A novel high-resolution melting analysis strategy for detecting cystic fibrosis-causing variants.

Cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease, is caused by variants in both alleles of the CF transmembrane conductance regulator (CFTR) gene. A new assay based on allele-specific polymerase chain reaction and high-resolution melting analysis was developed for the detection of 18 CF-causing CFTR variants previously identified in Cuba and Latin America. The assay is also useful for zygosity determination of mutated alleles and includes internal controls. The reaction mixtures were normalized and evaluated using blood samples collected on filter paper. The evaluation of analytical parameters demonstrated the specificity and sensitivity of the method to detect the included CFTR variants. Internal and external validations yielded a 100% agreement between the new assay and the used reference tests. This assay can complement CF newborn screening not only in Cuba but also in Latin America.

Niveles séricos de inmunoglobulinas, componentes 3 y 4 del complemento, alelo HLA-B27 y espondiloartropatía en pacientes con uveítis anterior no infecciosa / Serum Immunoglobulin Levels, Complement Components 3 and 4, HLA-B27 Allele and Spondyloarthropathy in Patients with Non-Infectious Anterior Uveites

Objetivo: Identificar la relación entre los niveles séricos de inmunoglobulinas, los componentes 3 y 4 del complemento, la presencia del alelo HLA-B27 y el diagnóstico de espondiloartropatía en pacientes con uveítis anterior no infecciosa. Materiales y métodos: Se incluyeron 197 pacientes con diagnóstico de uveítis anterior no infecciosa. Se determinaron las concentraciones de inmunoglobulinas séricas y proteínas C3 y C4 del complemento mediante turbidimetría. Se recogieron los antecedentes personales de sospecha de inmunodeficiencia, complicaciones oftalmológicas, de artralgias, antecedentes familiares de espondiloartropatías y la presencia del alelo HLA-B27. Resultados: Los antecedentes familiares de espondiloartropatías, artralgias axiales y complicaciones oftalmológicas fueron más frecuentes en los pacientes positivos a HLA-B27 (p=0,0005, p≤0,0001 y p≤0,0001, respectivamente) y en aquellos con diagnóstico de espondiloartropatías (p≤0,0001, p≤0,0001 y p≤0,0001, respectivamente). Los antecedentes personales de sospecha de inmunodeficiencia, sepsis recurrentes y alteraciones gastrointestinales, se asociaron a la presencia del alelo HLA-B27 (p≤0,0001 y p=0,0240, respectivamente) y al diagnóstico de espondiloartropatía (p=0,0492 y p=0,0017, respectivamente). Se observó disminución de las IgG (χ2=18,5; OR 5,03; IC 95% 2,32-10,89; p=0,0001) e IgM (OR 7,13; IC 95% 1,40-36,4; p=0,0128) en pacientes positivos para el alelo HLA-B27 y en aquellos con diagnóstico de espondiloartropatías (p=0,0364 y p=0,0028, respectivamente). La disminución de las proteínas C3 (OR 4,82; IC 95% 1,35-17,11; p=0,0328) y C4 (OR 9,09; IC 95% 2,13-38,88; p=0,0074) se asoció al diagnóstico de espondiloartropatías.(AU)

Objective: To identify the relationship between serum immunoglobulin levels, complement components 3 and 4, the presence of the HLA-B27 allele and diagnosis of spondyloarthropathies in patients with non-infectious anterior uveitis. Materials and methods: The participants were 197 patients with a non-infectious anterior uveitis. The concentrations of serum immunoglobulins, and C3 and C4 proteins of the complement were determined by turbidimetry. The personal history of suspected immunodeficiency, ophthalmological complications, arthralgia, family history of spondyloarthropathies and the presence of the HLA-B27 allele were collected. Results: A family history of spondyloarthropathy, axial arthralgias, and ophthalmological complications were more frequent in HLA-B27 positive patients (P=.0005, P≤.0001, and P≤.0001, respectively) and in patients with spondyloarthropathy diagnoses (P≤.0001, P≤.0001, and P≤.0001, respectively). A personal history of recurrent sepsis, and gastrointestinal abnormalities was associated with the presence of the HLA-B27 allele (P≤.0001, and P=.0240, respectively) and with the diagnosis of spondyloarthropathy (P=.0492, and P=.0017, respectively). IgG decrease was observed (χ2=18.5, OR 5.03, 95% CI 2.32-10.89; P=.0001) and IgM (OR 7.13, 95% CI 1.40-36.4; P=.0128) in patients positive for the HLA-B27 allele and in patients with a diagnosis of spondyloarthropathies (P=.0364 and P=.0028, respectively). The decrease of C3 proteins (OR 4.82; CI 95% 1.35-17.11; P=.0328) and C4 (OR 9.09; CI 95% 2.13-38.88; P=.0074) were associated with a spondyloarthropathies diagnosis. Conclusions: Patients with non-infectious anterior uveitis, positive for the HLA-B27 allele and diagnosed with spondyloarthropathies have alterations in serum immunoglobulin levels and complement components 3 and 4, which could contribute to the perpetuation and worse clinical course of this disease.(AU)

Serum immunoglobulin levels, complement components 3 and 4, HLA-B27 allele and spondyloarthropathy in patients with non-infectious anterior uveites.

