Immunoproteomics approach for the discovery of antigens applied to the diagnosis of canine visceral leishmaniasis.

In the present study, an immunoproteomic approach using Leishmania infantum parasites isolated from naturally infected dogs from an endemic region of the disease, was carried out to identify new antigens to be used in the diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL). Protein extracts, obtained from parasites isolated from asymptomatic (CanLA) and symptomatic (CanLS) dogs, were used to perform the two-dimensional gels. Western Blotting assays were carried out by employing a pool of sera from dogs with visceral leishmaniasis (CanLA or CanLS), healthy dogs from an endemic area, or dogs with similar diseases associated with cross-reactions (babesiosis and ehrlichiosis). With these results, it was possible to exclude the spots that showed a cross-reactivity of the sera from groups of healthy dogs, and those with babesiosis or ehrlichiosis. Taken together, 20 proteins were identified, 15 of which have already been described in the literature and 5 of which are hypothetical. An immunogenomic screen strategy was applied to identify conserved linear B-cell epitopes in the identified hypothetical proteins. Two peptides were synthesized and tested in ELISA experiments as a proof of concept for the validation of our immunoproteomics findings. The results demonstrated that the antigens presented sensitivity and specificity values ranging from 81.93% to 97.59% and 78.14 to 85.12%, respectively. As a comparative antigen, a preparation of a Leishmania extract showed sensitivity and specificity values of 75.90% and 74.88%, respectively. The present study was able to identify proteins capable of being used for the serodiagnosis of canine visceral leishmaniasis.

Monitoring the Establishment of VOC Gamma in Minas Gerais, Brazil: A Retrospective Epidemiological and Genomic Surveillance Study.

Since its first identification in Brazil, the variant of concern (VOC) Gamma has been associated with increased infection and transmission rates, hospitalizations, and deaths. Minas Gerais (MG), the second-largest populated Brazilian state with more than 20 million inhabitants, observed a peak of cases and deaths in March-April 2021. We conducted a surveillance study in 1240 COVID-19-positive samples from 305 municipalities distributed across MG's 28 Regional Health Units (RHU) between 1 March to 27 April 2021. The most common variant was the VOC Gamma (71.2%), followed by the variant of interest (VOI) zeta (12.4%) and VOC alpha (9.6%). Although the predominance of Gamma was found in most of the RHUs, clusters of Zeta and Alpha variants were observed. One Alpha-clustered RHU has a history of high human mobility from countries with Alpha predominance. Other less frequent lineages, such as P.4, P.5, and P.7, were also identified. With our genomic characterization approach, we estimated the introduction of Gamma on 7 January 2021, at RHU Belo Horizonte. Differences in mortality between the Zeta, Gamma and Alpha variants were not observed. We reinforce the importance of vaccination programs to prevent severe cases and deaths during transmission peaks.

Avaliação da exposição ocupacional ao benzeno em trabalhadores frentistas e analistas de combustíveis utilizando o Teste Cometa como biomarcador de genotoxicidade / Comet assay as a biomarker of genotoxicity to assess occupational exposure to benzene in gas-station attendants and fuel analysts

Resumo Introdução: frentistas e analistas de combustíveis estão expostos a vários compostos orgânicos voláteis presentes na gasolina, incluindo benzeno, que se destaca por sua importância toxicológica. Objetivo: avaliar a exposição ocupacional ao benzeno na gasolina, utilizando o Teste Cometa como biomarcador de genotoxicidade em comparação ao ácido trans,trans-mucônico urinário (AttM) como biomarcador de exposição ao benzeno. Métodos: estudo de corte transversal com análises de biomarcadores de exposição e de genotoxicidade em grupo de expostos ocupacionalmente ao benzeno através da gasolina e grupo controle. Resultados: o Teste Cometa mostrou uma média (desvio padrão) de índice de dano, expresso em unidades arbitrárias, no grupo exposto de 28,4 (10,1) significativamente mais elevado do que no grupo não-exposto, 18,4 (10,1). O AttM urinário, em mg/g de creatinina, foi significativamente maior no grupo exposto, 1,13 (0,45), em relação ao grupo não exposto, 0,44 (0,33). Os dois biomarcadores apresentaram boa correlação linear (r=0,81; p<0,05), indicando uma forte associação entre o biomarcador de exposição e o biomarcador de efeito. Conclusão: os resultados sugerem que uma maior exposição ocupacional ao benzeno está associada a um risco aumentado de dano genotóxico entre indivíduos expostos à gasolina.

