Equine herpesvirus 1 elicits a strong pro-inflammatory response in the brain of mice.

Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an emerging pathogen that causes encephalomyelitis in horses and non-equid species. Several aspects of the immune response in the central nervous system (CNS), mainly regarding the role of inflammatory mediators during EHV-1 encephalitis, remain unknown. Moreover, understanding the mechanisms underlying extensive neuropathology induced by viruses would be helpful to establish therapeutic strategies. Therefore, we aimed to evaluate some aspects of the innate immune response during highly neurovirulent EHV-1 infection. C57BL/6 mice infected intranasally with A4/72 and A9/92 EHV-1 strains developed a fulminant neurological disease at 3 days post-inoculation with high viral titres in the brain. These mice developed severe encephalitis with infiltration of monocytes and CD8+ T cells to the brain. The inflammatory infiltrate followed the detection of the chemokines CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CXCL2, CXCL9 and CXCL-10 in the brain. Notably, the levels of CCL3, CCL4, CCL5 and CXCL9 were higher in A4/72-infected mice, which presented higher numbers of inflammatory cells within the CNS. Pro-inflammatory cytokines, such as interleukins (ILs) IL-1α, IL-1ß, IL-6, IL-12ß, and tumour necrosis factor (TNF), were also detected in the CNS, and Toll-like receptor (TLR) TLR2, TLR3 and TLR9 genes were also upregulated within the brain of EHV-1-infected mice. However, no expression of interferon-γ (IFN-γ) and IL-12α, which are important for controlling the replication of other herpesviruses, was detected in EHV-1-infected mice. The results show that the activated innate immune mechanisms could not prevent EHV-1 replication within the CNS, but most likely contributed to the extensive neuropathology. The mouse model of viral encephalitis proposed here will also be useful to study the mechanisms underlying extensive neuropathology.

Seroepidemiology of Neospora caninum among goats (Capra hircus) in the state of Paraíba, northeastern Brazil / Soroepidemiologia de Neospora caninum em caprinos (Capra hircus) do estado da Paraíba, Nordeste do Brasil

Although goat dairy farms in Brazil may have a higher risk of infection by Neospora caninum than beef farms, risk factor evaluation on a representative population remains to be fully established in Brazil. Accordingly, this study aimed to establish the occurrence of anti-N. caninum antibodies and factors associated with exposure in 406 blood samples from five dairy and three beef goat farms in the state of Paraíba, northeastern Brazil. Anti-N. caninum antibodies were detected by indirect immunofluorescence assay (IFA), with samples considered positive when reacting with dilution ≥ 1:50. A total of 106/406 goats (26.11%; 95% CI: 21.96-30.72%) were seroreactive comprising 2/61 (3.28%), 10/45 (22.22%), 13/50 (26.00%), 17/51 (33.33%) to 29/46 (63.04%) in dairy farms, and from 3/54 (5.56%), 12/50 (24.00%) to 20/49 (40.82%) on the beef farms. No significant associations were found in relation to age, gender, dairy versus beef farms, occurrence of abortions or mummified fetuses, and seroreactivity to N. caninum (P>0.05). In conclusion, goat farms in the state of Paraíba showed the highest occurrence of anti-N. caninum antibodies to date in Brazil.(AU)

Embora as criações caprinas de leite no Brasil possam ter maior probabilidade de risco de infecção por Neospora caninum do que as de carne, a avaliação dos fatores de risco em uma população representativa ainda não está totalmente estabelecida no Brasil. Dessa forma, este estudo teve por objetivo estabelecer a soroprevalência de N. caninum e seus fatores associados à exposição em 406 amostras de sangue de cinco fazendas de leite e três de corte provenientes do estado da Paraíba, região Nordeste do Brasil. A detecção de anticorpos anti-N. caninum foi realizada utilizando-se a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com as amostras consideradas positivas na diluição ≥ 1:50. No total, 106/406 (26,11%; IC 95%: 21,96-30,72%) caprinos foram sororreagentes, variando de 2/61 (3,28%), 10/45 (22,22%), 13/50 (26,00%), 17/51 (33,33%) a 29/46 (63,04%) em fazendas de leite, e de 3/54 (5,56%), 12/50 (24,00%) a 20/49 (40,82%) em fazendas de corte. Não foram observadas associações significativas entre idade, sexo, criação de leite e carne, ocorrência de abortamentos ou fetos mumificados e sororreatividade para N. caninum (P>0,05). Em conclusão, fazendas de caprinos da Paraíba mostraram as mais altas ocorrências de anticorpos anti-N. caninum até o momento no Brasil.(AU)

Seroepidemiology of Neospora caninum among goats (Capra hircus) in the state of Paraíba, northeastern Brazil / Soroepidemiologia de Neospora caninum em caprinos (Capra hircus) do estado da Paraíba, Nordeste do Brasil

Although goat dairy farms in Brazil may have a higher risk of infection by Neospora caninum than beef farms, risk factor evaluation on a representative population remains to be fully established in Brazil. Accordingly, this study aimed to establish the occurrence of anti-N. caninum antibodies and factors associated with exposure in 406 blood samples from five dairy and three beef goat farms in the state of Paraíba, northeastern Brazil. Anti-N. caninum antibodies were detected by indirect immunofluorescence assay (IFA), with samples considered positive when reacting with dilution ≥ 1:50. A total of 106/406 goats (26.11%; 95% CI: 21.96-30.72%) were seroreactive comprising 2/61 (3.28%), 10/45 (22.22%), 13/50 (26.00%), 17/51 (33.33%) to 29/46 (63.04%) in dairy farms, and from 3/54 (5.56%), 12/50 (24.00%) to 20/49 (40.82%) on the beef farms. No significant associations were found in relation to age, gender, dairy versus beef farms, occurrence of abortions or mummified fetuses, and seroreactivity to N. caninum (P>0.05). In conclusion, goat farms in the state of Paraíba showed the highest occurrence of anti-N. caninum antibodies to date in Brazil.(AU)