OBJECTIVE: To identify the relationship between serum immunoglobulin levels, complement components 3 and 4, the presence of the HLA-B27 allele and diagnosis of spondyloarthropathies in patients with non-infectious anterior uveitis. MATERIALS AND METHODS: The participants were 197 patients with a non-infectious anterior uveitis. The concentrations of serum immunoglobulins, C3 and C4 proteins of the complement were determined by turbidimetry. The personal history of suspected immunodeficiency, ophthalmological complications, arthralgia, family history of spondyloarthropathies and the presence of the HLA-B27 allele were collected. RESULTS: A family history of spondyloarthropathy, axial arthralgias, and ophthalmological complications were more frequent in HLA-B27 positive patients (P=.0005, P≤.0001, P≤.0001 respectively) and in patients with spondyloarthropathy diagnoses (P≤.0001, P≤.0001, P≤.0001 respectively). A personal history of recurrent sepsis, and gastrointestinal abnormalities was associated with the presence of the HLA-B27 allele (P≤.0001, P=.0240 respectively) and with the diagnosis of spondyloarthropathy (P=.0492, P=.0017 respectively). IgG decrease was observed (χ2=18.5, OR=5.03, 95% CI=2.32-10.89, P=.0001) and M (OR=7.13, 95% CI=1.40-36.4; P=.0128) in patients positive for the HLA-B27 allele and in patients with a diagnosis of SpA (P=.0364 and P=.0028 respectively). The decrease of C3 proteins (OR=4.82; CI 95%=1.35-17.11; P=.0328) and C4 (OR=9.09; CI 95%=2.13-38.88; P=.0074) were associated with a spondyloarthropathies diagnosis. CONCLUSIONS: Patients with non-infectious anterior uveitis, positive for the HLA-B27 allele and diagnosed with spondyloarthropathies have alterations in serum immunoglobulin levels and complement components 3 and 4, which could contribute to the perpetuation and worse clinical course of this disease.

Niveles de antitoxina tetánica y diftérica relacionadas con el alelo HLA-B27 en pacientes cubanos con uveítis anterior no infecciosa / Tetanus and diphtheria antitoxin levels related to the HLA-B27 allele in Cuban patients with non-infectious anterior uveitis

La uveítis anterior no infecciosa es una enfermedad inflamatoria del ojo que afecta al tracto uveal y que puede causar ceguera total y otras discapacidades visuales. Esta enfermedad se ubica en el espectro de enfermedades autoinmunes y autoinflamatorias. Se han descrito respuestas no adecuadas a la vacunación en enfermedades mediadas por el sistema inmune, por lo que se evaluaron los niveles de antitoxina tetánica y diftérica en pacientes cubanos con uveítis anterior no infecciosa, relacionada con el alelo HLA-B27. Se determinaron los niveles de antitoxina tetánica y diftérica mediante ELISA en 190 pacientes con uveítis anterior no infecciosa y controles supuestamente sanos. El 97,37 por ciento de los pacientes con uveítis mostraron niveles de protección de antitoxina tetánica mayor o igual a 0,1 UI/mL, similar a lo observado en los controles sanos (98,95 por ciento) (p=0,4385). Las proporciones de pacientes con uveítis anterior no infecciosa y sus controles en los diferentes niveles de protección de antitoxina tetánica fueron similares (p>0,05), al igual que los títulos medios geométricos (p=0,2907). En los pacientes con uveítis, de 65 años o más, se detectó una mayor proporción de individuos con títulos protectores de larga duración (>1,0 UI/mL) de antitoxina diftérica (p=0,0065). En los pacientes con uveítis no se observó asociación entre la presencia del alelo HLA-B27 y la respuesta de anticuerpos frente al toxoide tetánico (p=0,6196) y diftérico (p=0,1917). El 37,9 por ciento de los pacientes con uveítis y el 42 por ciento de los controles, presentaron títulos no protectores (<0,1 UI/mL) de antitoxina diftérica (0,1148). La mayoría de los pacientes con uveítis anterior no infecciosa y los controles supuestamente sanos presentaron protección frente al toxoide tetánico; mientras que, en los pacientes con uveítis, así como en los controles supuestamente sanos, con edad igual o más de 18 años, se debe reevaluar incluir refuerzos con toxoide diftérico para alcanzar mayores niveles de protección frente a la difteria(AU)

