Simple and promising paper-based electrochemical platform for serological detection of American tegumentary leishmaniasis.

BACKGROUND: American tegumentary leishmaniasis (ATL) is an endemic neglected tropical disease (NTD), its conventional treatment is toxic, slow, and invasive. Rapid diagnosis is crucial for the clinical management of suspected patients, so the development and use of low-cost, miniaturised and portable devices could be the key. OBJECTIVES: This work aimed to develop a simple paper-based electrochemical platform for the serological detection of ATL. METHODS: Platform was fabricated in Whatman N°1 paper, contains a hydrophobic zone generated by wax printing, two pencil graphite electrodes, and uses specific crude extracts (CA) antigens for ATL immuno-determination. The platform performance was analysed by measuring the relative impedance change for different antigen-antibody combinations. Then, 10 serum human samples previously diagnosed by the gold standard (five positive ATL cases and five non-ATL cases) were evaluated. FINDINGS: The platform presented a linear response for the charge transfer resistance (ΔRct) and the interface reactance (ΔXc). Also, optimal working conditions were established (1/60 serum dilution and 180 µg/mL CA concentration). Then, the platform permits to distinguish between ATL and non-ATL (p < 0.05) human serum samples. MAIN CONCLUSIONS: Our platform could allow the diagnosis, management, and monitoring of leishmaniasis while being an extremely simple and environmentally friendly technology.

Ocorrência de Babesia sp, Ehrlichia canis e Hepatozoon canis em cães domiciliados, em dois municípios do estado do Espírito Santo - Brasil / Occurrence of Babesia sp, Ehrlichia canis and Hepatozoon canis in domiciled dogs in two municipalities of the state of Espírito Santo - Brazil / Ocurrencia de Babesia sp, Ehrlichia canis y Hepatozoon canis em perros domiciliados em dos municipios del estado de Espírito Santo - Brasil

As doenças transmitidas por carrapatos são afecções de grande importância na clínica médica de pequenos animais, devido à alta casuística e ampla distribuição vetorial no território brasileiro. Os principais agentes responsáveis pelas infecções em cães são Babesia sp., Ehrlichia canis e Hepatozoon canis. Os animais infectados são assintomáticos ou apresentam sinais clínicos inespecíficos, sendo necessário a utilização de testes diagnósticos para definição do agente etiológico, e diagnóstico seguro. O objetivo do presente estudo foi determinar a ocorrência desses micro-organismos em cães naturalmente infectados, domiciliados nos municípios de Vila Velha e Anchieta, Espírito Santo, utilizando diferentes testes de detecção: Reação em cadeia polimerase (PCR), sorologia para detecção de anticorpos anti Ehrlichia canis e pesquisa de hematozoários em esfregaço sanguíneo. Foram analisadas 65 amostras de sangue obtidas por venopunção de veia cefálica de cães. No teste de PCR, 4,62% dos animais foram positivos para Babesia vogeli e 1,54% para Ehrlichia canis sendo os resultados para Hepatozoon canis negativos. No teste sorológico para E. canis 90,77% dos animais foram positivos para a presença de anticorpos, e na pesquisa em lâminas de esfregaço sanguíneo 3,02% apresentavam outros hemoparasitas. Os resultados indicam a dispersão desses hemoparasitas na população canina da região de estudo, entretanto com baixa ocorrência. O teste de PCR demonstrou-se como o mais sensível no qual Babesia vogeli foi o agente mais observado.(AU)

Tick-borne diseases are diseases of great importance in the medical practice of small animals, due to the high casuistry and wide vectorial distribution in the Brazilian territory. The main agents responsible for infections in dogs are Babesia sp., Ehrlichia canis and Hepatozoon canis. Infected animals are asymptomatic or present nonspecific clinical signs, requiring the use of diagnostic tests to define the etiologic agent, and safe diagnosis. The objective of the present study was to determine the occurrence of these microorganisms in naturally infected dogs domiciled in the municipalities of Vila Velha and Anchieta, Espírito Santo, using different detection tests: polymerase chain reaction (PCR), serology to detect antibodies against Ehrlichia canis and research of hematozoa in blood smears. Sixty-five blood samples obtained by venipuncture of the cephalic vein of dogs were analyzed. In the PCR test, 4.62% of the animals were positive for Babesia vogeli and 1.54% for Ehrlichia canis, and the results for Hepatozoon canis were negative. In the serological test for E. canis, 90.77% of the animals were positive for the presence of antibodies, and in the research in blood smear slides, 3.02% presented other hemoparasites. The results indicate the dispersion of these hemoparasites in the canine population of the study region, however with low occurrence. The PCR test proved to be the most sensitive, in which Babesia vogeli was the most observed agent.(AU)

Las enfermedades transmitidas por garrapatas son enfermedades de gran importancia en la práctica médica de los pequeños animales, debido a la alta casuística y amplia distribución vectorial en el territorio brasileño. Los principales agentes responsables de las infecciones en los perros son Babesia sp., Ehrlichia canis y Hepatozoon canis. Los animales infectados son asintomáticos o presentan signos clínicos inespecíficos, siendo necesario el uso de pruebas diagnósticas para la definición del agente etiológico, y el diagnóstico seguro. El objetivo del presente estudio fue determinar la ocurrencia de estos microorganismos en perros infectados naturalmente, domiciliados en los municipios de Vila Velha y Anchieta, Espírito Santo, utilizando diferentes pruebas de detección: reacción en cadena de la polimerasa (PCR), serología para detectar anticuerpos anti Ehrlichia canis e investigación de hematozoos en frotis de sangre. Se analizaron sesenta y cinco muestras de sangre obtenidas por venopunción de la vena cefálica de los perros. En la prueba PCR, el 4,62% de los animales fueron positivos para Babesia vogeli y el 1,54% para Ehrlichia canis, y los resultados para Hepatozoon canis fueron negativos. En la prueba serológica para E. canis, el 90,77% de los animales fueron positivos a la presencia de anticuerpos, y en la investigación en láminas de frotis de sangre el 3,02% presentaron otros hemoparásitos. Los resultados indican la dispersión de estos hemoparásitos en la población canina de la región de estudio, aunque con una baja presencia. La prueba PCR resultó ser la más sensible, en la que Babesia vogeli fue el agente más observado.(AU)

