Avaliação do impacto da orientação farmacêutica aos pacientes sobre os medicamentos prescritos / Evaluation of the impact of pharmaceutical orientation given to patients on prescribed drugs

O uso racional de medicamentos é considerado um dos elementos-chave recomendados pela Organização Mundial de Saúde, cuja ausência pode acarretar consequências como reações adversas, diminuição da eficácia do medicamento, perdas de ordem econômica para o governo e/ou indivíduo, interações medicamentosas e agravo do quadro clínico do paciente. O serviço de orientação farmacêutica que envolve esse contexto foi discutido por poucos estudos, considerando-se interessante a utilização de um instrumento validado para demonstrar o impacto do fornecimento de orientação farmacêutica direcionada a pacientes em uso de medicamentos prescritos, o que constitui o objetivo desse trabalho. A metodologia utilizada foi estudo transversal conduzido em uma Unidade Básica de Saúde de Diamantina/ MG. Foi utilizado um questionário para medir o grau do conhecimento do paciente sobre seus medicamentos nos momentos pré e pós a realização de orientação farmacêutica. Após a orientação farmacêutica, observou-se diminuição do percentual de usuários que não conheciam seus medicamentos (73,2%; 93 para 33,9%; 43) e aumento do nível de conhecimento suficiente (14,2%; 18 para 18,9%; 24) e ótimo (11,0%; 14 para 47,2%; 60). Houve aumento do conhecimento dos usuários em todos os itens que compõem o questionário. A orientação farmacêutica apresentou impacto positivo sobre o conhecimento dos pacientes sobre seus medicamentos e constitui uma prática essencial para o Uso Racional dos Medicamentos.

The rational use of drugs is considered one of the key elements recommended by the World Health Organization, the absence of which can lead to consequences such as adverse reactions, decreased drug efficacy, economic losses for the government and/or individual, drug interactions, and worsening of the patient's clinical condition. The pharmaceutical orientation service that involves this context has been discussed by few studies, and the use of a validated instrument to demonstrate the impact of providing pharmaceutical guidance to patients on prescribed drugs is considered interesting and constitutes the objective of this work. The methodology used was a cross-sectional study conducted in a Primary Care Center in Diamantina, MG. A questionnaire was used to measure the patient's level of knowledge about their medications before and after receiving pharmaceutical guidance. After pharmaceutical orientation, there was a decrease in the percentage of users who did not know about their medications (73.2%; n=93 to 33.9%; n=43) and an increase in the level of sufficient knowledge (14.2%; n=18 to 18.9%; n=24) and excellent knowledge (11.0%; n=14 to 47.2%; n=60). There was an increase in users' knowledge of all the items that make up the questionnaire. Pharmaceutical orientation had a positive impact on patients' knowledge about their medications and constitutes an essential practice for the Rational Use of Medications.

Caracterização e avaliação do paciente anticoagulado com varfarina em relação à complexidade da farmacoterapia / Characterization and evaluation of patients anticoagulated with warfarin in relation to the complexity of pharmacotherapy

