ABSTRACT
Investigaram-se os eventos morfológicos relacionados ao desenvolvimento pré-natal de ovários de 81 embriões e fetos da raça Nelore, coletados em frigoríficos, com idades variando de 26 a 240 dias pós-fecundação. Observou-se formação da crista gonádica e presença de células germinativas em seu interior aos 29 e 34 dias, respectivamente. As oogônias e folículos primordiais, ao contrário dos folículos em crescimento, apresentaram diferenças significativas de diâmetro nos vários períodos estudados. Verificou-se correlação positiva (P<0,05) entre o diâmetro das oogônias e de seus núcleos, bem como entre o diâmetro dos folículos primordiais e em crescimento com seus oócitos e respectivos núcleos. A gônada apresentou-se completamente formada aos 40 dias. Folículos primordiais, em crescimento e antrais surgiram, aproximadamente, aos 95, 140 e 180 dias, respectivamente. Na raça Nelore, a oogênese tem início e duração semelhante à de raças taurinas, mas apresenta como peculiaridade a antecipação do surgimento da foliculogênese.
Subject(s)
Animals , Cattle , Cattle/anatomy & histology , Cattle/embryology , Gonads/anatomy & histology , Gonads/embryology , Ovary/anatomy & histology , Ovary/embryology , Sex Differentiation , Germ CellsABSTRACT
Murine and bovine embryos at the late morula stage were cultured in medium containing high-titer rat H-Y antisera. After 12h of incubation, embryos blocked at the late morulae stage were classified as males and those at the blastocyst stage were classified as females. Sexing of murine embryos by PCR and cytogenetics revealed that 83% of the embryos classified as males and 82% of those classified as females had their sex correctly predicted (P < 0.05). Bovine embryos were transferred to recipient females. Pregnancy rates were 71.4% (10/14) for embryos classified as males and 68.8% (11/16) for embryos classified as females. The sex was correctly predicted for 80% (8/10) of the embryos classified as males and for 81.8% (9/11) of those classified as females (overall accuracy, 80.9%, P < 0.05). Therefore, the induction of developmental arrest by high-titer male-specific antisera was an efficient strategy for non-invasive embryo sexing. The procedure was straightforward and has considerable commercial potential for sexing bovine embryos.
Subject(s)
Blastocyst , Cattle/embryology , Isoantibodies/pharmacology , Mice/embryology , Morula , Sex Determination Analysis/veterinary , Animals , Blastocyst/chemistry , Blastocyst/drug effects , Blastocyst/ultrastructure , Embryo Transfer/veterinary , Female , Male , Morula/chemistry , Morula/drug effects , Morula/ultrastructure , Polymerase Chain Reaction , Pregnancy , Sensitivity and Specificity , Sex Determination Analysis/methodsABSTRACT
A new device was developed to hold linear transducers for transvaginal follicle aspiration. Efficacy of follicle aspiration was compared using a linear 6 MHz and a convex 5 MHz transducer. Fifty-five cows were submitted to follicle aspiration at random days of the estrous cycle. Aspirations were conducted with linear (n=28) and convex (n=38) transducers with 18 G needles at a negative pressure corresponding to 13 ml H(2)O/min. A greater number of follicles were aspirated using convex than to linear probe (12.4 versus 7.8, respectively, P<0.05). Mean number of oocytes and recovery rates were similar for convex (5.4 and 48.6%) and linear (4.6 and 59.3%) transducers. Limited space between the linear transducer and needle guide restricted access to some portions of the ovary, reducing the number of follicles aspirated using a linear transducer. The newly developed adaptor allowed greater stability, holding the ovaries firmly against the linear transducer. This diminished mobility permitted a similar number of oocytes to be recovered with both transducers. In conclusion, this new adaptor provided a low cost alternative for routine follicle aspiration and oocyte recovery in cattle.
Subject(s)
Cattle/surgery , Oocytes/physiology , Ovarian Follicle/surgery , Tissue and Organ Harvesting/veterinary , Animals , Cattle/physiology , Female , Oocytes/diagnostic imaging , Ovarian Follicle/diagnostic imaging , Tissue and Organ Harvesting/methods , Tissue and Organ Harvesting/standards , Transducers/standards , Transducers/veterinary , UltrasonographyABSTRACT
We evaluated the relationship between follicle size and oocyte recovery (OR) using ultrasound-guided follicle aspiration. Thirty Holstein cows were subjected to OR without gonadotrophic therapy. Oocytes were recovered two to four times from each cow in a total of 67 aspiration sessions. Ovarian follicles with diameters < or =4 mm and >4 mm were aspirated in separated groups. Recovered oocytes from each group were kept separate and submitted to in vitro maturation, fertilization, and culture to the blastocyst stage. A total of 430 follicles were aspirated, of which 154 (35.8%) were from follicles >4 mm and 276 (64.2%) were from follicles < or =4 mm. Seventy-seven oocytes (50%) were recovered from follicles >4 mm and 200 (72.2%) were from follicles < or =4 mm. Nineteen blastocysts were obtained from follicles >4 mm, whereas 45 blastocysts were obtained from follicles < or =4 mm. Recovery rate was greater (P<0.01) in follicles < or =4 mm. Oocyte quality, cleavage rate and blastocyst development did not differ between different follicle sizes. Routine aspiration of small follicles (< or =4 mm) could increase the number of oocytes available for in vitro development.