Testagem universal para hepatite viral C em gestantes no pré-natal / Universal testing for viral hepatitis C in prenatal pregnant women

INTRODUÇÃO: Estima-se que a prevalencia de hepatite C entre gestantes no Brasil varie entre 0,2 e 1,4%, entretanto, a partir de 2014 a taxa de deteccao da doenca entre mulheres em idade fertil dobrou no pais, apos a incorporacao pelo Sistema Unico de Saude de antivirais de acao direta com alta efetividade e seguranca. O risco de transmissao vertical e variavel e depende de fatores como o correto planejamento de procedimentos obstetricos, da viremia materna, de coinfeccao por HIV, entre outros. A hepatite C na gravidez esta relacionada a desfechos em saude desfavoraveis para a gestante e os recem-nascidos e, em longo prazo, a aumento de incidencia de carcinoma hepatocelular, cirrose, necessidade de transplante de figado, utilizacao de servicos de saude e mortalidade. Atualmente a conduta para a deteccao de hepatite C em gestantes depende da prospeccao de fatores de risco pre-existentes, a qual postula-se ser ineficaz na identificação do numero real de casos. O rastreamento e proposto como alternativa a testagem baseada em risco com a finalidade de aumentar a taxa de deteccao de casos, diminuir a transmissao vertical e aumentar a cobertura de tratamentos atendendo a politicas publicas de eliminacao da doenca implementadas pelo Sistema de Saude Publica brasileiro. PERGUNTA: A estrategia de rastreamento para hepatite C em gestantes no primeiro trimestre de gravidez durante o prenatal e eficaz, segura e custo-efetiva quando comparada a testagem baseada em fatores de risco de acordo com a conduta em vigencia preconizada no Protocolo Clinico e Diretrizes Terapeuticas (PCDT) de Hepatite C e Coinfeccoes do Ministerio da Saude? TECNOLOGIA: Testagem universal para hepatite C em gestantes no primeiro trimestre de gravidez durante o pre-natal. EVIDÊNCIAS CLÍNICAS: Identificou-se pela avaliacao de estudos observacionais e transversais descritivos que a estrategia de testagem baseada em risco esta associada a baixos rendimentos diagnostico e sensibilidade, ou a uma baixa deteccao de casos efetivamente diagnosticados de hepatite C em gestantes durante o pre-natal. Em estudo realizado no Canada, pais em que a prevalencia estimada de hepatite C em gestantes e de 0,6%, identificou-se que uma resposta positiva (a questionario estruturado) a pelo menos um dos fatores de risco foi relacionada com uma sensibilidade de 67%, uma especificidade de 28%, um valor preditivo positivo de 0,4% e um valor preditivo negativo de 99% para identificacao de gestantes com HCV. Alem disso, identificou-se que o valor preditivo positivo para essa estrategia e dependente dos fatores de risco avaliados. E possivel que essa variabilidade se traduza em diferentes taxas de deteccao da doenca por meio da estrategia de abordagem por risco, com numero de casos verdadeiramente positivos nao identificaveis variando amplamente entre 2,5% e 27%, mas podendo chegar a 50%. De fato, na maioria dos estudos nao se identificou associação estatisticamente significativa entre a presenca de fatores de risco e ter um diagnostico positivo para hepatite C em gestantes. Em relacao aos criterios de Wilson e Jungner, utilizados na avaliacao de estrategias de rastreamento, identificasse que a maioria deles seriam atendidos, entretanto, ainda nao ha estudos em que se avaliem desfechos em saúde relevantes de curto (de importancia obstetrica e transmissao vertical) e longo prazos (evolucao da doenca e transmissibilidade) associados a implementacao de programa de rastreamento para hepatite C em gestantes. Outro criterio nao atendido e a inexistencia atualmente de tratamento antiviral aprovado para o uso em gestantes. AVALIAÇÃO ECONÔMICA: Foi conduzida uma analise de custo-efetividade na perspectiva do Sistema Unico de Saude para comparar as duas estrategias utilizando-se um modelo estatico de arvore de decisao em combinacao com cadeias de Markov. O rastreamento foi associado a custos incrementais de R$ 288,78 e aumento incremental em anos de vida ajustados pela qualidade (AVAQ-QALY) de 0,18 por gestante rastreada em comparacao com a triagem baseada em risco, com uma razao de custo-efetividade incremental de R$1.617,95 por QALY para rastreamento versus estrategia baseada em risco. Análise de impacto orçamentário: O impacto orcamentario anual associado a implementacao de um programa de rastreamento para hepatite C em gestantes na perspectiva do Sistema Unico de Saude foi de R$ 49 milhoes, com estimativa de gastos de 250 milhoes em cinco anos. Foram considerados os gastos diretos com diagnosticos, exames e procedimentos medicos complementares e tratamento. A variacao de parametros como a taxa de cobertura de gestantes testadas no sistema publico de saude em relacao as testadas no sistema suplementar, a taxa de gestantes testadas