ABSTRACT
Cattle trypanosomosis caused by Trypanosoma vivax is a widely distributed disease in Africa and Latin America. It causes significant losses in the livestock industry and is characterized by fluctuating parasitemia, anemia, fever, lethargy, and weight loss. In this study we evaluated the virulence (capacity to multiply inside the host and to modulate the host response) and pathogenicity (ability to produce disease and/or mortality) patterns of two T. vivax strains (TvMT1 and TvLIEM176) in experimentally-infected sheep and determined the proteins differentially expressed in the proteomes of these two strains. Hematological and clinical parameters were monitored in experimentally-infected versus non-infected sheep for 60 days. All the infected animals developed discernable parasitemia at 3 days post-infection (dpi), and the first parasitemia peak was observed at 6 dpi. The maximum average value of parasitemia was 1.3 × 107 (95% CI, 7.9 × 105-2 × 108) parasites/ml in TvLIEM176-infected animals, and 2.5 × 106 (95% CI, 1.6 × 105-4 × 107) parasites/ml in TvMT1-infected ones. Anemia and clinical manifestations were more severe in the animals infected by TvMT1 strain than in those infected by TvLIEM176. In the proteomic analysis, a total of 29 proteins were identified, of which 14 exhibited significant differences in their expression levels between strains. Proteins with higher expression in TvLIEM176 were: alpha tubulin, beta tubulin, arginine kinase, glucose-regulated protein 78, paraflagellar protein 3, and T-complex protein 1 subunit theta. Proteins with higher expression in TvMT1 were: chaperonin HSP60, T-complex protein 1 subunit alpha, heat shock protein 70, pyruvate kinase, glycerol kinase, inosine-5'-monophosphate dehydrogenase, 73 kDa paraflagellar rod protein, and vacuolar ATP synthase. There was a difference in the virulence and pathogenicity between the T. vivax strains: TvLIEM176 showed high virulence and moderate pathogenicity, whereas TvMT1 showed low virulence and high pathogenicity. The proteins identified in this study are discussed for their potential involvement in strains' virulence and pathogenicity, to be further defined as biomarkers of severity in T. vivax infections.
ABSTRACT
El objetivo de la presente investigación fue el de valorar el efecto de la predominancia fenotípica sobre el contenido lipídico como indicador de la calidad ovocitaria. Los COCs fueron recuperados mediante aspiración folicular y sometidos a maduración in vitro (MIV), fecundación in vitro (FIV) y cultivo in vitro (CIV). Se determinó el contenido lipídico y actividad mitocondrial en ovocitos inmaduros y MIV. La tasa de maduración total se ubicó en 75%, con valores de 80,6% y 69,3% para ovocitos predominantemente B. indicus y predominantemente B. taurus, respectivamente. La tasa de fecundación total fue de 27,6%, para ovocitos predominantemente B. indicus y predominantemente B. taurus, esta fue de 26,1% y 29%, respectivamente. Se observó un total de embriones divididos de 52,1% y 58,9% tras 48 y 72 horas post inseminación (hpi), respectivamente. Por otro lado, para el grupo predominantemente B. indicus se apreció un 55,5% y 57,5% de embriones divididos tras 48 y 72 hpi. Mientras que para el grupo predominantemente B. taurus se apreció un 52,1% y 58,9% de embriones divididos tras 48 y 72 hpi. Ovocitos inmaduros presentaron mayor número de gotas lipídicas pequeñas (p <0,0001), en contraste con los ovocitos MIV que presentaron mayor número de gotas lipídicas medianas y grandes (p < 0,0001). Ovocitos predominantemente B. indicus presentaron mayor número de gotas lipídicas pequeñas (p = 0,0005) y medianas (p = 0.005), mientras que para las gotas lipídicas grandes no se apreciaron diferencias significativas. Ovocitos MIV presentaron mayor actividad mitocondrial que el grupo de ovocitos inmaduros (p < 0,05), sin observarse efecto de la predominancia fenotípica sobre este parámetro. La valoración del contenido lipídico no resultó un factor predictivo de la calidad ovocitaria en hembras mestizas.(AU)