Subject(s)
Oocytes , Ovarian Follicle/anatomy & histology , Tissue and Organ Harvesting/methods , Animals , Blastocyst , Cattle , Female , Fertilization in Vitro/veterinary , Oocytes/physiology , Suction , UltrasonographyABSTRACT
Avaliaram-se o efeito do IGF-I na maturaçäo in vitro (MIV) (experimento I) e no desenvolvimento embrionário (DE) (experimento II) de oócitos bovinos fecundados in vitro, quanto às taxas de clivagem (TC), de blastocistos (TB) e de eclosäo(TE). Para MIV, complexos cumulus-oócitos imaturos foram cultivados em meio TCM-199 suplementado com HEPES, bicarbonato e piruvato de sódio, aditivos, soro fetal bovino (meio B-199) e gonadotrofinas 14U/ml de PMSG e 7U/ml de hCG. Para o desenvolvimento embrionário, os oócitos/zigotos foram cultivados em meio B-199 com células epiteliais do oviduto bovino em suspensäo sob óleo de silicone. As condiçöes de cultivo in vitro para ambos os experimentos seguiram os tratamentos: 1- meio B-199 + 200 ng/ml IGF-I; 2- B-199 + 100 ng/ml IGF-I; 3- B-199 + 50 ng/ml IGF-I; 4- B-199 + 10 ng/ml IGF-I; 5- B-199 + 0 ng/ml IGF-I. Todas as culturas foram realizadas a 38,5§C em atmosfera com 5(porcento) de CO2 e os dados foram analisados pelo teste do qui-quadrado. No experimento I, näo houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto às TC, TB e TE, quanto ao meio de MIV foi suplemento com IGF-I. No experimento II, a adiçäo de IGF-I ao meio de DE resultou em aumento na TC (P<0,05) mas näo influenciou a TB e a TE. A adiçäo de 200 ng/ml de IGF-I ao meio DE melhorou a TC (71,1(porcento)) quando comparada com a TC dos grupos de 100 ng/ml de IGF-I (57,6(porcento)) ou controle (56,7(porcento)), entretanto näo houve diferença quando comparada com a dos grupos de 50 ng/ml (69,4(porcento)) ou 10 ng/ml (73,1(porcento)) de IGF-I. Näo houve efeito benéfico na adiçäo de 10 a 200 ng/ml de IGF-I nos meios de MIV e de DE com relaçäo ao desenvolvimento de embriöes produzidos a partir de oócitos maturados e fecundados in vitro
Subject(s)
Animals , Female , Cattle , Insulin-Like Growth Factor I , OocytesABSTRACT
O objetivo deste estudo foi mensurar as regiöes que compöem a garupa da vaca leiteira, com aparelho desenvolvido para esse fim, e avaliar o efeito dessas variáveis na contaminaçäo intra-uterina e na eficiência reprodutiva (intervalos parto-primeiro cio e parto-primeira inseminaçäo, número de serviços por concepçäo e período de serviço). Foram usadas 252 vacas Holandesas, paridas há mais de 30 dias e näo inseminadas. Realizaram-se medidas anatômicas da regiäo pélvica e do aparelho genital e cultivo bacteriológico de material uterino. A influência das variáveis independentes (mensuraçöes) sobre a presença de contaminantes intra-uterinos foi analisada por meio de regressäo logística, a da presença de contaminantes intra-uterinos sobre a eficiência reprodutiva, por análise de variância, e a das variáveis independentes (mensuraçöes) sobre a eficiência reprodutiva por meio de regressao linear múltipla. A presença de contaminantes intra-uterinos näo foi influenciada por nenhuma das variáveis. Staphylococcus sp. (29,6 por cento) foi o microrganismo mais encontrado no material uterino, seguido por Actinomyces pyogenes (26,0 por cento), Streptococcus sp. (22,2 por cento) e coliformes (22,2 por cento), porém essa contaminaçäo nao teve efeito negativo nos índices reprodutivos. Das medidas anatômicas avaliadas, as que influenciaram as características reprodutivas foram: abertura do ílio (maior abertura menor eficiência reprodutiva), localizaçäo do óstio cranial da cérvice (quanto mais abdominal, piores os índices reprodutivos) e presença de urovagina (influência negativa na taxa de concepçäo)
Subject(s)
Animals , Female , Cattle , Cattle , Cattle Diseases/etiology , Endometritis , Genitalia, Female/anatomy & histology , InfertilityABSTRACT
