Integrin alpha 6 homozygous splice-site mutation causes a new form of junctional epidermolysis bullosa in Charolais cattle.

BACKGROUND: Inherited epidermolysis bullosa (EB) is a group of painful and life-threatening genetic disorders that are characterized by mechanically induced blistering of the skin and mucous membranes. Congenital skin fragility resembling EB was recently reported in three Charolais calves born in two distinct herds from unaffected parents. Phenotypic and genetic analyses were carried out to describe this condition and its molecular etiology. RESULTS: Genealogical, pathological and histological investigations confirmed the diagnosis of recessive EB. However, the affected calves showed milder clinical signs compared to another form of EB, which was previously reported in the same breed and is caused by a homozygous deletion of the ITGB4 gene. Homozygosity mapping followed by analysis of the whole-genome sequences of two cases and 5031 control individuals enabled us to prioritize a splice donor site of ITGA6 (c.2160 + 1G > T; Chr2 g.24112740C > A) as the most compelling candidate variant. This substitution showed a perfect genotype-phenotype correlation in the two affected pedigrees and was found to segregate only in Charolais, and at a very low frequency (f = 1.6 × 10-4) after genotyping 186,154 animals from 15 breeds. Finally, RT-PCR analyses revealed increased retention of introns 14 and 15 of the ITGA6 gene in a heterozygous mutant cow compared with a matched control. The mutant mRNA is predicted to cause a frameshift (ITGA6 p.I657Mfs1) that affects the assembly of the integrin α6ß4 dimer and its correct anchoring to the cell membrane. This dimer is a key component of the hemidesmosome anchoring complex, which ensures the attachment of basal epithelial cells to the basal membrane. Based on these elements, we arrived at a diagnosis of junctional EB. CONCLUSIONS: We report a rare example of partial phenocopies observed in the same breed and due to mutations that affect two members of the same protein dimer, and provide the first evidence of an ITGA6 mutation that causes EB in livestock species.

Cutaneous and systemic granulomatous disease associated with hairy vetch toxicosis in a French Holstein dairy herd.

This report describes an outbreak of hairy vetch toxicosis afflicting a herd of cattle with a fatal cutaneous and systemic granulomatous disease. It highlights how this condition remains poorly recognized by cattle production professionals in Europe and the need for communication about vetch-associated diseases.

Cet article décrit une épidémie de toxicose due à la vesce velue touchant un troupeau de bovins se manifestant par une maladie granulomateuse systémique et cutanée fatale. Ceci illustre comment cette atteinte reste peu connue par les professionnels de l'élevage en Europe et le besoin de communiquer sur les maladies associées à la vesce velue.

Este artículo describe un brote de toxicosis de veza vellosa (Vicia villosa) que afectó a un rebaño de ganado con una enfermedad granulomatosa cutánea y sistémica mortal. Destaca cómo esta condición sigue siendo poco reconocida por los profesionales de la producción ganadera en Europa y la necesidad de comunicación sobre las enfermedades asociadas al consumo de veza.

Este relato descreve um surto de intoxicação por ervilhaca peluda em um rebanho de gado com uma doença granulomatosa cutânea e sistêmica. Destaca-se como essa enfermidade continua pouco reconhecida pelos profissionais de bovinocultura na Europa, e a necessidade de comunicação sobre doenças associadas à ervilhaca.

Whole-genome sequencing identifies a homozygous deletion encompassing exons 17 to 23 of the integrin beta 4 gene in a Charolais calf with junctional epidermolysis bullosa.

BACKGROUND: Since 2010, four Charolais calves with a congenital mechanobullous skin disorder that were born in the same herd from consanguineous matings were reported to us. Clinical and histopathological examination revealed lesions that are compatible with junctional epidermolysis bullosa (JEB). RESULTS: Fifty-four extended regions of homozygosity (>1 Mb) were identified after analysing the whole-genome sequencing (WGS) data from the only case available for DNA sampling at the beginning of the study. Filtering of variants located in these regions for (i) homozygous polymorphisms observed in the WGS data from eight healthy Charolais animals and (ii) homozygous or heterozygous polymorphisms found in the genomes of 234 animals from different breeds did not reveal any deleterious candidate SNPs (single nucleotide polymorphisms) or small indels. Subsequent screening for structural variants in candidate genes located in the same regions identified a homozygous deletion that includes exons 17 to 23 of the integrin beta 4 (ITGB4), a gene that was previously associated with the same defect in humans. Genotyping of a second case and of six parents of affected calves (two sires and four dams) revealed a perfect association between this mutation and the assumed genotypes of the individuals. Mining of Illumina BovineSNP50 Beadchip genotyping data from 6870 Charolais cattle detected only 44 heterozygous animals for a 5.6-Mb haplotype around ITGB4 that was shared with the carriers of the mutation. Interestingly, none of the 16 animals genotyped for the deletion carried the mutation, which suggests a rather recent origin for the mutation. CONCLUSIONS: In conclusion, we successfully identified the causative mutation for a very rare autosomal recessive mutation with only one case by exploiting the most recent DNA sequencing technologies.

