Glutamine promotes human CD8+ T cells and counteracts imiquimod-induced T cell hyporesponsiveness.

T cells protect tissues from cancer. Although investigations in mice showed that amino acids (AA) critically regulate T cell immunity, this remains poorly understood in humans. Here, we describe the AA composition of interstitial fluids in keratinocyte-derived skin cancers (KDSCs) and study the effect of AA on T cells using models of primary human cells and tissues. Gln contributed to ∼15% of interstitial AAs and promoted interferon gamma (IFN-γ), but not granzyme B (GzB) expression, in CD8+ T cells. Furthermore, the Toll-like receptor 7 agonist imiquimod (IMQ), a common treatment for KDSCs, down-regulated the metabolic gatekeepers c-MYC and mTORC1, as well as the AA transporter ASCT2 and intracellular Gln, Asn, Ala, and Asp in T cells. Reduced proliferation and IFN-γ expression, yet increased GzB, paralleled IMQ effects on AA. Finally, Gln was sufficient to promote IFN-γ-production in IMQ-treated T cells. Our findings indicate that Gln metabolism can be harnessed for treating KDSCs.

Macrophage Biology in Human Granulomatous Skin Inflammation.

Cutaneous granulomatoses represent a heterogeneous group of diseases, which are defined by macrophage infiltration in the skin. Skin granuloma can be formed in the context of infectious and non-infectious conditions. Recent technological advances have deepened our understanding of the pathophysiology of granulomatous skin inflammation, and they provide novel insights into human tissue macrophage biology at the site of ongoing disease. Here, we discuss findings on macrophage immune function and metabolism derived from three prototypic cutaneous granulomatoses: granuloma annulare, sarcoidosis, and leprosy.

Novel noninvasive marker of regression of clear cell renal cell carcinoma (ccRCC).

OBJECTIVE: Analyzing protein kinase C (PKC) alpha, iota, and zeta as well as levels of Mxi-2 and Vim3 in regressive clear cell renal carcinomas (ccRCCs) and urine samples. MATERIAL AND METHODS: Fresh samples of ccRCCs (predominantly pT1a/b) with different degrees of regression (<10%, 30%, 50%, and 70%) vs normal renal tissue and oncocytomas were studied by Western blot, using antibodies of different PKC isoforms. Urine samples from these tumors were analyzed by ELISA (PKC isoforms, Mxi-2, and Vim3). RESULTS: With increasing degree of regression beyond 10%, nuclear Mxi-2 and Vim3 were highly overexpressed in fresh tumor samples. In urine samples, Vim3 was significantly overexpressed in oncocytoma and downregulated in RCCs with 70% regression. Western blot analysis shows that PKC alpha and iota levels were significantly increased in fresh tumor tissue samples (tumors with 30% regression). PKC zeta was expressed in normal kidney and significantly increased in oncocytoma but not found in ccRCCs. In patients' urines, Mxi-2 was significantly reduced (regression > 50%), while PKC isoform alpha was significantly increased by advanced regression rate. PKC iota in patients' urine was overexpressed in oncocytoma and reduced in all ccRCC urines. CONCLUSION: Tumor regression in ccRCC tissue shows strong nuclear overexpression of Mxi-2, Vim3, and PKC alpha and iota. In respective urines, PKC alpha was overexpressed; PKC iota was decreased. Mxi-2 and Vim3 decreased with increasing regression rates. These reagents could serve as noninvasive ccRCC markers for regression.

Detección de lesiones laríngeas benignas en estudiantes de canto de la Universidad Nacional / Detection of laringeal lessions in singing students of the National University

Identificar lesiones laríngeas en estudiantes de canto asintomáticos del conservatorio de la Universidad Nacional. Diseño: Estudio de corte transversal. Métodos: Se realizó un estudio transversal, mediante la realización de estroboscopia laríngea a 31 estudiantes, las cuales fueron valoradas por dos observadores independientes, comparándose entre sí dichas observaciones. Resultados: Se encontró una alta tasa de lesión en pacientes asintomáticos (70,96%), se determinaron factores asociados, tiempo de utilización vocal a la semana, en promedio 26.1 horas; frecuencia fundamental de las diferentes voces (151 Hz en hombres y 226 Hz en mujeres). Se determinó la fuerza de la concordancia entre evaluadores de 0.31 es decir aceptable. Conclusión: Se observó poca concordancia interobservador; es necesario realizar estudios ulteriores con este grupo de profesionales a fin de determinar las causas y formas de prevención de las lesiones evidenciadas...