The objective of this research was to evaluate the effect of phenotypic predominance on lipid content, mitochondrial activity and early developmental competence as indicators of oocyte quality. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were recovered through follicular aspiration, and underwent in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF), and in vitro culture (IVC) of presumptive zygotes. Lipid content and mitochondrial activity in immature and IVM oocytes were determined. A maturation rate of 80.6% and 69.3% was found for oocytes predominantly B. indicus and predominantly B. taurus, respectively. Total fertilization rate was 27.6%; 26.1% for predominantly B. indicus oocytes and 29% for predominantly B. taurus oocytes. A total of 55.5% and 57.5% of cleaved embryos after 48 and 72 h post-insemination (hpi) in predominantly B. indicus group were observed, respectively. As for the predominantly B. taurus group, 48.6% and 60.4% of cleaved embryos were found after 48 and 72 hpi, respectively. In both groups, immature oocytes showed a greater amount of small lipidic droplets (p <0.0001); IVM decreased the number of small lipid droplets (p < 0.0001) and increased the number of medium and large lipid droplets (p < 0.0001). Predominantly B. indicus oocytes had a greater number of small and medium-sized lipid droplets, while there were no significant differences in large lipid droplets. IVM oocytes had higher mitochondrial activity than immature oocytes group (p < 0.05) without any effect of phenotypic predominance on this parameter. Assessment of lipid content was not a predictive factor of oocyte quality in crossbred cows.(AU)
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da predominância fenotípica no conteúdo lipídico como um indicador da qualidade do oócito. Os COC foram recuperados por aspiração folicular e submetidos a maturação in vitro (IVM), fertilização in vitro (FIV) e cultura in vitro (CIV). Determinou-se o conteúdo lipídico e atividade mitocondrial em oócitos imaturos e IVM. A taxa de maturação total era de 75%, com valores de 80,6% e 69,3% para oócitos predominantemente B. Indicus e predominantemente B. taurus, respectivamente. A taxa de fertilização total foi de 27,6%, para oócitos predominantemente B. indicus e predominantemente B. taurus, este foi de 26,1% e 29%, respectivamente. Um total de 52,1% de embriões divididos e 58,9% foi observada após 48 e 72 horas após a inseminação (hpi), respectivamente. Além disso, para o grupo predominantemente B. indicus 55,5% e 57,5% embrião clivada após 48 e 72 hpi foi observado. Enquanto para o grupo predominantemente B. taurus 52,1% e 58,9% dos embriões divididos após 48 e 72 hpi respectivamente. Oócitos imaturos mostraram gotas lipídicas mais pequenas (p<0,0001), em contraste com oócitos IVM com maior número de gotas lipídicas médias e grandes (p <0,0001). Oócitos predominantemente B. indicus mostraram mais gotas lipídicas pequenas (p = 0,0005) e médias (p = 0,005), enquanto que para as gotas lipídicas grandes não foram observadas diferenças significativas. Oócitos IVM tiveram maior atividade mitocondrial que o grupo de oócitos imaturos (p < 0,05), não houve efeito de predominância fenotípica sobre este parâmetro. A avaliação do conteúdo lipídico não foi um preditor de qualidade dos oócitos nas vacas mestiças.(AU)