no primeiro trimestre de gravidez, o numero de gestantes coinfectadas com HIV e a taxa de oferta de tratamento causam reducoes no impacto orcamentario que variam entre 41 e 55%. RECOMENDAÇÕES INTERNACIONAIS: As Agencias inglesa National Institute for Health and Care Excellence (NICE), a canadense Canadian Agency for Drugs and Technologies in Health (CADTH) e a European Association for the Study of the Liver recomendam a testagem baseada na deteccao de fatores de risco. Nos Estados Unidos o Centers for Disease Control and Prevention (CDC), o U.S. Preventive Services Task Force (USPSTF) e a American Association for the Study of Liver Diseases e a Infectious Diseases Society of America recomendam o rastreamento para hepatite C em gestantes. O American College of Obstetricians and Gynecologists (ACOG) esta atualmente revisando as recomendacoes publicadas em 2017. Na Australia e Nova Zelandia, em documento de 2020, o The Royal Australian and New Zealand College of Obstetricians and Gynaecologists (RANZCOG) recomenda o rastreamento para hepatite C em gestantes. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Ha evidencia de moderada qualidade que a estrategia de selecao para testagem de gestantes baseada na identificacao de risco e ineficaz, com baixo valor preditivo positivo e baixa sensibilidade. Apesar de não existem estudos controlados randomizados ou estudos observacionais com braco comparador em que se avaliem as consequencias em saude e os riscos associados a ambas as estrategias, e possivel que o numero de mulheres não detectadas pela estrategia baseada em risco seja significativo com consequencias deleterias para a saude das gestantes e recem-nascidos. Na perspectiva do Sistema Unico de Saude a estrategia de rastreamento se demonstrou mais efetiva que a deteccao baseada em risco com um acrescimo de R$ 288 por gestante testada. Algumas autoridades de saude mundiais vem reformulando as recomendacoes a respeito do diagnostico da hepatite C em gestantes para indicar o rastreamento, principalmente frente ao aumento da taxa de deteccao dos casos mundiais em mulheres, como ocorre no Brasil. A implementacao do programa de rastreamento atende a maioria dos criterios de Wilson e Jungner, exceto a possibilidade de tratamento, que ainda nao e possivel em gestantes. A adocao do rastreamento estaria associada a um incremento de 49 milhoes por ano no orcamento do Ministerio da Saude, principalmente em funcao do alto custo dos tratamentos. RECOMENDAÇÃO INICIAL DA CONITEC: Os membros presentes na 87a reuniao ordinaria da Conitec, que ocorreu no dia 03/06/2020, decidiram, por unanimidade, recomendar a incorporacao da testagem universal para hepatite C em gestantes no pre-natal. CONSULTA PÚBLICA: A consulta publica n° 19/2020, publicada no Diario Oficial da Uniao de 15/06/2020, foi realizada entre os dias 16/06/2020 e 06/07/2020. Foram recebidas 50 contribuicoes, sendo 8 pelo formulario para contribuicoes tecnicocientificas e 42 pelo formulario para contribuicoes sobre experiencia ou opiniao. Entre as 8 contribuicoes recebidas e avaliadas de cunho tecnico-cientifico, 4 foram consideradas para inclusao nesse parecer, todas concordantes com a recomendacao inicial da Conitec. Houve duas contribuicoes de pessoa juridica, da Iniciativa Medicamentos Doenças Negligenciadas (DNDi America Latina) e da Sociedade Brasileira de Infectologia. Os estudos submetidos reforcam a importancia da deteccao acurada de gestantes infectadas pela hepatite C em funcao dos piores desfechos relacionados a gestação nesse contexto e clinico e da possibilidade de encaminhamento das mulheres para acompanhamento para gestação de alto risco, do melhor planejamento de procedimentos obstetricos, de tratamento das mulheres e crianças em momento oportuno apos o parto e do alinhamento com as metas para a eliminacao da doenca no pais, diminuindo a transmissao vertical. Considerou-se a abordagem de testagem por risco como ineficaz. Todas as 42 contribuições recebidas sobre experiencia com a tecnologia ou opiniao sobre a incorporacao traziam contribuicoes em algum dos campos do formulario disponivel para submissao e foram concordantes com a recomendacao inicial da Conitec, incluindo as submetidas pelo Grupo Otimismo de Apoio ao Portador de Hepatite e da Sociedade Brasileira de Hepatologia observando-se grande convergencia entre o conteudo dessas contribuicoes e as de cunho tecnico-cientifico. Apos avaliacao das contribuicoes a Conitec manteve a recomendacao inicial favoravel a incorporacao da testagem universal para hepatite C em gestantes no pre-natal. DECISÃO: Incorporar a testagem universal para hepatite viral C em gestantes no prenatal, conforme protocolo do Ministerio da Saude, no ambito do Sistema Unico de Saude - SUS, conforme Portaria no 32, publicada no Diario Oficial da Uniao no 160, secao 1, pagina 118, em 20 de agosto de 2020.