To identify laryngeal lesions in asymptomatic singing students of the National University Conservatoire. Design: Cross-sectional study. Methods: A cross-sectional study was developed; 31 students were assessed with laryngeal stroboscopy, which were evaluated by two independent observers, whose diagnostics were compared. Results: High injury rate of asymptomatic patients (70.96%) was found; as well as associated factors such as time of use of voice per week, on average 26.1 hours were determined; fundamental frequency of the different voices (151 Hz to 226 Hz in men and women). The strength of the correlation between evaluators was 0.31 that is acceptable. Conclusion: Low interobserver concordance was observed; further studies are needed with this group of professionals to determine the causes and ways for preventing injuries evidenced...

Evaluación de niveles séricos de citocinas proinflamatorias y marcadores de estrés oxidativo en mujeres embarazadas a término / Evaluation of the serum levels of proinflammatory cytokines and oxidative stress markers in term pregnant women

El conocimiento acerca del papel del sistema inmune y el estrés oxidativo en el embarazo normal puede contribuir a profundizar en los mecanismos fisiopatológicos y en el tratamiento de las enfermedades asociadas a la gestación. Se realizó un estudio por el método de observación, transversal y descriptivo, con el objetivo de describir diferencias entre las concentraciones y la detectabilidad sérica de interleucina 6, el factor de necrosis tumoral-alfa, el ó xido nítrico y la enzima glutation peroxidasa en 10 embarazadas sanas a término, respecto a 18 mujeres no embarazadas . Se encontraron niveles detectables de interleucina 6 en el 80(por ciento) de las embarazadas y solo en el 22,2 del grupo de mujeres no embarazadas, para un valor de Chi cuadrado = 8,763 (p = 0,005). La diferencia de la detectabilidad de f actor de necrosis tumoral-alfa entre ambos grupos fue no significativa (p = 0,515) para un valor de Chi cuadrado = 0,016. No existieron diferencias significativas entre las medias de ambos grupos para óxido nítrico y glutation peroxidasa. En conclusión se encontró una mayor detectabilidad sérica de interleucina 6 , lo cual relacionamos con sus fuentes productoras aumentadas en el embarazo normal, el favorecido patrón Th2 y la activación de la inmunidad innata materna(AU)

Evaluación de niveles séricos de citocinas proinflamatorias y marcadores de estrés oxidativo en mujeres embarazadas a término / Evaluation of the serum levels of proinflammatory cytokines and oxidative stress markers in term pregnant women

El conocimiento acerca del papel del sistema inmune y el estrés oxidativo en el embarazo normal puede contribuir a profundizar en los mecanismos fisiopatológicos y en el tratamiento de las enfermedades asociadas a la gestación. Se realizó un estudio por el método de observación, transversal y descriptivo, con el objetivo de describir diferencias entre las concentraciones y la detectabilidad sérica de interleucina 6, el factor de necrosis tumoral-alfa, el ó xido nítrico y la enzima glutation peroxidasa en 10 embarazadas sanas a término, respecto a 18 mujeres no embarazadas . Se encontraron niveles detectables de interleucina 6 en el 80(por ciento) de las embarazadas y solo en el 22,2 del grupo de mujeres no embarazadas, para un valor de Chi cuadrado = 8,763 (p = 0,005). La diferencia de la detectabilidad de f actor de necrosis tumoral-alfa entre ambos grupos fue no significativa (p = 0,515) para un valor de Chi cuadrado = 0,016. No existieron diferencias significativas entre las medias de ambos grupos para óxido nítrico y glutation peroxidasa. En conclusión se encontró una mayor detectabilidad sérica de interleucina 6 , lo cual relacionamos con sus fuentes productoras aumentadas en el embarazo normal, el favorecido patrón Th2 y la activación de la inmunidad innata materna(AU)

Inhibition of LPS-responses by synthetic peptides derived from LBP associates with the ability of the peptides to block LBP-LPS interaction.