Non-infectious anterior uveitis is an inflammatory disease of the eye that affects the uveal tract and can cause total blindness and other visual disabilities. Autoimmune and inflammatory diseases are associated with qualitative and quantitative alterations in the immune response; therefore, the levels of tetanus and diphtheria antitoxin related to the HLA-B27 allele were evaluated in Cuban patients with non-infectious anterior uveitis. Tetanus and diphtheria antitoxin levels were determined by ELISA in 190 patients with non-infectious anterior uveitis and healthy control individuals. 97.37 percent of patients with uveitis showed protective tetanus antitoxin levels greater than and equal to 0.1 IU/mL as well as healthy controls (98.95 percent) (p=0.4385). The proportions of patients with non-infectious anterior uveitis and presumably healthy controls in the different levels of protective tetanus antitoxin were similar (p>0.05) at all levels of protection, as were the geometric mean titers for this antitoxin (p=0.2907). Patients with uveitis aged 65 years or older had a higher proportion of individuals with long-term reliable protective titers (>1.0 IU/mL) of diphtheria antitoxin (p=0.0065). In uveitis patients, no association was observed between the presence of the HLA-B27 allele and the antibody response against tetanus toxoid (p=0.6196) and diphtheria (p=0.1917). Similarly, 37.9 percent of patients with uveitis and 42 percent of their controls had non-protective titers (<0.1 IU/mL) of diphtheria antitoxin (0.1148). Most patients with anterior uveitis and control subjects were protected against tetanus (p>0.05), while in patients with uveitis and supposedly healthy controls, aged 18 years or older, the administration of booster doses with diphtheria toxoid should be reevaluated to achieve higher levels of protection against diphtheria(AU)

Genotype-Phenotype Correlation in Patients with Congenital Adrenal Hyperplasia due to 21-Hydroxylase Deficiency in Cuba.

BACKGROUND: There are several studies that show a good genotype-phenotype correlation in congenital adrenal hyperplasia (CAH) due to 21-hydroxylase deficiency (21OHD). However, there is well-documented evidence of inconsistency in some cases. OBJECTIVES: To determine if there is a correlation between the identified mutations and the clinical manifestations of 21OHD in the Cuban population. METHODS: A cross-sectional descriptive study of all patients referred for a molecular diagnosis of 21OHD in Cuba from January 2000 to December 2018. The clinical manifestations of each patient were identified and classified according to the phenotype. The CYP21A2 gene was analyzed for the presence of 5 point mutations involved in the pathogenesis of 21OHD (intron 2, deletion of 8bp, I172N, P30L, and Q318X); correlation was sought between the phenotypic characteristics and the frequencies of point mutations in the patients using the Spearman test. RESULTS: A total of 55 patients underwent direct analysis of the CYP21A2 gene in order to determine the presence of the 5 point mutations. Point mutations were identified in 31 patients, which corresponded to 56%. A statistically significant genotype-phenotype correlation was found. CONCLUSIONS: The correlation between the detected molecular defect and the clinical expression of 21OHD was reasonable in the Cuban population, which could allow phenotypic predictions to be made from the genotype.

Molecular diagnosis of patients with congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency.

BACKGROUND: Congenital adrenal hyperplasia (CAH) is an autosomal recessive group of diseases. 21-Hydroxylase deficiency (21OHD) accounts for between 95 and 99% of all CAH cases. OBJECTIVES: To characterize the genotype of patients clinically diagnosed with 21OHD and to identify the most frequent mutations in the Cuban population. METHODS: Cross-sectional descriptive study that included all patients diagnosed with 21OHD from January 2000 to December 2018. For the molecular analysis of the CYP21A2 gene, a protocol was used that used the polymerase chain reaction in 2 stages; in the first stage genomic DNA was amplified and 5 point mutations were detected in the second stage (Intron 2, Deletion of 8 bp, G318X, I172N and P30L). RESULTS: The 5 point mutations were identified in 31 of the 55 (56%) studied patients, 16/21 (76%) in the salt-wasting, 12/18 (67%) in the simple virilizing and 3/16 (19%) in the nonclassical form. The Intron 2 mutation was the most frequent, followed by G318X and 8 bp deletion. Compound heterozygotes were found in 10 patients, all corresponded to classic forms of the disease. CONCLUSIONS: The causal CYP21A2 gene mutation was detected in 56% (72% in classic CAH), which makes the method encouraging. The most frequent mutations observed were Intron 2 and G318X. The detection of mutations offers confirmation of diagnosis, prediction of phenotype and genetic counseling.

Serum Immunoglobulin Levels, Complement Components 3 and 4, HLA-B27 Allele and Spondyloarthropathy in Patients with Non-Infectious Anterior Uveites. / Niveles séricos de inmunoglobulinas, componentes 3 y 4 del complemento, alelo HLA-B27 y espondiloartropatía en pacientes con uveítis anterior no infecciosa.