A realização de diagnóstico e tratamento das arritmias sustentadas fazem parte da rotina clínica, sendo uma das arritmias mais frequentes a Fibrilação Atrial (FA). Para prevenção de eventos tromboembólicos em pacientes com FA, recomendase a anticoagulação oral, destacando-se a varfarina. Apesar da importância, esse medicamento possui estreita margem terapêutica, o que faz com que pequenas mudanças no tratamento gerem risco de eventos trombóticos ou hemorrágicos. Dentre essas mudanças, destaca-se a adesão aos demais medicamentos em uso, alteração do uso desses medicamentos por prescritores e automedicação. Várias são as interações entre varfarina e demais medicamentos de uso contínuo, acreditando-se que a complexidade da prescrição pode interferir nos desfechos clínicos da terapia anticoagulante. O objetivo do estudo foi caracterizar pacientes acompanhados em um ambulatório de anticoagulação em relação ao Índice de Complexidade da Farmacoterapia. Para identificação da complexidade da farmacoterapia, considerou-se as prescrições dos demais medicamentos em uso, prescritas por médicos da atenção primária em saúde. Utilizouse o instrumento Medication Regimen Complexity Index (MRCI). A complexidade, compreendida como a forma de administração, posologia e forma farmacêutica, fatores que interferem na adesão à terapia anticoagulante, foi subdividida em três níveis: baixa complexidade, moderada e alta, conforme indicado pela literatura. A análise da complexidade foi realizada por dois pesquisadores de forma independente, sendo considerados os critérios conforme orientação do MRCI. Trata-se de um estudo descritivo realizado em duas clínicas de anticoagulação, localizadas em Minas Gerais. Durante a pesquisa, pacientes foram acompanhados em dois ambulatórios de anticoagulação do Brasil, em uso de varfarina, foram convidados a participarem de um ensaio clínico entre dezembro de 2018 e fevereiro de 2019, sendo que posteriormente foi realizado um recorte para o presente estudo. Um total de 93 pacientes foram incluídos no estudo, sendo a média de idade de 63 anos e a maioria do sexo feminino (68,8%). A fibrilação atrial foi a indicação da ACO mais predominante (92,5%). A média do número de medicamentos utilizados foi de 7,0. A maioria dos pacientes com farmacoterapia classificada como alta (38, 6,5%) e média complexidade (24, 80,7%) apresentou TTR inadequado. O presente estudo permitiu identificar que há um predomínio de pacientes com alta complexidade da farmacoterapia, o que pode indicar necessidades de cuidados adicionais em relação ao tratamento anticoagulante. Para tanto, em casos de pacientes com controle inadequado da anticoagulação oral, recomenda-se que aspectos da complexidade da farmacoterapia sejam incorporados na abordagem educacional.

Diagnosis and treatment of sustained arrhythmias are part of the clinical routine, with one of the most frequent arrhythmias being Atrial Fibrillation (AF). To prevent thromboembolic events in patients with AF, oral anticoagulation is recommended, particularly warfarin. Despite its importance, this medication has a narrow therapeutic range, which means that small changes in treatment generate a risk of thrombotic or hemorrhagic events. Among these changes, adherence to other medications in use, changes in the use of these medications by prescribers and self-medication stand out. There are several interactions between warfarin and other medications for continuous use, with the belief that the complexity of the prescription may interfere with the clinical outcomes of anticoagulant therapy. The objective of the study was to characterize patients followed in an anticoagulation outpatient clinic in relation to the Pharmacotherapy Complexity Index. To identify the complexity of pharmacotherapy, prescriptions for other medications in use, prescribed by primary health care doctors, were considered. The Medication Regimen Complexity Index (MRCI) instrument was used. Complexity, understood as the form of administration, dosage and pharmaceutical form, factors that interfere with adherence to anticoagulant therapy, was subdivided into three complexity levels: low, moderate and high, as indicated in the literature. The complexity analysis was carried out by two researchers independently, considering the criteria as per MRCI guidance. This is a descriptive study carried out in two anticoagulation clinics, located in Minas Gerais. During the research, patients were monitored in two anticoagulation clinics in Brazil, using warfarin, and were invited to participate in a clinical trial between December 2018 and February 2019, and a selection was subsequently made for the present study. A total of 93 patients were included in the study, the average age was 63 years and the majority were female (68.8%). Atrial fibrillation was the most predominant OAC indication (92.5%). The average number of medications used was 7.0. The majority of patients with pharmacotherapy classified as high (38, 6.5%) and medium complexity (24, 80.7%) presented inadequate TTR. The present study identified that there is a predominance of patients with high complexity of pharmacotherapy, which may indicate the need for additional care in relation to anticoagulant treatment. Therefore, in cases of patients with inadequate control of oral anticoagulation, it is recommended that aspects of the complexity of pharmacotherapy be incorporated into the educational approach.

