Aquaporin-4 Removal from the Plasma Membrane of Human Müller Cells by AQP4-IgG from Patients with Neuromyelitis Optica Induces Changes in Cell Volume Homeostasis: the First Step of Retinal Injury?

Aquaporin-4 (AQP4) is the target of the specific immunoglobulin G autoantibody (AQP4-IgG) produced in patients with neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). Previous studies demonstrated that AQP4-IgG binding to astrocytic AQP4 leads to cell-destructive lesions. However, the early physiopathological events in Müller cells in the retina are poorly understood. Here, we investigated the consequences of AQP4-IgG binding to AQP4 of Müller cells, previous to the inflammatory response, on two of AQP4's key functions, cell volume regulation response (RVD) and cell proliferation, a process closely associated with changes in cell volume. Experiments were performed in a human retinal Müller cell line (MIO-M1) exposed to complement-inactivated sera from healthy volunteers or AQP4-IgG positive NMOSD patients. We evaluated AQP4 expression (immunofluorescence and western blot), water permeability coefficient, RVD, intracellular calcium levels and membrane potential changes during hypotonic shock (fluorescence videomicroscopy) and cell proliferation (cell count and BrdU incorporation). Our results showed that AQP4-IgG binding to AQP4 induces its partial internalization, leading to the decrease of the plasma membrane water permeability, a reduction of swelling-induced increase of intracellular calcium levels and the impairment of RVD in Müller cells. The loss of AQP4 from the plasma membrane induced by AQP4-IgG positive sera delayed Müller cells' proliferation rate. We propose that Müller cell dysfunction after AQP4 removal from the plasma membrane by AQP4-IgG binding could be a non-inflammatory mechanism of retinal injury in vivo, altering cell volume homeostasis and cell proliferation and consequently, contributing to the physiopathology of NMOSD.

Desarrollo de ensayos inmunoenzimáticos para la detección de anticuerpos antiplaquetarios de las clases IgG, IgA e IgM / Development of immunoenzymatic assays to detect IgG and IgM antiplatelet antibodies

Se desarrollaron tres métodos para la detección de inmunoglobulina IgG, IgA e IgM asociada a la membrana plaquetaria. Los valores de densidad óptica (DO) de 50 donantes obtenidos por estas técnicas fueron de 0,124-0,236, 0,07-0,129 y 0,06-0,112 para las IgG, IgA e IgM, respectivamente. Se aceptaron como positivas las muestras con una DO mayor de tres desviaciones estándar de la media de los controles negativos. Se obtuvieron resultados positivos en 10 de los 12 pacientes (83,3 por ciento) con púrpura trombocitopénica autoinmune crónica (PTI-c). En todos los casos en remisión los resultados fueron negativos. La IgG fue la clase de inmunoglobulina más frecuentemente detectada tanto en la PTI-a como en la PTI-, seguida por la IgM y la IgA. La frecuencia con que se detectó una sola clase de inmunoglobulina fue similar a la frecuencia con que se detectaron combinaciones de más de un isotipo, en ambas formas de PTI. En 11 de los 23 pacientes con trombocitopenias y otros diagnósticos de enfermedades hematológicas o autoinmunes se encontraron resultados positivos. En estos casos de trombocitopenias autoinmunes secundarias fue frecuente encontrar la coexistencia de más de un isotipo de inmunoglobulina. Los métodos desarrollados permitirán realizar estudios acerca de la significación clínica del espectro de clases de inmunoglobulinas en las trombocitopenias autoinmunes.

Desarrollo de ensayos inmunoenzimáticos para la detección de anticuerpos antiplaquetarios de las clases IgG, IgA e IgM / Development of immunoenzymatic assays to detect IgG and IgM antiplatelet antibodies

Se desarrollaron tres métodos para la detección de inmunoglobulina IgG, IgA e IgM asociada a la membrana plaquetaria. Los valores de densidad óptica (DO) de 50 donantes obtenidos por estas técnicas fueron de 0,124-0,236, 0,07-0,129 y 0,06-0,112 para las IgG, IgA e IgM, respectivamente. Se aceptaron como positivas las muestras con una DO mayor de tres desviaciones estándar de la media de los controles negativos. Se obtuvieron resultados positivos en 10 de los 12 pacientes (83,3 por ciento) con púrpura trombocitopénica autoinmune crónica (PTI-c). En todos los casos en remisión los resultados fueron negativos. La IgG fue la clase de inmunoglobulina más frecuentemente detectada tanto en la PTI-a como en la PTI-, seguida por la IgM y la IgA. La frecuencia con que se detectó una sola clase de inmunoglobulina fue similar a la frecuencia con que se detectaron combinaciones de más de un isotipo, en ambas formas de PTI. En 11 de los 23 pacientes con trombocitopenias y otros diagnósticos de enfermedades hematológicas o autoinmunes se encontraron resultados positivos. En estos casos de trombocitopenias autoinmunes secundarias fue frecuente encontrar la coexistencia de más de un isotipo de inmunoglobulina. Los métodos desarrollados permitirán realizar estudios acerca de la significación clínica del espectro de clases de inmunoglobulinas en las trombocitopenias autoinmunes. (AU)

Confección de un panel de eritrocitos de prueba para la detección y caracterización de anticuerpos / Preparation of a testing erythrocyte panel for detection and characterization of antibodies

Se estudiaron 73 personas pertenecientes al grupo sanguíneo O y aptas para donar sangre, para conformar un panel de eritrocitos de prueba para la detección y clasificación de anticuerpos antieritrocitarios. Se determinaron los siguientes antígenos de grupo sanguíneo. C, c, E, e, D, C(w), K, Kp(a), Kp(b), Fy(a), Fy(b), M, N, S, s, Pl, Le(a), Le(b), Lu(b), Jk(a), Jk(b) y se realizaron pruebas de control de calidad. Se confeccionó un panel de 10 donantes con el que se pueden detectar y clasificar todos los anticuerpos antieritrocitarios de importancia clínica