OBJECTIVE: To identify the relationship between serum immunoglobulin levels, complement components 3 and 4, the presence of the HLA-B27 allele and diagnosis of spondyloarthropathies in patients with non-infectious anterior uveitis. MATERIALS AND METHODS: The participants were 197 patients with a non-infectious anterior uveitis. The concentrations of serum immunoglobulins, and C3 and C4 proteins of the complement were determined by turbidimetry. The personal history of suspected immunodeficiency, ophthalmological complications, arthralgia, family history of spondyloarthropathies and the presence of the HLA-B27 allele were collected. RESULTS: A family history of spondyloarthropathy, axial arthralgias, and ophthalmological complications were more frequent in HLA-B27 positive patients (P=.0005, P≤.0001, and P≤.0001, respectively) and in patients with spondyloarthropathy diagnoses (P≤.0001, P≤.0001, and P≤.0001, respectively). A personal history of recurrent sepsis, and gastrointestinal abnormalities was associated with the presence of the HLA-B27 allele (P≤.0001, and P=.0240, respectively) and with the diagnosis of spondyloarthropathy (P=.0492, and P=.0017, respectively). IgG decrease was observed (χ2=18.5, OR 5.03, 95% CI 2.32-10.89; P=.0001) and IgM (OR 7.13, 95% CI 1.40-36.4; P=.0128) in patients positive for the HLA-B27 allele and in patients with a diagnosis of spondyloarthropathies (P=.0364 and P=.0028, respectively). The decrease of C3 proteins (OR 4.82; CI 95% 1.35-17.11; P=.0328) and C4 (OR 9.09; CI 95% 2.13-38.88; P=.0074) were associated with a spondyloarthropathies diagnosis. CONCLUSIONS: Patients with non-infectious anterior uveitis, positive for the HLA-B27 allele and diagnosed with spondyloarthropathies have alterations in serum immunoglobulin levels and complement components 3 and 4, which could contribute to the perpetuation and worse clinical course of this disease.

Eventos genéticos poco frecuentes detectados en estudios de relación filial mediante marcadores de ADN / Low frequency genetic events found in filial relatio nships studies with DNA markers

Introducción: En los estudios de relación filial son ampliamente utilizados marcadores de ADN tipo STR (del inglés Short Tandem Repeats), muy informativos debido a su variabilidad genética.Análisis y síntesis de la información: Durante la elaboración de los estudios de realización de marcadores STR, realizados por el Centro Nacional de Genética Médica en conjunto con el Instituto de Medicina Legal, se identificaron algunos eventos pocos frecuentes que se presentan en este trabajo, siendo ellos: mutación germinal, alelo fuera del rango esperado y patrón trialélico.Conclusiones: Con la presentación de tres eventos genéticos se demuestra la gran complejidad que puede presentar los estudios de relación filial y la importancia de tenerlos en cuenta a la hora de emitir los resultados…(AU)

Dinámica de los estudios de relación filial en Cuba / Dynamics of filial relationship studies in Cuba

Introducción: La indefinición en la relación filial entre individuos repercute severamente en el estado psicosocial de los involucrados y es posible de resolver en la actualidad mediante las técnicas de análisis de ADN. La colaboración establecida entre el Centro Nacional de Genética Médica y el Instituto de Medicina Legal, permitió realizar estos estudios a partir de 2017.Objetivo: Conocer las principales características de cien estudios de relación filial realizados entre los años 2017 y 2018 para obtener información que permita establecer una estrategia futura al respecto.Métodos: Se realizaron cien estudios de relación filial, los cuales implicaban 115 análisis de relación filial, mediante el empleo de 11 marcadores de ADN microsatélites que fueron genotipados por la técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa, resueltos en geles de poliacrilamida desnaturalizantes y visualizados mediante tinción con plata. Como criterios para el cierre de los análisis fueron definidos alcanzar una razón de verosimilitud no menor de 100 o al menos 3 exclusiones. Para concluir casos no resueltos o caracterizar eventos genéticos poco frecuentes que se presentaron, se utilizó el sistema multiplex GenomeLab™ Human STR Primer Set de la firma Beckman Coulter.Resultados: Los estudios dirigidos a evaluar la paternidad representaron 98(percent) el total. Se recibieron también otros dirigidos a evaluar la maternidad y la hermandad (uno en cada caso). Se realizaron 115 análisis de relación filial, de ellos 112 de paternidad. El 76,8 (percent) de los análisis de paternidad contaron con participación de la madre. El 33(percent) de los análisis de paternidad indicaron exclusión de este vínculo familiar, obteniéndose como promedio 4 marcadores excluyentes por análisis excluyente. El 96,4(percent) de los análisis de paternidad realizados cumplieron los criterios de cierre establecidos.Conclusiones: Fueron resueltos satisfactoriamente los distintos tipo…(AU)

Identificación de la mutación I172N del gen CYP21 en pacientes con hiperplasia adrenal congénita / Identification of the I172N mutation of gene CYP21 in patients with congenital adrenal hyperplasia

Introducción: La hiperplasia adrenal congénita abarca un conjunto de trastornos de herencia autosómica recesiva, causados por la deficiencia de alguna de las enzimas de la vía esteroidogénica suprarrenal. Más del 90 (percent) de los casos se debe a un déficit de actividad 21-hidroxilasa por mutaciones en el gen CYP21A2. En el 75 (percent) de los pacientes estas mutaciones son microconversiones procedentes de un pseudogen homólogo cercano. Una de las más frecuentes es la mutación I172N asociada a formas severas de enfermedad. Objetivo: Detectar la mutación I172N en pacientes con hiperplasia adrenal congénita por déficit de 21 hidroxilasa y calcular su frecuencia alélica para determinar la pertinencia de su introducción en el esquema de estudio molecular de la enfermedad. Métodos: Se procesaron 79 muestras de ADN, procedentes de pacientes no consanguíneos, con diagnóstico clínico de la enfermedad. La estrategia empleada consistió en la amplificación específica del CYP21A2, seguida de una PCR-ACRS anidada para la amplificación del locus I172N y posterior digestión enzimática. Resultados: Se detectó la mutación I172N en 8 casos: 3 homocigóticos y 5 heterocigóticos. La frecuencia alélica fue de 0,0696. Cuatro de los pacientes con I172N resultaron heterocigóticos compuestos con otras mutaciones previamente estudiadas…(AU)

