Treating complex palmar-plantar wounds using a bilaminar 'trapdoor' technique: a case series.

OBJECTIVE: Due to the similarities of glabrous skin, the plantar region is an excellent donor area for covering complex palmar-plantar wounds. However, taking grafts from the plantar area often results in significant morbidity at the donor site or non-integration of the graft due to the greater thickness of the plantar corneal layer. METHOD: This is a prospective case series including patients with burns or wounds who have been treated with a dermal graft using the bilaminar 'trapdoor' technique. This procedure is used to remove a thin graft from the deep plantar dermis after the partial elevation of the first layer including the entire epidermis and superficial part of the dermis. RESULTS: At the donor area in the four patients in this case series, we observed healing at around 10 days, and absence of hypertrophic scar in all patients. There was complete re-epithelialisation between two and three weeks from the periphery to the centre of the deep dermal graft, and from the glandular epithelium transferred with the graft. During the follow-up, patients presented aesthetic and functional features of glabrous and amelanotic skin, with similar resistance to those of the adjacent areas of the wound in the palmar-plantar region. CONCLUSION: This technique has some advantages, such as less surgical time, minimal morbidity in the plantar donor area, easy integration of the grafts, and maintenance of the functional and aesthetic properties of glabrous skin both in the plantar donor area and in the palmar-plantar recipient region. DECLARATION OF INTEREST: The authors have no conflicts of interest to declare.

Autologous platelet-rich plasma action on skin autografts in horses / Ação do plasma rico em plaquetas autólogo em autoenxertos de pele em equinos

ABSTRACT: This study evaluated the action of autologous platelet-rich plasma (PRP) on cutaneous wounds, containing skin autografts, in the gluteal region of horses. Seven healthy horses were used. Two 6 x 6cm cutaneous wounds were produced on each side of the gluteal region. Eight days after wound induction, grafts were performed with skin fragments harvested from the neck, as well as the application of PRP, prepared by double-centrifugation protocol. Wounds with autografts on the left side received PRP (group T), and those with autografts on the right side did not receive treatment (group C). Macroscopic and microscopic evaluations were performed, considering the integration of autografts and retraction of wound edges, as well as neovascularization, inflammatory infiltrate, young fibroblasts, collagenization, reepithelization and autografts integration. There was no difference between the groups (P > 0.05) in relation to most macroscopic and microscopic variables. However, neovascularization was significantly greater (p = 0.0191) in group T, on the 14th day after grafting. It is concluded that PRP favors the process of skin repair with autografts in horses, since it increases the neovascularization in the initial phase of wound healing. Furthermore, the PRP seems to positively influence the integration of the skin autografts and the retraction of the wound edges.

RESUMO: Este estudo avaliou a ação do plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em feridas cutâneas, contendo autoenxertos de pele em equinos. Foram utilizados sete equinos hígidos, nos quais foram produzidas duas feridas cutâneas de 6 x 6cm, em cada um dos lados da região glútea. Oito dias após a indução das feridas, foram realizados enxertos com fragmentos de pele colhidos do pescoço, assim como a aplicação do PRP, preparado através de protocolo de dupla centrifugação. As feridas com autoenxertos do lado esquerdo receberam PRP (grupo T), e as com autoenxertos do lado direito não receberam tratamento (grupo C). Foram realizadas avaliações macroscópica e microscópica, considerando as variáveis integração dos autoenxertos e retração das bordas da ferida, além de neovascularização, infiltrado inflamatório, fibroblastos jovens, colagenização, reepitelização e integração dos autoenxertos. Não houve diferença entre os grupos (p > 0,05) em relação à maioria das variáveis macroscópicas e microscópicas. Contudo, a neovascularização foi significativamente maior (P = 0,0191) no grupo T, no 14º dia após a realização da enxertia. Conclui-se que o PRP favorece o processo de reparo da pele com autoenxertos em equinos, já que aumenta a neovascularização na fase inicial da cicatrização da ferida. Ainda, o PRP parece influenciar positivamente a integração dos autoenxertos de pele e a retração das bordas da ferida.

Autologous platelet-rich plasma action on skin autografts in horses / Ação do plasma rico em plaquetas autólogo em autoenxertos de pele em equinos

This study evaluated the action of autologous platelet-rich plasma (PRP) on cutaneous wounds, containing skin autografts, in the gluteal region of horses. Seven healthy horses were used. Two 6 x 6cm cutaneous wounds were produced on each side of the gluteal region. Eight days after wound induction, grafts were performed with skin fragments harvested from the neck, as well as the application of PRP, prepared by double-centrifugation protocol. Wounds with autografts on the left side received PRP (group T), and those with autografts on the right side did not receive treatment (group C). Macroscopic and microscopic evaluations were performed, considering the integration of autografts and retraction of wound edges, as well as neovascularization, inflammatory infiltrate, young fibroblasts, collagenization, reepithelization and autografts integration. There was no difference between the groups (P > 0.05) in relation to most macroscopic and microscopic variables. However, neovascularization was significantly greater (p = 0.0191) in group T, on the 14th day after grafting. It is concluded that PRP favors the process of skin repair with autografts in horses, since it increases the neovascularization in the initial phase of wound healing. Furthermore, the PRP seems to positively influence the integration of the skin autografts and the retraction of the wound edges.

