Heme, an iron-containing prosthetic group found in many proteins, carries out diverse biological functions such as electron transfer, oxygen storage and enzymatic reactions. Hemin, the oxidised form of heme, is used to treat porphyria and also to activate heme-oxygenase (HO) which catalyses the rate-limiting step in heme degradation. Our group has previously demonstrated that hemin displays antitumor activity in breast cancer (BC). The aim of this work has been to study the effect of hemin on protein expression modifications in a BC cell line to gain insight into the molecular mechanisms of hemin antitumor activity. For this purpose, we carried out proteome analysis by Mass Spectrometry (MS) which showed that 1309 proteins were significantly increased in hemin-treated cells, including HO-1 and the proteases that regulate HO-1 function, and 921 proteins were significantly decreased. Furthermore, the MS-data analysis showed that hemin regulates the expression of heme- and iron-related proteins, adhesion and cytoskeletal proteins, cancer signal transduction proteins and enzymes involved in lipid metabolism. By biochemical and cellular studies, we further corroborated the most relevant in-silico results. Altogether, these results show the multiple physiological effects that hemin treatment displays in BC and demonstrate its potential as anticancer agent.
Breast Neoplasms , Hemin , Humans , Female , Hemin/pharmacology , Heme Oxygenase-1/metabolism , Proteomics , Heme Oxygenase (Decyclizing)/metabolism , Heme/metabolism , Iron/metabolism
Linoleic acid (LA) is a polyunsaturated fatty acid present in high concentrations in bovine follicular fluid; when added to maturation culture media, it affects oocyte competence (depending on the type and concentration of LA used). To date, little is known about the effective level of incorporation of LA and there is apparently no information regarding its esterification into various lipid fractions of the oocyte and its effect on neutral lipid storage. Therefore, the objective was to assess the uptake and subcellular lipid distribution of LA by analyzing incorporation of radiolabeled LA into oocyte polar and neutral lipid classes. The effects of various concentrations of LA on the nuclear status and cytoplasmic lipid content of bovine oocytes matured in vitro was also analyzed, with particular emphasis on intermediate concentrations of LA. Neutral lipids stored in lipid droplets were quantified with a fluorescence approach. Linoleic acid at 9 and 43 µM did not affect the nuclear status of oocytes matured in vitro, and 100 µM LA inhibited germinal vesicle breakdown, resulting in a higher percentage of oocytes arrested at the germinal state (43.5 vs. 3.0 in controls; P < 0.05). Bovine oocytes actively incorporated LA from the maturation medium (83.4 pmol LA per 100 oocytes at 22 hours of incubation; P < 0.05) and metabolized it mainly into major lipid classes, e.g., triacylglycerols and phospholipids (61.1% and 29.3%, respectively). Supplementation of the maturation medium with LA increased triacylglycerol accumulation in cytoplasmic lipid droplets at all concentrations assayed (P < 0.05). In conclusion, LA added to a defined maturation medium at concentrations that did not alter the nuclear status of bovine oocytes matured in vitro (9 and 43 µM) improved their quality by increasing the content of neutral lipids stored in lipid droplets. By directing the free fatty acid (LA) to triacylglycerol synthesis pathways and increasing the degree of unsaturation of membrane phospholipids, the oocyte was protected from lipotoxic effects (with an expectation of improved cryotolerance).
Cattle , Linoleic Acid/administration & dosage , Lipid Metabolism/drug effects , Oocytes/growth & development , Oocytes/metabolism , Animals , Carbon Radioisotopes , Cell Nucleus/drug effects , Cell Nucleus/physiology , Cells, Cultured , Culture Media , Cytoplasm/chemistry , Cytoplasm/drug effects , Cytoplasm/metabolism , Dose-Response Relationship, Drug , Fatty Acids, Nonesterified/metabolism , Female , Isotope Labeling , Linoleic Acid/metabolism , Lipids/analysis , Oocytes/ultrastructure , Triglycerides/metabolism
Los bioterios suelen no tener personal disponible para llevar un registro adecuado del desarrollo de una experiencia en particular. Pueden perderse datos relevantes o no anticiparse efectos adversos. El impacto es mayor en experimentos a largo plazo, como el estudios de la carcinogénesis. Nuestro grupo desarrolló modelos de historias clínicas (HC) y partes diarios para investigación (PDI) que incluyen procedimientos estandarizados para su confección. Objetivo: demostrar que el uso de HC y PDI permite realizar el seguimiento diario de animales de experimentación por largos períodos y complementa la formación de recursos humanos. Materiales y métodos: se usó como modelo de HC la utilizada por el Grupo Oncológico Cooperativo del Sur (GOCS). En la confección del PDI se consideraron los objetivos del estudio, variables ambientales y bienestar animal. Se entrenó a alumnos avanzados para el manejo de estas herramientas. Resultados: durante 370 días se cumplieron seguimientos diarios en : controles ambientales, cuidado de los animales y prácticas generales. La limpieza de la cama y la detección de ruidos fueron las variables que se recogieron con más frecuencia. El sangrado de fosas nasales, pérdida de pelo y lesiones en piel y mucosas fueron las observaciones más comunes. Se obtuvieron datos para análisis interinos y retrospectivos de posible utilidad a la hora de interpretar resultados. Conclusiones: estas sencillas herramientas, HC y PDI, simplificaron y optimizaron la observación diaria de los animales, pudiéndose realizar acciones correctivas rápidas y permitiendo que alumnos avanzados puedan entrenarse en el manejo de animales de experimentación (AU)
Animals , Research/methods , Neoplasms/veterinary , Veterinary Medicine , Animals, Laboratory , Records
Los bioterios suelen no tener personal disponible para llevar un registro adecuado del desarrollo de una experiencia en particular. Pueden perderse datos relevantes o no anticiparse efectos adversos. El impacto es mayor en experimentos a largo plazo, como el estudios de la carcinogénesis. Nuestro grupo desarrolló modelos de historias clínicas (HC) y partes diarios para investigación (PDI) que incluyen procedimientos estandarizados para su confección. Objetivo: demostrar que el uso de HC y PDI permite realizar el seguimiento diario de animales de experimentación por largos períodos y complementa la formación de recursos humanos. Materiales y métodos: se usó como modelo de HC la utilizada por el Grupo Oncológico Cooperativo del Sur (GOCS). En la confección del PDI se consideraron los objetivos del estudio, variables ambientales y bienestar animal. Se entrenó a alumnos avanzados para el manejo de estas herramientas. Resultados: durante 370 días se cumplieron seguimientos diarios en : controles ambientales, cuidado de los animales y prácticas generales. La limpieza de la cama y la detección de ruidos fueron las variables que se recogieron con más frecuencia. El sangrado de fosas nasales, pérdida de pelo y lesiones en piel y mucosas fueron las observaciones más comunes. Se obtuvieron datos para análisis interinos y retrospectivos de posible utilidad a la hora de interpretar resultados. Conclusiones: estas sencillas herramientas, HC y PDI, simplificaron y optimizaron la observación diaria de los animales, pudiéndose realizar acciones correctivas rápidas y permitiendo que alumnos avanzados puedan entrenarse en el manejo de animales de experimentación
Animals , Research/methods , Neoplasms/veterinary , Veterinary Medicine , Animals, Laboratory , Directory