Uso complementario de las pruebas moleculares y pruebas de detección de anticuerpos para el diagnóstico de COVID-19 / Complementary use of molecular tests and antibody screening tests for the diagnosis of COVID-19

ANTECEDENTES: El COVID-19 es una infección producida por una cepa de coronavirus denominada SARS-CoV-2. En la actualidad, esta infección es una pandemia que afecta a más de 209 países y territorios a nivel mundial. En el Perú, se han reportado hasta el 07 de abril de 2020, 2 954 casos y un total de 107 fallecidos. El diagnóstico rápido de la infección juega un papel importante en el manejo de la enfermedad y de los brotes, permitiendo implementar medidas de vigilancia, prevención y control. Una dificultad para el diagnóstico oportuno es la gran proporción de portadores asintomáticos del virus, quienes representan un contribuyente importante en la propagación de la enfermedad. El método estándar para el diagnóstico de COVID-19 es la prueba molecular basada en la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR). Sin embargo, esta prueba presenta algunas limitaciones como el alto costo, la necesidad de procesamiento por personal especializado, en un laboratorio con medidas de bioseguridad, la posibilidad inicial de falsos negativos y la tendencia a negativizarse conforme transcurre la enfermedad. Asimismo, existen pruebas basadas en la detección de anticuerpos, principalmente inmunoglobulinas (Ig) M y G. Estas pruebas podrían usarse en la comunidad, no requieren personal altamente calificado ni condiciones estrictas de operación como en caso de las pruebas de RT-PCR. Sin embargo, pueden pasar algunos días desde el inicio de la infección hasta que se produzcan anticuerpos detectables. La utilización complementaria de ambas pruebas podría mejorar la identificación correcta de pacientes con COVID-19, incluyendo a los pacientes asintomáticos o con enfermedad leve, contribuyendo a disminuir su propagación. OBJETIVO: Describir la evidencia científica disponible sobre la utilidad del uso complementario de pruebas moleculares y de detección de anticuerpos para mejorar el diagnóstico de sospechosos de COVID-19. MÉTODO: Búsqueda sistemática de estudios en idioma español o inglés publicados entre el 01 de diciembre de 2019 y el 04 de abril de 2020 en Medline, Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL), MedRxiv, Chinese Clinical Trial Registry (CCTR), y LILACS, complementada con una búsqueda de literatura gris en Google Scholar. RESULTADOS: Se incluyeron 06 estudios que respondieron a la pregunta PICO de interés Tres estudios evaluaron la variación de sensibilidad de diferentes pruebas para el diagnóstico de COVID-19 según los días transcurridos desde el inicio de síntomas. Estos estudios coinciden en observar mayor sensibilidad de las pruebas de RT-PCR durante los primeros siete días del inicio de síntomas (rango: 66,7% a 100%), en comparación con las pruebas de detección de anticuerpos totales (rango: 38,3% a 64,1%), IgG (rango: 19,1% a 53,8%) o IgM (rango: 23,0% a 33,3%). En el intervalo mayor de tiempo de medición de los estudios considerando el inicio de síntomas (más de 15 días), se observó una reversión de la tendencia, con una mayor sensibilidad de la prueba de anticuerpos totales (100% en dos estudios), IgM (rango: 52,2% a 96,7%) e IgG (rango: 79,8% a 93,3%), en comparación con las pruebas de RT-PCR (rango: 13% a 70,7%). Un estudio comparó la disminución de sensibilidad de la prueba de RT-PCR según el tipo de muestra, observando que en las muestras obtenidas de hisopado nasofaríngeo la disminución de sensibilidad fue más acentuada (desde 69,2% a los 7 días, hasta 13% a más de 15 días), en comparación a las muestras de esputo (desde 92,3% a los 7 días, hasta 60,8% a más de 15 días). Un estudio observó que la aplicación de una regla basada en realizar una prueba de detección de anticuerpos a todos los casos negativos según RT-PCR, incrementó la sensibilidad diagnóstica desde un 51,9% hasta un 98,6%, reduciendo el porcentaje de falsos negativos. CONCLUSIONES: Se observó mayor positividad de las pruebas de RT-PCR durante los primeros días del inicio de síntomas, comparado con las pruebas de detección de anticuerpos. Conforme transcurre la enfermedad, la tendencia se revierte, mostrando las pruebas de detección de anticuerpos IgG/IgM una mayor sensibilidad en comparación con las pruebas de RT-PCR. La reducción de la positividad en las pruebas de RT-PCR conforme transcurre la enfermedad, es más acentuada en muestras de hisopado faríngeo, en comparación con muestras de esputo. La aplicación de una regla basada en realizar una prueba de detección de anticuerpos a todos los casos negativos según RT-PCR, incrementa la sensibilidad desde un 51,9% hasta un 98,6%, reduciendo el porcentaje de falsos negativos. Los hallazgos de la presente revisión apoyan el uso complementario de pruebas de RT-PCR y de detección de anticuerpos para el diagnóstico de pacientes con COVID-19.(AU)

Precisión diagnóstica de pruebas de detección de antígenos para SARS-CoV-2 / Precisão diagnóstica dos testes de triagem de antígenos para SARS-CoV-2

ANTECEDENTES: Los coronavirus son una familia de virus causantes de enfermedades respiratorias, digestivas y del sistema nervioso en humanos y animales. En diciembre de 2019, se identificó en la provincia de Wuhan, China una cepa de coronavirus nunca antes encontrada en humanos, la cual recibió el nombre de SARSCoV-2. La infección por SARS-CoV-2 se ha extendido a más de 209 países y fue declarada como pandemia por la Organización Mundial de la Salud. En nuestro país, se ha reportado 28 699 casos y un total de 782 fallecidos. La técnica molecular estándar para detectar SARS-CoV-2 es la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR). Sin embargo, se requieren pruebas rápidas que disminuyan el tiempo de espera entre la toma de muestras y la entrega de resultados, con la finalidad de descartar casos sospechosos, mejorar el pronóstico clínico y contener el contagio de la infección. Las pruebas basadas en la detección de antígenos permiten detectar microorganismos o fragmentos de los mismos en muestras clínicas, y pueden contribuir a mejorar la oportunidad del diagnóstico, en comparación con las pruebas de RT-PCR. OBJETIVO: Describir la evidencia científica disponible sobre la precisión diagnóstica de las pruebas rápidas de detección de antígenos para SARS-CoV-2. MÉTODO: Búsqueda sistemática en Medline (Pubmed), Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL), Medrxiv y Chinese Clinical Trial Registry (CCTR) de estudios en idioma español o inglés publicados entre el 01 de diciembre de 2019 y el 22 de abril de 2020, complementada con una búsqueda en Google Scholar. La calidad metodológica se evaluó usando el instrumento QUADAS 2. RESULTADOS: Los resultados de un estudio desarrollado en muestras clínicas de 239 pacientes sospechosos de COVID19 procedentes de siete hospitales en China mostraron una sensibilidad de 68%, y especificidad de 100% de una prueba de detección de la proteína de la nucleocápside (antígeno N) del SARS-CoV-2, en comparación con RT-PCR como estándar de referencia. La evaluación de calidad mostró una probabilidad alta de sesgo en las dimensiones de selección de individuos y prueba de referencia. En cuanto a la aplicabilidad de los resultados del estudio, existe una probabilidad incierta en la dimensión de selección de los pacientes. CONCLUSIONES: Comparado con la prueba de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RTPCR), la prueba de detección de antígenos mostró una sensibilidad de 68% y especificidad de 100% para el diagnóstico para SARS-CoV-2. Con una prevalencia de 87% (prevalencia de COVID-19 del estudio) y según la precisión diagnóstica reportada, la probabilidad de tener COVID-19 frente a un resultado negativo con la prueba de detección de antígenos es del 68%. Esta probabilidad se ve afectada por la prevalencia de la enfermedad, siendo menor cuando la prevalencia disminuye. La calidad de la evidencia para la precisión diagnóstica de las pruebas de detección de antígenos contra SARS-CoV-2 es muy baja, pues procede de un único estudio con alto riesgo de sesgo, imprecisión en sus resultados y aplicabilidad incierta.(AU)