Este estudo avaliou a ação do plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em feridas cutâneas, contendo autoenxertos de pele em equinos. Foram utilizados sete equinos hígidos, nos quais foram produzidas duas feridas cutâneas de 6 x 6cm, em cada um dos lados da região glútea. Oito dias após a indução das feridas, foram realizados enxertos com fragmentos de pele colhidos do pescoço, assim como a aplicação do PRP, preparado através de protocolo de dupla centrifugação. As feridas com autoenxertos do lado esquerdo receberam PRP (grupo T), e as com autoenxertos do lado direito não receberam tratamento (grupo C). Foram realizadas avaliações macroscópica e microscópica, considerando as variáveis integração dos autoenxertos e retração das bordas da ferida, além de neovascularização, infiltrado inflamatório, fibroblastos jovens, colagenização, reepitelização e integração dos autoenxertos. Não houve diferença entre os grupos (p > 0,05) em relação à maioria das variáveis macroscópicas e microscópicas. Contudo, a neovascularização foi significativamente maior (P = 0,0191) no grupo T, no 14º dia após a realização da enxertia. Conclui-se que o PRP favorece o processo de reparo da pele com autoenxertos em equinos, já que aumenta a neovascularização na fase inicial da cicatrização da ferida. Ainda, o PRP parece influenciar positivamente a integração dos autoenxertos de pele e a retração das bordas da ferida.

Autologous platelet-rich plasma action on skin autografts in horses / Ação do plasma rico em plaquetas autólogo em autoenxertos de pele em equinos

This study evaluated the action of autologous platelet-rich plasma (PRP) on cutaneous wounds, containing skin autografts, in the gluteal region of horses. Seven healthy horses were used. Two 6 x 6cm cutaneous wounds were produced on each side of the gluteal region. Eight days after wound induction, grafts were performed with skin fragments harvested from the neck, as well as the application of PRP, prepared by double-centrifugation protocol. Wounds with autografts on the left side received PRP (group T), and those with autografts on the right side did not receive treatment (group C). Macroscopic and microscopic evaluations were performed, considering the integration of autografts and retraction of wound edges, as well as neovascularization, inflammatory infiltrate, young fibroblasts, collagenization, reepithelization and autografts integration. There was no difference between the groups (P > 0.05) in relation to most macroscopic and microscopic variables. However, neovascularization was significantly greater (p = 0.0191) in group T, on the 14th day after grafting. It is concluded that PRP favors the process of skin repair with autografts in horses, since it increases the neovascularization in the initial phase of wound healing. Furthermore, the PRP seems to positively influence the integration of the skin autografts and the retraction of the wound edges.(AU)

Este estudo avaliou a ação do plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em feridas cutâneas, contendo autoenxertos de pele em equinos. Foram utilizados sete equinos hígidos, nos quais foram produzidas duas feridas cutâneas de 6 x 6cm, em cada um dos lados da região glútea. Oito dias após a indução das feridas, foram realizados enxertos com fragmentos de pele colhidos do pescoço, assim como a aplicação do PRP, preparado através de protocolo de dupla centrifugação. As feridas com autoenxertos do lado esquerdo receberam PRP (grupo T), e as com autoenxertos do lado direito não receberam tratamento (grupo C). Foram realizadas avaliações macroscópica e microscópica, considerando as variáveis integração dos autoenxertos e retração das bordas da ferida, além de neovascularização, infiltrado inflamatório, fibroblastos jovens, colagenização, reepitelização e integração dos autoenxertos. Não houve diferença entre os grupos (p > 0,05) em relação à maioria das variáveis macroscópicas e microscópicas. Contudo, a neovascularização foi significativamente maior (P = 0,0191) no grupo T, no 14º dia após a realização da enxertia. Conclui-se que o PRP favorece o processo de reparo da pele com autoenxertos em equinos, já que aumenta a neovascularização na fase inicial da cicatrização da ferida. Ainda, o PRP parece influenciar positivamente a integração dos autoenxertos de pele e a retração das bordas da ferida.(AU)

Clínica cirúrgica de pequenos animais: controle microbiológico na obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP) / Microbiological control in obtaining platelet-rich plasma (PRP)

O plasma rico em plaquetas é um produto obtido por meio da centrifugação do sangue, e devido as suas propriedades de estimular a angiogênese, este é utilizado em cirurgias reconstrutivas a fim de evitar complicações pós-cirúrgicas. A coleta do sangue é feita de forma asséptica para obtenção do PRP, porém há possibilidade de contaminação bacteriana no momento da sua confecção podendo assim ocasionar complicações ao paciente. Objetivou-se ressaltar a importância do rigor no controle microbiológico do produto obtido, bem como avaliar a possibilidade de contaminação bacteriana no momento da confecção (PRP), antes do seu emprego no leito de enxertos cutâneos em coelhos. No presente estudo, apenas quatro amostras das sessenta confeccionadas apresentaram colônias bacterianas, indicando que o plasma rico em plaquetas obtido de maneira asséptica é propício e seguro em cirurgias reconstrutivas. Conclui-se que o rigor no controle microbiológico aliado a adequada desinfecção do centro cirúrgico e antissepsia do campo operatório, bem como o preparo asséptico do PRP, seu uso é indicado e seguro, não provocando riscos de contaminação da ferida cirúrgica.

Platelet-rich plasma is a product obtained by centrifuging blood, and due to its properties of stimulating angiogenesis, it is used in reconstructive surgery in order to avoid post-surgical complications. Blood collection is done aseptically to obtain platelet-rich plasma, but there is a possibility of bacterial contamination at the time of making it, thus causing complications to the patient. The objective was to emphasize the importance of rigor in the microbiological control of the product obtained, as well as to evaluate the possibility of bacterial contamination when making plateletrich plasma (PRP), before its use in the bed of skin grafts in rabbits. In the present study, only four samples of the sixty made had bacterial colonies, indicating that the platelet-rich plasma obtained aseptically is conducive and safe in reconstructive surgery. It is concluded that the rigor in microbiological control combined with adequate disinfection of the operating room and antisepsis of the operating field, as well as the aseptic preparation of the PRP, its use is indicated and safe, without causing risks of contamination of the surgical wound.