Avaliação do conhecimento do usuário da estratégia de saúde da família sobre o serviço de nutrição / Assessment of user knowledge of the Family Health Strategy on nutrition service

A Atenção Primária à Saúde corresponde ao primeiro nível de contato da população com o sistema de saúde. Considerando os preceitos do SUS, não se pode deixar de destacar as transições demográficas, epidemiológicas e nutricionais ocorridas no Brasil. Dessa forma, se faz necessária a inclusão de ações multidisciplinares, que visem promoção da saúde, que possam evitar os agravos ocasionados pela transição nutricional. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o conhecimento do usuário entre as equipes de saúde da família (ESF), do município do Vale do Jequitinhonha-MG sobre o serviço de nutrição e a associação desses resultados com os fatores socioeconômicos da população. Constitui-se de um estudo quantitativo, descritivo, analítico e transversal, realizado com 615 usuários. As informações foram coletadas por meio do instrumento Primary Care Assessment Tool (PCATool) versão adulta e o instrumento Critério Brasil. Dos 615 usuários, observou- se que 64,6% (n=397) dos entrevistados referiram a ESF, quando ficavam doentes ou precisavam de conselhos de saúde. Foi observado que, aproximadamente, 58% dos indivíduos informaram que o serviço de nutrição estava disponível. Sobre o programa de suplementação ofertado apenas 33% o identificaram. E em relação ao aconselhamento sobre alimentação saudável ou sobre dormir, 54% disseram existir esse tipo de aconselhamento. Quando perguntados sobre o aconselhamento sobre exercício físico, cerca de 62% dos entrevistados declararam ter recebido esse aconselhamento. Sobre a realização de exames para verificar níveis de colesterol, calcula-se que 68% dos indivíduos afirmaram que tal assunto foi abordado. Os resultados mostraram que, em todas as áreas de abrangência, os serviços abordados neste estudo ainda precisam de mais investimento e divulgação, a fim de melhorar o conhecimento e acesso dos indivíduos aos serviços disponíveis nas unidades básicas de saúde. Acredita-se que a inserção do profissional nutricionista nas unidades básicas de saúde possa favorecer o conhecimento da população e realização de ações na busca pela segurança alimentar e nutricional e consequente promoção da saúde dos indivíduos.

The Primary Health corresponds to the first level of contact of the population with the health system. Considering the principles of the SUS, one can not fail to highlight the transitions demographic, epidemiological and nutritional occurred in Brazil. Thus, it is necessary to include actions aimed at multidisciplinary health promotion able to avoid the complications caused by nutritional transition. The objective of this research was to evaluate the knowledge of the user between the family health teams (FHT) of Vale of Jequitinhonha-MG on the food service and the association of these results with the socioeconomic population. It consists of a quantitative, descriptive, analytical, cross-sectional with 615 users. Data were collected using the instrument Primary Care Assessment Tool (PCATool) adult version and instrument Criterion Brazil. Of the 615 users, it was observed that 64.6% (n = 397) of respondents reported FHS when they was sick or need health advice. Was observed that approximately 58% of subjects reported that the nutrition service was available. About supplementation program offered only 33% identified and in relation to advice on healthy eating or sleeping about 54% reported living that kind of advice. When asked about advice on exercise approximately 62% of respondents reported receiving this advice, and on conducting tests to check cholesterol levels approximately 68% of individuals stated that this matter was addressed. The results showed that in all areas covered by the services covered in this study still need more investment and promotion in order to improve the knowledge and access of individuals to the services available in the basic health units. It is believed that the inclusion of dieticians in primary health care can encourage people's knowledge and implementation of public policies and actions in the pursuit of food security and nutrition and consequent promotion of the health of individuals.

Avaliação da atenção à saúde do adulto em um município-polo do Vale do Jequitinhonha (MG) / Evaluation of adult health care in a city pole of Vale do Jequitinhonha (MG)

A qualidade da Atenção Primária à Saúde é avaliada a partir da presença e extensão dos atributos essenciais e derivados. O presente estudo avaliou esses atributos (saúde do adulto) na Estratégia Saúde da Família de um município do Vale do Jequitinhonha (MG). Os dados foram coletados por meio do PCATool. Foi observado escore geral abaixo do valor considerado satisfatório (≥6,6), e escores satisfatórios foram identificados para apenas dois atributos. Percebeu-se uma melhor orientação para os atributos em apenas uma área de abrangência. Acredita-se que este trabalho poderá subsidiar futuras práticas e decisões acerca do investimento público, visando ao fortalecimento da atenção primária pelos gestores.