Subject(s)
Animals , Female , Cattle , Oocytes/chemistry , Oocytes/physiology , Phenotype , Lipids , Embryonic Development , In Vitro Oocyte Maturation Techniques/veterinary , BiomarkersABSTRACT
El objetivo de la presente investigación fue el de valorar el efecto de la predominancia fenotípica sobre el contenido lipídico como indicador de la calidad ovocitaria. Los COCs fueron recuperados mediante aspiración folicular y sometidos a maduración in vitro (MIV), fecundación in vitro (FIV) y cultivo in vitro (CIV). Se determinó el contenido lipídico y actividad mitocondrial en ovocitos inmaduros y MIV. La tasa de maduración total se ubicó en 75%, con valores de 80,6% y 69,3% para ovocitos predominantemente B. indicus y predominantemente B. taurus, respectivamente. La tasa de fecundación total fue de 27,6%, para ovocitos predominantemente B. indicus y predominantemente B. taurus, esta fue de 26,1% y 29%, respectivamente. Se observó un total de embriones divididos de 52,1% y 58,9% tras 48 y 72 horas post inseminación (hpi), respectivamente. Por otro lado, para el grupo predominantemente B. indicus se apreció un 55,5% y 57,5% de embriones divididos tras 48 y 72 hpi. Mientras que para el grupo predominantemente B. taurus se apreció un 52,1% y 58,9% de embriones divididos tras 48 y 72 hpi. Ovocitos inmaduros presentaron mayor número de gotas lipídicas pequeñas (p <0,0001), en contraste con los ovocitos MIV que presentaron mayor número de gotas lipídicas medianas y grandes (p < 0,0001). Ovocitos predominantemente B. indicus presentaron mayor número de gotas lipídicas pequeñas (p = 0,0005) y medianas (p = 0.005), mientras que para las gotas lipídicas grandes no se apreciaron diferencias significativas. Ovocitos MIV presentaron mayor actividad mitocondrial que el grupo de ovocitos inmaduros (p < 0,05), sin observarse efecto de la predominancia fenotípica sobre este parámetro. La valoración del contenido lipídico no resultó un factor predictivo de la calidad ovocitaria en hembras mestizas.
The objective of this research was to evaluate the effect of phenotypic predominance on lipid content, mitochondrial activity and early developmental competence as indicators of oocyte quality. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were recovered through follicular aspiration, and underwent in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF), and in vitro culture (IVC) of presumptive zygotes. Lipid content and mitochondrial activity in immature and IVM oocytes were determined. A maturation rate of 80.6% and 69.3% was found for oocytes predominantly B. indicus and predominantly B. taurus, respectively. Total fertilization rate was 27.6%; 26.1% for predominantly B. indicus oocytes and 29% for predominantly B. taurus oocytes. A total of 55.5% and 57.5% of cleaved embryos after 48 and 72 h post-insemination (hpi) in predominantly B. indicus group were observed, respectively. As for the predominantly B. taurus group, 48.6% and 60.4% of cleaved embryos were found after 48 and 72 hpi, respectively. In both groups, immature oocytes showed a greater amount of small lipidic droplets (p <0.0001); IVM decreased the number of small lipid droplets (p < 0.0001) and increased the number of medium and large lipid droplets (p < 0.0001). Predominantly B. indicus oocytes had a greater number of small and medium-sized lipid droplets, while there were no significant differences in large lipid droplets. IVM oocytes had higher mitochondrial activity than immature oocytes group (p < 0.05) without any effect of phenotypic predominance on this parameter. Assessment of lipid content was not a predictive factor of oocyte quality in crossbred cows.