Clínica cirúrgica de pequenos animais: controle microbiológico na obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP) / Microbiological control in obtaining platelet-rich plasma (PRP)

O plasma rico em plaquetas é um produto obtido por meio da centrifugação do sangue, e devido as suas propriedades de estimular a angiogênese, este é utilizado em cirurgias reconstrutivas a fim de evitar complicações pós-cirúrgicas. A coleta do sangue é feita de forma asséptica para obtenção do PRP, porém há possibilidade de contaminação bacteriana no momento da sua confecção podendo assim ocasionar complicações ao paciente. Objetivou-se ressaltar a importância do rigor no controle microbiológico do produto obtido, bem como avaliar a possibilidade de contaminação bacteriana no momento da confecção (PRP), antes do seu emprego no leito de enxertos cutâneos em coelhos. No presente estudo, apenas quatro amostras das sessenta confeccionadas apresentaram colônias bacterianas, indicando que o plasma rico em plaquetas obtido de maneira asséptica é propício e seguro em cirurgias reconstrutivas. Conclui-se que o rigor no controle microbiológico aliado a adequada desinfecção do centro cirúrgico e antissepsia do campo operatório, bem como o preparo asséptico do PRP, seu uso é indicado e seguro, não provocando riscos de contaminação da ferida cirúrgica.(AU)

Platelet-rich plasma is a product obtained by centrifuging blood, and due to its properties of stimulating angiogenesis, it is used in reconstructive surgery in order to avoid post-surgical complications. Blood collection is done aseptically to obtain platelet-rich plasma, but there is a possibility of bacterial contamination at the time of making it, thus causing complications to the patient. The objective was to emphasize the importance of rigor in the microbiological control of the product obtained, as well as to evaluate the possibility of bacterial contamination when making plateletrich plasma (PRP), before its use in the bed of skin grafts in rabbits. In the present study, only four samples of the sixty made had bacterial colonies, indicating that the platelet-rich plasma obtained aseptically is conducive and safe in reconstructive surgery. It is concluded that the rigor in microbiological control combined with adequate disinfection of the operating room and antisepsis of the operating field, as well as the aseptic preparation of the PRP, its use is indicated and safe, without causing risks of contamination of the surgical wound.(AU)

Autologous and homologous skin grafts treated with platelet-rich plasma (PRP): experimental study in rabbits / Enxertos cutâneos autólogos e homólogos tratados com plasma rico em plaquetas (PRP): estudo experimental em coelhos

The aim of the present study was to compare tissue repair of skin defects in rabbits submitted to autologous and homologous grafts treated or not with platelet-rich plasma (PRP). We selected nine rabbits and constituted four groups, designated as G1, in which were performed autologous graft treated with PRP; G2, autologous graft only; G3, homologous graft treated with PRP; and G4, homologous graft only. Macroscopic and histomorphometric evaluation was realized. The histomorphometric evaluation was performed by Hematoxylin/Eosin and Masson´s Trichrome staining with quantification of collagen fibers, macrophages, fibroblasts and vessels. The autologous graft treated with PRP showed positive influence on the early stage of the tissue repair process at the macroscopic evaluation, characterized by rosy color and cosmetic appearance. At the histomorphometric evaluation, there was no statistical difference in the number of macrophages and fibroblasts between the treated grafts or not with the PRP, as well as the quantification of vessels and collagen fibers. It can be concluded that PRP promotes a positive influence on the initial phase or "take" of the graft.(AU)

Objetiva-se com o presente estudo comparar a reparação tecidual de defeitos cutâneos em coelhos, submetidos a enxertos autólogos e homólogos, tratados ou não com plasma rico em plaquetas (PRP). Para isso, foram selecionados nove coelhos e constituídos quatro grupos experimentais, designados como G1, no qual foi realizado enxerto autólogo tratado com PRP; G2, enxerto autólogo; G3, enxerto homólogo tratado com PRP; e G4, enxerto homólogo. Foram realizadas avaliações macroscópica e histomorfométrica, por meio das colorações de Hematoxilina/Eosina e Tricômio de Masson, incluindo quantificação de fibras colágenas, contagem de macrófagos, fibroblastos e vasos. O uso do enxerto autólogo com PRP influenciou positivamente na fase inicial do processo de reparação tecidual à avaliação macroscópica, caracterizada por coloração rósea e de aspecto cosmético. À avaliação histomorfométrica, não houve diferença estatística quanto ao número de macrófagos e fibroblastos entre os enxertos tratados ou não com o PRP, bem como quanto às contagens de vasos e a quantificação das fibras colágenas. Conclui-se que o PRP sob a promoveu influência positiva na fase inicial ou de "pega" do enxerto autólogo.(AU)

Surgical sponge associated with platelets rich plasma in skin mesh grafts and layer in rabbits (Oryctolagus cuniculus) / Esponja cirúrgica associada com plasma rico em plaquetas em enxertos cutâneos em malha e camada em coelhos (Oryctolagus cuniculus)

