga species(AU)

Actividad antiviral de un extracto acuoso del alga roja Laurencia obtusa frente a virus influenza A y B / Antiviral activity of an aqueous extract from the red alga Laurencia obtusa against influenza A and B viruses

Introducción: la terapia antiviral frente a las infecciones provocadas por virus influenza se basa en empleo de inhibidores de las proteínas M2 y neuraminidasa (NA). Sin embargo, la emergencia de cepas estacionales resistentes a ambos grupos de fármacos motiva la búsqueda de nuevos fármacos anti-influenza. Los extractos de algas pueden ser utilizados como fuente para la obtención de estos compuestos, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos descrita en estos organismos. Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Laurencia obtusa frente a virus influenza A (H1N1), A (H3N2) e influenza B. Métodos: se evaluó la citotoxicidad en células MDCK, mediante cálculo de la viabilidad celular, en presencia de concentraciones crecientes del extracto. Los efectos sobre la replicación viral se cuantificaron mediante determinación de los niveles de la hemaglutinina (HA) y de la inhibición del efecto citopático (ECP). El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS=CC50/CE 50. Resultados: el extracto acuoso de Laurencia obtusa posee actividad antiviral in vitro frente a virus influenza B, A (H3N2) y A (H1N1) con valores de IS de 7,73; 11,79 y 12,95; respectivamente. Conclusiones: Laurencia obtusa inhibe la replicación de virus influenza de elevada importancia clínica. La realización de ensayos secundarios de caracterización de la actividad biológica, así como de caracterización molecular del extracto, podrían permitir el desarrollo de novedosos compuestos antivirales. Este trabajo constituye el primer informe de actividad inhibitoria de esta especie de macroalga frente a virus influenza(AU)

Introduction: antiviral therapy against infections caused by influenza viruses is based on the use of inhibitors of M2 protein and neuraminidase (NA). However, the emergence of seasonal strains resistant to both drug groups has led to the search for new anti-influenza medications. Extracts from algae may be used as a source of compounds, considering the diversity of metabolites described for these organisms. Objective: evaluate the in vitro antiviral activity of an aqueous extract from the red alga Laurencia obtusa against influenza A (H1N1), A (H3N2) and B viruses. Methods: cytotoxicity was evaluated in MDCK cells by cell viability estimation in the presence of growing concentrations of the extract. The effects over viral replication were quantified by determining hemagglutinin (HA) levels and inhibition of the cytopathic effect (CPE). The selective index (SI) was estimated by SI=CC50/CE50. Results: the aqueous extract of Laurencia obtusa showed in vitro antiviral activity against influenza B, A (H3N2) and A (H1N1) viruses with SI values of 7.73, 11.79 and 12.95, respectively. Conclusions: Laurencia obtusa inhibits the replication of influenza viruses, a fact of great clinical importance. Secondary assays to characterize the biological activity and molecular composition of the extract may lead to the development of novel antiviral compounds. The present paper is the first report on the inhibitory activity of this macroalga species against influenza viruses(AU)

Actividad antiviral de un extracto acuoso del alga roja Laurencia obtusa frente a virus influenza A y B / Antiviral activity of an aqueous extract from the red alga Laurencia obtusa against influenza A and B viruses

(au)INTRODUCCIÓN: la terapia antiviral frente a las infecciones provocadas por virus influenza se basa en empleo de inhibidores de las proteínas M2 y neuraminidasa (NA). Sin embargo, la emergencia de cepas estacionales resistentes a ambos grupos de fármacos motiva la búsqueda de nuevos fármacos anti-influenza. Los extractos de algas pueden ser utilizados como fuente para la obtención de estos compuestos, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos descrita en estos organismos. OBJETIVO: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Laurencia obtusa frente a virus influenza A (H1N1), A (H3N2) e influenza B. MÉTODOS: se evaluó la citotoxicidad en células MDCK, mediante cálculo de la viabilidad celular, en presencia de concentraciones crecientes del extracto. Los efectos sobre la replicación viral se cuantificaron mediante determinación de los niveles de la hemaglutinina (HA) y de la inhibición del efecto citopático (ECP). El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS=CC50/CE 50. RESULTADOS: el extracto acuoso de Laurencia obtusa posee actividad antiviral in vitro frente a virus influenza B, A (H3N2) y A (H1N1) con valores de IS de 7,73; 11,79 y 12,95; respectivamente. CONCLUSIONES: Laurencia obtusa inhibe la replicación de virus influenza de elevada importancia clínica. La realización de ensayos secundarios de caracterización de la actividad biológica, así como de caracterización molecular del extracto, podrían permitir el desarrollo de novedosos compuestos antivirales. Este trabajo constituye el primer informe de actividad inhibitoria de esta especie de macroalga frente a virus influenza.compuestos antivirales. Este trabajo constituye el primer informe de actividad inhibitoria de esta especie de macroalga frente a virus influenza(AU)