Evaluation of dot-blot test for serological diagnosis of bovine brucellosis

Abstract The objective of this study was to standardize and validate the dot-blot test for the serological diagnosis of bovine brucellosis, compare the results with those found in the 2-mercaptoethanol (2-ME) and complement fixation test (CF), and estimate the relative sensitivity and specificity of the dot-blot compared to these tests. Fifty bovine blood serum samples were used for the test standardization, and 1315 samples were used for evaluation and comparison between the tests; the results were compared using the Kappa indicator. At the end of standardization, it was established as optimal for the antigen obtained from Brucella abortus B19 after passing through a microorganism rupture process, the blood serum samples diluted at 1:100, and the conjugate at 1:30,000. The comparison of the dot-blot results with 2-ME showed Kappa index of 0.9939, sensitivity of 99.48%, and specificity 99.91%, with CF, Kappa index of 0.8226, sensitivity 100% and specificity 95.32%. Using the combination of the test results 2-ME and CF to establish the true condition of the animal, the dot-blot showed relative sensitivity of 100%, and relative specificity of 99.91%. The evaluated test proved to be effective and reliable, besides being easy to handle and interpret the results.

Técnicas de testeo de ácido nucleico (NAT) para el diagnóstico pretransfusional de VIH, VHB, VHC / Nucleic acid test (NAT) techniques for pretransfusional diagnosis of HIV, HBV, HCV

INTRODUCCIÓN: La sangre representa un insumo vital en la atención médica. Existe sin embargo un riesgo de transmisión de agentes infecciosos asociados a las transfusiones tales como el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) el virus de la hepatitis B (VHB), virus de la hepatitis C (VHC), citomegalovirus (CMV), y otros. En este sentido existen numerosos esfuerzos a nível internacional tendientes a ofrecer mayor seguridad a los receptores de transfusiones mediante la selección de donantes y pruebas de diagnóstico sobre las unidades de sangre. DESCRIPCIÓN DE LA TECNOLOGÍA: La técnica de amplificación nucleica (NAT) se basa en la obtención de secuencias altamente conservadas del genoma viral, las cuales se detectan mediantes sondas complementarias para cada uno de los virus y se procesan mediantes cebadores y enzimas específicas. Esta técnica comenzó a usarse para detectar ARN de VIH y VHC en sangre donada desde el año 1999 en Estados Unidos. Posteriormente ésta se reemplazó por otra que incorpora en el mismo test la detección de ADN del VHB. OBJETIVO: El objetivo de este trabajo es, mediante una revisión bibliográfica del tema, determinar el beneficio de incorporar NAT a las pruebas de tamizaje realizadas en sangre donada para la detección de VIH, VHB y VHC, en comparación con los estudios serológicos y de antígenos, como herramienta para mejorar la seguridad de las unidades de hemoderivados y hemocomponentes a transfundir. RESULTADOS Y CONCLUSIÓN: La evidencia bibliográfica hallada presenta limitaciones relacionadas tanto al diseño de los estudios incluídos como a las poblaciones analizadas. Los estudios concuerdan en que la utilización de NAT resulta en una gran reducción del período de ventana para los tres virus. Sin embargo la magnitud del impacto de esta reducción en la detección de unidades infecciosas adicionales con el uso de esta tecnología aún no está clara y es probable que la difusión de su uso en grandes poblaciones permita establecer con más precisión su beneficio. El rendimiento de la utilización de NAT posiblemente sea mayor em contextos de alta prevalencia de las infecciones estudiadas.

Evaluation of dot-blot test for serological diagnosis of bovine brucellosis.

The objective of this study was to standardize and validate the dot-blot test for the serological diagnosis of bovine brucellosis, compare the results with those found in the 2-mercaptoethanol (2-ME) and complement fixation test (CF), and estimate the relative sensitivity and specificity of the dot-blot compared to these tests. Fifty bovine blood serum samples were used for the test standardization, and 1315 samples were used for evaluation and comparison between the tests; the results were compared using the Kappa indicator. At the end of standardization, it was established as optimal for the antigen obtained from Brucella abortus B19 after passing through a microorganism rupture process, the blood serum samples diluted at 1:100, and the conjugate at 1:30,000. The comparison of the dot-blot results with 2-ME showed Kappa index of 0.9939, sensitivity of 99.48%, and specificity 99.91%, with CF, Kappa index of 0.8226, sensitivity 100% and specificity 95.32%. Using the combination of the test results 2-ME and CF to establish the true condition of the animal, the dot-blot showed relative sensitivity of 100%, and relative specificity of 99.91%. The evaluated test proved to be effective and reliable, besides being easy to handle and interpret the results.

Subtractive phage display selection for screening and identification of peptide sequences with potential use in serodiagnosis of paracoccidioidomycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis.

Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease endemic in Latin America whose aetiologic agents are the thermodimorphic fungi Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii. Despite technological advances, some problems have been reported for the fungal antigens used for serological diagnosis, and inconsistencies among laboratories have been reported. The use of synthetic peptides in the serological diagnosis of infectious diseases has proved to be a valuable strategy because in some cases, the reactions are more specific and sensitive. In this study, we used a subtractive selection with a phage display library against purified polyclonal antibodies for negative and positive PCM sera caused by P. brasiliensis. The binding phages were sequenced and tested in a binding assay to evaluate its interaction with sera from normal individuals and PCM patients. Synthetic peptides derived from these phage clones were tested in a serological assay, and we observed a significant recognition of LP15 by sera from PCM patients infected with P. brasiliensis. Our results demonstrated that subtractive phage display selection may be useful for identifying new epitopes that can be applied to the serodiagnosis of PCM caused by P. brasiliensis. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: Currently, there is no standardized method for the preparation of paracoccidioidomycosis (PCM) antigens, which has resulted in differences in the antigens used for serological diagnosis. Here, we report a procedure that uses subtractive phage display selection to select and identify new epitopes for the serodiagnosis of PCM caused by Paracoccidioides brasiliensis. A synthetic peptide obtained using this methodology was successfully recognized by sera from PCM patients, thus demonstrating its potential use for improving the serodiagnosis of this mycosis. The development of synthetic peptides for the serodiagnosis of PCM could be a promising alternative for the better standardization of diagnoses among laboratories.

Análise comparativa da reatividade anti-LID-1, NDO-LID, NDO-HSA e PGL-1 em hanseníase / Comparative analysis of the reactivity anti-LID-1, NDO-LID, NDO-HSA and PGL-1 in leprosy

A infecção subclínica pode ser avaliada por meio de teste sorológico, que determina imunoglobulinas circulantes. O objetivo do presente estudo foi analisar a reatividade de diferentes antígenos em casos novos de hanseníase, contatos domiciliares de casos e em população de área endêmica, com o intuito de identificar o melhor antígeno para o diagnóstico sorológico da hanseníase e detecção de indivíduos infectados pelo Mycobacterium leprae.Trata-se de um estudo transversal de natureza exploratória e analítica. A reatividade anti-LID-1, NDO-LID, NDO-HSA e PGL-1 foi avaliada por meio do enzyme-linked immunosorbentassay. Foram analisadas amostras de sangue total em papel de filtro Whatman de 2494indivíduos da população de sete municípios da microrregião de Almenara e de soro de 94casos novos de hanseníase e 104 contatos domiciliares de casos residentes no município de Uberlândia. O Banco de Dados foi criado no Software Epi Info versão 3.5.1 e análise realizada no software Statistical Package for the Social Sciences for Windows 18 e no GraphPad Prism versão 5. Para análise estatística foram utilizados os seguintes testes: Kolmogorov-Smirnov, Kruskal-Wallis one-way (H), Mann-Whitney (U) com correção de Bonferroni, kappa, Spearman (rho), teste Qui-quadrado de Pearson e regressão logística binária. Foi observado maior soropositividade no grupo de casos multibacilares (MB), em contatos domiciliares de casos MB e nos indivíduos residentes nos municípios de Almenara e Jequitinhonha. Obteve-se correlação positiva entre a sorologia e o índice baciloscópico,concordância substancial e significativa no grupo de casos novos de hanseníase e correlação positiva para todos os antígenos testados. Os testes anti-LID-1 e anti-NDO-LID apresentaram melhor performance para identificar os contatos domiciliares e ou indivíduos da população...

The subclinical infection can be evaluated by serologic test which determine circulating immunoglobulins. The aim of this study was to analyze the reactivity of different antigens inleprosy cases, household contacts of index cases and the population of the endemic area toidentify the best antigen for the diagnosis of leprosy and detection of individuals infected with Mycobacterium leprae. It is a cross-sectional study of exploratory and analytical nature. There activity anti-LID-1, NDO-LID, NDO-HAS e PGL-1 were evaluated using the enzyme linke dimmunosorbent assay. The whole blood in What man filter paper of 2494 individuals from the general population of seven municipalities in the micro-Almenara and serum of 94 patients with leprosy and 104 household contacts of patients residing in Uberlândia were analyzed. The database was created in Epi Info software version 3.5.1 and analysis in the software Statistical Package for Social Sciences for Windows 18 and GraphPad Prism version5. For statistical analysis the following tests were used: Kolmogorov-Smirnov, Kruskal Wallisone-way (H), Mann-Whitney (U) with Bonferroni correction, kappa, Spearman (rho), chisquaretest of Pearson and binary logistic regression. Identied higher seropositivity in the group of MB patients, household contacts of MB patients and in individuals living in the municipalities of Almenara and Jequitinhonha. Observed positive correlation between serology test and bacterial index, substantial agreement and significant in patients positive and positive correlation for all antigens. The LID-1 and NDO-LID antigens showed greater ability to identify household contacts or the general population infected with M. leprae, but the performance of the NDO-LID was better. The native PGL-1 had higher seropositivity than the NDO-HSA for all clinical forms of leprosy and household contacts. The seropositivity prevalence in the general population was higher than the detection rate of leprosy...

Impedimetric evaluation for diagnosis of Chagas' disease: antigen-antibody interactions on metallic electrodes.

A polypeptide chain formed by recombinant antigens, cytoplasmic repetitive antigen (CRA) and flagellar repetitive antigen (FRA) (CF-Chimera) of Trypanosoma cruzi, was adsorbed on gold and platinum electrodes and investigated by electrochemical impedance spectroscopy on phosphate buffer saline solutions (PBS) containing a redox couple. It was found that the adsorption is strongly sensitive to the oxide layer on the electrode surface. In the majority of the experiments the antigens retained their activity as observed through their interaction with sera from chronic chagasic patients. The results expressed in terms of the charge transfer resistance across the interface, indicate the viability of using the impedance methodology for the development of a biosensor for serological diagnosis of Chagas' disease.

