[First isolate of Encephalitozoon intestinalis from stools of a Colombian patient with AIDS]. / Primer aislamiento de Encephalitozoon intestinalis a partir de muestra de materia fecal de un paciente colombiano con sida.

INTRODUCTION: Microsporidia are obligate intracellular parasites that are recognized as important opportunistic pathogens of immunocompromised and transplanted patients. Enterocytozoon bieneusi and, less frequently, Encephalitozoon intestinalis are the most prevalent species in humans; both of them are associated with enteric infections. Cell cultures have been useful in the study of microsporidia biology. In Colombia, however, no isolates of microsporidia from patients with AIDS have been obtained. OBJECTIVE: A cell culture of intestinal microsporidia was established from stools of positive patients in order to isolate a native strain. MATERIALS AND METHODS: Stool from a single AIDS patient was concentrated with the water-ether technique, and the sediment was treated with a mixture of antibiotics and antifungal agents for 18 hours at 37 degrees C. Vero cells were cultivated in 24-well plates with Gibco RPMI medium supplemented with 10% bovine fetal serum and antibiotics. The culture was subsequently inoculated with previously concentrated spores. The medium was changed every second day and the presence of spores was evaluated with the Quick Hot Gram chromotrope stain. RESULTS: Two weeks post-infection, microsporidial spores were identified with characteristic morphology and staining properties. PCR results showed that Encephalitozoon intestinalis was the isolated species. CONCLUSIONS: A cell culture of microsporidia was established from a stool sample. This protocol is important to isolate and maintain additional native Colombian strains and it will contribute to biochemical, immunological and epidemiological studies of the currently established strain.

Primer aislamiento de Encephalitozoon intestinalis a partir de muestra de materia fecal de un paciente colombiano con sida / First isolate of Encephalitozoon intestinalis from stools of a Colombian patient with AIDS

Introducción. Los microsporidios son agentes de infecciones oportunistas en pacientes con sida y con trasplantes, principalmente. Enterocytozoon bieneusi y Encephalitozoon intestinalis son los más frecuentes, asociados con infecciones entéricas. Los cultivos celulares han contribuido al conocimiento de los microsporidios. En Colombia no se han obtenido aislamientos provenientes de pacientes con microsporidiosis y, por consiguiente, no existen cepas autóctonas de los mismos. Objetivo. Establecer el cultivo celular de microsporidios intestinales a partir de materia fecal de pacientes parasitados. Materiales y métodos. Se realizó concentración agua-éter de la materia fecal positiva para microsporidios y el sedimento resultante se trató con una mezcla de antibióticos y antimicóticos durante 18 horas a 37 oC. Se inocularon células Vero previamente cultivadas en placas de 24 pozos y en medio RPMI con suplemento de suero bovino fetal al 10 por ciento y antibióticos, con las esporas concentradas. Los cultivos se mantuvieron a 37 oC al 5 por ciento de CO2. Se cambió de medio cada dos días y se evaluó la presencia de esporas en los sobrenadantes mediante Gram-cromótropo rápido en caliente. Resultados. En la segunda semana después de la infección, se encontraron esporas de microsporidios con morfología y coloración características. Mediante PCR se determinó que el microsporidio encontrado correspondía a la especie E. intestinalis. Conclusión. Se estableció el cultivo in vitro de microsporidios de materia fecal. Este protocolo es importante para la obtención y el mantenimiento de cepas autóctonas en Colombia, y contribuirá a las investigaciones de aspectos bioquímicos, inmunológicos y epidemiológicos de dichas cepas.

Frecuencia de microsporidiosis intestinal en pacientes positivos para VIH mediante las técnicas de Gram cromotropo rápido y PCR / Frequency of intestinal microsporidian infections in HIV-positive patients, as diagnosis by quick hot Gram chromotrope staining and PCR

Los microsporidios son protozoos intracelulares obligados, implicados en procesos de diarrea persistente en pacientes con sida, aunque no son exclusivos de este grupo de pacientes. La prevalencia de microsporidios en diferentes países varía entre 8 por ciento y 52 por ciento. En nuestro medio no se conoce su frecuencia, por lo que este trabajo se propuso determinar la frecuencia de microsporidiosis intestinal en pacientes positivos para VIH, mediante la prueba del Gram cromotropo rápido ( quick hot Gram) y la PCR; para esto se realizó un estudio prospectivo, descriptivo, con una población intencional de todos los pacientes positivos para VIH remitidos al Laboratorio del Grupo Interdisciplinario para el Estudio de las Parasitosis Intestinales por las diferentes instituciones de atención de pacientes positivos para VIH de Medellín en el periodo comprendido entre agosto de 2001 y septiembre de 2002. Se hizo una encuesta clínico-epidemiológica y se practicaron análisis coprológicos seriados que incluían examen directo, por concentración y tinciones especiales para coccidias y microsporidios intestinales; además, se solicitó recuento de linfocitos TCD4+ y carga viral. Se estudiaron 103 pacientes en edades comprendidas entre 2 y 74 años; el 70 por ciento(72/103) presentaba diarrea al ingreso al estudio; la mayoría (83,5 por ciento) fueron hombres. La frecuencia global de microsporidiosis intestinal fue de 3,9 por ciento(4/103); se encontraron tres pacientes positivos para Enterocytozoon bieneusi y uno con Encephalitozoon intestinalis; otras parasitosis intestinales representaron el 39,8 por ciento. La frecuencia de microsporidiosis en este estudio fue relativamente baja; además, como era de esperarse, la mayoría de los casos de microsporidios estuvieron asociados con diarrea prolongada y recuentos de LTCD4+ menores de 100 cél/µl y cargas virales superiores a 100.000 copias (3/4)

[Frequency of intestinal microsporidian infections in HIV-positive patients, as diagnosis by quick hot Gram chromotrope staining and PCR]. / Frecuencia de microsporidiosis intestinal en pacientes positivos para VIH mediante las técnicas de Gram cromotropo rápido y PCR.

Microsporidia are intracellular obligate parasites, today mainly associated with diarrhea in AIDS patients. Microsporidia prevalence ranges from 8% to 52% in different countries, as evaluated by several diagnostic methods, such as the stain test and PCR. In Medellín, Colombia, its frequency is unknown, and hence, a study was undertaken to determine the frequency of intestinal microsporidiosis in HIV patients, by means of the quick-hot Gram chromotrope test and the PCR. A prospective and descriptive study of an intentional population of all HIV-positive patients was sent to the Grupo Interdisciplinario para el Estudio de las Parasitosis Intestinales laboratory by institutions treating the HIV-positive patients of Medellín between August 2001 and September 2002. The clinical-epidemiological survey included a serial stool test with direct concentration and special stains for coccidiae and intestinal microsporidia. In addition, counts of lymphocytes TCD4+ and viral load were requested. One hundred and three patients with ages ranging from 2-74 years were evaluated. Seventy percent presented with diarrhea--mostly in men (83.5%). The overall frequency of intestinal microsporidiosis was 3.9% and that of other intestinal parasitic infections was 39.8%. Three of the four patients positive for microsporida were infected with Enterocytozoon bieneusi and one with Encephalitozoon intestinalis. The microsporidiosis frequency was relatively low with 3 of the 4 cases associated with protracted diarrhea, counts of LTCD4+ below 100 cel/microl and viral loads up to 100,000 copies.