The quality of Primary Health Care is evaluated from the presence and the extent of the essential and derived attributes. This current study has evaluated those attributes (adults´ health) in the Family Health Strategy of a municipality located in the Vale of Jequitinhonha (MG). Data were harvested by PCAtool. It was observed general score below the value considered satisfactory (≥6,6) and satisfying scores were identified for only two attributes: It was noticed a better orientation for the attributes in only one area of coverage. It is believed that this work may subsidize future practices and decisions about public investment, aiming at the strengthening of the Primary Care by municipal managers.

Fatores relacionados à adesão farmacoterapêutica de pacientes hipertensos acolhidos na estratégia de saúde da família / Factors associated with pharmacotherapy adherence of hypertensive patients received in the Family Health Strategy

Uma das dificuldades encontradas no atendimento a pessoas portadoras de HAS é a falta de adesão ao tratamento. A problemática da adesão ao tratamento é complexa, pois vários fatores estão associados. A má comunicação entre a equipe de saúde e o paciente, a má organização dos serviços de saúde, a dificuldade de acesso aos medicamentos, sensação de melhora do paciente, número de medicamentos a serem administrados, bem como o aparecimento de reações adversas podem ser entendidos como algumas das razões pelas quais não se cumprem as indicações mé-dicas. Este estudo teve como objetivo identificar o perfil dos pacientes portadores de HAS acolhidos em uma Estratégia Saúde da Família de um Município do interior de Minas Gerais e avaliar o grau de adesão ao tratamento da HAS e seus fatores determinantes. Trata-se de um estudo não-experimental, descritivo e transversal. Os dados foram coletados por meio do Teste de Medida de Adesão ao Tratamento (MAT), específico para determinar o grau de adesão e um formulário, contendo variáveis demográficas, socioeconômicas, clínicas e terapêuticas. Para verificar a associação entre as variáveis, foi utilizado o Teste Exato de Fisher. O perfil demográfico e socioeconômico dos pacientes com HAS participantes deste estudo mostrou um predomínio de pessoas do sexo feminino (76,5%), com idades superiores a 50 anos (82,1%), casadas (64,7%), com baixa escolaridade (74,5%), baixa renda (84,3%), composto de donas-de-casa e aposentados (82,4%). Dos 51 pacientes entrevistados, aproximadamente 33% não aderiam ao tratamento da HAS. A falta de informação sobre o medicamento prescrito influenciou diretamente na não adesão do paciente à farmacoterapia da HAS (p<0,05).O médico foi o profissional mais citado pelos pacientes como o responsável por transmitir as informações sobre a doença e sobre o medicamento e o farmacêutico, o profissional menos citado. Dessa maneira, mostra-se a necessidade de construir mecanismos efetivos para promover a adesão à farmacoterapia. Espera-se que os resultados apresentados ofereçam subsídios para repensar as estraté-gias de intervenção utilizadas. Acredita-se que a constru-ção de um trabalho multidisciplinar no âmbito do SUS em que o profissional farmacêutico possa atuar efetivamente na forma como os medicamentos vêm sendo utilizados torna-se essencial para o sucesso dos investimentos públicos no âmbito da atenção primária à saúde.