Multiple congenital epitrichial sweat gland hamartomas in a piglet.

A case of multiple congenital epitrichial sweat gland hamartomas in a 2-day-old piglet is presented. The skin lesions were raised, ovoid to linear in configuration, alopecic, red-purple to pink, and cauliflower-like to cerebriform in appearance. Histological examination of skin specimens confirmed a diagnosis of epitrichial sweat gland hamartoma. Complete necropsy examination revealed no other lesions.

Detection by PCR-enzyme-linked immunosorbent assay of Clostridium botulinum in fish and environmental samples from a coastal area in northern France.

The prevalence of Clostridium botulinum types A, B, E, and F was determined in 214 fresh fish and environmental samples collected in Northern France. A newly developed PCR-enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) used in this survey detected more than 80% of samples inoculated with fewer than 10 C. botulinum spores per 25 g and 100% of samples inoculated with more than 30 C. botulinum spores per 25 g. The percent agreement between PCR-ELISA and mouse bioassay was 88.9%, and PCR-ELISA detected more positive samples than the mouse bioassay did. The prevalence of C. botulinum in seawater fish and sediment was 16.6 and 4%, respectively, corresponding to 3.5 to 7 and 1 to 2 C. botulinum most-probable-number counts, respectively, and is in the low range of C. botulinum contamination reported elsewhere. The toxin type identification of the 31 naturally contaminated samples was 71% type B, 22.5% type A, and 9.6% type E. Type F was not detected. The high prevalence of C. botulinum type B in fish samples is relatively unusual compared with the high prevalence of C. botulinum type E reported in many worldwide and northern European surveys. However, fish processing and fish preparation in France have not been identified as a significant hazard for human type B botulism.

Myxomatosis of the Depilated Angora rabbit. A Preliminary Study.