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da predominância fenotípica no conteúdo lipídico como um indicador da qualidade do oócito. Os COC foram recuperados por aspiração folicular e submetidos a maturação in vitro (IVM), fertilização in vitro (FIV) e cultura in vitro (CIV). Determinou-se o conteúdo lipídico e atividade mitocondrial em oócitos imaturos e IVM. A taxa de maturação total era de 75%, com valores de 80,6% e 69,3% para oócitos predominantemente B. Indicus e predominantemente B. taurus, respectivamente. A taxa de fertilização total foi de 27,6%, para oócitos predominantemente B. indicus e predominantemente B. taurus, este foi de 26,1% e 29%, respectivamente. Um total de 52,1% de embriões divididos e 58,9% foi observada após 48 e 72 horas após a inseminação (hpi), respectivamente. Além disso, para o grupo predominantemente B. indicus 55,5% e 57,5% embrião clivada após 48 e 72 hpi foi observado. Enquanto para o grupo predominantemente B. taurus 52,1% e 58,9% dos embriões divididos após 48 e 72 hpi respectivamente. Oócitos imaturos mostraram gotas lipídicas mais pequenas (p<0,0001), em contraste com oócitos IVM com maior número de gotas lipídicas médias e grandes (p <0,0001). Oócitos predominantemente B. indicus mostraram mais gotas lipídicas pequenas (p = 0,0005) e médias (p = 0,005), enquanto que para as gotas lipídicas grandes não foram observadas diferenças significativas. Oócitos IVM tiveram maior atividade mitocondrial que o grupo de oócitos imaturos (p < 0,05), não houve efeito de predominância fenotípica sobre este parâmetro. A avaliação do conteúdo lipídico não foi um preditor de qualidade dos oócitos nas vacas mestiças.
Subject(s)
Female , Animals , Cattle , Embryonic Development , Phenotype , Lipids , Oocytes/physiology , Oocytes/chemistry , Biomarkers , In Vitro Oocyte Maturation Techniques/veterinaryABSTRACT
El gC1qR, un receptor para el dominio globular del C1q, es una proteína multicompartamental y multifuncional, cuya intervención en el proceso de fecundación en humanos se ha demostrado recientemente. Los objetivos de esta investigación fueron describir la distribución de gC1qR y valorar su expresión en la membrana plasmática de espermatozoides bovinos antes y después del tratamiento con heparina. La capacitación de espermatozoides provenientes de semen descongelado bovino se indujo con una incubación con heparina y su efectividad se evaluó con la tinción CTC. Posteriormente, se realizaron ensayos de inmunofluorescencia indirecta con el anticuerpo monoclonal 60.11 (anti-gC1qR). El análisis de los datos demostró que el gC1qR es una molécula ubicada en la membrana plasmática de los espermatozoides bovinos que presentauna redistribución tras la capacitación, concentrándose en la región acrosomal: 175 espermatozoides en las alícuotas incubadas con heparina vs. 109 en el control (P<0,05; n=300) presentaron fluorescencia en la región acrosomal; esta distribución es semejante a la documentada en humanos. Igualmente, el nivel de expresión o de accesibilidad de gC1qR en el espermatozoide bovino aumentó tras la capacitación, hecho que se ha observado también en humanos. Estos resultados sugieren que el gC1qR podría participar en la interacción primaria entre el espermatozoide y el ovocito en bovinos.
The complement receptor gC1qR/p33, which recognizes the globular heads of C1q, is a multicompartmental and multifunctional protein and has been shown to play a role in reproduction in humans. The objective of this research was to determine the gC1qR distribution and expression on plasma membrane in bovine sperm before and after heparin treatment. Thus, capacitation of sperm derived from frozen-thawed bovine semen was induced through heparin incubation and its effectiveness was assessed with a CTC stain. Subsequently, indirect immunofluorescence assays were conducted with mAb (60.11, anti-gC1qR) to assess gC1qR distribution and expression. Data analysis demonstrated that gC1qR is expressed on the plasma membrane of bovine sperm. gC1qR showed a capacitation-related redistribution, migrating to the acrosome region: 175 sperm in heparin-incubated aliquots vs. 109 in control (P<0.05, n=300) showed fluorescence over the acrosome region. This distribution is similar to that reported in humans. Similarly, either gC1qR expression or its accessibility to antibodies increased after capacitation. This also correlates with what has been observed in humans. These results suggest that gC1qR could participate in primary sperm-oocyte interaction in bovines.