INTRODUCTION: antiviral therapy against infections caused by influenza viruses is based on the use of inhibitors of M2 protein and neuraminidase (NA). However, the emergence of seasonal strains resistant to both drug groups has led to the search for new anti-influenza medications. Extracts from algae may be used as a source of compounds, considering the diversity of metabolites described for these organisms. OBJECTIVE: evaluate the in vitro antiviral activity of an aqueous extract from the red alga Laurencia obtusa against influenza A (H1N1), A (H3N2) and B viruses. METHODS: cytotoxicity was evaluated in MDCK cells by cell viability estimation in the presence of growing concentrations of the extract. The effects over viral replication were quantified by determining hemagglutinin (HA) levels and inhibition of the cytopathic effect (CPE). The selective index (SI) was estimated by SI=CC50/CE50. RESULTS: the aqueous extract of Laurencia obtusa showed in vitro antiviral activity against influenza B, A (H3N2) and A (H1N1) viruses with SI values of 7.73, 11.79 and 12.95, respectively. CONCLUSIONS: Laurencia obtusa inhibits the replication of influenza viruses, a fact of great clinical importance. Secondary assays to characterize the biological activity and molecular composition of the extract may lead to the development of novel antiviral compounds. The present paper is the first report on the inhibitory activity of this macroalga species against influenza viruses(AU)

Marine fouling invasions in ports of Patagonia (Argentina) with implications for legislation and monitoring programs.

Ports are a key factor in the understanding and solving of most problems associated with marine invasive species across regional and global scales. Yet many regions with active ports remain understudied. The aim of this work was to (a) identify and quantify the marine fouling organisms in all Patagonian ports of Argentina classifying them as native, exotic or cryptogenic species through a rapid assessment survey and experimental studies, (b) survey the environmental and anthropogenic variables of these ports and (c) analyze and discuss these results in the light of the South America context for the study of marine invasive species, legislation and commerce. We found 247 fouling species, including 17 introduced, one of which is a new record for the region, and other 15 species currently considered cryptogenic species that will need further attention to clarify their status. The analysis of mobile and sessile taxa, together with the environmental variables measured in this study and the port movement, allow us to discuss individual ports' vulnerability to future introductions. This is the first large scale study performed for this region on this topic, and it will help in developing monitoring programs and early detection plans to minimize new species introductions along the marine coastline of southern South America.

A new genus and species of Platyischnopidae (Amphipoda: Gammaridea) from the Argentine sea, South-West Atlantic ocean.

The family Platyischnopidae is herein reported for the first time in the Argentine Sea, South-West Atlantic Ocean. A new genus and species, Platyisao holodividum gen. et. sp. nov., collected off the coast of Buenos Aires and Río Negro provinces, is fully described and illustrated. Platyisao gen. nov. is distinguished from the eight other genera of Platyischnopidae by the gnathopods subchelate, and the telson elongate, completely cleft. In addition, the distribution of Tiburonella viscana (Barnard J.L., 1964), up to now known in the South-West Atlantic Ocean from Brazilian waters, is extended to the coast off Buenos Aires province, Argentina.

Actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A / In vitro antiviral activity of aqueous extract from red seaweed Tricleocarpa fragilis to Influenza A virus