The aim of this study was to evaluate of the efficacy of PRP employment associated with surgical sponges to improve the integration of the graft in the recipient bed. It was held at the Veterinary Hospital UNESP, Campus of Jaboticabal - SP, a study of 64 rabbits, divided into eight groups with eight animals. The groups were divided in control with saline solution 0,9%, control with PRP both without the sponge, surgical sponge with PRP, surgical sponge without PRP, and were used mesh and layer grafts in the respective groups. The data were submitted to statistical analysis (paired t-test, Kruskal-Wallis test, with subsequent use of the multiple comparison tests of Dunn, analysis of variance (F) test, Tukey test, P< 0.05). Edema and exudate with 3 and 3 and 7 days (P= 0,03 e P= 0,0049); coloring on the 14th day (P= 0,0001); cosmetic appearance on the 7th and 14th day (P= 0,0026 and P= 0,0001); mononuclear cells (P= 0,01) and polymorphonuclear (P= 0,01); fibroblast proliferation (P= 0,01); collagenous (P= 0,05); hemorrhage (P-007); necrosis and re-epithelialization (P= 0,2928 and P= 0,1). We concluded that the use of Platelet Rich Plasma Gel on skin grafts associated with a sponge as a compressive dressing promote the skin graft survival without a previous granulation tissue.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do PRP associado com esponjas cirúrgicas na integração do enxerto ao leito receptor. Realizou-se, no Hospital Veterinário da Unesp, Jaboticabal, SP, um estudo com 64 coelhos, separados em oito grupos, com oito animais. Os grupos foram: Gprpc (PRP, sem esponja cirúrgica, enxerto camada), Gprpce (PRP, esponja cirúrgica, enxerto camada), Gcc (solução fisiológica 0,9%, sem esponja cirúrgica, enxerto camada), Gcce (solução fisiológica 0,9%, esponjas cirúrgicas, enxerto camada), Gprpm (PRP, sem esponja cirúrgica, enxerto malha), Gprpme (PRP, esponja cirúrgica, enxerto malha), Gcm (solução fisiológica 0,9%, sem esponja cirúrgica, enxerto malha) e Gcce (solução fisiológica 0,9%, esponjas cirúrgicas, malha). Os dados foram analisados pelo teste t emparelhado, Kruskal-Wallis, análise de variância, e teste de Tukey (P<0,05). Edema e exsudato presente com três e sete dias (P=0,03 e P=0,0049); coloração cianótica no 14º dia (P=0,0001); aspecto cosmético bom no sétimo e no 14º dia (P=0,00026 e P=0,0001); presença de células mononucleares (P=0,01) e polimorfonucleares (P=0,01); proliferação de fibroblastos discreta (P=0,01); colagenização intensa (P=0,05); hemorragia discreta (P=0,007); ausência de diferença significativa em necrose e reepitelização (P=0,2928 e P=0,1). Conclui-se que o emprego do PRP gel em enxertos cutâneos associando esponjas cirúrgicas como curativo compressivo favorece sua integração ao leito receptor sem a presença prévia de tecido de granulação.(AU)

Surgical sponge associated with platelets rich plasma in skin mesh grafts and layer in rabbits (Oryctolagus cuniculus) / Esponja cirúrgica associada com plasma rico em plaquetas em enxertos cutâneos em malha e camada em coelhos (Oryctolagus cuniculus)

The aim of this study was to evaluate of the efficacy of PRP employment associated with surgical sponges to improve the integration of the graft in the recipient bed. It was held at the Veterinary Hospital UNESP, Campus of Jaboticabal - SP, a study of 64 rabbits, divided into eight groups with eight animals. The groups were divided in control with saline solution 0,9%, control with PRP both without the sponge, surgical sponge with PRP, surgical sponge without PRP, and were used mesh and layer grafts in the respective groups. The data were submitted to statistical analysis (paired t-test, Kruskal-Wallis test, with subsequent use of the multiple comparison tests of Dunn, analysis of variance (F) test, Tukey test, P< 0.05). Edema and exudate with 3 and 3 and 7 days (P= 0,03 e P= 0,0049); coloring on the 14th day (P= 0,0001); cosmetic appearance on the 7th and 14th day (P= 0,0026 and P= 0,0001); mononuclear cells (P= 0,01) and polymorphonuclear (P= 0,01); fibroblast proliferation (P= 0,01); collagenous (P= 0,05); hemorrhage (P-007); necrosis and re-epithelialization (P= 0,2928 and P= 0,1). We concluded that the use of Platelet Rich Plasma Gel on skin grafts associated with a sponge as a compressive dressing promote the skin graft survival without a previous granulation tissue.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do PRP associado com esponjas cirúrgicas na integração do enxerto ao leito receptor. Realizou-se, no Hospital Veterinário da Unesp, Jaboticabal, SP, um estudo com 64 coelhos, separados em oito grupos, com oito animais. Os grupos foram: Gprpc (PRP, sem esponja cirúrgica, enxerto camada), Gprpce (PRP, esponja cirúrgica, enxerto camada), Gcc (solução fisiológica 0,9%, sem esponja cirúrgica, enxerto camada), Gcce (solução fisiológica 0,9%, esponjas cirúrgicas, enxerto camada), Gprpm (PRP, sem esponja cirúrgica, enxerto malha), Gprpme (PRP, esponja cirúrgica, enxerto malha), Gcm (solução fisiológica 0,9%, sem esponja cirúrgica, enxerto malha) e Gcce (solução fisiológica 0,9%, esponjas cirúrgicas, malha). Os dados foram analisados pelo teste t emparelhado, Kruskal-Wallis, análise de variância, e teste de Tukey (P<0,05). Edema e exsudato presente com três e sete dias (P=0,03 e P=0,0049); coloração cianótica no 14º dia (P=0,0001); aspecto cosmético bom no sétimo e no 14º dia (P=0,00026 e P=0,0001); presença de células mononucleares (P=0,01) e polimorfonucleares (P=0,01); proliferação de fibroblastos discreta (P=0,01); colagenização intensa (P=0,05); hemorragia discreta (P=0,007); ausência de diferença significativa em necrose e reepitelização (P=0,2928 e P=0,1). Conclui-se que o emprego do PRP gel em enxertos cutâneos associando esponjas cirúrgicas como curativo compressivo favorece sua integração ao leito receptor sem a presença prévia de tecido de granulação.(AU)

Histochemical and immunohistochemical evaluation of angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) submitted to skin grafts associated with platelet-rich plasma / Histoquímica e imunohistoquíca na avaliação da angiogênese em coelhos submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com plasma rico em plaquetas