One of the difficulties encountered in caring for people suffering from systemic arterial hypertension (SAH) is the lack of adherence to treatment. The issue of adherence to treatment is complex because several factors are associated. Poor communication between health staff and patient, poor organization of health services, difficulties in access to medicines, the patient's sensation of improvement, number of medications to be administered, as well as the appearance of adverse reactions can be understood as some of the reasons why medical indications are not met. This study aimed to identify the profile of patients with SAH admitted at a Family Health Strategy center in a municipality in Minas Gerais, and assess the degree of adherence to treatment of SAH and its determining factors. It is a non-experimental study, descriptive and transversal. Data were collected through the Treatment Adherence Measure (TAM) test, specifically for determining the degree of adherence, and a form containing demographic, socio-economic, clinical, and therapeutic variables. To investigate the association between the variables, Fisher's Exact Test was used. The demographic and socio-economic profile of the patients with SAH participating in this study showed a predominance of females (76.5%), over 50 years old (82.1%), married (64.7%), with a low educational level (74.5%), low income (84.3%), comprising housewives and retirees (82.4%). Of the 51 patients interviewed, roughly 33% did not adhere to the SAH treatment. The lack of information about the prescribed drug directly influenced the patient's non-adherence to the SAH pharmacotherapy (p<0.05). The doctor was theprofessional most often cited by patients as the person responsible for conveying information about the disease and the drug, and the pharmacist was the professional least mentioned. Thus the need is demonstrated to build effective mechanisms to promote adherence to pharmacotherapy. It is hoped that these results offer help in rethinking the intervention strategies used. It is believed that the construction of a multidisciplinary approach in the health care system, in which the pharmacist can play an effective role in how medications are being used, is essential to the success of the public investment in primary health care.

Immunological changes in canine peripheral blood leukocytes triggered by immunization with first or second generation vaccines against canine visceral leishmaniasis.

In this study, we summarized the major phenotypic/functional aspects of circulating leukocytes following canine immunization with Leishvaccine and Leishmune®. Our findings showed that Leishvaccine triggered early changes in the innate immunity (neutrophils and eosinophils) with late alterations on monocytes. Conversely, Leishmune(®) induced early phenotypic changes in both, neutrophils and monocytes. Moreover, Leishvaccine triggered mixed activation-related phenotypic changes on T-cells (CD4+ and CD8+ and B-lymphocytes, whereas Leishmune(®) promoted a selective response, mainly associated with CD8+ T-cell activation. Mixed cytokine profile (IFN-γ/IL-4) was observed in Leishvaccine immunized dogs whereas a selective pro-inflammatory pattern (IFN-γ/NO) was induced by Leishmune® vaccination. The distinct immunological profile triggered by Leishvaccine and Leishmune® may be a direct consequence of the distinct biochemical composition of these immunobiological, i.e. complex versus purified Leishmania antigen along with Bacillus Calmette-Guérin (BCG) versus saponin adjuvant. Both immunobiologicals are able to activate phagocytes and CD8+ T-cells and therefore could be considered as a putative vaccines against canine visceral leishmaniasis (CVL).

Advances in flow cytometric serology for canine visceral leishmaniasis: diagnostic applications when distinct clinical forms, vaccination and other canine pathogens become a challenge.

We have previously reported the applicability of flow cytometry anti-fixed Leishmania infantum chagasi promastigotes IgG (FC-AFPA-IgG) as a novel serological device for laboratorial diagnosis of CVL. Herein, we validate throughout a blind study applied into a broader range of coded sera samples that FC-AFPA-IgG at serum dilution 1:8192 have an outstanding performance to discriminate the serological reactivity of canine visceral leishmaniasis (CVL, n=64) and Leishmune vaccines (VAC, n=62) and non-infected controls (NI, n=25). Moreover, we have evaluated the performance of indirect immunofluorescence antibody test (IFAT) and the crude-antigen enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in parallel with FC-AFPA-IgG, to discriminate the seroreactivity of NI, CVL and VAC. Our data demonstrated that both ELISA and FC-AFPA-IgG showed similar performance to detect the seronegativity in 100% of NI, whereas FC-AFPA-IgG displayed better performance to exclude seropositivity in 100% of VAC. The high kappa agreement indexes observed suggested similar performance between these two serological testes when distinct clinical forms of CVL become a challenge. Furthermore, the FC-AFPA-IgG applied at sera dilution 1:8192 showed a remarkable performance to discriminate CVL from other co-endemic canine infections with high co-negativity in dogs infected with Trypanosoma cruzi and Leishmania braziliensis (86% and 84%, respectively). In conclusion, the data presented here re-emphasize the applicability of FC-AFPA-IgG as an innovative methodology able to discriminate post-infection imunomediated seroreactivity from that triggered by prophylactic immunization with minor cross-reactivity with other relevant canine pathogens, which may contribute as a supplementary assay for the CVL immunodiagnosis.