Variantes alélicas *3, *4, *5 y *6 del gen CYP2D6 en una muestra de pacientes cubanos con esquizofrenia / Aallelic variants *3, *4, *5 and *6 of gene CYP2D6 in a sample of Cuban patients with schizophrenia

Introducción: El gen CYP2D6 codifica la proteína de igual nombre, enzima principal del complejo de citocromos P-450 en la fase I del metabolismo de muchos medicamentos ampliamente usados en la práctica clínica, entre los que se encuentran los neurolépticos. Las variantes alélicas que implican una función nula de esta enzima: *3, *4, *5, y *6, predicen entre el 93-97,5(percent) de los posibles fenotipos metabolizadores lentos, que implican acumulación de concentraciones tóxicas y, por consiguiente, mayor riesgo de reacciones adversas. Por otro lado, hay estudios que reportan una baja frecuencia de metabolizadores lentos en pacientes con esquizofrenia. Objetivo: Evaluar la asociación entre las variantes no funcionales del gen CYP2D6 con la esquizofrenia en pacientes cubanos. Métodos: Se realizó un estudio de casos y controles. En el grupo de los casos se incluyeron 212 pacientes con esquizofrenia, y en los controles 326 voluntarios sanos. Resultados: Las frecuencias de los alelos CYP2D6 con actividad enzimática nula fueron similares entre los casos y los controles. No se detectó una diferencia estadísticamente significativa de metabolizadores lentos entre los pacientes con esquizofrenia ni en los voluntarios sanos…(AU)

Frecuencia de microdeleciones del cromosoma Y en pacientes cubanos con azoospermia u oligozoospermia idiopática / Frequency of Y chromosome microdeletions in Cuban patient with idiopathic azoospermia or oligozoospermia

La microdeleción del brazo largo del cromosoma Y, constituye una de las causas genéticas más frecuentes de infertilidad masculina. Se estima una alta incidencia en azoospérmicos con relación a oligozoospérmicos y una frecuencia de ocurrencia que varía entre el 2 (percent) y el 10 (percent). El 95(percent) de las deleciones clínicamente relevantes y reportadas en la literatura ocurren en una región conocida como factor de azoospermia y el 80(percent) de las deleciones corresponden a la región AZFc. Objetivo: Determinar la frecuencia de distribución de las microdeleciones del brazo largo del cromosoma Y. Método: Se estudiaron 71 hombres con azoospermia u oligozoospermia severa que consultaron diferentes centros de atención a las parejas infértiles, específicamente de La Habana y Mayabeque. Se realizó el análisis molecular de microdeleciones de la región AZF a través de la técnica STS-PCR-Multiplex, utilizando ADN genómico extraído de leucocitos de sangre periférica. A cada paciente se le analizaron los sitios de secuencias conocidos para las regiones AZFa, AZFb y AZFc. Resultados: Del total de pacientes estudiados 52 (73,2 (percent) presentaron azoospermia y 19 (26,8 percent) oligozoospermia severa. Se diagnosticó microdeleción en la región AZFc en 2 de los pacientes con azoospermia (2,8 percent). Conclusiones: La frecuencia de las microdeleciones del cromosoma Y en los pacientes estudiados es similar a la de otras poblaciones con diferentes orígenes…(AU)

Técnicas de biología molecular aplicadas al diagnóstico de enfermedades genéticas / Molecular biology techniques applied to the diagnosis of genetic diseases

Aunque el precio de secuenciar un genoma humano completo en la actualidad es una ínfima parte de lo que costó la obtención del primer borrador en 2001, la secuenciación de rutina de genomas completos sigue siendo económicamente inabordable para la mayoría de las instituciones. No obstante, hay un gran número de pruebas moleculares disponibles, que resultan de gran valor para el estudio de enfermedades genéticas: secuenciación Sanger, estudio de expansiones por análisis de fragmentos, estudios de metilación, cribaje de mutaciones mediante el ensayo de curva de disociación de alta resolución mediante PCR en tiempo real (qPCR-HRM), amplificación múltiple de sondas dependiente de ligación (MLPA), entre otras, las cuales son utilizadas dependiendo de las características de la enfermedad.(6,7) La secuenciación Sanger se recomienda cuando la enfermedad se produce por mutaciones específicas producidas en un solo gen, mientras que en las que hay heterogeneidad se recomienda realizar un cribaje de mutaciones, como es en el caso de Fibrosis Quística, Galactosemia, Gaucher, entre otras…(AU)

Detección de la mutación I172N en pacientes cubanos con hiperplasia suprarrenal congénita por insuficiencia de 21 hidroxilasa / Detection of the I172N Mutation in Cuban Patients with Congenital Adrenal Hyperplasia due to 21 Hydroxylase Insufficiency