O presente estudo analisou o significado fisiológico do folículo dominante (FD) e sua remoçäo na resposta superovulatória de 42 vacas Nelore e testou a hipótese de que o número de folículos subordinados pequenos (3-8mm) poderia ser usado como critério único para a avaliaçäo da presença ou ausência de um FD nos ovários. Exames ultra-sonográficos foram realizados dois dias antes do início do tratamento superovulatório (D0) e as vacas foram divididas em três grupos: grupo sem FD (SFD), grupo com FD (FD) e grupo com um FD aspirado (FDA). A resposta superovulatória das doadoras näo diferiu entre os grupos, mas a taxa de viabilidade embrionária foi maior nos grupos SFD (69,40 por cento) e FDA (68,99 por cento) grupos, comparados ao FD (48,54 por cento). O número de estruturas näo fertilizadas näo diferiu entre os grupos SFD e FD nem entre SFD e FDA, mas foi maior no grupo FD comparados ao FDA. Pode-se concluir que, em vacas Nelore, a determinaçäo do número de folículos subordinados é um critério seguro para a avaliaçäo da presença ou ausência de um FD nos ovários, mas erros poderiam ser evitados se apenas folículos de 4-8mm fossem considerados, e que a presença de um FD no início da superovulaçäo reduz a taxa de viabilidade embrionária e sua remoçäo por aspiraçäo transvaginal guiada por ultra-som induziu taxas de viabilidade embrionárias semelhantes àquelas observadas na ausência de um FD
Subject(s)
Animals , Female , Cattle , Follicle Stimulating Hormone , SuperovulationABSTRACT
Avaliaram-se as condiçöes de cultura para maturaçäo dos oócitos (Exp. I) e o efeito do reprodutor (Exp. II) sobre as taxas de clivagem (TC) e de mórulas e blastocistos (MO/BL) produzidos in vitro. Oócitos imaturos foram submetidos a maturaçäo in vitro sob diferentes condiçöes: meio B-199, acrescido de 5 por cento de soro de vaca em estro (SVE), 5 por cento de soro fetal bovino (SFB) e células da granulosa (T1 subscrito/Exp. I) ou meio B-199, acrescido de 10 por cento de SFB, 14 UI/ml de PMSG e 7 UI/ml de hCG (T2 subscrito/Exp I). Após 24 h de cultura, os oócitos maturos foram inseminados com sêmen descongelado de dois reprodutores (R1 subscrito e R2 subscrito/Exp. II) e, após 48 h de incubaçäo, os embriöes de 2 e 4 células foram transferidos para placas de cultivo in vitro, onde permaneceram em cultura por mais 9 dias. No Exp. I, os oócitos de T1 subscrito e T2 subscrito foram inseminados com sêmen do R1 subscrito/Exp. II. No Exp. II, os oócitos do T1 subscrito/Exp. I foram inseminados com sêmen de R1 subscrito e R2 subscrito/Exp. II. No Exp. I, a TC foi superior (p<0,0l) para T2 subscrito, quando comparado com T1 subscrito. A produçäo de MO/BL näo foi diferente (p>0,05) entre tratamentos. No Exp. II, a TC e a taxa de MO/BL diferiram (p<0,05) para cada reprodutor. A adiçäo de hormônios no meio de maturaçäo, embora näo tenha interferido na produçäo de embriöes, parece ser um procedimento mais prático que o uso de células da granulosa. A utilizaçäo de sêmen de diferentes reprodutores afetou o subseqüente desenvolvimento embrionário in vitro
Subject(s)
Cattle , Fertilization , OocytesABSTRACT
O objetivo deste estudo foi identificar um marcador bioquímico de folículos bovinos com diâmetro maior do que 10 mm, o qual poderia ser utilizado para identificar folículos dominantes nesta espécie. Líquido folicular era aspirado de folículos com diâmetros menores do que 5 mm, entre 5 e 10 mm e maiores do que 10 mm, provenientes de ovários de 37 fêmeas bovinas abatidas. Após aspiraçäo, o líquido folicular (LF) era acondicionado em ependorfs etiquetados e congelados. Os padröes eletroforéticos em SDS-PAGE das proteínas do LF foram deteminados e verificou-se que os folículos com diâmetro maior do que 10 mm apresentaram um polipeptídeo com PM entre 39 e 43 KDa identificado como a proteína ligante de IGF-3 (IGFBP-3), o qual näo foi observado em folículos com diâmetro menor do que 5 mm e entre 5 e 10 mm. Este estudo sugere que este polipeptídeo possa ser utilizado como marcador bioquímico de folículos maiores do que 10 mm
Subject(s)
Animals , Female , Cattle , Follicular Fluid , Insulin-Like Growth Factor Binding Proteins , BiomarkersABSTRACT