Abstract Introduction: gas-station attendants and fuel analysts are exposed to various volatile organic compounds found in gasoline, including benzene, which stands out because of its toxicological significance. Objective: to assess occupational exposure to benzene using the comet assay as a biomarker of genotoxicity in comparison to the urinary trans, trans muconic acid (ttMA) as benzene exposure biomarker. Methods: cross-sectional study using biomarkers of exposure and genotoxicity analyses in a group of workers occupationally exposed to benzene from gasoline compared with a control group. Results: the comet assay results showed that the mean (standard deviation) damage index, in arbitrary units, in the exposed group, 28.4 (10.1), was significantly higher than in the non-exposed group, 18.4 (10.1). The mean value of urinary ttMA was significantly higher in the exposed group, 1.13 (0.45), compared to the non-exposed group, 0.44 (0.33). Both biomarkers showed a linear correlation r = 0.81 (p<0.05) indicating a strong association between the exposure biomarker and the biomarker effect. Conclusion: the results suggest that a greater occupational exposure to benzene is associated to an increased risk of genotoxic damage among individuals exposed to gasoline.

Alfa-Talassemias: aspectos moleculares e diagnóstico / Alpha-Thalassemias: molecular aspects and diagnosis

A α-talassemia é um dos distúrbios da síntese de hemoglobina mais comuns no mundo, sendo causada, principalmente,por mutações delecionais nos genes α-globínicos. De acordo com o número degenes mutados que varia de um a quatro, a α-talassemia pode ser divididaem quatro fenótipos: α-talassemia silenciosa, traço α-talassêmico, Doençade HbH e hidropsia fetal, espectivamente. Segundo a literatura, afrequência de α-talassemia no Brasil também é considerável, sendo de grande importância o diagnósticocorreto deste distúrbio, que pode ser realizado com auxílio de exames convencionais que apresentam vantagens e desvantagens. Contudo, em alguns casos, principalmente nas formas menores da α-talassemia, a confirmação diagnóstica só pode ser realizada através dos exames moleculares que, apesar de confirmatórios, não estão disponíveisem grande parte dos laboratórios de análises clínicas e, devido ao custo, não são acessíveis à população em geral..

Comparison of discriminative indices for iron deficiency anemia and ß thalassemia trait in a Brazilian population.

To discriminate iron deficiency anemia (IDA) from ß thalassemia trait (ßTT), several indices obtained from modern blood count analyzers have been reported. Discrimination power of seven indices to differentiate between IDA and ßTT, such as Green and King Index (GKI), RDW Index (RDWI), Srivastava Index (SRI), Mentzer Index (MI), Shine and Lal Index (SLI), Ehsani Index (EI), and Sirdah Index (SI), were evaluated. These indices were applied on 47 patients with ßTT and on 289 patients with IDA, as confirmed by gold standard tests. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, efficiency, area under receiver-operating characteristics curve (AUC), and Youden's Index (YI) were calculated. GKI and RDWI showed the highest reliability, as they had the largest AUCs (0.919, 0.912, respectively) and Youden's Index (70.4, 74.6, respectively). Conversely, SLI presented a less satisfactory performance (AUC = 0.786 and YI = 6.6). Data taken together suggest the superiority of GKI and RDWI to discriminate between IDA and ßTT.

Preeclampsia and ABO blood groups: a systematic review and meta-analysis.

Preeclampsia (PE) is a multifactorial pregnancy-specific syndrome which represents one of the leading causes of maternal mortality worldwide. Inherited thrombophilia have been investigated as risk factor for the development of PE and it is currently known that ABO blood group may impact haemostatic balance, having the non-O blood groups (A, B or AB) subjects increased risk for thrombus formation, as compared to those of group O. We performed a systematic review of the literature for published studies investigating whether ABO blood groups could influence PE developing. A sensitive search of four databases identified 45 unique titles. The retrieved papers were assessed independently by authors and a rigorous process of selection and data extract was conduct. Methodological quality of the included studies was also evaluated. Two studies met eligibility criteria. As a main finding of our systematic review, an association between the AB blood group and the occurrence of PE was detected based on two original studies. Considering the role of ABO blood groups on the hemostatic process and thrombus formation, special attention should be given to pregnant patients carrying the AB blood group in order to prevent the syndrome and improve prognosis.