Resumen Fundamento: la hiperplasia suprarrenal congénita constituye la causa más frecuente de ambigüedad sexual en la infancia y aproximadamente el 95 % de los casos son producto de mutaciones que ocurren en el gen que codifica la enzima 21α-hidroxilasa. El diagnóstico molecular constituye un elemento a considerar para el manejo y asesoramiento genético a pacientes y familiares en riesgo. Objetivo: identificar la mutación I172N, determinar su frecuencia en la población estudiada y su posible relación con los fenotipos clínicos encontrados. Métodos: se realizó un estudio descriptivo, de corte transversal, durante el período 2014-2016 a pacientes cubanos con diagnóstico de hiperplasia suprarrenal congénita por insuficiencia de 21-OH atendidos en el Instituto de Endocrinología de La Habana. El universo de estudio quedó constituido por 32 pacientes. Los resultados se presentaron en tablas o gráficos según fue más factible mostrar la información. Resultados: la mutación I172N fue identificada en individuos de ambos sexos y se estableció su relación con las formas clásicas de la enfermedad. En la población estudiada, se ubicó dentro de las tres mutaciones más frecuentes de las pesquisadas hasta el momento en el Centro Nacional de Genética Médica de la Habana a pacientes con hiperplasia suprarrenal congénita por insuficiencia de 21 OH. Conclusiones: el método estandarizado demostró ser reproducible y confiable para el diagnóstico molecular de los individuos con hiperplasia suprarrenal congénita por insuficiencia de 21-OH. La mutación I172N se ubica dentro de las tres más frecuentes en la población cubana estudiada y se relaciona con las formas clásicas de la enfermedad.

ABSTRACT Background: congenital adrenal hyperplasia is the most frequent cause of sexual ambiguity in childhood. Molecular diagnosis is an element to be considered for the management and genetic counseling of patients and relatives at risk. Objective: to identify the I172N mutation, to determine its frequency in the studied population and its possible relationship with the clinical phenotypes found. Methods: a descriptive, cross-sectional study was conducted during the 2014-2016 period for Cuban patients diagnosed with congenital adrenal hyperplasia due to 21-OH insufficiency treated at the Institute of Endocrinology of Havana. The universe consisted of 32 patients. The variables analyzed were: age, social sex, age at diagnosis, clinical form of hyperplasia, diagnosis by screening program, family history, consanguinity, nonspecific neonatal death, genital crisis of the newborn, previous molecular diagnosis, mutations studied previously, mutation I172N gene CYP21A. The results were presented in tables or graphs as it was more feasible to show the information. Results: the I172N mutation was identified in individuals of both sexes and its relation with the classic forms of the disease was established. In the studied population the three most frequent mutations of the researched ones, so far in the National Center of Medical Genetics of Havana to patients with congenital adrenal hyperplasia due to 21 OH insufficiency. Conclusions: the standardized method proved to be reproducible and reliable for the molecular diagnosis of individuals with congenital adrenal hyperplasia due to 21-OH insufficiency. The I172N mutation is among the three most frequent in the studied Cuban population and is related to the classic forms of the disease.

Estudio molecular del exón 3 del gen atp7b en pacientes cubanos con Enfermedad de Wilson / Molecular genetic analysis of exon 3 of the ATP7B gene in Cuban patients with Wilson's disease

Introducción: La Enfermedad de Wilson es una enfermedad con patrón de herencia autosómico recesivo. Es causada por las mutaciones en el gen atp7b. El exón 3 del gen atp7b es polimórfico y se informan más de 120 polimorfismos en el gen atp7b. Objetivo: Identificar los cambios conformacionales en el exón 3 del gen atp7b y detectar polimorfismos en pacientes cubanos con diagnóstico clínico presuntivo de la enfermedad de Wilson. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio descriptivo, en el Centro Nacional de Genética Médica y en el Instituto Nacional de Gastroenterología, durante el período 2007-2013, que incluyó 105 pacientes con diagnóstico clínico presuntivo de la enfermedad de Wilson. La extracción del ADN fue por la técnica de precipitación salina. Se utilizó la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa para la amplificación del fragmento de interés, y para detectar los cambios conformacionales y la presencia del polimorfismo p.L456V, se usó la técnica de Polimorfismo Conformacional de Simple Cadena, en el exón 3 del gen atp7b. Resultados: En el exón 3 se detectan los cambios conformacionales denominados b y c que correspondieron al polimorfismo p.L456V en estado heterocigótico y homocigótico respectivamente. La frecuencia alélica del polimorfismo p.L456V es de 41 por ciento. Las manifestaciones más frecuentes en los pacientes que presentaron este polimorfismo son las hepáticas. Conclusiones: Se identificó el polimorfismo p.L456V en 64 pacientes cubanos con diagnóstico clínico de la enfermedad de Wilson, lo cual posibilitará hacer estudios moleculares por métodos indirectos(AU)