Abstract- A nodular eruption occurring on the skin of depilated Angora rabbits was studied at 47 rabbit farms in 1988. Virus isolation, electron microscopy, transmission experiments and comparison with experimental infection using recognised strains of myxoma virus confirmed that the disease was myxomatosis. The disease occurred particularly in July and August in rabbits vaccinated in March or April with the heterologous vaccine. Morbidity on farms where lesions occurred only on depilated skin was much lower than on those where generalised forms occurred. In experimental intradermal infections of unvaccinated New Zealand White rabbits, both primary and secondary myxomas occurred earlier in inoculated animals depilated up to five days before or on the day of inoculation; but after six days development of lesions in the depilated area was not observed. The authors advance the hypotheses that the nature ot the spontaneous disease in rabbitries is dependant on the residual level of post-vaccinal immunity. Where this is high, myxomatosis does not occur. Where it is low classical myxomatosis, with numerous lesions on the depilated skin, occurs. Intermediate levels of immunity are able to restrict the development of myxomas to the depilated area. Résumé- Des nodules cutanés, se développant exclusivement sur le dos de quelques animaux récemment épilés, ont été observés en 1988 dans 47 élevages de lapins angora. L'isolement viral, la microscopie électronique, la transmission expérimentale et la comparaison avec l'infection expérimentale par des souches de virus myxomateux ont permis de montrer qu'il s'agissait d'une forme particulière de myxomatose. La maladie était principalement observée en juillet et août sur des lapins vaccinés en mars et avril avec un vaccin hétérologue. La morbidité dans les élevages atteins était significativement inférieure à celle constatée dans les élevages affectés par des formes classiques de myxomatose. L'infection expérimentale de lapins néo-zélandais non vaccinés a montré que le développement des myxomes était plus précoce lorsque les animaux étaient épilés cinq jours avant ou le jour de l'inoculation; mais aucune lésion ne fut observée dans la zone épilée lorsque l'épilation avait lieu plus de six jours après l'inoculation. Les auteurs émettent l'hypothèse que l'aspect de la maladie dépend du niveau résiduel de l'immunité post-vaccinale. Si ce niveau est élevé, la maladie n'apparaît pas. S'il est insuffisant, on observe une forme classique de myxomatose, avec en plus de nombreux myxomes dans la zone cutanée épilée. Une immunité intermédiaire limite le développement des myxomes aux zones cutanées épilées. Zusammenfassung- Das Auftreten von Nodula auf der Haut von enthaarten Angorakaninchen wurde 1988 in 47 Kaninchenfarmen untersucht. Durch Virusisolierung, elektronenmikroskopische Untersuchungen, Übertragungsversuche und den Vergleich mit experimentellen Infektionen mit bekannten Myxomavirusstämmen konnte bestätigt werden, daß es sich bei der Erkrankung urn Myxomatose handelte. Die Ekrankung trat vor allem im Juli und August bei Kaninchen auf, die im März oder April mit heterologen Vakzinen geimpft worden waren. Die Morbidität in Betrieben, wo die Veränderungen nur auf enthaarter Haut auftraten, war viel niedriger als bei denen, wo generalisierte Formen auftraten. Bei experimentellen intradermalen Infektionen nicht geimpfter Weiße Neuseeland-Kaninchen traten sowohl primäre wie sekundäre Myxome früher auf bei den inokulierten Tieren, die bis zu fünf Tage vor der Inokulation depiliert worden waren; 6 Tage danach jedoch wurde keine Entwicklung von Veränderungen im depilierton Bereich festgestellt. Die Autoren stellen die Hypothese auf, daß der Grad der natürlichen Erkrankung in Kaninchenhaltungen von dom residualen Spiegel der durch Impfung erzeugten Immunität abhängt. Wo dieser Spiegel hoch ist, tritt die Myxomatose nicht auf. Wo er niedrig ist, kommt es zu der klassischen Myxomatose mit zahlreichen Veränderungen auf der enthaarten Haut. Mittlere Immunitätsspiegel können die Entwicklung der Myxome of enthaarte Gebiete beschränken. Resumen Una erupción nodular producida en la piel de conejos de Angora depilados fue estudiada en 47 granjas de conejos en 1988. El aislamiento de virus, microscopía electrónica, experimentos de transmisión y la comparación con infecciones experimentales usando cultivos conocidos del virus myxoma, confirmaron que la enfermedad era myxomatosis. La enfermedad ocurrió especialmente en julio y agosto en conejos vacunados en marzo o abril con la vacuna heteróloga. En infecciones experimentales intradérmicas de conejos no vacunados New Zealand y Blancos, ambos myxomas, primario y secundario ocurrieron más pronto en animales inoculados depilados hasta unos cinco dias antes o en el día de la inoculacion; pero después de seis días no se observó desarrollo de lesiones en el area depilada. Los autores avanzaron la hipotesis de que la naturaleza de la enfermedad espontánea en rabbitrios es dependiente del nivel residual de inmunidad post-vacunal. Dónde este es elevado no se produce myxomatosis. Dónde es bajo, se produce la clásica myxomatosis con numerosas lesiones en la piel depilada. Niveles intermedios de inmunidad son capaces de restringir el desarrollo de myxomas en el area depilada.

Bovine Nodular Thelitis: a Clinicopathological Study of 20 Cases.