Hemostatic changes in patients with type 2 diabetes mellitus

O diabetes tem adquirido um caráter de epidemia devido ao grande aumento do número de indivíduos acometidos nas últimas décadas. A mortalidade relacionada ao diabetes está associada a eventos trombóticos, principalmente cardiovasculares. De uma maneira geral, pacientes com diabetes apresentam um quadro de hipercoagulabilidade e hipofibrinólise; entretanto, ainda não foram esclarecidos os mecanismos que deflagram as alterações hemostáticas nos indivíduos diabéticos. O objetivo do presente artigo foi abordar as alterações mais frequentes do sistema hemostático descritas na literatura nos indivíduos diabéticos. Os indivíduos diabéticos apresentam alterações endoteliais, plaquetárias, nos fatores de coagulação, nos anticoagulantes naturais e no sistema fibrinolítico, sendo que essas alterações são causadas direta ou indiretamente pela hiperglicemia. Dessa forma, analitos como fator de Von Willebrand, fator VIII, fibrinogênio e D-dímero são marcadores que apresentam interpretações diferenciadas no contexto do paciente diabético. As evidências laboratoriais das alterações hemostáticas nos indivíduos diabéticos suportam a observação clínica de que o diabetes é um estado de hipercoagulabilidade e hipofibrinólise. Ainda não estão bem estabelecidas as estratégias de intervenção clínica e/ou medicamentosa frente aos resultados alterados do sistema hemostático.

Diabetes has acquired an epidemic character due to the large increase in the number of individuals affected over recent decades. Diabetes-related mortality is associated with thrombotic events, especially cardiovascular. In general, patients with diabetes present symptoms of hypercoagulability and hypofibrinolysis. However, the mechanisms that trigger hemostatic abnormalities in diabetic patients are not clear. The aim of this paper was to address the most frequent changes of the hemostatic system in diabetic patients described in the literature. Diabetics have abnormalities of the endothelium, platelets, clotting factors, natural anticoagulants and the fibrinolytic system; all these changes are directly and/or indirectly caused by hyperglycemia. Thus, analytes such as von Willebrand factor, factor VIII, fibrinogen and D-dimer are markers that should be interpreted differently in diabetic patients. Laboratory evidence of hemostatic abnormalities in diabetic patients supports clinical observations that diabetes is a state of hypercoagulability and hypofibrinolysis. Strategies for clinical intervention and medications are not well established considering the results of the hemostatic markers.

Type 2 diabetes: assessment of endothelial lesion and fibrinolytic system markers.

This study aimed to investigate whether endothelial cells are damaged and to evaluate fibrinolytic system function in patients with type 2 diabetes. For this proposal, plasma levels of von Willebrand factor (an endothelial marker of injury), homocysteine (an inductor of endothelial injury), D-dimer (a marker of coagulation cascade activation) and plasminogen activator inhibitor-1 (a fibrinolysis marker) were measured in individuals with both type 2 diabetes and high blood pressure, with type 2 diabetes, with high blood pressure and in healthy control individuals. No significant differences among groups were observed for von Willebrand factor and homocysteine plasma levels. The type 2 diabetes and high blood pressure group presented a significant difference to the other groups for D-dimer and also presented high values for plasminogen activator inhibitor-1. The high blood pressure group and type 2 diabetes group presented separately higher values of plasminogen activator inhibitor-1 compared with the control group. High levels of D-dimer and plasminogen activator inhibitor-1 in patients with type 2 diabetes and high blood pressure with normoalbuminuria therefore indicate a state of hypercoagulability and hypofibrinolysis, despite no evident microvascular injury supported by normal levels of von Willebrand factor and homocysteine.

