Development of a droplet digital PCR assay for quantification of the proviral load of bovine leukemia virus.

Droplet digital PCR (ddPCR) is a highly sensitive tool developed for the detection and quantification of short-sequence variants-a tool that offers unparalleled precision enabling measurement of smaller-fold changes. We describe here the use of ddPCR for the detection of Bovine leukemia virus (BLV) DNA provirus. Serum samples and whole blood from experimentally infected sheep and naturally infected cattle were analyzed through ddPCR to detect the BLV gp51 gene, and then compared with serologic and molecular tests. The ddPCR assay was significantly more accurate and sensitive than AGID, ELISA, nested PCR, and quantitative PCR. The limit of detection of ddPCR was 3.3 copies/µL, detecting positive experimentally infected sheep beginning at 6 d post-infection. The ddPCR methodology offers a promising tool for evaluating the BLV proviral load, particularly for the detection of low viral loads.

Skeletal involvement in Gaucher disease: An observational multicenter study of prognostic factors in the Argentine Gaucher disease patients.

Patients with Gaucher type 1 (GD1) throughout Argentina were enrolled in the Argentine bone project to evaluate bone disease and its determinants. We focused on presence and predictors of bone lesions (BL) and their relationship to therapeutic goals (TG) with timing and dose of enzyme replacement therapy (ERT). A total of 124 patients on ERT were enrolled in a multi-center study. All six TG were achieved by 82% of patients: 70.1% for bone pain and 91.1% for bone crisis. However, despite the fact that bone TGs were achieved, residual bone disease was present in 108 patients on ERT (87%) at time 0. 16% of patients showed new irreversible BL (bone infarcts and avascular osteonecrosis) despite ERT, suggesting that they appeared during ERT or were not detected at the moment of diagnosis. We observed 5 prognostic factors that predicted a higher probability of being free of bone disease: optimal ERT compliance; early diagnosis; timely initiation of therapy; ERT initiation dose ≥45 UI/kg/EOW; and the absence of history of splenectomy. Skeletal involvement was classified into 4 major phenotypic groups according to BL: group 1 (12.9%) without BL; group 2 (28.2%) with reversible BL; group 3 (41.9%) with reversible BL and irreversible chronic BL; and group 4 (16.9%) with acute irreversible BL. Our study identifies prognostic factors for achieving best therapeutic outcomes, introduces new risk stratification for patients and suggests the need for a redefinition of bone TG. Am. J. Hematol. 91:E448-E453, 2016. © 2016 Wiley Periodicals, Inc.

Nefrectomia laparoscópica em cão parasitado por Dioctophyma renale - Relato de caso / Laparoscopic nefrectomy in a Dyoctophyma renale parasited dog - A case report

No presente trabalho, foi realizado o diagnóstico de dioctofimose renal em um cão e seu posterior tratamento através de nefrectomia laparoscópica. Diagnosticou-se a presença de Dioctophyma renale através da constatação de ovos na urina e dos exames de ultra-sonografia e radiografia. Para a realização do procedimento cirúrgico, a cavidade peritoneal foi insuflada com dióxido de carbono através de uma punção com a agulha de Veress na linha alba, mantendo-se o animal em decúbito dorsal. Após o estabelecimento do pneumoperitônio, o cão foi posicionado em decúbito lateral esquerdo. A cavidade peritoneal foi acessada pela parede abdominal lateral direita com a utilização de quatro trocartes permanentes, dispostos em forma de cruz. O rim direito foi apreendido com uma pinça de Reddick-Olsen e os vasos renais foram dissecados utilizando-se uma pinça de Kelly e uma tesoura de Metzenbaum. Anteriormente à secção da artéria e da veia renal, procedeu-se a aplicação de três clipes de titânio em cada uma destas estruturas. O ureter foi isolado e ligado com dois clipes. O rim foi dissecado da fascia renal e peritônio com a utilização de tesoura e coagulação monopolar. Posteriormente, esse órgão foi colocado em um saco cirúrgico para remoção de tecidos e foi retirado da cavidade através da incisão cranial, ampliada em um centímetro de seu comprimento inicial. Constataram-se, no rim parasitado a destruição do seu parênquima e a presença de dois nematódeos. Seis meses após o procedimento cirúrgico, o animal apresentava-se em bom estado clínico. A técnica laparoscópica utilizada foi apropriada para a realização de nefrectoma no cão parasitado por Dyoctophyma renale.