Embora as criações caprinas de leite no Brasil possam ter maior probabilidade de risco de infecção por Neospora caninum do que as de carne, a avaliação dos fatores de risco em uma população representativa ainda não está totalmente estabelecida no Brasil. Dessa forma, este estudo teve por objetivo estabelecer a soroprevalência de N. caninum e seus fatores associados à exposição em 406 amostras de sangue de cinco fazendas de leite e três de corte provenientes do estado da Paraíba, região Nordeste do Brasil. A detecção de anticorpos anti-N. caninum foi realizada utilizando-se a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com as amostras consideradas positivas na diluição ≥ 1:50. No total, 106/406 (26,11%; IC 95%: 21,96-30,72%) caprinos foram sororreagentes, variando de 2/61 (3,28%), 10/45 (22,22%), 13/50 (26,00%), 17/51 (33,33%) a 29/46 (63,04%) em fazendas de leite, e de 3/54 (5,56%), 12/50 (24,00%) a 20/49 (40,82%) em fazendas de corte. Não foram observadas associações significativas entre idade, sexo, criação de leite e carne, ocorrência de abortamentos ou fetos mumificados e sororreatividade para N. caninum (P>0,05). Em conclusão, fazendas de caprinos da Paraíba mostraram as mais altas ocorrências de anticorpos anti-N. caninum até o momento no Brasil.(AU)

Comparison among three different serological methods for the detection of equine influenza virus infection.

The equine influenza virus (EIV) H3N8 subtype is responsible for all EIV outbreaks worldwide while the H7N7 subtype is less pathogenic and is considered extinct as it has not been confirmed in outbreaks since 1980. Although EIV is enzootic in Brazil, few reports describe the actual EIV antibody status in the country. The aims of this study were: - to evaluate the efficiency of different serum treatments described by the World Organisation for Animal Health (OIE) and the World Health Organization (WHO) to remove non-specific haemagglutination inhibitors for the haemagglutination inhibition (HI) assay for EIV - to evaluate the presence of EIV antibodies by HI, enzyme-linked immunosorbent assay and agar gel immunodiffusion in 83 non-vaccinated equines from São Paulo State - to evaluate a strategy to better analyse equine sera for EIV antibodies. Although there was no statistical difference among treatments, receptor-destroying enzyme treatment followed by chicken erythrocyte adsorption showed more consistent results, which corroborate the OIE and WHO recommendation to use this treatment preferentially. The HI results suggest equine H3N8 virus circulation among the animals tested from São Paulo State. The algorithm suggested here could be used to guide antibody detection against equine influenza virus in equines, improving the test specificity by aiming to avoid false positive results.

Tous les foyers de grippe équine dans le monde sont dus au sous-type H3N8 du virus. Le sous-type H7N7, moins pathogène, est considéré comme éteint, sa présence n'ayant été confirmée dans aucun des foyers enregistrés depuis 1980. Au Brésil, la grippe équine est enzootique mais la prévalence d'anticorps dans le pays est peu documentée. La présente étude avait trois objectifs : ­ évaluer l'efficacité de plusieurs traitements de sérums décrits par l'Organisation mondiale de la santé animale (OIE) et l'Organisation mondiale de la santé (OMS) sur la suppression des inhibiteurs d'hémagglutination non spécifiques, afin de pouvoir utiliser l'épreuve d'inhibition de l'hémagglutination pour la détection de la grippe équine, ­ évaluer la présence d'anticorps dirigés contre la grippe équine chez 83 chevaux non vaccinés de l'état de São Paulo en utilisant l'inhibition de l'hémagglutination, l'épreuve immuno-enzymatique (ELISA) et l'épreuve d'immunodiffusion en gélose (IDG) ; ­ évaluer une stratégie visant à améliorer les techniques sérologiques de détection des anticorps dirigés contre la grippe équine. S'il n'y a pas eu de différence statistique significative entre les traitements, celui faisant appel à l'enzyme de destruction du récepteur suivi d'une adsorption sur érythrocytes de poule a permis d'obtenir les résultats les plus cohérents, ce qui corrobore les recommandations de l'OIE et de l'OMS en faveur de ce traitement. Les résultats obtenus au moyen de l'inhibition de l'hémagglutination indiquent que le virus H3N8 est présent parmi les animaux testés de l'état de São Paulo. L'algorithme présenté par les auteurs pourrait servir de modèle pour détecter la présence d'anticorps dirigés contre le virus de la grippe équine chez les chevaux : en effet, il permet d'éviter les résultats faussement positifs, ce qui améliore la spécificité du test utilisé.