Avaliação da anticoagulação natural em pacientes com diabetes mellitus tipo 2 / Natural anticoagulation evaluation in type 2 diabetes

INTRODUÇÃO: Alterações no mecanismo hemostático têm sido associadas ao desenvolvimento de complicações vasculares em indivíduos com diabetes mellitus tipo 2 (DM2). A eficiência dos mecanismos da anticoagulação natural mediados pelas proteínas C (PC) e S (PS), bem como pela antitrombina (AT), depende da integridade da célula endotelial. Sendo assim, a avaliação dos níveis plasmáticos dessas proteínas poderia fornecer importantes informações acerca da anticoagulação natural que se contrapõe ao estado de hipercoagulabilidade no diabetes. OBJETIVO: O presente estudo teve como objetivo a determinação dos níveis de AT, PC e PS e dos co-fatores fator V (FV) e fator VIII (FVIII) em indivíduos com e sem DM2 e hipertensão arterial sistêmica (HAS). MATERIAL E MÉTODOS: Indivíduos hígidos (controles, n = 16), pacientes com DM2 (n = 7), com hipertensão (HAS, n = 12) e com DM2 associado à HAS (DM2 + HAS, n = 18) foram incluídos neste estudo para avaliação da anticoagulação natural. RESULTADOS: Para os níveis de AT o grupo HAS apresentou níveis aumentados em relação ao controle. O grupo DM2 + HAS apresentou níveis aumentados de PC. Para a PS não foi encontrada diferença significativa entre os grupos. O aumento do FV ocorreu apenas no grupo DM2 + HAS; já para o FVIII não foi encontrada diferença significativa entre os grupos. CONCLUSÕES: O aumento da AT é ainda pouco conhecido no meio científico; outros estudos já observaram aumento de PC em pacientes com DM2 e normoalbuminúria, entretanto o mecanismo permanece desconhecido. O aumento de FV observado no grupo DM2 + HAS e não no grupo DM2 pode acontecer em decorrência da HAS. Como o FVIII é uma proteína de fase aguda, a ausência de diferença significativa entre os grupos indica que os indivíduos avaliados não apresentavam processos inflamatórios importantes.

Comparação dos métodos molecular (PCR-RFLP)e coagulométrico para a detecção de fator V Leiden/resistência à proteína C ativada / Comparison of the methods molecular (PCR-RFLP) and coagulométrico for the detention of factor V Leiden/resistance to activated protein C

A proteína C (PC) é um anticoagulante natural, cuja ação consiste em clivar os fatores Va e VIIIa e, desta forma, limita a formação da trombina. O fator V Leiden (F V Leiden) é resultante da mutação G1691A no gene do fator V e leva a resistência à ação da proteína C ativada (rPCA). A detecção de Fator V Leiden é usualmente feita por método molecular, através da reação em cadeia dapolimerase e polimorfismo de restrição (PCR-RFLP). Esta técnica é bastante complexa e não está, ainda, ao alcance dos laboratórios de menor porte. No entanto, a rPCA pode ser avaliada por método coagulométrico, accessível a todos os laboratórios. O objetivo do presenteestudo foi avaliar a eficácia do método coagulométrico para detecção da resistência hereditária à proteína C ativada, comparando-se os resultados obtidos por esse método e pela detecção de Fator V Leiden por PCR-RFLP. Os participantes deste estudo foram selecionadosdentre indivíduos portadores de mutação de importância em trombofilia, porém assintomáticos, pertencentes a famílias de pacientes que já sofreram evento trombótico (portadores de mutações de importância em trombofilia). O primeiro grupo (grupo I) foi composto por não-portadores da mutação G1691A (n=57) e o segundo (grupo II) por portadores da mutação G1691A (no gene do FV)em heterozigose (n=25). O teste molecular foi feito por reação em cadeia da polimerase, seguida da digestão com endonucleases de restrição (PCR-RFLP) e o método coagulométrico, utilizando-se o conjunto diagnósticoCOATEST APC RESISTANCE V da CHROMOGENIX.Os resultados obtidos demonstraram uma grande concordância entre a identificação do FV Leiden por PCR e detecção de rPCA por método coagulométrico utilizando plasma deficiente em FV. Todos os portadores da mutação G1691A (no gene do FV) apresentaram resistência à proteína Cativada e essa resistência não foi observada entre os não-portadores. Esses resultados permitem concluir que o teste coagulométrico com diluição em plasma deficiente em FV,...