INTRODUCCIÓN: los virus influenza constituyen importantes patógenos de humanos que anualmente causan alrededor de 500 000 muertes a nivel mundial. La emergencia de variantes virales resistentes a los fármacos antiinfluenza disponibles, motiva la búsqueda de nuevos antivirales. Los extractos obtenidos a partir de algas pueden ser empleados con esta finalidad, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos secundarios descritos en estos organismos. OBJETIVO: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A(H1N1) y A(H3N2) MÉTODOS: se determinó el valor de concentración citotóxica media (CC50) empleando el ensayo de reducción de MTT en células MDCK . El cálculo de la concentración inhibitoria media (CI50) se realizó mediante un ensayo de hemaglutinación y de inhibición del efecto citopático (ECP) en células MDCK. El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS= CC 50/CI50. RESULTADOS: el extracto acuoso de T. fragilis no resultó tóxico en las células MDCK, en el rango de concentraciones evaluadas. El alga inhibió la replicación in vitro de virus influenza A(H1N1), A(H3N2) con valores de IS> 11,4 y 106, respectivamente. CONCLUSIONES: el extracto acuoso de T. fragilis posee actividad antiviral frente a virus influenza A y puede ser empleado en el desarrollo de fármacos antiinfluenza novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

INTRODUCTION: influenza viruses are major human pathogens that cause over 500 000 deaths every year. The emergence of viral variants resistant to approved antiviral drugs has prompted the search for new anti-influenza compounds. Alga could be used as a source for the development of new anti-influenza drugs, taking into account the diversity of secondary metabolites previously described in these organisms. OBJECTIVE: to evaluate the in vitro antiviral activity of aqueous extract of the red seaweed Tricleocarpa fragilisagainst influenza A virus. METHODS: the mean citotoxicity (CC50) concentration of the extract was determined by using the MTT reduction assay in MDCK cells. The mean inhibitory concentration (CI50) was estimated by means of viral protein (hemagglutinin) test and a cytopathic effect inhibition test in MDCK cells. The Selective index was calculated from (SI)= CC50/IC50. RESULTS: T. fragilis was not toxic at the concentrations evaluated in MDCK cells. The aqueous extract inhibited in vitro influenza A(H1N1) and A(H3N2) virus replication with SI values > 11.4 and 106; respectively. CONCLUSIONS: aqueous extract of T. fragilis showed in vitro anti-influenza activity and can be employed as a source for new antiviral drugs. This paper was the first report for the antiviral activity of T. fragilis(AU)

Actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A / In vitro antiviral activity of aqueous extract from red seaweed Tricleocarpa fragilis to Influenza A virus

Introducción: los virus influenza constituyen importantes patógenos de humanos que anualmente causan alrededor de 500 000 muertes a nivel mundial. La emergencia de variantes virales resistentes a los fármacos antiinfluenza disponibles, motiva la búsqueda de nuevos antivirales. Los extractos obtenidos a partir de algas pueden ser empleados con esta finalidad, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos secundarios descritos en estos organismos. Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A(H1N1) y A(H3N2). Métodos: se determinó el valor de concentración citotóxica media (CC50) empleando el ensayo de reducción de MTT en células MDCK. El cálculo de la concentración inhibitoria media (CI50) se realizó mediante un ensayo de hemaglutinación y de inhibición del efecto citopático (ECP) en células MDCK. El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS= CC 50/CI50. Resultados: el extracto acuoso de T. fragilis no resultó tóxico en las células MDCK, en el rango de concentraciones evaluadas. El alga inhibió la replicación in vitro de virus influenza A(H1N1), A(H3N2) con valores de IS> 11,4 y 106, respectivamente. Conclusiones: el extracto acuoso de T. fragilis posee actividad antiviral frente a virus influenza A y puede ser empleado en el desarrollo de fármacos antiinfluenza novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

Introduction: influenza viruses are major human pathogens that cause over 500 000 deaths every year. The emergence of viral variants resistant to approved antiviral drugs has prompted the search for new anti-influenza compounds. Alga could be used as a source for the development of new anti-influenza drugs, taking into account the diversity of secondary metabolites previously described in these organisms. Objective: to evaluate the in vitro antiviral activity of aqueous extract of the red seaweed Tricleocarpa fragilis against influenza A virus. Methods: the mean citotoxicity (CC50) concentration of the extract was determined by using the MTT reduction assay in MDCK cells. The mean inhibitory concentration (CI50) was estimated by means of viral protein (hemagglutinin) test and a cytopathic effect inhibition test in MDCK cells. The Selective index was calculated from (SI)= CC50/IC50. Results: T. fragilis was not toxic at the concentrations evaluated in MDCK cells. The aqueous extract inhibited in vitro influenza A(H1N1) and A(H3N2) virus replication with SI values > 11.4 and 106; respectively. Conclusions: aqueous extract of T. fragilis showed in vitro anti-influenza activity and can be employed as a source for new antiviral drugs. This paper was the first report for the antiviral activity of T fragilis(AU)