Introduction: Wilson's disease is a rare inherited autosomal recessive disorder caused by mutations in the ATP7B gene. The exon 3 of the ATP7B gene is polymorphic, and more than 120 polymorphisms of this type have been reported in the literature. Objective: To identify conformational band shifts in exon 3 and detect polymorphisms of the ATP7B gene in Cuban patients, clinically diagnosed with Wilson's disease. Materials and Methods: A descriptive study including 105 patients with the clinical diagnosis of Wilson's disease was conducted at the National Center for Medical Genetics and the National Institute of Gastroenterology from 2007 to 2013. Salting-out protocol was used for DNA extraction. The Polymerase Chain Reaction was used to amplify the fragment of interest and the Single-Strand Conformational Polymorphism was applied in the region of exon 3 of the ATP7B gene to identify conformational changes and the presence of the polymorphism p.L456V. Results: The conformational change called B and C corresponded to the p.L456V polymorphism in the heterozygous and homozygous states, respectively. The allelic frequency of the p.L456V polymorphism in 105 Cuban patients clinically diagnosed with Wilson's disease was 41 percent. The most common manifestations in patients with this polymorphism were related to the liver. Conclusion: The p.L456V polymorphism was identified in 64 Cuban patients with Wilson disease, which will enable us to conduct molecular studies by indirect methods(AU)

Frecuencia de las mutaciones G85E y V754M en pacientes con diagnóstico clínico de fibrosis quística / Frequency of G85E and V754M mutations in patients with a clinical diagnosis of cystic fibrosis

La fibrosis quística es una de las enfermedades hereditarias más frecuentes a nivel mundial en poblaciones de origen caucásico. Presenta un patrón de herencia autosómico recesivo con una incidencia en Cuba de 1 en 9862 nacidos vivos. Se han descrito más de 2000 mutaciones que afectan el gen regulador de la conductancia transmembranal de la fibrosis quística. Objetivo: Determinar la frecuencia de las mutaciones G85E y V754M en pacientes cubanos diagnosticados con diagnóstico clínico de fibrosis quística. Métodos: En el presente estudio las mutaciones G85E y V754M se detectaron mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa-polimorfismo de longitud de los fragmentos en restricción. Resultados: De las 130 muestras analizadas, 7 resultaron positivas: 3 heterocigóticos y 1 homocigótico para V754M y 3 heterocigóticos para G85E. Conclusión: Las frecuencias resultaron para V754M y G85E de 1,9 y 1,2(percent), respectivamente. Con estos valores de frecuencia es factible considerar la introducción de la detección de estas mutaciones en el diagnóstico molecular de los pacientes cubanos con fibrosis quística…(AU)

PCR para la detección de la mutación p. W402X y su identificación en familias cubanas con síndrome de Hurler / PCR for determination of p. W402X mutation and its identification in Cuban families with Hurler syndrome

La mucopolisacridosis tipo I es una enfermedad genética de almacenamiento lisosomal con un modo de herencia autosómico recesivo. El síndrome de Hurler es la forma más severa de presentación. La causa molecular es la deficiencia en la actividad de la enzima αL-iduronidasa producto de mutaciones en el gen IDUA. La que con mayor frecuencia se ha identificado en Europa y América es la c.1205G>A; p.W402X. En Cuba, hasta este momento, no hay disponibles estudios moleculares.Objetivos: Introducir una técnica de PCR con digestión enzimática para la detección de la mutación p.W402X y caracterizar molecularmente a familias con síndrome de Hurler identificadas entre el 2008 y el 2018.Métodos: Se empleó ADN obtenido a partir de sangre seca impregnada en papel de filto. Se estandarizó un PCR con digestión enzimática producto de modificaciones realizadas al método descrito por Scott y otros en 1992. Se estudiaron cinco familias con algún miembro afectado con fenotipo Hurler.Resultados: En todas las familias estudiadas se identificó la mutación p.W402X; en tanto los pacientes mostraron una actividad enzimática de αL-iduronidase leucocitaria muy disminuida.Conclusiones: Dentro del espectro mutacional del gen IDUA responsable del síndrome de Hurler en Cuba en el periodo evaluado, la mutación p.W402X es la más frecuente. Por lo tanto, la técnica de biología molecular introducida debe ser muy efectiva para el diagnóstico molecular de esta entidad en el país…(AU)

Asociación de los polimorfismos T352C y A16974C con la lepra lepromatosa en pacientes cubanos / Association of T352C and A16974C polymorphisms with lepromatose leprosy in cuban patients

Introducción: La Lepra es una enfermedad infecciosa causada por el Mycobacterium leprae. Los patrones dermatoglíficos de pacientes cubanos con lepra lepromatosa mostraron indicios probatorios de que existe predisposición genética para el desarrollo de esta enfermedad, que sugiere la búsqueda de la asociación con polimorfismos moleculares, de mayor precisión. Entre estos, unos de los más estudiados son el T352C del gen del receptor de la vitamina D y el A16974C del gen IL12p40, cuya utilidad relativa depende de la población. Objetivo: Determinar si existe asociación entre la presencia de los polimorfismos T352C y A16974C con la lepra lepromatosa en pacientes cubanos. Material y Métodos: Se realizó un estudio observacional, analítico, de tipo caso-control de asociación genética donde se estudiaron pacientes con lepra lepromatosa y controles. Fueron identificados los genotipos relacionados con los polimorfismos T352C y A16974C en cada grupo. La prueba Chi-cuadrado de Pearson fue utilizada para determinar si los controles se hallaban en equilibrio de Hardy Weinberg, así como si existía relación entre los polimorfismos y la presencia de la enfermedad. Resultados: Los pacientes estudiados fueron 32 para el polimorfismo T352C y 44 para el A16974C. Los controles fueron 64 y 44, respectivamente; estos se hallaron en equilibrio Hardy-Weinberg. No se detectó asociaciónentre los polimorfismos A16974C y T352C con la lepra lepromatosa. Conclusiones: Los polimorfismos T352C y A16974C no son útiles como factor de riesgo predisponente en el grupo de pacientes cubanos con lepra lepromatosa estudiados(AU)