Histochemical staining consists of a set of specific chemical reactions of structures or tissue-endogenous substances. Immunohistochemistry allows verification of proteins in tissues related to biological and pathological factors. The standardization of methods to assess angiogenesis resulting from formation of new blood vessels in procedures with stimulants is important to facilitate the implementation of research as well as to assist interpretation of data. In rabbits some markers of angiogenesis antibodies in the skin are not standardized because of cross-reactions that may occur because the antibodies are made from such animals.The aim of this study was to analyze the immunohistochemical methods through dyes and immunohistochemical markers angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) having undergone reconstructive surgery with skin grafts associated with plasma angiogenesis stimulator rich in platelets, in order to evaluate which method would be better to visualize the vessels, as well as to evaluate which antibody would promote better immunostaining, and find the differences between the methods and to standardize the methodology to be applied in experiments using rabbits. Sixteen rabbits were used, split into two groups of eight animals: Gprp (plasma rich in platelets) and Gc (control, saline solution, 9%). The same technique of reconstructive surgery using graft mesh was performed on each rabbit. The groups differed only in the application of platelet-rich plasma before the surgical wound synthesis. Samples for evaluation of angiogenesis were collected 15 days after the surgical procedure. The dyes Hematoxylin & Eosin and Masson's Trichrome were used in the histochemical study to evaluate vascular proliferation. Markers CD31, CD34 and Caveolin-1 was used for the immunohistochemical study. The evaluation between the groups (Gprp and Gc) in regard to the categorical variable (vascular proliferation intensity) used the Kruskal-Wallis test with p values equal to or less than 0.05 being considered significant. The immunohistochemistry was subjected to analysis of variance for a completely randomized design, with two groups and five repetitions (medium) and 5% significance level. Multiple comparison of groups resulted in the Tukey test (p=0.05) used. The amount of vascular proliferation assessed by histochemical method HE and Masson's Trichrome was found to be a significant variable in Gprp when compared with group Gc. When evaluating the methods used, there was no significant difference. There was no difference in the three markers which were used for correlating microvessels; however, there was more intense staining of vessels when Caveolin-1 Antibody was used. This caused intense marking of the capillaries and small vessels, as well as of larger vessels. When using CD31 and CD34, the same was observed, but it was not as intense as with Caveolin-1; though some cases showed sincere and discreet marking. The results of this study demonstrated that the histochemical methods performed are effective for semi-quantitative assessment of angiogenesis. The immunohistochemical comparison of Caveolin-1, CD31, and CD34 as markers of angiogenesis in rabbits showed that both antibodies could immunostain the newly formed vessels; but the Caveolin-1 showed better immunostaining in small and medium-sized vessels, as well as a minor presence in the background. Although not specific markers for angiogenesis, they can be used as immunohistochemical markers of vascular endothelium in rabbits.(AU)

Colorações histoquímicas consistem de um conjunto de reações químicas específicas das estruturas ou substâncias endógenas do tecido. Logo a Imunohistoquímica permite observar proteínas presentes nos tecidos relacionadas com fatores determinantes do comportamento biológico e patológico. A padronização dos métodos que avaliam a angiogênese decorrente de procedimentos que utilizam substâncias estimulantes à formação de novos vasos são importantes, a fim de facilitar a execução das pesquisas, bem como auxiliar na interpretação dos dados, visto que em coelhos alguns anticorpos marcadores de angiogênese na pele ainda não são padronizadas em virtude das reações cruzadas que podem ocorrer devido aos anticorpos serem confeccionados a partir de tais animais. Objetivou-se analisar os métodos histoquímicos por meio das colorações e imunohistoquímicas com marcadores de angiogênese em coelhos (Oryctolagus cuniculus) submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com estimulador de angiogênese plasma rico em plaquetas, a fim de avaliar qual método seria melhor para visualização dos vasos, bem como avaliar qual anticorpo promoveria melhor imunomarcação, buscando-se assim encontrar a diferenças entre os métodos e padronizar a metodologia a ser aplicada em experimentos que utilizem coelhos. Utilizou-se 16 coelhos, separados em dois grupos com oito animais, compreendendo os grupos Gprp (plasma rico em plaquetas) e Gc (controle, solução fisiológica 0,9%). Em todos os animais foi realizada a mesma técnica de cirurgia reconstrutiva de enxertia do tipo malha, os grupos diferiram apenas a aplicação do plasma rico em plaquetas antes da síntese da ferida cirúrgica. As amostras para avaliação da angiogênese foram coletadas após 15 dias do procedimento cirúrgico. Utilizou-se no estudo histoquímico as colorações Hematoxilina & Eosina e Tricrômico de Masson para avaliação da proliferação vascular, e os anticorpos CD31 e CD34 e Caveolina - 1 para avaliação imunohistoquímica. A comparação entre os grupos (Gprp e Gc) em relação à variável categórica (intensidade de proliferação vascular) foi utilizado o teste de Kruskal-Wallis, com valores de p iguais ou inferiores a 0,05 foram considerados significativos. Os dados imuno-histoquímico foram submetidos à análise de variância para um delineamento inteiramente ao acaso, com 2 grupos e 5 repetições (médias) e nível de significância de 5%. Nas comparações múltiplas das médias dos grupos, utilizou-se o teste de Tukey (α = 0,05). A intensidade de proliferação vascular avaliada pelo método histoquímico HE e Tricômico de Masson encontrou-se que tal variável foi significativa no Gprp, quando comparado com o Gc. Avaliando os métodos utilizados não houve diferença significativa. A contagem microvascular (MVC) realizada com os diferentes marcadores (Caveolina-1, CD31 e CD34) foi significativa no Gprp. Correlacionando a contagem microvascular dos três marcadores utilizados não houve diferença significativa, no entanto observou-se marcação mais intensa dos vasos utilizando o anticorpo Caveolina-1, sendo intensa a marcação dos capilares, vasos de pequeno calibre, bem como em vasos maiores. Nas avaliações de CD31 e CD34 observou que houve imunomarcação dos vasos, porém não foi intensa como a Caveolina-1, alguns casos apresentaram fundo, bem como marcação discreta. Os resultados encontrados neste estudo evidenciaram os métodos histoquímicos são eficazes para avaliação semiquantitativa da angiogênese. A comparação imunohistoquímicas da Caveolina-1, CD31 e CD34 como marcadores de angiogênese em coelhos evidenciaram que ambos os anticorpos são capazes de imunomarcar os vasos neoformados, porém a Caveolina-1 apresentou melhor imunomarcação de vasos de pequeno e médio calibre, bem como menor presença de fundo, embora não seja um marcador específico para angiogênese pode ser utilizada como marcador imunohistoquímico de endotélio vascular em coelhos.(AU)