Abstract- Bovine nodular thelitis in dairy cows is a chronic and enzootic infection. Four stages were distinguished: early stage, evolutive stage, ulcerative stage and final stage. Lesions were located mainly in the lower part of the udder or on the teat and recognized as solid papules and nodules. The histopathological study revealed a tuberculoid granulomatous pattern characterized by a subacute focal dermatitis with lymphoid cells, macrophages, epitheloid cells and a variable number of multinucleate giant cells (Langhans type) but no necrosis. Acid-fast bacilli were demonstrated in two of 14 cases. Three strains of acid fast bacilli were isolated but the only one identified was Mycobacterium terrae. M. terrae is a non-pathogenic slowly growing, non-photochromogenic mycobacterium. Its role in tuberculosis-like skin lesion is the bovine udder is uncertain. Résumé- La thélite nodulaire est une infection chronique et enzootique chez les vaches laitières. On distingue 4 phases: une phase précoce, une phase évolutive, une phase ulcérative et une phase finale. Vingt échantillons histologiques, mammelles et trayons, ont été examinés. Les lésions étaient localisées essentiellement à la partie basse de la mammelle ou sur le trayon et se présentaient sous l'aspect de papules solides ou de nodules. Les échantillons étaient divisés en deux parties: l'une destinée à l'isolement de mycobactéries, l'autre à l'examen histologique. Les lésions histologiques des trayons étaient des granulomes tuberculoïdes, caractérisés par une dermatite subaigue focale avec présence de lymphocytes, macrophages, cellules épithélioïdes et une nombre variable de cellules multinucléées géantes (type Langhans). Les infiltrats inflammatoires étaient principalement périvasculaires. Parfois, ils infiltraient toute la paroi du trayon. Aucune nécrose n'a été observée. Des bacilles acidoalcoolorésistants furent mis en évidence de manière inconstante (2 cas sur 14). Trois types de bacilles acidoalcoolorésistants ont été isolés raais, un seul a été identifié comme étant Mycobacterium terrae. M. terrae est une mycobactérie non pathogène, de croissance lente et non photochromogène. L'implication de cet organisme dans les lésions de type tuberculeux dans la mammelle de la vache est discutée. Zusammenfassung- Bei Milchkühen stellt die bovine noduläre Thelitis eine chronische und enzootische Infektion dar. Vier Stadien lassen sich unterscheiden: Früstadium evolutorisches Stadium, ulzeratives Stadium und Endstadium. 20 pathologische Proben von Euter und Zitzen wurden untersucht. Die Veränderungen waren hauptsächlich am unteren Teil des Euters oder an den Zitzen lokalisiert und ließen sich als solide Papeln oder Knoten ansprechen. Das Untersuchungsgul wurde für die Isolierung von Mykobakterien und für eine histopathologische Untersuchung geteilt. Die histopathologischen Veränderungen der Zitzen zeigten ein tuberkuloides granulomatöses Bild, das durch subakute fokale Dermatitis mit lymphyoiden Zellen, Makrophagen, Epitheloidzellen und einer variablen Anzahl von vielkernigen Riesenzellen (Langhans-Typ) gekennzeichnet war. Die entzündlichen Infiltrate befanden sich hauptsächlich perivaskulär. Manchmal ließen sie sich aber auch in der gesamten Zitzenwand nachweisen. Nekrosen bestaznden nicht. Säurefeste Bazillus-Keime waren inkonstant vorhanden (2 von 14 Fällen). Drei Arten von säurefesten Bazillus-Keimen wurden isoliert, aber nur eine wurde speziell identifiziert (Mycobacterium terrae). M. terrae ist ein nicht pathogenes, langsam wachsendes und nich photochromogenes Mykobakterium. Die Beteiligung dieses Organismus bei den tuberkulose-ähnlichen Hautveränderungen am bovinen Euter wird diskutiert. Resumen La Telitis Nodular Bovina es una infección enzoótica crónica de las vacas lecheras. Se distinguen cuatro etapas: etapa inicial, etapa evolutiva, etapa ulcerativa y etapa final. En el presente trabajo se examinaron 20 muestras de mama y de pezón. Las lesiones se localizaban principalmente en la parte inferior de la glándula mamaria o en el pezón y consistían en pápulas sólidas y en nódulos. Las muestras se dividían en dos partes, una para el aislamiento de micobacterias y la otra para los estudios histopatológicos. Las lesiones histopatológicas consistían en una reacción granulomatosa de tipo tuberculoide, caracterizada por una dermatitis focal subaguda con células linfoides, macrófagos, células epitelioides y un número variable de células gigantes multinucleadas (tipo Langhans). Los infiltrados inflamatorios estaban localizados predominantemente en la zone perivascular. En ocasiones, aparecían a lo largo de toda la pared de la glándula mamaria. No se observó necrosis. Se han aislado tres cepas de bacilos acido-alcohol resistentes, pero sólo una fue identificada específicamente como Mycobacterium terrae. M. Terrae es una micobacteria no fotocromogénica de crecimiento lento y no patógena. Se discute la posible participación de este microorganismo en la génesis de las lesiones pseudotuberculosas observadas en estos animales.