El subtipo H3N8 del virus de la gripe equina (VGE) es el agente etiológico de todos los brotes que se producen en el mundo, mientras que el subtipo H7N7, menos patogénico, se da por extinto, en la medida en que desde 1980 no se ha confirmado su intervención en brote alguno. Aunque en el Brasil el VGE es enzoótico, existen pocos trabajos que den cuenta de la situación real del país en cuanto a la presencia de anticuerpos contra el virus. Los autores describen un estudio que perseguía los siguientes objetivos: ­ evaluar la eficacia de distintos tratamientos séricos descritos por la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) para eliminar los inhibidores inespecíficos de la hemaglutinación con objeto de aplicar la técnica de inhibición de la hemaglutinación a la detección del VGE; ­ evaluar la presencia de anticuerpos contra el VGE por inhibición de la hemaglutinación, ensayo inmunoenzimático (ELISA) e inmunodifusión en gel de agar en 83 ejemplares equinos no vacunados del estado de São Paulo; ­ evaluar una estrategia encaminada a analizar más eficazmente sueros equinos para detectar en ellos anticuerpos anti-VGE. Aunque no se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos, el uso de enzimas destructores de receptores seguido de la técnica de adsorción de eritrocitos de pollo arrojó resultados más coherentes, cosa que avala la recomendación de la OIE y la OMS de privilegiar este tratamiento. Los resultados obtenidos por inhibición de la hemaglutinación parecen indicar que el virus H3N8 equino circula entre los animales analizados del estado de São Paulo. El algoritmo aquí propuesto podría servir de guía para detectar en equinos la presencia de anticuerpos contra el VGE. Puesto que apunta a evitar falsos positivos, su aplicación mejoraría la especificidad de la prueba.

Equid herpesvirus type-1 exhibits neurotropism and neurovirulence in a mouse model.

Intranasal inoculation of equid herpesvirus type-1 (EHV-1) Brazilian strains A4/72 and A9/92 induced an acute and lethal infection in four different inbred mouse strains. Clinical and neurological signs appeared between the 2nd and 3rd day post inoculation (dpi) and included weight loss, ruffled fur, a hunched posture, crouching in corners, nasal and ocular discharges, dyspnoea, dehydration and increased salivation. These signs were followed by increased reactivity to external stimulation, seizures, recumbency and death. The virus was recovered consistently from the brain and viscera of all mice with neurological signs. Histopathological changes consisted of leptomeningitis, focal haemorrhage, ventriculitis, neuronal degeneration and necrosis, neuronophagia, non-suppurative inflammation, multifocal gliosis and perivascular infiltration of polymorphonuclear and mononuclear cells. Immunohistochemical examination demonstrated that EHV-1 strains A4/72 and A9/92 replicated in neurons of the olfactory bulb, the cortex and the hippocampus. In contrast, mice inoculated with the EHV-1 Brazilian strain A3/97 showed neither weight loss nor apparent clinical or neurological signs; however, the virus was recovered consistently from their lungs at 3 dpi. These three EHV-1 strains showed distinct degrees of virulence and tissue tropism in mice. EHV-1 strains A4/72 and A9/92 exhibited a high degree of central nervous system tropism with neuroinvasion and neurovirulence. EHV-1 strain A3/97 was not neurovirulent despite being detected in the brains of infected BALB/c nude mice. These findings indicate that several inbred mouse strains are susceptible to neuropathogenic EHV-1 strains and should be useful models for studying the pathogenesis and mechanisms contributing to EHV-induced myeloencephalopathy in horses.

Ocorrência de equídeos soropositivos para os vírus das encefalomielites e anemia infecciosa no estado de Mato Grosso / The occurrence of equids seropositive for encephalomyelitis and infectious anemia virus in Mato Grosso state, Brazil

O presente trabalho determinou a ocorrência de equídeos com sorologia positiva para os vírus das encefalomielites virais dos tipos Leste (EEL), Oeste (EEO) e Venezuelana (EEV) e Anemia Infecciosa (AIE) nos biomas Amazônico, Pantaneiro e Cerrado do Estado de Mato Grosso. A detecção de anticorpos para AIE foi realizada em 886 soros pela prova de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA), enquanto que para EEL, EEO e EEV foi realizada em 473 soros pela Microtécnica de Soroneutra-lização viral em culturas de células VERO. Para AIE, 46 (5,1%) equídeos foram positivos, não sendo observados animais positivos da região amazônica e a maior frequência ocorrendo no ambiente do pantanal com 36,6% de animais positivos (P < 0,05). Para as encefalites virais, foram detectados 168 (35,5%) equídeos positivos para EEL e 31 (6,5%) para EEV. Não houve soros positivos para EEO. As maiores frequências de animais positivos para EEL foram observadas nos ambientes pantaneiro e amazônico com 45,8% e 62,0%, respectivamente (P < 0,05). Os três biomas estudados apresentaram ocorrência similar (P > 0.05) de animais positivos para EEV, com 4,1%, 6,4% e 10,3% para o pantanal, cerrado e amazônia, respectivamente. Embora não apresentando equídeos reagente ao vírus da AIE na região amazônica, a presença de positivos em Mato Grosso encontra-se dentro do relatado no Brasil. O comportamento diferenciado do vírus da EEL e EEV nos três ecossistemas estudados reforça a presença de animais reservatórios, condições ambientais e climáticas que favorecem a proliferação de vetores que propiciam a infecção pelos vírus no Estado de Mato Grosso.(AU)

The present work evaluated the occurrence of seropositive equids for eastern encephalomyelitis virus (EEE), western encephalomyelitis virus (WEE), Venezuelan encephalomyelitis virus (VEE) and infectious anemia virus (IAV) in the Pantanal, Savannah and Amazon biomes of Mato Grosso State, Brazil. The detection of antibodies against IAV was carried out in 886 sera of equids by the immunodiffusion test, and antibodies against EEE, WEE and VEE were evaluated in 473 sera by the seroneutralization test performed in VERO cells. The results showed 46 IAV seropositive equids (5.1%). No sera was positive in the Amazon region, and the Pantanal biome showed a higher occurrence with 36.6% of seropositives (P < 0.05). No sera was positive for WEE virus and 168 (35.5%) and 31 (6.5%) equids were positive for EEE and VEE respectively. Higher frequencies (P < 0.05) were observed for EEE in the Pantanal and Amazon regions with 45.8% and 62.0% respectively. Regarding EEV, no differences were observed between the Pantanal, Savannah and Amazon regions, presenting 4.1%, 6.4% and 10.3% respectively (P > 0.05). Despite that IAV was not observed in equids from the Amazon, the occurrence of seropositive equids agree with the Brazilian prevalence. The differences of EEE and VEE behavior between biomes reinforce the presence of animal reservoirs, along with environmental and weather characteristics that support vector maintenance, which favor the presence of the viral infection in Mato Grosso State.(AU)