The ability of LPS-binding protein (LBP) to greatly potentiate cell responses to lipopolysaccharide (LPS) may largely contribute to LPS toxicity in sepsis. The study of agents with the capacity to block the interaction between LBP and LPS might improve the understanding of the role of LBP in Gram-negative infections as well as offering new therapeutic tools for septic disorders. Here we confirm the ability of synthetic peptides comprising the human LBP amino acid region 86-108 to interfere with the LBP-LPS interaction. The analysis of selected alanine mutants of a blocking peptide corresponding to the LBP region 86-99 suggests the importance of peptide amphipathicity for the inhibitory activity. The potency of the native peptide and a selected analogue at inhibiting in vitro and in vivo LPS-induced responses was associated with their relative activity in blocking LBP-LPS interaction. It was remarkable that these peptides were at least 500-fold more active in vivo than in vitro. Also, the inhibitory activity of peptides LBP86-99 and LBPK95A seems to be independent of LBP concentrations, a behavior that may be relevant for the potential use of these peptides in septic disorders where LBP serum concentrations are considerably elevated.

Interleukin-2 inhibits proliferation of HPV-associated tumor cells and halts tumor growth in vivo.

Previous studies have shown inhibition of cervical cancer cell growth by treatment with high concentrations of IL-2. In the present study, we evaluated the in vitro and in vivo effects of recombinant human IL-2 on HPV-associated tumor cells (3T3-16). Treatment of 3T3-16 cells with rhIL-2 for 72 h inhibited cell growth in a dose-dependent manner and this effect was evidenced at nanomolar concentrations. These tumor cells expressed mRNA for beta and gamma subunits of the IL-2 receptor, which are required for signal transduction. In experiments to explore the effect of IL-2 on the growth of the HPV-associated tumor, mice received rhIL-2 through different routes: (i) intraperitoneal; (ii) subcutaneous, at the tumor inoculation site; or (iii) subcutaneous, distant from the tumor inoculation site. An effective antitumor response was observed only in those animals that received IL-2 at the tumor site (P<0.01). These results indicate the potential adequacy of therapeutic strategies based on local administration of rhIL-2 for cervical carcinoma, not only based on the ability of this cytokine to stimulate cellular-mediated immunity but also because of its direct effects on tumor cells.

Isolation and characterization of modified species of a mutated (Cys125 -Ala) recombinant human interleukin-2.

During purification of recombinant and mutated interleukin-2 (rhIL-2A125) by reversed-phase-high-performance liquid chromatography, more and less hydrophobic fractions named MHF and LHF, respectively are discarded due to the presence of some unidentified forms of rhIL-2Ala125. Using slow and linear gradients of acetonitrile, these fractions were further purified by RP-HPLC, analyzed by automatic Edman degradation, digested with trypsin and analyzed by electrospray ionization mass spectrometry. In all fractions, partial processing of the N-terminal Met residue was observed. In the LHF the Met104 was partially oxidized as sulfoxide. Combining the selective and reversible blocking of tryptic peptides and cation-exchange chromatography, two unexpected C-terminal peptides were selectively isolated. Automatic N-terminal sequencing showed that one of these corresponded to the C-terminal peptide of rhIL-2Ala125 linked to another 11 amino acids (AANDENYALAA) and the other corresponded to the C-terminal peptide of a truncated rhIL-2Ala125 without the C-terminal threonine residue and the extension of the 11 amino acids previously mentioned. MHF contained a mixture of four species of rhIL-2A125 monoacetylated at the N-terminus and at the epsilon-amino groups of internal Lys residues: 8, 32 and 48. Cys58 was found as free cysteine and also covalently linked to Mr 69 and 77 molecules. Covalent dimers of rhIL-2A125 linked through disulfide bridges between Cys58 and Cys105 of different monomers were also found.

Caracterización de la estructura primaria de la interleucina-2 humana recombinante / Characterization of the primary structure of the recombinant human interleukin-2

La interleucina-2 humana recombinante clonada y expresada en E. coli, y purificada mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC), fue analizada para verificar su estructura primaria. El análisis de aminoácidos de la proteína pura coincide con la composición teórica esperada. La proteína fue hidrolizada con bromuro de cianógeno, los péptidos separados por HPLC fueron secuenciados automáticamente y determinada su composición aminoacídica, confirmándose la estructura desde el extremo N-terminal hasta el residuo 56. Con el propósito de completar la secuencia de la proteína, esta fue reducida y carboximetilada. La proteína se sometió a digestión con endoproteinasa GLU-C (Staphyloccocus aureus V8) y una parte de esta digestión se incubó a continuación con tripsina. Los péptidos purificados mediante gel filtración (Biogel P-6) y HPLC en fase inversa, fueron secuenciados con la técnica manual de doble acoplamiento con dimetilaminoazobenzeno isotiocianato e isotiocianato de fenilo (DABITC/PITC). La purificación de la digestión tríptica de la proteína reducida y carboximetilada mediante fase inversa, suministró los péptidos para análisis en espectrometría de masas utilizando como fuente de ionización bombardeo con átomos rápidos (MS FAB). Tanto los resultados de la secuenciación como la espectrometría de masas confirman que la interleucina-2 obtenida en E. coli posee la estructura primaria reportada para esta proteína