T-cell-derived cytokines, nitric oxide production by peripheral blood monocytes and seric anti-Leishmania (Leishmania) chagasi IgG subclass patterns following immunization against canine visceral leishmaniasis using Leishvaccine and Leishmune.

It is generally accepted that distinct cytokine expression by the cellular immune response plays a critical role during the outcome of experimental as well as natural canine visceral Leishmaniasis (CVL). Despite the fact that immunoprophylaxis of CVL has become an important control strategy and protective immunity has been reported upon immunization with whole as well as purified Leishmania antigens, the cytokine profile of T-cells triggered by anti-CVL vaccines still remain to be determined. Herein, we have developed a cross-sectional analysis of German Shepherd dogs submitted to vaccination protocols with Leishvaccine (n=6) and Leishmune (n=6). Our data identified distinct immunological profiles elicited by Leishvaccine and Leishmune, with the Leishvaccine triggering a mixed, IFN-gamma and IL-4, cytokine pattern in addition to high levels of anti-Leishmania IgG1, whereas the Leishmune induced an immunological pattern characterized by enhanced levels of IFN-gamma, NO and anti-Leishmania chagasi IgG2. It was important to notice that despite the distinct immunological patterns triggered by Leishvaccine and Leishmune, the ability of both immunobiologicals to activate T-cell-derived IFN-gamma synthesis further suggesting their immunogenic potential against CVL. These findings added support to our hypothesis that both antigenic composition (whole antigen in Leishvaccine versus purified antigen in Leishmune) as well as the adjuvant nature (BGC and saponin) used for the vaccine formulation may count for the distinct activation pattern observed.

Despite Leishvaccine and Leishmune trigger distinct immune profiles, their ability to activate phagocytes and CD8+ T-cells support their high-quality immunogenic potential against canine visceral leishmaniasis.

Phenotypic features of peripheral blood leukocytes have been investigated as a pre-requisite to characterize the protective immunity attributed to both Leishvaccine and Leishmune. Our results showed that either those vaccine were accompanied by distinct profiles on innate immune compartment. While Leishvaccine promoted early changes in phenotypic features of neutrophils and eosinophils with late involvement of monocytes, Leishmune induced early and persistent activation of neutrophils and monocytes, without changes on eosinophil activation status. Regarding the adaptive immunity, Leishvaccine sponsored a mixed profile, associated with phenotypic changes of T and B-lymphocytes. Major phenotypic changes in CD4+ T-cells with transient activation of CD8+ T-cell, besides decreased frequency of B-cell expressing CD32 were the hallmark of Leishvaccine. In contrast, Leishmune was associated with phenotypic changes in T-lymphocytes, particularly in CD8+ T-cells, and selective up-regulation of CD3+CD5+LowCD8+ cells. We hypothesized that this dissimilar alteration in immunological events would represent phenomenon directly related with the molecular nature of these vaccines besides the distinct adjuvants employed. However, it is important to emphasize that both immunobiologicals are able to activate phagocytes and CD8+ T-cells and therefore could be considered priority vaccines with a high-quality immunogenic potential against CVL.

Inovações metodológicas para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina / Methodological innovations for serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis

A soropositividade para Leishmania tem sido considerada o padrão de referência para indicar a eutanásia de cães, como recomendado pelo programa de controle da leishmaniosevisceral. Entretanto, as técnicas utilizadas atualmente, RIFI e ELISA, apresentam limitações, considerando principalmente a especificidade em detectar a leishmaniose visceral canina(LVC). Adicionalmente, após a disponibilização comercial da vacina Leishmune Marca Registrada muitas questões de ordem prática tem se tornado urgentes, devido à soroconversão imunomediada pós vacinal, que tem um impacto direto na interpretação da sorologia positiva anti-LVC. Neste estudo, foram estabelecidos procedimentos metodológicos, baseados na citometria de fluxo, para pesquisa de anticorpos anti-formas fixadas de L. chagasi (AAPFIgM,IgA, IgG, IgG1, IgG2 e IgE). Foi avaliado o desempenho das técnicas em amostras de soros de cães não infectados (NI, n=15), infectados com L. chagasi (INF, n=29) e vacinados com Leishmune Marca Registrada (VAC, n=21) para o diagnóstico diferencial da LVC. Utilizando PPFP=20% como ponto de corte para segregar resultados negativos e positivos, a AAPF-IgG apresentou excelente desempenho quando aplicada nas diluições do soro 1:2.048 e 1:8.192, sendo portanto qualificada como técnica aplicável ao diagnóstico sorológico da LVC. A AAPF-IgG foi validada para o diagnóstico sorológico da LVC quando aplicada em um maior número de amostras de cães NI (n=25), INF (n=62) e VAC (n=64). Além disso, foi avaliado o desempenho da AAPF-IgG em comparação ‘com a RIFI e ELISA e Kalazar Detect Marca Registrada para discriminar a soro reatividade de NI, INF e VAC.

Os dados demonstraram que AAPF-IgG e ELISA apresentaram desempenho semelhante para detectar soro negatividade em cães NI (especificidades=100%), enquanto a AAPF-IgG mostrou melhor desempenho para excluir soropositividade no grupo VAC (especificidade=100%). O elevado valor encontrado para o índice Kappa sugere similar desempenho para AAPF-IgG e ELISA quando o diagnóstico de diferentes formas clínicas torna-se um desafio. Em relação à AAPF-IgG e Kalazar Detect , ambos apresentaram capacidade semelhante para excluir o diagnóstico de LVC em todos os cães VAC (especificidades=100%), entretanto, a AAPF-IgG apresentou um menor número de resultados falso negativos em cães INF, representando uma ferramenta mais confiável para o diagnóstico da LVC. Além disso, a AAPF-IgG, aplicada na diluição do soro 1:8.192, apresentou elevado desempenho para discriminar cães INF de cães vacinados experimentalmente com outros imunobiológicos candidatos a imunoprofilaxia contra LVC e cães infectados com Trypanosoma cruzi e L. braziliensis (86% e 84% de especificidade, respectivamente). Em conjunto, os resultados gerados nesse trabalho sugerem que a pesquisa de anticorpos IgG anti-L. chagasi, por citometria de fluxo, apresenta-se como potente metodologia complementar para o diagnóstico da LVC, podendo subsidiar os órgãosresponsáveis pelo controle da LV no Brasil na implementação de medidas de controle oravigentes, contribuindo para utilização segura de imunobiológicos em programas nacionais de imunoprofilaxia e controle da leishmaniose visceral

Inovações metodológicas para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina

A soropositividade para Leishmania tem sido considerada o padrão de referência para indicar a eutanásia de cães, como recomendado pelo programa de controle da leishmaniosevisceral. Entretanto, as técnicas utilizadas atualmente, RIFI e ELISA, apresentam limitações, considerando principalmente a especificidade em detectar a leishmaniose visceral canina(LVC). Adicionalmente, após a disponibilização comercial da vacina Leishmune Marca Registrada muitas questões de ordem prática tem se tornado urgentes, devido à soroconversão imunomediada pós vacinal, que tem um impacto direto na interpretação da sorologia positiva anti-LVC. Neste estudo, foram estabelecidos procedimentos metodológicos, baseados na citometria de fluxo, para pesquisa de anticorpos anti-formas fixadas de L. chagasi (AAPFIgM,IgA, IgG, IgG1, IgG2 e IgE). Foi avaliado o desempenho das técnicas em amostras de soros de cães não infectados (NI, n=15), infectados com L. chagasi (INF, n=29) e vacinados com Leishmune Marca Registrada (VAC, n=21) para o diagnóstico diferencial da LVC. Utilizando PPFP=20% como ponto de corte para segregar resultados negativos e positivos, a AAPF-IgG apresentou excelente desempenho quando aplicada nas diluições do soro 1:2.048 e 1:8.192, sendo portanto qualificada como técnica aplicável ao diagnóstico sorológico da LVC. A AAPF-IgG foi validada para o diagnóstico sorológico da LVC quando aplicada em um maior número de amostras de cães NI (n=25), INF (n=62) e VAC (n=64). Além disso, foi avaliado o desempenho da AAPF-IgG em comparação ‘com a RIFI e ELISA e Kalazar Detect Marca Registrada para discriminar a soro reatividade de NI, INF e VAC.