Introduction: Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae. Dermatoglyphic patterns of Cuban patients with lepromatose leprosy showed evidential signs of the existence of genetic predisposition to the development of this disease, which suggests a search for the association with molecular polymorphisms of higher degree of accuracy. Among them, some of the most studied are the T352C vitamin D receptor gene and the A16974Cof the IL12p40 gene, which relative usefulness depends on the population. Objective: To determine whether there is an association between the T352Cand A16974C polymorphisms with lepromatose leprosy in Cuban patients. Material and methods: An observational analytical case-control type genetic association study was conducted where patients with lepromatose leprosy and controls were studied. Genotypes related to T352Cand A16974C polymorphisms were identified in each group. Pearson´s chi square test was used to determine whether the controls were in Hardy-Weinberg equilibrium, and also whether there was a relation between polymorphisms and the presence of diseases. Results: There were 32 patients under study for T352C polymorphism, and 42 for A16974C. The controls were 64 and 44, respectively; and these were in Hardy-Weinberg equilibrium. No association between T352Cand A16974C polymorphisms with lepromatose leprosy was detected. Conclusions: T352Cand A16974C polymorphisms are not useful as a predisposing risk factor in the group of Cuban patients with lepromatose leprosy studied(AU)

Caracterización clínica y genética de la fibrosis quística en la provincia de Holguín / Clinical and genetic characterization of cystic fibrosis in Holguin province

Introducción: la fibrosis quística es una enfermedad genética caracterizada por alteraciones pulmonares crónicas, insuficiencia pancreática exocrina y una elevada concentración de los electrólitos en el sudor. Es causada por la presencia de mutaciones en el gen CFTR, que codifica para un canal de cloro denominado proteína reguladora de la conductancia transmembranal (CFTR), localizado en el cromosoma 7. Se hereda con carácter autosómico recesivo, y expresa gran heterogeneidad clínica y genética.Objetivo: describir las principales características clínicas y genéticas que presentan los enfermos con fibrosis quística en la provincia de Holguín.Método: se realizó un estudio descriptivo, tipo serie de casos, en el que la muestra estuvo formada por 22 pacientes con diagnóstico clínico y molecular de fibrosis quística en la provincia de Holguín, en el período de Enero de 2009 a Enero de 2016.Resultados: predominó el sexo masculino, con 15 afectados entre 6 a 10 años, el 81,8 por ciento de los pacientes presentó manifestaciones respiratorias crónicas, y el signo clínico más frecuentemente asociado fue la desnutrición en 14 enfermos (63,6 por ciento). Los heterocigóticos compuestos totalizaron el 59,09 por ciento, los homocigóticos el 40,9 por ciento, la mutación ΔF508 en forma homocigótica se presentó en solo 4 afectados, y heterocigótico compuesto en 7, para 31,8 por ciento.Conclusiones: la mutación más frecuentemente encontrada es la deleción ΔF508, y la enfermedad respiratoria crónica la manifestación clínica que predominó. Los pacientes homocigóticos a la mutación ΔF508 están más afectados desde el punto de vista clínico(AU)

Introduction: cystic fibrosis is one type of genetic disease characterized by chronic pulmonary alterations, exocrine pancreatic failure and high concentration of electrolytes in sweat. It is caused by mutations in CFTR gene that codes for a chlorine channel called transmembrane conductance regulator protein (CFTR) located in chromosome 7. It is a hereditary recessive autosomal disease and expresses great clinical and genetic heterogeneity.Objective: to describe the main clinical and genetic characteristics of patients with cystic fibrosis in Holguin province.Methods: a case-series descriptive study was conducted in a sample of 22 patients with clinical and molecular diagnosis of cystic fibrosis from Holguin province in the period of January 2009 through January 2016.Results: males predominated, 15 diagnosed patients aged 6 to 10 years, 81.8 percent of the sample presented with chronic respiratory manifestations and the most frequently associated sign was malnutrition in 14 patients (63.6 percent). The compound heterozygotes accounted for 59.09 percent and the homozygotes for 40.9 percent; homozygotic ΔF508 mutation affected 4 patients whereas compound heterozygotic form was seen in 7, representing 31.8 percent. Conclusions: the most found mutation is ΔF508 deletion and the predominant clinical manifestation is chronic respiratory disease. The patients with homozygotic ΔF508 mutation were the most clinically affected persons(AU)