Incidencia de marcadores serológicos (MS) en los donantes voluntarios de plasma (DVP) por métodos automatizados / Incidence of serological markers in plasma volunteers donors by automatized methods

La donación de plasma procedente de voluntarios es una alternativa a la sangre entera. Sin embargo, requiere de una selección más rigurosa de los donantes, del apoyo de un laboratorio y del cumplimiento estricto de las normas de bioseguridad. A 3.743 muestras de donantes voluntarios de plasma se les determinó HBsAg, HIV I-II, VDRL y HCV. Los resultados se compararon con 41.142 muestras de donantes voluntarios de sangre. En los DVP no se encontraron muestras reactivas para HBsAg y HVC. Para HIV, 4 (0,38 por ciento) (confirmatorio negativo), y 5 para VDRL 0,13 por ciento. En los DVS la seroprevalencia fue de: HBsAg 433 (1,05 por ciento), HVC 716 (1,7 por ciento), HIV 150 (0,36 por ciento), VDRL 387 (0,94 por ciento). El total de MS en DVP 0,2 por ciento y en DVS 4 por ciento. Los MS en DVP fueron 20 veces menor, debido a: la selección y vigilancia de los donantes para detectar situaciones de riesgo, al equipamiento utilizado en la DP y al cumplimiento de bioseguridad. Hace 4 años se informó una incidencia del 48,3 por ciento para HVC, pero se utilizaba la DP manual y acudían pacientes para aféresis en las mismas áreas. Donde se practique la DP se recomienda: * Selección rigurosa y vigilancia continua de los hábitos de conducta de los DVP. * Utilización de equipos de DP automatizados. * Cumplimiento de las normas de bioseguridad. * Exclusión de pacientes en las áreas de DVP.

Incidencia de marcadores serológicos (MS) en los donantes voluntarios de plasma (DVP) por métodos automatizados / Incidence of serological markers in plasma volunteers donors by automatized methods

La donación de plasma procedente de voluntarios es una alternativa a la sangre entera. Sin embargo, requiere de una selección más rigurosa de los donantes, del apoyo de un laboratorio y del cumplimiento estricto de las normas de bioseguridad. A 3.743 muestras de donantes voluntarios de plasma se les determinó HBsAg, HIV I-II, VDRL y HCV. Los resultados se compararon con 41.142 muestras de donantes voluntarios de sangre. En los DVP no se encontraron muestras reactivas para HBsAg y HVC. Para HIV, 4 (0,38 por ciento) (confirmatorio negativo), y 5 para VDRL 0,13 por ciento. En los DVS la seroprevalencia fue de: HBsAg 433 (1,05 por ciento), HVC 716 (1,7 por ciento), HIV 150 (0,36 por ciento), VDRL 387 (0,94 por ciento). El total de MS en DVP 0,2 por ciento y en DVS 4 por ciento. Los MS en DVP fueron 20 veces menor, debido a: la selección y vigilancia de los donantes para detectar situaciones de riesgo, al equipamiento utilizado en la DP y al cumplimiento de bioseguridad. Hace 4 años se informó una incidencia del 48,3 por ciento para HVC, pero se utilizaba la DP manual y acudían pacientes para aféresis en las mismas áreas. Donde se practique la DP se recomienda: * Selección rigurosa y vigilancia continua de los hábitos de conducta de los DVP. * Utilización de equipos de DP automatizados. * Cumplimiento de las normas de bioseguridad. * Exclusión de pacientes en las áreas de DVP. (AU)

Selección de donadores sanguíneos. Identificación de anti-HBc para evitar hepatitis postransfusional / Blood donors screening: identification of anti-HBc to prevent post-transfusional hepatitis

Para determinar la eficacia de la identificación de anticuerpos contra el antígeno central del virus de la hepatitis B (anti-HBc) en la selección de donadores de sangre se contrastaron las seroprevalencias del antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (AgsHB), anticuerpos contra el antígeno central del virus de la hepatitis C (anti-VHC) y las densidades ópticas de donadores negativos y las de no donadores. Se incluyeron 110,251 y 240 individuos en cada grupo respectivamente. Las seroprevalencias de AgsHB y anti-VHC fueron semejantes y mayores en los donadores positivos y los no donadores (p = 0.59 y 0.0008 respectivamente). Las densidades ópticas del AgsHB fueron similares en todos los grupos (p = 0.41 y 0.5), y las de anti-VHC mayores en los dos primeros (p = < 0.0001). La sensibilidad, especificidad, valores predictivos postivos y negativos fueron: 0.83, 0.7, 0.1 y 0.99 respectivamente. Concluimos que el anti-HBc es poco eficaz en la selección de donadores de sangre y está en función del punto de corte inadecuado. Es aconsejable realizar estudios de validez en este sentido

Uso de las pruebas de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas y aglutinación con rivanol para el diagnóstico de brucelosis bovina en Yucatán, México / Use of an enzyme-linked immunosorbent assay and the rivanol agglutination test for the diagnosis of bovine brucellosis in Yucatan, Mexico

Se usaron sueros negativos de animales vacunados (322) y no vacunados (248) provenientes de hatos libres de brucelosis y sueros positivos (90) a las pruebas de Rosa de Bengala (RB) y fijación de complemento (FC) de hatos infectados con Brucella abortus, para determinar la sensibilidad relativa y la especificidad de las pruebas inmunoenzimática indirecta (I-ELISA) y de aglutinación con rivanol (RIV). La concordancia entre pruebas se determinó mediante el análisis kappa usando 688 sueros. La prueba I-ELISA mostró una sensibilidad del 100 por ciento y especificidad de 92.8 por ciento. La RIV tuvo una sensibilidad de 97.8 por ciento y especificidad de 100 por ciento. La concordancia (Kappa) entre I-ELISA y FC fue de 0.73, entre I-ELISA y RIV de 0.74, entre I-ELISA y RB de 0.79 y entre RIV y FC fue de 0.96. Los valores predictivos (VP); para I-ELISA fueron 66.9 por ciento para positivos y 100 por ciento para negativos y para RIV, 100 por ciento para positivos y 99.7 por ciento para los negativos. La prueba I-ELISA puede ser usada como tamiz en las condiciones de Yucatán o como prueba confirmatoria en lugares donde la vacunación no se lleva a cabo. La prueba de RIV mostró una falta de sensibilidad, por tanto no se recomienda en etapas finales de programas de erradicación, pero podría usarse como prueba confirmatoria en programas de control o etapas tempranas en campañas de erradicación