Efecto de Phyllanthus orbicularis sobre la viabilidad celular y el antígeno de superficie de la hepatitis B en células PLC/PRF/5 / Effect of Phyllanthus orbicularis on the cell viability and the hepatitis B surface antigen in PLC/PRF/5 cells

La actividad antiviral de Phyllanthus orbicularis Kunth, planta endémica de Cuba, frente al virus de la hepatitis B, fue estudiada in vitro. Se determinó la capacidad del extracto acuoso y 2 fracciones químicas ricas en taninos y flavonoides (acético-acuosa y butanólica) para inhibir la producción o bloquear la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B (AgsHB) en las células PLC/PRF/5, una línea celular de hepatoma humano que expresa este marcador constitutivamente. El extracto acuoso fue efectivo al inhibir el AgsHB producido a las 24 y 48 h con índices selectivos superiores a 10, con una acción inhibitoria dependiente de la concentración. La evaluación de la actividad de las fracciones obtenidas a partir de esta planta mostró que ambas eran efectivas con índices selectivos superiores a 10. Estos resultados sugieren que existe una actividad inhibitoria del antígeno estudiado y que esta planta posee algunos compuestos fenólicos que podrían actuar sobre el AgsHB y reducir su producción en las células, lo que indica una posible actividad in vivo. Este trabajo corrobora el potencial de acción antiviral del extracto acuoso de P orbicularis, además de avalar el empleo de la línea PLC/PRF/5 para futuras evaluaciones o ensayos encaminados a valorar la actividad antihepatitis B de diferentes productos. De igual forma abre el camino para la determinación de aquel o aquellos componentes químicos responsables de la actividad de la planta frente al virus de la hepatitis B(AU)

The antiviral activity of Phyllanthus orbicularis, an endemic Cuban plant, against the hepatitis B virus was evaluated in vitro. The ability of the aqueous extract and 2 tannin- and flavonoid-rich chemical fractions (aqueous-acetic and buthanolic) to inhibit the hepatitis B surface antigen (HBsAg) production was determined in PLF/PRC/5 cellas, a human hepatoma cell line that constitutively expresses this antigen. The aqueous extract was effective in inhibiting the HBsAg at 24 and 48 hours of treatment, being the selective index (SI) above 10, with concentration-dependent inhibitory activity. The evaluation of the inhibitory action of the two fractions from the plant proved that both were effective and their selective indexes were also higher than 10. These results indicated the inhibitory activity against HBsAg of the plant and the presence of phenolic compounds that could reduce the antigen production. This may contribute to an in vivo antiviral action. This paper also corroborated the antiviral potential of the aqueous extract from Phyllanthus orbicularis Kunth, in addition to supporting the use of PLC/PRF/5 for future evaluations or trials directed towards assessing the anti-hepatitis B activity of various products. Likewise, it paved the way for the detection of the chemical component(s) responsible for the plant's action against hepatitis B virus(AU)

Efecto de Phyllanthus orbicularis sobre la viabilidad celular y el antígeno de superficie de la hepatitis B en células PLC/PRF/5 / Effect of Phyllanthus orbicularis on the cell viability and the hepatitis B surface antigen in PLC/PRF/5 cells

La actividad antiviral de Phyllanthus orbicularis Kunth, planta endémica de Cuba, frente al virus de la hepatitis B, fue estudiada in vitro. Se determinó la capacidad del extracto acuoso y 2 fracciones químicas ricas en taninos y flavonoides (acético-acuosa y butanólica) para inhibir la producción o bloquear la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B (AgsHB) en las células PLC/PRF/5, una línea celular de hepatoma humano que expresa este marcador constitutivamente. El extracto acuoso fue efectivo al inhibir el AgsHB producido a las 24 y 48 h con índices selectivos superiores a 10, con una acción inhibitoria dependiente de la concentración. La evaluación de la actividad de las fracciones obtenidas a partir de esta planta mostró que ambas eran efectivas con índices selectivos superiores a 10. Estos resultados sugieren que existe una actividad inhibitoria del antígeno estudiado y que esta planta posee algunos compuestos fenólicos que podrían actuar sobre el AgsHB y reducir su producción en las células, lo que indica una posible actividad in vivo. Este trabajo corrobora el potencial de acción antiviral del extracto acuoso de P orbicularis, además de avalar el empleo de la línea PLC/PRF/5 para futuras evaluaciones o ensayos encaminados a valorar la actividad antihepatitis B de diferentes productos. De igual forma abre el camino para la determinación de aquel o aquellos componentes químicos responsables de la actividad de la planta frente al virus de la hepatitis B