Ocorrência de equídeos soropositivos para os vírus das encefalomielites e anemia infecciosa no Estado de Mato Grosso

The present work evaluated the occurrence of seropositive equids for eastern encephalomyelitis virus (EEE), western encephalomyelitis virus (WEE), Venezuelan encephalomyelitis virus (VEE) and infectious anemia virus (IAV) in the Pantanal, Savannah and Amazon biomes of Mato Grosso State, Brazil. The detection of antibodies against IAV was carried out in 886 sera of equids by the immunodiffusion test, and antibodies against EEE, WEE and VEE were evaluated in 473 sera by the seroneutralization test performed in VERO cells. The results showed 46 IAV seropositive equids (5.1%). No sera was positive in the Amazon region, and the Pantanal biome showed a higher occurrence with 36.6% of seropositives (P 0.05). No sera was positive for WEE virus and 168 (35.5%) and 31 (6.5%) equids were positive for EEE and VEE respectively. Higher frequencies (P 0.05) were observed for EEE in the Pantanal and Amazon regions with 45.8% and 62.0% respectively. Regarding EEV, no differences were observed between the Pantanal, Savannah and Amazon regions, presenting 4.1%, 6.4% and 10.3% respectively (P > 0.05). Despite that IAV was not observed in equids from the Amazon, the occurrence of seropositive equids agree with the Brazilian prevalence. The differences of EEE and VEE behavior between biomes reinforce the presence of animal reservoirs, along with environmental and weather characteristics that support vector maintenance, which favor the presence of the viral infection in Mato Grosso State.

O presente trabalho determinou a ocorrência de equídeos com sorologia positiva para os vírus das encefalomielites virais dos tipos Leste (EEL), Oeste (EEO) e Venezuelana (EEV) e Anemia Infecciosa (AIE) nos biomas Amazônico, Pantaneiro e Cerrado do Estado de Mato Grosso. A detecção de anticorpos para AIE foi realizada em 886 soros pela prova de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA), enquanto que para EEL, EEO e EEV foi realizada em 473 soros pela Microtécnica de Soroneutra-lização viral em culturas de células VERO. Para AIE, 46 (5,1%) equídeos foram positivos, não sendo observados animais positivos da região amazônica e a maior frequência ocorrendo no ambiente do pantanal com 36,6% de animais positivos (P 0,05). Para as encefalites virais, foram detectados 168 (35,5%) equídeos positivos para EEL e 31 (6,5%) para EEV. Não houve soros positivos para EEO. As maiores frequências de animais positivos para EEL foram observadas nos ambientes pantaneiro e amazônico com 45,8% e 62,0%, respectivamente (P 0,05). Os três biomas estudados apresentaram ocorrência similar (P > 0.05) de animais positivos para EEV, com 4,1%, 6,4% e 10,3% para o pantanal, cerrado e amazônia, respectivamente. Embora não apresentando equídeos reagente ao vírus da AIE na região amazônica, a presença de positivos em Mato Grosso encontra-se dentro do relatado no Brasil. O comportamento diferenciado do vírus da EEL e EEV nos três ecossistemas estudados reforça a presença de animais reservatórios, condições ambientais e climáticas que favorecem a proliferação de vetores que propiciam a infecção pelos vírus no Estado de Mato Grosso.

Ocorrência de equídeos soropositivos para os vírus das encefalomielites e anemia infecciosa no estado de Mato Grosso / The occurrence of equids seropositive for encephalomyelitis and infectious anemia virus in Mato Grosso state, Brazil

O presente trabalho determinou a ocorrência de equídeos com sorologia positiva para os vírus das encefalomielites virais dos tipos Leste (EEL), Oeste (EEO) e Venezuelana (EEV) e Anemia Infecciosa (AIE) nos biomas Amazônico, Pantaneiro e Cerrado do Estado de Mato Grosso. A detecção de anticorpos para AIE foi realizada em 886 soros pela prova de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA), enquanto que para EEL, EEO e EEV foi realizada em 473 soros pela Microtécnica de Soroneutra-lização viral em culturas de células VERO. Para AIE, 46 (5,1%) equídeos foram positivos, não sendo observados animais positivos da região amazônica e a maior frequência ocorrendo no ambiente do pantanal com 36,6% de animais positivos (P 0.05) de animais positivos para EEV, com 4,1%, 6,4% e 10,3% para o pantanal, cerrado e amazônia, respectivamente. Embora não apresentando equídeos reagente ao vírus da AIE na região amazônica, a presença de positivos em Mato Grosso encontra-se dentro do relatado no Brasil. O comportamento diferenciado do vírus da EEL e EEV nos três ecossistemas estudados reforça a presença de animais reservatórios, condições ambientais e climáticas que favorecem a proliferação de vetores que propiciam a infecção pelos vírus no Estado de Mato Grosso.