Caracterización de la estructura primaria de la interleucina-2 humana recombinante / Characterization of the primary structure of the recombinant human interleukin-2

La interleucina-2 humana recombinante clonada y expresada en E. coli, y purificada mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC), fue analizada para verificar su estructura primaria. El análisis de aminoácidos de la proteína pura coincide con la composición teórica esperada. La proteína fue hidrolizada con bromuro de cianógeno, los péptidos separados por HPLC fueron secuenciados automáticamente y determinada su composición aminoacídica, confirmándose la estructura desde el extremo N-terminal hasta el residuo 56. Con el propósito de completar la secuencia de la proteína, esta fue reducida y carboximetilada. La proteína se sometió a digestión con endoproteinasa GLU-C (Staphyloccocus aureus V8) y una parte de esta digestión se incubó a continuación con tripsina. Los péptidos purificados mediante gel filtración (Biogel P-6) y HPLC en fase inversa, fueron secuenciados con la técnica manual de doble acoplamiento con dimetilaminoazobenzeno isotiocianato e isotiocianato de fenilo (DABITC/PITC). La purificación de la digestión tríptica de la proteína reducida y carboximetilada mediante fase inversa, suministró los péptidos para análisis en espectrometría de masas utilizando como fuente de ionización bombardeo con átomos rápidos (MS FAB). Tanto los resultados de la secuenciación como la espectrometría de masas confirman que la interleucina-2 obtenida en E. coli posee la estructura primaria reportada para esta proteína (AU)

Determinación de IL-l usando un sistema de proliferación de timocitos / Determination of IL-l with a timocite proliferative system

La interleukina-1 (IL-1) es un factor soluble producido por células accesorias que constituye la segunda señal necesaria para la activación de células T, dependientes de macrófagos. La determinación de la IL-1 constituye un importante aspecto al medir y estudiar la inmunorreactividad in vitro y la presencia de este factor en fluidos corporales. En el presente trabajo se describe el método de proliferación de timocitos como sistema de medición de la IL-1 adaptado a nuestras condiciones de laboratorio, siendo demostrado que es posible usar otras especies de ratones además de la C3H/Hed (no respondedores al LPS) si se trabaja en el rango propuesto de concentración de LPS; (100 ug ml-1 hasta 10-3 ug ml-1). Se presentan así mismo resultados de la valoración de otros aspectos que afectan la medición tales como: tipo y concentración de los mitógenos usados (Con A, PHA), edad de los animales, tipo y por ciento de suero añadido al cultivo, número de células y tiempo de los cultivos. Se discute la importancia de los inhibidores y las posibles fluctuaciones del test como sistema biológico

Determinación de IL-l usando un sistema de proliferación de timocitos / Determination of IL-l with a timocite proliferative system

La interleukina-1 (IL-1) es un factor soluble producido por células accesorias que constituye la segunda señal necesaria para la activación de células T, dependientes de macrófagos. La determinación de la IL-1 constituye un importante aspecto al medir y estudiar la inmunorreactividad in vitro y la presencia de este factor en fluidos corporales. En el presente trabajo se describe el método de proliferación de timocitos como sistema de medición de la IL-1 adaptado a nuestras condiciones de laboratorio, siendo demostrado que es posible usar otras especies de ratones además de la C3H/Hed (no respondedores al LPS) si se trabaja en el rango propuesto de concentración de LPS; (100 ug ml-1 hasta 10-3 ug ml-1). Se presentan así mismo resultados de la valoración de otros aspectos que afectan la medición tales como: tipo y concentración de los mitógenos usados (Con A, PHA), edad de los animales, tipo y por ciento de suero añadido al cultivo, número de células y tiempo de los cultivos. Se discute la importancia de los inhibidores y las posibles fluctuaciones del test como sistema biológico