Histochemical and immunohistochemical evaluation of angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) submitted to skin grafts associated with platelet-rich plasma / Histoquímica e imunohistoquíca na avaliação da angiogênese em coelhos submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com plasma rico em plaquetas

Histochemical staining consists of a set of specific chemical reactions of structures or tissue-endogenous substances. Immunohistochemistry allows verification of proteins in tissues related to biological and pathological factors. The standardization of methods to assess angiogenesis resulting from formation of new blood vessels in procedures with stimulants is important to facilitate the implementation of research as well as to assist interpretation of data. In rabbits some markers of angiogenesis antibodies in the skin are not standardized because of cross-reactions that may occur because the antibodies are made from such animals.The aim of this study was to analyze the immunohistochemical methods through dyes and immunohistochemical markers angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) having undergone reconstructive surgery with skin grafts associated with plasma angiogenesis stimulator rich in platelets, in order to evaluate which method would be better to visualize the vessels, as well as to evaluate which antibody would promote better immunostaining, and find the differences between the methods and to standardize the methodology to be applied in experiments using rabbits. Sixteen rabbits were used, split into two groups of eight animals: Gprp (plasma rich in platelets) and Gc (control, saline solution, 9%).(AU)

Colorações histoquímicas consistem de um conjunto de reações químicas específicas das estruturas ou substâncias endógenas do tecido. Logo a Imunohistoquímica permite observar proteínas presentes nos tecidos relacionadas com fatores determinantes do comportamento biológico e patológico. A padronização dos métodos que avaliam a angiogênese decorrente de procedimentos que utilizam substâncias estimulantes à formação de novos vasos são importantes, a fim de facilitar a execução das pesquisas, bem como auxiliar na interpretação dos dados, visto que em coelhos alguns anticorpos marcadores de angiogênese na pele ainda não são padronizadas em virtude das reações cruzadas que podem ocorrer devido aos anticorpos serem confeccionados a partir de tais animais. Objetivou-se analisar os métodos histoquímicos por meio das colorações e imunohistoquímicas com marcadores de angiogênese em coelhos (Oryctolagus cuniculus) submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com estimulador de angiogênese plasma rico em plaquetas, a fim de avaliar qual método seria melhor para visualização dos vasos, bem como avaliar qual anticorpo promoveria melhor imunomarcação, buscando-se assim encontrar a diferenças entre os métodos e padronizar a metodologia a ser aplicada em experimentos que utilizem coelhos.(AU)

Enxertos de couro cabeludo para a correção de feridas cirúrgicas / Scalp grafts for correcting surgical wounds

Das diversas opções de reconstrução de feridas cirúrgicas, utilizam-se enxertos cutâneos quando o fechamento primário ou por segunda intenção é inviável ou devido a outros fatores que não recomendem o uso de retalhos. O reparo de ferida cirúrgica com enxerto de espessura parcial obtido do couro cabeludo com lâmina flexível é relatado em três casos de exérese convencional de dois casos de carcinoma basocelular na regão nasal e um caso de carcinoma espinocelular no dorso da mão. A técnica proporcionou bom resultado estético tanto na área receptora quanto na área doadora.

Among the diverse reconstruction alternatives used in surgical wounds, those employing cutaneous grafts are implemented when the closure ­ primary or by second intention ­ is unfeasible or, due to other factors, flaps are not recommend. The repair of surgical wounds using partial thickness graft obtained from the scalp with a flexible blade is described in 3 cases of conventional exeresis (2 basal cell carcinomas in the nasal region and 1 case of squamous cell carcinoma on the dorsum of the hand). The technique yielded good aesthetic outcomes, both in the receiver and donor areas.

Epitelização de enxertos cutâneos em feridas recentes de coelhos tratados com membrana amniótica canina e/ou laserterapia / Skin graft epithelialization in rabbit fresh wounds treated with amniotic membrane and/or laser therapy

A enxertia cutânea é uma técnica cirúrgica simples e bastante útil para o reparo de feridas, principalmente aquelas onde existe dificuldade da aplicação do fechamento primário ou de outras técnicas reconstrutivas. Entretanto, para a sobrevivência do enxerto, é necessário que o leito da ferida esteja saudável e com presença de tecido de granulação exuberante. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a aplicação da membrana amniótica e da laserterapia como potenciais estimulantes da cicatrização em enxertos aplicados em feridas sem tecido de granulação. Foram utilizados 42 coelhos, divididos em quatro grupos: grupo controle (GC), grupo membrana (GM), grupo laser (GL) e grupo membrana e laser (GML), submetidos a avaliações macro e microscópicas. Na avaliação macroscópica, foi possível notar que os pacientes dos grupos nos quais a membrana amniótica foi utilizada (GM e GML) apresentaram evidências associadas à acentuada reação inflamatória, à falha de integração do enxerto e à consequente necrose dele. Já os pacientes do GL apresentaram melhor aspecto do enxerto no último dia de avaliação. Na análise microscópica, observou-se intensa integração do enxerto à derme, reepitelização acentuada e escassas células inflamatórias no local do enxerto no GL. O contrário foi observado nos pacientes do GM e GML, nos quais aparentemente houve rejeição da membrana. A formação de colágeno não se correlacionou com outros fatores, como inflamação e necrose, em nenhum dos grupos de tratamento. Dessa forma, é possível afirmar que a laserterapia mostrou ser efetiva, contribuindo para o processo cicatricial e a integração do enxerto. Já a membrana amniótica canina não deve ser utilizada para esse fim, pois provoca intensa reação inflamatória, além de impedir a nutrição do enxerto.(AU)