The present work evaluated the occurrence of seropositive equids for eastern encephalomyelitis virus (EEE), western encephalomyelitis virus (WEE), Venezuelan encephalomyelitis virus (VEE) and infectious anemia virus (IAV) in the Pantanal, Savannah and Amazon biomes of Mato Grosso State, Brazil. The detection of antibodies against IAV was carried out in 886 sera of equids by the immunodiffusion test, and antibodies against EEE, WEE and VEE were evaluated in 473 sera by the seroneutralization test performed in VERO cells. The results showed 46 IAV seropositive equids (5.1%). No sera was positive in the Amazon region, and the Pantanal biome showed a higher occurrence with 36.6% of seropositives (P 0.05). Despite that IAV was not observed in equids from the Amazon, the occurrence of seropositive equids agree with the Brazilian prevalence. The differences of EEE and VEE behavior between biomes reinforce the presence of animal reservoirs, along with environmental and weather characteristics that support vector maintenance, which favor the presence of the viral infection in Mato Grosso State.

Ocorrência de equídeos soropositivos para os vírus das encefalomielites e anemia infecciosa no Estado de Mato Grosso

The present work evaluated the occurrence of seropositive equids for eastern encephalomyelitis virus (EEE), western encephalomyelitis virus (WEE), Venezuelan encephalomyelitis virus (VEE) and infectious anemia virus (IAV) in the Pantanal, Savannah and Amazon biomes of Mato Grosso State, Brazil. The detection of antibodies against IAV was carried out in 886 sera of equids by the immunodiffusion test, and antibodies against EEE, WEE and VEE were evaluated in 473 sera by the seroneutralization test performed in VERO cells. The results showed 46 IAV seropositive equids (5.1%). No sera was positive in the Amazon region, and the Pantanal biome showed a higher occurrence with 36.6% of seropositives (P 0.05). No sera was positive for WEE virus and 168 (35.5%) and 31 (6.5%) equids were positive for EEE and VEE respectively. Higher frequencies (P 0.05) were observed for EEE in the Pantanal and Amazon regions with 45.8% and 62.0% respectively. Regarding EEV, no differences were observed between the Pantanal, Savannah and Amazon regions, presenting 4.1%, 6.4% and 10.3% respectively (P > 0.05). Despite that IAV was not observed in equids from the Amazon, the occurrence of seropositive equids agree with the Brazilian prevalence. The differences of EEE and VEE behavior between biomes reinforce the presence of animal reservoirs, along with environmental and weather characteristics that support vector maintenance, which favor the presence of the viral infection in Mato Grosso State.

O presente trabalho determinou a ocorrência de equídeos com sorologia positiva para os vírus das encefalomielites virais dos tipos Leste (EEL), Oeste (EEO) e Venezuelana (EEV) e Anemia Infecciosa (AIE) nos biomas Amazônico, Pantaneiro e Cerrado do Estado de Mato Grosso. A detecção de anticorpos para AIE foi realizada em 886 soros pela prova de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA), enquanto que para EEL, EEO e EEV foi realizada em 473 soros pela Microtécnica de Soroneutra-lização viral em culturas de células VERO. Para AIE, 46 (5,1%) equídeos foram positivos, não sendo observados animais positivos da região amazônica e a maior frequência ocorrendo no ambiente do pantanal com 36,6% de animais positivos (P 0,05). Para as encefalites virais, foram detectados 168 (35,5%) equídeos positivos para EEL e 31 (6,5%) para EEV. Não houve soros positivos para EEO. As maiores frequências de animais positivos para EEL foram observadas nos ambientes pantaneiro e amazônico com 45,8% e 62,0%, respectivamente (P 0,05). Os três biomas estudados apresentaram ocorrência similar (P > 0.05) de animais positivos para EEV, com 4,1%, 6,4% e 10,3% para o pantanal, cerrado e amazônia, respectivamente. Embora não apresentando equídeos reagente ao vírus da AIE na região amazônica, a presença de positivos em Mato Grosso encontra-se dentro do relatado no Brasil. O comportamento diferenciado do vírus da EEL e EEV nos três ecossistemas estudados reforça a presença de animais reservatórios, condições ambientais e climáticas que favorecem a proliferação de vetores que propiciam a infecção pelos vírus no Estado de Mato Grosso.

First detection of the equine herpesvirus 1 neuropathogenic variant in Brazil.

This report describes the first detection of an equine herpesvirus 1 (EHV-1) neuropathogenic variant (G2254/D752) in Brazil from a case of fatal equine herpesvirus myeloencephalopathy (EHM) in a mare. The results of nucleotide sequencing of the EHV-1 ORF30 gene showed that two other Brazilian EHV-1 isolates from EHM cases are representatives of the non-neuropathogenic variant (A2254/N752), suggesting that other unidentified factors are probably also involved in the neuropathogenicity of EHV-1 in horses. These findings will contribute to the epidemiological knowledge of EHV-1 infection in Brazil.

Identification of Porcine parvovirus from wild boars by partial sequencing of the VP-2 coding gene / Identificação de parvovírus suíno em javalis a partir do sequenciamento parcial do gene VP-2

Este estudo descreve a detecção e a identificação de DNA de parvovírus suíno (PVS) em amostras de órgãos de dois javalis, por PCR e sequenciamento direcionado ao gene VP-2. Pools de órgãos (baço, rins, fígado, linfonodos e tonsila) de três javalis adultos e assintomáticos de Paraguaçu Paulista, SP, criados com propósitos comerciais, foram submetidos à detecção de PVS, resultando em duas amostras positivas após reações de nested-PCR direcionadas aos genes NS-1 e VP-2. Os fragmentos parciais de VP-2 foram sequenciados e comparados a sequências homólogas de cepas NADL-2 e Kresse, demonstrando identidade nucleotídica de 100%. Com relação a 29 cepas de PVS previamente isoladas no Brasil, o grau de identidade nucleotídica variou de 99 a 100% (uma a três substituições de nucleotídeos). Estes resultados demonstram, pela primeira vez, a detecção direta por PCR de parvovírus suíno em javalis, confirmada por análise de sequenciamento genético.