The antiviral activity of Phyllanthus orbicularis, an endemic Cuban plant, against the hepatitis B virus was evaluated in vitro. The ability of the aqueous extract and 2 tannin- and flavonoid-rich chemical fractions (aqueous-acetic and buthanolic) to inhibit the hepatitis B surface antigen (HBsAg) production was determined in PLF/PRC/5 cellas, a human hepatoma cell line that constitutively expresses this antigen. The aqueous extract was effective in inhibiting the HBsAg at 24 and 48 hours of treatment, being the selective index (SI) above 10, with concentration-dependent inhibitory activity. The evaluation of the inhibitory action of the two fractions from the plant proved that both were effective and their selective indexes were also higher than 10. These results indicated the inhibitory activity against HBsAg of the plant and the presence of phenolic compounds that could reduce the antigen production. This may contribute to an in vivo antiviral action. This paper also corroborated the antiviral potential of the aqueous extract from Phyllanthus orbicularis Kunth, in addition to supporting the use of PLC/PRF/5 for future evaluations or trials directed towards assessing the anti-hepatitis B activity of various products. Likewise, it paved the way for the detection of the chemical component(s) responsible for the plant's action against hepatitis B virus

Análisis de flavonoides en una fracción butanólica obtenida de Phyllanthus orbicularis HBK / Flavonoids analysis of a butanol fraction obtained from Phyllanthus orbicularis HBK

El presente trabajo comprende el análisis por cromatografía líquida de alta resolución de flavonoides presentes en una fracción butanólica activa frente al virus del herpes simple tipo 1, la cual fue obtenida tras un proceso de extracción y fraccionamiento realizado a la especie Phyllanthus orbicularis HBK. Según los resultados del estudio se puede sugerir por medio de la comparación de los tiempos de retención y espectros ultravioletas de los diferentes picos mostrados con el de los patrones ensayados, la presencia de rutina, quercetina y kaempferol en dicha fracción(AU)

Present paper includes the analysis of high performance liquid chromatography of flavonoids present in an active butanol fraction versus type 1obtained after extraction and fractionation process performed in HBK Phyllanthus orbicularis species. According to study results it is possible to suggest by comparison of retention times and ultraviolet spectra of different peaks showed and assayed patterns, the rutin, quercetin and kaempferol presence in such fraction(AU)

Análisis de flavonoides en una fracción butanólica obtenida de Phyllanthus orbicularis HBK / Flavonoids analysis of a butanol fraction obtained from Phyllanthus orbicularis HBK

El presente trabajo comprende el análisis por cromatografía líquida de alta resolución de flavonoides presentes en una fracción butanólica activa frente al virus del herpes simple tipo 1, la cual fue obtenida tras un proceso de extracción y fraccionamiento realizado a la especie Phyllanthus orbicularis HBK. Según los resultados del estudio se puede sugerir por medio de la comparación de los tiempos de retención y espectros ultravioletas de los diferentes picos mostrados con el de los patrones ensayados, la presencia de rutina, quercetina y kaempferol en dicha fracción

Present paper includes the analysis of high performance liquid chromatography of flavonoids present in an active butanol fraction versus type 1obtained after extraction and fractionation process performed in HBK Phyllanthus orbicularis species. According to study results it is possible to suggest by comparison of retention times and ultraviolet spectra of different peaks showed and assayed patterns, the rutin, quercetin and kaempferol presence in such fraction

Metodología de pesquisa preclínica de actividad anti-herpesvirus a partir de productos naturales / Methodology for the preclinical screening of anti-herpesvirus activity starting from natural products

Herpesviridae es una de las familias virales de mayor impacto en la salud humana y animal. Los virus del herpes simple constituyen causa de infecciones muy comunes, con un amplio espectro de manifestaciones clínicas. La naturaleza latente de la infección que le permite al virus escapar de los efectores de la respuesta inmunológica, ha imposibilitado la obtención de vacunas antiherpéticas eficaces. Esto ha motivado la búsqueda de productos antiherpéticos, lo cual trae consigo la necesidad de establecer un sistema de evaluación preclínica de productos naturales y sintéticos mediante una metodología de pesquisa rápida in vitro. En el presente trabajo se muestra la metodología y fundamentación del sistema de ensayos empleado por el Grupo de Antivirales Naturales de la Facultad de Biología (Universidad de La Habana) para el pesquisaje de productos con propiedades antiherpéticas. Dicha metodología incluye la evaluación primaria y varios ensayos secundarios, encaminados a la determinación de los mecanismos de acción(AU)