Skin grafting is a simple surgical technique and useful to repair wounds, especially those where there is a difficulty to apply primary closure skin or other reconstructive techniques. However, for graft survival a healthy wound bed and the presence of an exuberant granulation tissue are necessary. This study aimed to evaluate the application of amniotic membrane and laser therapy as potential healing stimulants in grafts applied in wounds without granulation tissue. For this, we used 42 rabbits divided into four treatment groups, control group (CG), membrane group (MG), laser group (LG) and membrane and laser group (MLG), submitted to macroscopic and microscopic evaluation. The macroscopic examination showed that the patients of the groups where the amniotic membrane was used in order to stimulate re-epithelialization (MG and MLG) presented evidences associated with severe inflammatory reaction, graft integration failure and consequent necrosis. LG patients apparently had the best graph aspect in the last valuation date. Microscopic examination showed intense integration of the graft to the dermis, high re-epithelialization level, and scarce inflammatory cells in the graft site of LG patients. The opposite was observed in patients in the MG and MLG groups, where a rejection of the membrane was observed. Finally, collagen formation was not correlated with other factors such as inflammation and necrosis in any of the treatment groups. We can conclude that laser therapy was effective, contributing to the healing process and integration of the graft. Thus, canine amniotic membrane should not be used for this purpose because it causes intense inflammatory reaction besides avoiding graft nutrition.(AU)

Cierre de lesiones en pacientes con pie diabético por injerto de Davis / Closure of injures in patients with diabetic foot by using Davis' skin grafting

Los injertos de piel por método de Davis se caracterizan por ser injertos cutáneos autólogos con características especiales que comparten de otros tipos de injertos y que a su vez lo diferencian de ellos, tales como su grosor, el cual a nivel central es de mayores proporciones, pero que paulatinamente se adelgaza hacia la periferia con un diámetro alrededor de tres milímetros, facilitando su prendimiento. Debido a la gran resistencia que presentan son de mucha utilidad en áreas sometidas a traumas externos, como en pacientes portadores de pie diabético a los cuales se les haya realizado algún tipo de amputación menor, especialmente a nivel transmetatarsiano. A pesar de la sencillez y utilidad de esta técnica quirúrgica, continúa subutilizada debido a su poca difusión, lo que ocasiona su desconocimiento. Por lo anterior se considera de interés su publicación. Se presenta el caso de un paciente diabético tipo 2 e hipertenso de largo tiempo de evolución de ambas enfermedades. Es ingresado en el Servicio de Angiopatía Diabética con el diagnóstico de pie diabético neuroinfeccioso. Se le realizó desbridamiento quirúrgico con amputación de los dedos e injerto libre de piel por el método de Davis. La evolución y resultados fueron satisfactorios. El injerto de piel por este método constituye una buena opción para aquellos pacientes portadores de pie diabético que necesiten de cobertura cutánea, con baja morbilidad y excelentes resultados en aquellos pacientes en los que no se pueda realizar un colgajo en primera instancia(AU)

Davis´s skin grafting method is autologous skin graft with special characteristics that are similar to other types of grafting but some others make it different such as thickness which is at the central area thicker, but it gradually becomes thinner toward the peripheral area, with a 3 mm diameter, thus facilitating the engraftment. Due to its great resistance, this type of graft is very useful in areas under external traumas such as patients with diabetic foot who have undergone some kind of minor transmetatarsal amputation. Despite de simplicity and usefulness of this surgical technique, it remains underutilized since it is poorly publicized and practically unknown. This is the reason why it is interesting to provide information about it. Here is a type 2 diabetic and hypertensive patient who had suffered from both diseases for a long period of time. He was admitted to the diabetic angiopathy service and diagnosed with neuroinfective diabetic foot. He was performed surgical debridement with amputation of toes and free skin graft by using Davis' method. The results and the recovery were satisfactory. Skin grafting by Davis' method is a good choice for those patients with diabetic foot in need of cutaneos cover, with low morbidity rate and excellent results in patients who cannot be treated with a flap as a first option(AU)

Epitelização de enxertos cutâneos em feridas recentes de coelhos tratados com membrana amniótica canina e/ou laserterapia / Skin graft epithelialization in rabbit fresh wounds treated with amniotic membrane and/or laser therapy