Identification of Porcine parvovirus from wild boars by partial sequencing of the VP-2 coding gene / Identificação de parvovírus suíno em javalis a partir do sequenciamento parcial do gene VP-2

Este estudo descreve a detecção e a identificação de DNA de parvovírus suíno (PVS) em amostras de órgãos de dois javalis, por PCR e sequenciamento direcionado ao gene VP-2. Pools de órgãos (baço, rins, fígado, linfonodos e tonsila) de três javalis adultos e assintomáticos de Paraguaçu Paulista, SP, criados com propósitos comerciais, foram submetidos à detecção de PVS, resultando em duas amostras positivas após reações de nested-PCR direcionadas aos genes NS-1 e VP-2. Os fragmentos parciais de VP-2 foram sequenciados e comparados a sequências homólogas de cepas NADL-2 e Kresse, demonstrando identidade nucleotídica de 100%. Com relação a 29 cepas de PVS previamente isoladas no Brasil, o grau de identidade nucleotídica variou de 99 a 100% (uma a três substituições de nucleotídeos). Estes resultados demonstram, pela primeira vez, a detecção direta por PCR de parvovírus suíno em javalis, confirmada por análise de sequenciamento genético.(AU)

Detecção do vírus da artrite encefalite caprina em amostras de leite de cabras pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e nested-PCR / Caprine arthritis encephalitis virus detected by PCR and nested-PCR in milk

A artrite encefalite caprina (CAE) é uma doença infecciosa multissistêmica causada por um Lentivirus, que pode infectar animais de idade e sexo variados. Os principais sinais clínicos são leucoencefalomielite, pneumonia intersticial crônica, artrite e mastite indurativa intersticial. Foi descrito que cabras infectadas apresentavam endurecimento gradativo e difuso do parênquima glandular e com a presença de vários nódulos de consistência dura, além de apresentarem diminuição na produção leiteira e alterações físico-químicas no leite. O exame de amostras de leite pelas técnicas de PCR e nested-PCR para detecção da CAE é caracterizada como métodos com alta especificidade e sensibilidade, oferecendo resultados rápidos. A técnica possibilita identificar vírus em amostras com virus não viável. Nesse estudo, 72 amostras de leite de cabras sororreagentes ao teste de imunodifusão em ágar gel (IDGA) foram avaliadas. Utilizou-se para a produção de DNA primers específicos o gene Pol. As técnicas de PCR e nested-PCR foram conduzidas para amplificar fragmentos genômicos correspondentes ao gene Pol. Catorze amostras (19,4%) apresentaram formação de banda positiva na altura de 600 pb para PCR, e 16 amostras (22,2%) para nested-PCR na altura de 278 pb. Os resultados mostraram que a técnica foi adequada para detectar o DNA pró-viral em amostras de leite e pode ser utilizado como uma ferramenta complementar no estudo da transmissão natural do vírus pela ingestão do leite de cabras sororreagentes a CAE.

The caprine arthritis encephalitis is a multisystemic infectious disease caused by a Lentivirus may affect animals at all ages and sex. The major symptoms are leukoencephalomyelitis, cronical interstitial pneumonia, arthritis and hardening interstitial mastitis. It was described that mammary glands from infected goats had a gradual non inflammatory diffuse nodular hardening, and also decreased milk production and abnormal physical-chemical milk parameters. The detection on milk samples by PCR and nested-PCR techniques are characterized as methods with high specificity and sensibility that provides fast results. The techniques are able to identify nucleic acids on samples with no living virus. In this study, 72 milk samples from infected and seroreagent to IDAG test animals were evaluated. DNA generation with specifics primers Pol gene, PCR and nested-PCR was conducted for individual amplification from a genomic fragment corresponding to the Pol gene. Fourteen samples (19, 4%) presented positive by PCR at 600 bp length bands and 16 samples (22, 2%) by nested-PCR at 278 bp length bands. The results show that PCR and nested-PCR tecniques were able to detect pro-viral DNA in goat milk samples and may be used as a complementary means of Caprine Arthritis and Encephalitis diagnosis.

Prevalência de anticorpos contra agentes virais em equídeos no sul do estado de são paulo

ABSTRACT Sera from 163 Equidae (143 equines and 20 mules) from 16 municipalities in the southern region of São Paulo State, Brazil, were selected in a two-stage stratified probabilistic sample survey. Serum samples were collected from October 2004 to June 2005. The antibody prevalence was estimated against eastern (EEE), western (WEE) and Venezuelan (VEE) equine encephalitis, equine herpesvirus (EHV), equine viral arteritis (EVA), equine influenza 1 and 2 (EI 1 and 2) and vesicular stomatitis (Indiana 2 Cocal virus COCV and Indiana 3 Alagoas virus (VSAV). The results showed positivity of 26% for EHV, 21% for COCV, 5% for VCAV, 16% for EEE, 2.26% for VEE, 11% for influenza Equi/2 and 2.7% for influenza Equi/1. No antibodies were detected against WEE and AVE. These results suggest that the equine population in the south of São Paulo State is exposed to infection risk of HVE, IE Equi-1(H7N7) and Equi-2 (H3N8), EEE, VEE and Indiana 2 Cocal (COCV) Indiana 3 Alagoas (VSAV).