Subject(s)
Cattle , Animals , Spermatozoa , Heparin , Proteins , Veterinary MedicineABSTRACT
Las diferencias de la anatomía vascular de los ovarios se han asociado a diferencias significativas en las respuestas fisiológicas de estos órganos durante el ciclo estral. El objetivo de esta investigación fue describir comparativamente el patrón vascular arterial del ovario en oveja y vaca durante el ciclo estral en las diferentes especies. La irrigación arterial del ovario de 18 ovejas y 10 vacas reproductivamente maduras, durante las diferentes fases del ciclo estral, se evaluó a través de disección simple, clarificación de tejidos, moldes de corrosión, microscopía óptica, microscopía electrónica y arteriograma. Los resultados mostraron que las arterias ováricas penetraban en número de dos, en la zona vascular del órgano, formando un complejo ovillo arterial muy tortuoso. En cambio en la vaca, las arterias ováricas penetraban al órgano en número de cinco o seis, sin formar ningún ovillo. Esto sugiere que la oveja tiene un mayor aporte sanguíneo al ovario en comparación con la vaca. Se observó una red arterial con origen en la arteria uterina y ovárica en la superficie de la vena uterina en ambas especies. Durante las fases del ciclo estrual se observaron diferencias en la irrigación del ovario. En ovarios de animales en el día 7 del ciclo estral, con cuerpos lúteos, se evidenció una irrigación bien definida a diferencia de los ovarios con cuerpos lúteos a los 13 días del ciclo estral (oveja) o a los 17 del ciclo estral (vaca), en los cuales las arterias disminuían tanto en número como en diámetro.
Differences in ovarian vascular anatomy have been associated to significant differences in physiologic responses of ovaries during estrous cycle in different species. The objective of this study was to describe on a comparative basis the ovarian arterial vascular pattern from 18 ewes and 10 cows in reproductive age, during the different stages of the estrous cycle. The above mentioned pattern was evaluated through simple dissection, tissue clarification, corrosion templates, optic microscopy, electron microscopy and arteriograms. Results showed that in ewes, two ovarian arteries entered into the ovarian vascular zone, forming a very contorted and complex arterial mesh (glomus). By contrast, in cows five o six, ovarian arteries entered into the ovaries, without forming mesh. This suggests that ewes might have a better blood supply to the ovary than cows. A network was observed originating from uterine and ovarian arteries on the surface of uterine vein in both species. Differences in ovarian blood supply were seen during the different stages of estrous cycle. In animals having corpora lutea at 7 days of the estrous cycle was noticed a well defined ovarian blood supply, whereas in animals at 14 (ewes) or 18 (cows) post-heat, having corpora lutea as well, ovarian arteries diminished in size and number.
ABSTRACT
En los equinos pura sangre de carreras, las lesiones del sistema músculo esquelético representan el mayor porcentaje de lesiones encontradas en esta especie. Un total de 24 caballos con tendonitis clínica en algunos de sus miembros anteriores, fue evaluado mediante un examen físico y posteriormente con ultrasonografía en modo B tiempo real, con el objetivo de determinar el grado de correlación entre los signos clínicos y los hallazgos ultrasonográficos. Las lesiones encontradas se clasificaron de acuerdo al porcentaje de fibras dañadas: Grado I: pérdida difusa de la densidad de las fibras del tendón; Grado II: presencia de un área anecoica que abarca menos del 50 por ciento del área transversal del tendón (ATT); Grado III: presencia de un área anecoica que abarca más del 50 por ciento de ATT; Grado IV: 90 por ciento o más del ATT afectada (ruptura del tendón). También se evaluó la presencia o no de fibrosis en los tendones. Se observó una correlación positiva y significativa, tanto entre los signos clínicos a inflamación de un determinado tendón y los hallazgos ultrasonográficos, como entre esos signos clínicos y la presencia de fibrosis, en todos los tendones y miembros evaluados, lo cual sugiere que a través de la ultrasonografía se puede establecer el estado clínico y el pronóstico de la lesión con mucha más exactitud que con la realización únicamente de la evaluación física