Detección de anticuerpos contra Leptospira interrogans en equinos dedicados a la producción de sueros hiperinmunes / Detection of Leptospira interrogans antibody in horses used for production of hyperimmune sera

Sueros de 106 equinos de 1 a 21 años (89 machos y 17 hembras), procedentes del Instituto Nacional de Higiene y dedicados a producir sueros hiperinmunes, fueron analizados por aglutinación microscópica (AM) contra 19 serovariedades de L. interrogans. Considerando el estado inmunológico de los equinos, se examinaron sueros con títulos 1:400 mediante inmunodifusión doble en agar (IDD) y contrainmunoelectroforesis (CIEF), para descartar reacciones inespecíficas. Con el mismo fin, se inocularon conejos con los antígenos utilizados en los equinos (virus rábico, toxoides tetánico y diftérico y venenos de alacrán y víbora) y se probaron por AM. Con reacciones 1:100, 83 por ciento de los equinos (88 de 106) fueron positivos a una o más serovariedades con títulos de hasta 1:6500. Las serovariedades con más reacciones positivas fueron: autumnalis, australis y pomona. Las serovariedades con títulos más altos fueron: autumnalis, cynopteri y pyrogenes (1:6400) y australis, celledoni, szwajizak e icterohaemorrhagiae (1:3200). La IDD detectó un caso de identidad inmunológica total entre virus rábico y L. pomona (suero 545). La CIEF no detectó líneas de precipitación. Ninguno de los conejos inmunizados mostró títulos contra leptospira

Seroepidemiología del sarampión en individuos de 5 a 14 años de edad de la República Mexicana / Seroepidemiology of measles in child of 5-14 years old in the Mexican Republic

Introducción: El sarampión continúa siendo un problema de salud pública en el mundo, especialmente en países en vías de desarrollo, por lo que es necesario realizar periódicamente estudios epidemiológicos para identificar grupos susceptibles a la infección, así como las poblaciones en las que se requiere intensificar los programas de vacunación. Material y Métodos. El área de estudio comprendió la República Mexicana con sus 32 entidades federativas, estudiándose 9,075 sueros de individuos de 5 a 14 años de edad. El método empleado para evaluar los anticuerpos inhibidores de la hemaglutinación, fue la técnica en microplaca de acuerdo al procedimiento de Borrby, habiéndose considerado un título 1:8 como valor protector. Resultados. Se identificó un 81.2 por ciento de individuos seropositivos (IC 95 por ciento, 80.4-82.0 por ciento). La proporción de susceptibles por entidad federativa varió de 51.0 a 0.7 por ciento, con una myor proporción de susceptibles en los niños de áreas rurales (20.9 por ciento) y en los niños de nivel socioeconómico bajo (21.4 por ciento). No hubo diferencias en la producción de susceptibles cuando se analizó el nivel de escolaridad y el antecedente de vacunación. Conclusiones. Se encontró un porsentaje elevado (19 por ciento) de niños susceptibles al sarampión en el grupo de 5 a 14 años, predominantemente en el área rural y en los estratos socioeconómicos bajos. Una adecuada estrategia de control del padecimiento es la de aplicar una segunda dosis de vacuna a los escolares, preferentemente en las áreas rurales

Anticuerpos contra productos extracelulares del estreptococo grupo A: importancia diagnóstica en la fibre reumática aguda / Antibodies against extracellular products of group a streptococcus. its diagnostic value in acute rheumatic fever

La infección estreptocóccica de la faringe es condición sine qua non el desarrollo de la fiebre reumática (FR), La demostración de esa infección suele requerir métodos inmunoserológicos que detectan anticuerpos contra productos extracelulares del estreptococo (PEE). Se evaluó la respuesta inmune humoral contra PEE en niños y adultos con y sin diagnóstico de FR. Se estableció que la distribución de valores para anti-estreptolisina O (AEL-O) no es gaussiana y que el valor de referencia debe manejarse como percentila. En adultos la percentila 97 es 227, en niños la percentila 90 es 451. En caso de FR, todos los enfermos excepto uno tuvo valores superiores. Una prueba de aglutinación que reconoce otros anticuerpos a PEE (Estreptozima mr), mostró en menores de 15 años que 15/28 los tenían a título bajo, en cambio en el grupo con FR sólo 1 mostró ausencia de esos anticuerpos. A mayor título de AEL-O mayor título en Estreptozima. Los métodos probados son eficientes para reconocer la respuesta inmune humoral contra PEE

Evaluación de reactivos comerciales empleados en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en bancos de sangre de Chile: II aplicación rutinaria / Assesement of comercial kits used for Chagas' diseases diagnosis in blood banks: II routinary use

Aiming to study the applicability and reproducibility of four comercial kits used for the serological detection of Chagas disease (Chagatest-Inst Invest Paraguay, Ortho Chagas, Abbott Chagas (ELISA tests) and Estabilgen Hemo Chagas (indirect hemagglutination test), a comparative serological study was performed in 256 sera samples coming from a highly endemic area, 249 samples from a low endemic area, 180 reference sera and 2264 samples coming from three blood banks. Specificity of the kits was excellent and sensitivity ranged from 60 to 100 percent. The indirect hemagglutination test has the lower sensitivity. Some disagreements in the results were observed in the three blood banks, probably due to an unsatisfactory reactive management. We conclude that ELISA tests should be recommended for routine detection of Chagas disease and that for this purpose, a net of laboratories under the direction of a national reference center should exist. This center should assess new commercial products, train technicians and supervise the laboratories