RESUMO Foram analisados soros de 163 equídeos (143 equinos e 20 muares) provenientes de 16 municípios do sul do Estado de São Paulo, parte no Vale do Ribeira e parte no litoral. Utilizouse uma amostra probabilística estratificada em dois estágios, sendo a unidade amostral de primeiro estágio constituída pela unidade de produção agropecuária (UPA) e a de segundo estágio pelo animal dentro da UPA sorteada. Os soros foram coletados no período de outubro de 2004 a junho de 2005. Foram estimadas as prevalências de anticorpos contra os vírus das encefalites equinas do tipo leste (EEE), oeste (WEE) e venezuelana (VEE), herpesvírus equino (HVE), arterite viral dos equinos (AVE), influenza equina 1 e 2 (IE-1 e 2) e estomatite vesicular Indiana 2 Cocal (COCV) e Indiana 3 Alagoas (VSAV). Foram utilizadas as técnicas de inibição da hemoaglutinação para a detecção de anticorpos contra os vírus IE-1 e 2 e de soroneutralização para os demais vírus estudados. Dos animais testados, 26% apresentaram anticorpos contra o HVE, 21% para COCV, 5% para VSAV, 16% para EEE, 2,26% para VEE, 11% para influenza Equi/2 e 2,7% para influenza Equi/1. Não se encontraram animais reagentes para WEE e AVE. A soroprevalência obtida sugere a circulação do HVE, dos vírus da IE Equi-1(H7N7) e Equi-2 (H3N8), dos vírus EEE e VEE e dos vírus da estomatite vesicular Indiana 2 Cocal (COCV) e Indiana 3 Alagoas (VSAV) no rebanho de equídeos do sul do Estado de São Paulo.

Soroprevalência do vírus da influenza equina no município de uruará, pa, brasil, amazônia oriental

ABSTRACT The aim of this study was to estimate the prevalence of herds and animals infected with equine influenza virus in Uruará County, Pará State, Brazil. Antibodies against equine influenza virus were detected by the haemagglutination inhibition test. Sample size was estimated from 2,069 holder farms that raised Equidae and did not vaccinate against equine influenza virus. A 90% confidence level was adopted with 15% precision and 50% estimated prevalence. The following prevalence of serum reactors animals were observed: 55.6% (45/81) (CI 49.8-61.3) A/Eq1/SP/56 (H7N7) and 76.5% (62/81) (CI 70.7-82.3) A/Eq2/SP/1/85 (H3N8). All the farms were positive for both subtypes of equine influenza virus. It is concluded that both subtypes of equine influenza virus were circulating among animals and on all farms in Uruará County, Pará State, Brazil, Eastern Amazon Region, in the year of 1998.

RESUMO O objetivo do presente trabalho foi estimar a soroprevalência de anticorpos contra o vírus da influenza equina utilizando como unidades de análise os equídeos e as propriedades rurais do tipo familiar do Município de Uruará, PA. A presença de anticorpos contra o vírus da influenza equina A/Eq1/SP/56 (H7N7) e A/Eq2/SP/1/85 (H3N8) foi avaliada pela técnica de inibição da hemaglutinação (HI). O tamanho da amostra foi estimado a partir de um total de 2.069 propriedades, caracterizadas por agricultura familiar e ausência de vacinações contra qualquer enfermidade específica dos equídeos. Foi adotado o nível de confiança de 90%, com precisão de 15% e prevalência estimada de 50%. As seguintes prevalências de animais soro reagentes para os diferentes vírus foram observadas: 55,6% (45/81) (IC 49,8 a 61,3) para o vírus A/Eq1/SP/56 (H7N7) e 76,5% (62/81) (IC 70,7 a 82,3) para o vírus A/Eq2/SP/1/85 (H3N8). Todas as propriedades apresentaram pelo menos um animal soropositivo para os dois subtipos virais. Conclui-se que ambos os subtipos (H3N8 e H7N7) do vírus da influenza equina estavam circulando entre os equídeos e presentes em todas as propriedades estudadas no Município de Uruará, PA, Brasil, Amazônia Oriental, no ano de 1998.

First isolation of equine herpesvirus type 1 from a horse with neurological disease in brazil

ABSTRACT This report describes the first Brazilian equine herpesvirus type 1 (EHV-1) isolation from a single fatal equine herpes myeloencephalopathy case in a mare. The isolation of EHV-1 was confirmed from the first passage of cerebrospinal fluid (CSF) sample in Vero cells by PCR and virus neutralization assay. As virus isolation from CSF is unlikely to be successful, as has been shown in several case reports, this circumstantial evidence suggests that the neurological disease was caused by particularly neurovirulent strain of EHV-1.

RESUMO O presente relato refere-se ao primeiro isolamento no Brasil do herpesvírus eqüino tipo 1 (HVE-1) proveniente de um caso clínico de mieloncefalopatia herpética em uma égua, que evoluiu para o óbito. O isolado do HVE-1, denominado 07/05, foi obtido a partir de uma amostra de líquor na primeira passagem em células Vero, confirmando-se sua identidade pela PCR e pela prova de neutralização viral. Como o isolamento viral a partir do líquor geralmente não é bem sucedido, conforme demonstrado em vários relatos de casos, o presente achado sugere que a doença neurológica foi causada por uma amostra particularmente neurovirulenta de HVE-1.

Antibodies against pseudorabies virus in feral swine in southeast Brazil / Anticorpos contra o vírus da doença de Aujeszky em javalis no estado de São Paulo

Serum samples collected from 358 wild boars (Sus scrofa) in breeding farms in São Paulo, southeast Brazil, from 1998 to 2001, were tested for antibodies against pseudorabies virus (PRV) by means of serum neutralization (SN) and enzyme-linked immunobsorbent assay (ELISA). Seropositive animals were detected in three of seven herds analyzed. Overall seroprevalence as assessed by SN was 30.7 percent, ranging from 25.2 percent to 100 percent for the herds that presented seropositive animals. Indirect ELISA detected lower seroprevalence (19.3 percent). Sensitivity and specificity of ELISA were equal to 57.3 percent and 97.6 percent, respectively. Agreement was equal to 85.2 percent (P<0.0001). These results showed that PRV infections occurred in farmed feral swine in southeast Brazil, and affect pseudorabies eradication program.