A enxertia cutânea é uma técnica cirúrgica simples e bastante útil para o reparo de feridas, principalmente aquelas onde existe dificuldade da aplicação do fechamento primário ou de outras técnicas reconstrutivas. Entretanto, para a sobrevivência do enxerto, é necessário que o leito da ferida esteja saudável e com presença de tecido de granulação exuberante. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a aplicação da membrana amniótica e da laserterapia como potenciais estimulantes da cicatrização em enxertos aplicados em feridas sem tecido de granulação. Foram utilizados 42 coelhos, divididos em quatro grupos: grupo controle (GC), grupo membrana (GM), grupo laser (GL) e grupo membrana e laser (GML), submetidos a avaliações macro e microscópicas. Na avaliação macroscópica, foi possível notar que os pacientes dos grupos nos quais a membrana amniótica foi utilizada (GM e GML) apresentaram evidências associadas à acentuada reação inflamatória, à falha de integração do enxerto e à consequente necrose dele. Já os pacientes do GL apresentaram melhor aspecto do enxerto no último dia de avaliação. Na análise microscópica, observou-se intensa integração do enxerto à derme, reepitelização acentuada e escassas células inflamatórias no local do enxerto no GL. O contrário foi observado nos pacientes do GM e GML, nos quais aparentemente houve rejeição da membrana. A formação de colágeno não se correlacionou com outros fatores, como inflamação e necrose, em nenhum dos grupos de tratamento. Dessa forma, é possível afirmar que a laserterapia mostrou ser efetiva, contribuindo para o processo cicatricial e a integração do enxerto. Já a membrana amniótica canina não deve ser utilizada para esse fim, pois provoca intensa reação inflamatória, além de impedir a nutrição do enxerto.(AU)

Skin grafting is a simple surgical technique and useful to repair wounds, especially those where there is a difficulty to apply primary closure skin or other reconstructive techniques. However, for graft survival a healthy wound bed and the presence of an exuberant granulation tissue are necessary. This study aimed to evaluate the application of amniotic membrane and laser therapy as potential healing stimulants in grafts applied in wounds without granulation tissue. For this, we used 42 rabbits divided into four treatment groups, control group (CG), membrane group (MG), laser group (LG) and membrane and laser group (MLG), submitted to macroscopic and microscopic evaluation. The macroscopic examination showed that the patients of the groups where the amniotic membrane was used in order to stimulate re-epithelialization (MG and MLG) presented evidences associated with severe inflammatory reaction, graft integration failure and consequent necrosis. LG patients apparently had the best graph aspect in the last valuation date. Microscopic examination showed intense integration of the graft to the dermis, high re-epithelialization level, and scarce inflammatory cells in the graft site of LG patients. The opposite was observed in patients in the MG and MLG groups, where a rejection of the membrane was observed. Finally, collagen formation was not correlated with other factors such as inflammation and necrosis in any of the treatment groups. We can conclude that laser therapy was effective, contributing to the healing process and integration of the graft. Thus, canine amniotic membrane should not be used for this purpose because it causes intense inflammatory reaction besides avoiding graft nutrition.(AU)

Epidermal stem cells and skin tissue engineering in hair follicle regeneration.

The reconstitution of a fully organized and functional hair follicle from dissociated cells propagated under defined tissue culture conditions is a challenge still pending in tissue engineering. The loss of hair follicles caused by injuries or pathologies such as alopecia not only affects the patients' psychological well-being, but also endangers certain inherent functions of the skin. It is then of great interest to find different strategies aiming to regenerate or neogenerate the hair follicle under conditions proper of an adult individual. Based upon current knowledge on the epithelial and dermal cells and their interactions during the embryonic hair generation and adult hair cycling, many researchers have tried to obtain mature hair follicles using different strategies and approaches depending on the causes of hair loss. This review summarizes current advances in the different experimental strategies to regenerate or neogenerate hair follicles, with emphasis on those involving neogenesis of hair follicles in adult individuals using isolated cells and tissue engineering. Most of these experiments were performed using rodent cells, particularly from embryonic or newborn origin. However, no successful strategy to generate human hair follicles from adult cells has yet been reported. This review identifies several issues that should be considered to achieve this objective. Perhaps the most important challenge is to provide three-dimensional culture conditions mimicking the structure of living tissue. Improving culture conditions that allow the expansion of specific cells while protecting their inductive properties, as well as methods for selecting populations of epithelial stem cells, should give us the necessary tools to overcome the difficulties that constrain human hair follicle neogenesis. An analysis of patent trends shows that the number of patent applications aimed at hair follicle regeneration and neogenesis has been increasing during the last decade. This field is attractive not only to academic researchers but also to the companies that own almost half of the patents in this field.

Uso de espumas em áreas doadoras de enxertos / Use of polyurethane foam dressings on skin graft donor sites

Introdução: O sucesso de um enxerto de pele é avaliado não apenas pela integração do enxerto em si, mas também pela qualidade da recuperação da área doadora. A despeito de as áreas doadoras de enxertos representarem o melhor local para estudo de cicatrização de feridas, regimes de tratamento, de áreas doadoras, tem sido incompletamente estudados. Objetivo: Avaliação da eficácia de espumas de poliuretano como curativo de áreas doadoras de enxertos. Método: Estudo prospectivo no qual áreas doadoras de enxertos foram tratadas com espumas de poliuretano como alternativa a filmes de acetato de celulose. Resultados: Foram tratados 11 pacientes e catorze áreas doadoras de enxerto. Aderência prolongada (73%) e odor desagradável (45%) foram os problemas encontrados. Os resultados foram considerados insatisfatórios na grande maioria dos casos (73%). Conclusões: O uso de espumas de poliuretano mostrou-se ineficaz, nesse grupo de pacientes, devido à ocorrência de alto índice de complicações.

Introduction: The success of a skin graft is evaluated by not only the integration of the graft itself, but also the quality of the recovery of the donor site. Despite the fact that graft donor sites represent the best place to study wound healing, treatment regimens for donor sites have not been studied extensively. Method: To evaluate the efficiency of polyurethane foam as a dressing for graft donor sites. Methods: We conducted a prospective study in which graft donor sites were treated with polyurethane foam dressing, as an alternative to a cellulose acetate film. Results: We treated 11 patients and 14 donor graft sites. Problems associated with the use of polyurethane foam included prolonged adherence (73%) and an unpleasant odor (45%). The majority of patients reported that they found the dressing to be unsatisfactory (73%). Conclusions: The use of a polyurethane foam was shown to be ineffective as a graft donor site dressing, due to the high rate of associated complications.