Os dados demonstraram que AAPF-IgG e ELISA apresentaram desempenho semelhante para detectar soro negatividade em cães NI (especificidades=100%), enquanto a AAPF-IgG mostrou melhor desempenho para excluir soropositividade no grupo VAC (especificidade=100%). O elevado valor encontrado para o índice Kappa sugere similar desempenho para AAPF-IgG e ELISA quando o diagnóstico de diferentes formas clínicas torna-se um desafio. Em relação à AAPF-IgG e Kalazar Detect , ambos apresentaram capacidade semelhante para excluir o diagnóstico de LVC em todos os cães VAC (especificidades=100%), entretanto, a AAPF-IgG apresentou um menor número de resultados falso negativos em cães INF, representando uma ferramenta mais confiável para o diagnóstico da LVC. Além disso, a AAPF-IgG, aplicada na diluição do soro 1:8.192, apresentou elevado desempenho para discriminar cães INF de cães vacinados experimentalmente com outros imunobiológicos candidatos a imunoprofilaxia contra LVC e cães infectados com Trypanosoma cruzi e L. braziliensis (86% e 84% de especificidade, respectivamente). Em conjunto, os resultados gerados nesse trabalho sugerem que a pesquisa de anticorpos IgG anti-L. chagasi, por citometria de fluxo, apresenta-se como potente metodologia complementar para o diagnóstico da LVC, podendo subsidiar os órgãosresponsáveis pelo controle da LV no Brasil na implementação de medidas de controle oravigentes, contribuindo para utilização segura de imunobiológicos em programas nacionais de imunoprofilaxia e controle da leishmaniose visceral

Clinical value of anti-Leishmania (Leishmania) chagasi IgG titers detected by flow cytometry to distinguish infected from vaccinated dogs.

Leishmune vaccination covers a broader number of endemic areas of canine visceral leishmaniasis (CVL) and therefore the development of new serological devices able to discriminate CVL from Leishmune vaccinees becomes an urgent need considering the post-vaccine seroconversion detected throughout conventional methodologies. Herein, we have described the establishment of a flow cytometry based methodology to detect anti-fixed L. (L.) chagasi promastigotes antibodies (FC-AFPA-IgG, FC-AFPA-IgG1 and FC-AFPA-IgG2) in sera samples from Leishmania (Leishmania) chagasi infected dogs and Leishmune vaccinees. The results of FC-AFPA were reported along the sera titration curve (1:128-1:524,288), as percentage-of-positive-fluorescent-parasite (PPFP). The use of PPFP=20% as a cut-off edge to segregate negative and positive results at sera dilution 1:2048 revealed outstanding performance indexes that elect FC-AFPA-IgG and IgG2 (both detected by polyclonal FITC-labeled second step reagent) applicable to the serological diagnosis of CVL, with 100% of specificity for both IgG and IgG2 and 97 and 93% of sensitivity, respectively. Moreover, FC-AFPA-IgG, applied at sera dilution 1:2048, also appeared as a useful tool to discriminate L. chagasi infected dogs from Leishmune vaccinees, with 76% of specificity. Outstanding likelihood indexes further support the performance of FC-AFPA-IgG for exclusion diagnosis of CVL in Leishmune vaccinees. Analysis of FC-AFPA-IgG at sera dilution 1:8192 revealed the most outstanding indexes, demonstrating that besides the ability of PPFP