Progesterone (P(4)), 17beta- estradiol (E(2)) and androstenedione (A(4)) plasma concentrations were correlated with palpated corpora lutea (CL), recovered embryos and viable embryos in 13 Nelore cows induced to superovulate with FSH, starting on Day 10 of the estrous cycle. Administration of FSH increased the number of ovulations and recovered embryos. Plasma P(4), E(2) and A(4) levels on Day 0 and of P(4) on Days 10 and 11 of the cycle were not correlated with the superovulatory response. Determination of CL by palpation per rectum was used to estimate the number of recovered embryos. Plasma P(4) levels higher than 1 ng/ml on the induced estrus day (Day 14) had an adverse effect on the embryo viability rate. Plasma E(2) concentrations on Day 14 were positively correlated with the number of viable embryos collected, a correlation that has not been previously reported. The present data indicate that plasma P(4) and E(2) concentrations in FSH-PGF2alpha-treated Nelore cows are useful for the identification of 2 different populations of Nelore donors and are correlated with superovulatory response and, particularly, with the number of viable embryos.
ABSTRACT
Thirteen cows, Bos indicus, of the Nellore breed were superovulated with 22 mg of follicle stimulating hormone (FSH) administered by intramuscular route during four consecutive days (D10, D11, D12 and D13), starting on the 10th day of the estrous cycle (day 0 = estrus). Prostaglandin (PGF2 alpha, 1.0 mg, im) was administered on D12, 48 h after the first FSH injection, for the induction of estrus on D14, when artificial insemination was performed. Seven days later (D21 of the cycle), embryos were collected, and evaluated, and the ovarian response was estimated on the basis of number of corpora lutea determined by rectal palpation. Blood samples were obtained for the determination of plasma 17-beta estradiol on D10, D11, D12, D13, D14 and D21 and plasma progesterone on D14 by RIA. The donors were divided into two groups according to progesterone levels on D14, the day of the induced estrus (GI: P4 < or = 1.00 ng/ml, N = 5 and GII: P4 > 1.00 ng/ml, N = 8). A linear positive correlation was observed between plasma 17-beta estradiol concentration on the day of estrus and viable embryo number. We conclude that plasma 17-beta estradiol and progesterone concentrations on the day of estrus can be used to predict the viability of embryos recovered from Nellore cows superovulated with FSH.
Subject(s)
Cattle/physiology , Embryo, Mammalian , Estradiol/blood , Estrus/physiology , Fetal Viability , Follicle Stimulating Hormone/administration & dosage , Ovulation Induction , Animals , Estrus/drug effects , Female , Follicle Stimulating Hormone/pharmacology , Injections, Intramuscular , Progesterone/blood , Prostaglandins/administration & dosage , Prostaglandins/pharmacology , Time FactorsABSTRACT
Thirteen cows, Bos indicus, of the Nellore breed were superovulated with 22 mg of follicle stimulating hormone (FSH) administered by intramuscular route during four consecutive days (D10, D11, D12 and D13), starting on the 10th day of the estrous cycle (day 0 = estrus). Prostaglandin (PGF2 alpha, 1.0 mg, im) was administered on D12, 48 h after the first FSH injection, for the induction of estrus on D14, when artificial insemination was performed. Seven days later (D21 of the cycle), embryos were collected, and evaluated, and the ovarian response was estimated on the basis of number of corpora lutea determined by rectal palpation. Blood samples were obtained for the determination of plasma 17-beta estradiol on D10, D11, D12, D13, D14 and D21 and plasma progesterone on D14 by RIA. The donors were divided into two groups according to progesterone levels on D14, the day of the induced estrus (GI: P4 < or = 1.00 ng/ml, N = 5 and GII: P4 > 1.00 ng/ml, N = 8). A linear positive correlation was observed between plasma 17-beta estradiol concentration on the day of estrus and viable embryo number. We conclude that plasma 17-beta estradiol and progesterone concentrations on the day of estrus can be used to predict the viability of embryos recovered from Nellore cows superovulated with FSH.