Soros de 358 javalis (Sus scrofa), criados em sistema de semiconfinamento em propriedades do estado de São Paulo, foram coletados entre 1998 e 2000 e testados para anticorpos contra o vírus da doença de Aujeszky (VDA), pela técnica de soroneutralização (SN) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Foram detectados animais soropositivos em três das sete propriedades analisadas. Do total de javalis testados, 30,7 por cento apresentaram anticorpos neutralizantes contra o VDA, com variação de 25,2 por cento a 100 por cento nas propriedades com animais sororreagentes. O ELISA detectou menor número de sororeagentes (19,3 por cento), sendo a sensibilidade e a especificidade 57,3 por cento e 97,6 por cento, respectivamente, e a correlação observada de 85,2 por cento (P<0,0001). Os resultados mostram que a infecção pelo vírus da doença de Aujeszky ocorre em criações de javalis no estado de São Paulo, e compromete o sucesso de um futuro programa de erradicação da doença na região.

Antibodies against pseudorabies virus in feral swine in southeast Brazil / Anticorpos contra o vírus da doença de Aujeszky em javalis no estado de São Paulo

Serum samples collected from 358 wild boars (Sus scrofa) in breeding farms in São Paulo, southeast Brazil, from 1998 to 2001, were tested for antibodies against pseudorabies virus (PRV) by means of serum neutralization (SN) and enzyme-linked immunobsorbent assay (ELISA). Seropositive animals were detected in three of seven herds analyzed. Overall seroprevalence as assessed by SN was 30.7%, ranging from 25.2% to 100% for the herds that presented seropositive animals. Indirect ELISA detected lower seroprevalence (19.3%). Sensitivity and specificity of ELISA were equal to 57.3% and 97.6%, respectively. Agreement was equal to 85.2% (P<0.0001). These results showed that PRV infections occurred in farmed feral swine in southeast Brazil, and affect pseudorabies eradication program.(AU)

Soros de 358 javalis (Sus scrofa), criados em sistema de semiconfinamento em propriedades do estado de São Paulo, foram coletados entre 1998 e 2000 e testados para anticorpos contra o vírus da doença de Aujeszky (VDA), pela técnica de soroneutralização (SN) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Foram detectados animais soropositivos em três das sete propriedades analisadas. Do total de javalis testados, 30,7% apresentaram anticorpos neutralizantes contra o VDA, com variação de 25,2% a 100% nas propriedades com animais sororreagentes. O ELISA detectou menor número de sororeagentes (19,3%), sendo a sensibilidade e a especificidade 57,3% e 97,6%, respectivamente, e a correlação observada de 85,2% (P<0,0001). Os resultados mostram que a infecção pelo vírus da doença de Aujeszky ocorre em criações de javalis no estado de São Paulo, e compromete o sucesso de um futuro programa de erradicação da doença na região.(AU)

Anticorpos contra agentes bacterianos e virais em suínos de agricultura familiar do município de monte negro, ro

ABSTRACT Sera from swine fromfamily-employed farms in Monte Negro County, state of Rondônia, Brazil, were evaluated againstbacterial and viral agents. Brucellosis was evaluated by Rose-Bengal agglutination (RBA), standard tube agglutination (STA), and mercaptoethanol (ME); and leptospirosis by microscopic agglutination test (MAT) against 24 leptospira serovars. Anti-porcine parvovirus antibodies were tested by haemmaglutination inhibition assay, and ELISA technique was used for detection of antibodies against classical swine fever virus and Aujeszky disease virus. Only 1 (0.9%) from 104 tested sera reacted by RBA, and no samples reacted in STA and ME. Leptospira spp. antibodies were detected in 29 (32.9%) of 88 tested sera and the most frequent serovars detected were Castellonis, Bratislava and Canicola. Antibodies against porcine parvovirus were detected in 7.7% (8/104) of the sera. None of the examined samples reacted to classical swine fever virus or Aujeszky disease virus.

RESUMO Foram avaliados soros de suínos provenientes de propriedades rurais que desenvolvem agricultura familiar no Município de Monte Negro, Rondônia, frente a agentes bacterianos e virais. Para a pesquisa de anticorpos contra Brucella spp., foram utilizados o Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), a Soroaglutinação Lenta em Tubos (SAL) e a prova do 2-Mercaptoetanol (2-ME). Para a pesquisa de Leptospira spp. utilizou-se a Soroaglutinação Microscópica (SAM) contra 24 sorovares de leptospira. Anticorpos contra Parvovírus Suíno (PVS) foram pesquisados pela Inibição da Hemaglutinação (IH), enquanto que o vírus da Peste Suína Clássica (PSC) e da Doença de Aukeszky (DA) por Ensaio Imunoenzimático (ELISA). Apenas uma (0,9%) das 104 amostras testadas foi reagente na AAT e nenhuma na SAL e 2-ME. Para Leptospira spp. foram testados 88 soros, sendo detectados anticorpos em 29 amostras (32,9%) e os sorovares mais freqüentes foram Castellonis, Bratislava e Canicola. Foram detectados anticorpos contra PVS em 7,7% (8/104) dos soros testados. Nenhuma amostra foi reagente para PSC e DA.