Herpesviridae is one of the viral families of greatest impact on human and animal health. HSVs are the etiological agents of very common infections associated with a broad range of clinical symptoms. The latent nature of the infection allows the virus to escape from immune responses, hindering the obtention of efficient anti-herpes vaccines. This fact has encouraged scientists to search new anti-herpes drugs, and that's why the establishment of a rapid methodology for the in vitro evaluation of new products with potential antiviral activity is urgently needed. In this work, we describe the complete guide followed by the Antiviral Natural Products Research Group (Faculty of Biology, University of Havana) to perform the screening for antiviral activities among natural products. This guide includes the preliminary evaluation assay and a variety of secondary tests(AU)

Metodología de pesquisa preclínica de actividad anti-herpesvirus a partir de productos naturales / Methodology for the preclinical screening of anti-herpesvirus activity starting from natural products

Herpesviridae es una de las familias virales de mayor impacto en la salud humana y animal. Los virus del herpes simple constituyen causa de infecciones muy comunes, con un amplio espectro de manifestaciones clínicas. La naturaleza latente de la infección que le permite al virus escapar de los efectores de la respuesta inmunológica, ha imposibilitado la obtención de vacunas antiherpéticas eficaces. Esto ha motivado la búsqueda de productos antiherpéticos, lo cual trae consigo la necesidad de establecer un sistema de evaluación preclínica de productos naturales y sintéticos mediante una metodología de pesquisa rápida in vitro. En el presente trabajo se muestra la metodología y fundamentación del sistema de ensayos empleado por el Grupo de Antivirales Naturales de la Facultad de Biología (Universidad de La Habana) para el pesquisaje de productos con propiedades antiherpéticas. Dicha metodología incluye la evaluación primaria y varios ensayos secundarios, encaminados a la determinación de los mecanismos de acción.

Herpesviridae is one of the viral families of greatest impact on human and animal health. HSVs are the etiological agents of very common infections associated with a broad range of clinical symptoms. The latent nature of the infection allows the virus to escape from immune responses, hindering the obtention of efficient anti-herpes vaccines. This fact has encouraged scientists to search new anti-herpes drugs, and that's why the establishment of a rapid methodology for the in vitro evaluation of new products with potential antiviral activity is urgently needed. In this work, we describe the complete guide followed by the Antiviral Natural Products Research Group (Faculty of Biology, University of Havana) to perform the screening for antiviral activities among natural products. This guide includes the preliminary evaluation assay and a variety of secondary tests.

Propiedades antivirales de plantas del género Phyllanthus / Phyllanthus

El género Phyllanthus (familia Euphorbiaceae) agrupa más de 500 especies de plantas, distribuidas entre 11 subgéneros. Las infusiones de estas especies han sido usadas durante miles de años en la medicina folklórica de muchos países para el tratamiento de enfermedades de posible causa viral. Numerosos grupos de investigación se han propuesto encontrar las razones científicas para el uso milenario de estas plantas, y han desentrañado los fundamentos de la actividad de estas infusiones. El presente trabajo recoge la mayor parte de la evidencia científica disponible en la literatura sobre la actividad inhibidora de los extractos de plantas de este género sobre la multiplicación in vivo o in vitro de virus que se trasmiten fundamentalmente por vía sexual, como el virus de la hepatitis B, el virus de inmunodeficiencia humana y los virus del herpes simple

The genus Phyllanthus (family Euphorbiaceae) groups more than 500 species of plants distributed in 11 subgenera. The infusions from these species have been used for thousands of years in folk medicine of many countries to treat diseases of possible viral cause. Several research groups have proposed themselves to find the scientific reasons for the millenary use of these plants, and have got to the bottom of the foundations of the activity of these infusions. This paper presents most of the scientific evidence available in literature on the inhibitory activity of the extracts from plants of this genus on the in vivo or in vitro multiplication of mainly sexually transmitted viruses, as hepatitis B virus, human immunodeficiency virus, and herpes simplex virus(AU)