Spermatogenesis in a neotropical marsupial species, Philander frenatus (Olfers, 1818).

Despite the singular morphology of the male genital system and the different reproductive strategies of marsupials, little emphasis has been given to the testis morphology and spermatogenic kinetics in this mammalian order. The present study aimed to investigate the testis function and the duration of spermatogenesis in the southeastern four-eyed opossum, Philander frenatus. Testes of six adult males were routinely processed for histological and stereological analyses. In order to determine the duration of spermatogenesis, intratesticular injections of tritiated thymidine were performed 1h, 13days and 21days before the sacrifice. Based on the development of the acrosomic system, ten stages of the seminiferous epithelium cycle were characterized. The mean body and testis weights for the P. frenatus were respectively 326±20g and 0.4±0.05g, providing a gonadosomatic index of 0.3±0.02%. The most advanced germ cell types labeled at 1h, 13days and 21days after thymidine injections were, respectively, preleptotene spermatocytes at stage IV, pachytene spermatocytes at stage IV and diplotene spermatocytes at stage IX. Based on the stages frequencies and the most advanced labeled germ cells, each spermatogenic cycle and the entire spermatogenic process lasted respectively 13.5±0.5 and 60.9±2.4days. When compared to the vast majority of eutherian mammals already investigated, these data indicate that the Philander frenatus presents a relatively long duration of spermatogenesis.

Activation of endogenous angiotensin converting enzyme 2 prevents early injuries induced by hyperglycemia in rat retina

Diabetic retinopathy (DR) is a serious complication of diabetes mellitus that may result in blindness. We evaluated the effects of activation of endogenous angiotensin converting enzyme (ACE) 2 on the early stages of DR. Rats were administered an intravenous injection of streptozotocin to induce hyperglycemia. The ACE2 activator 1-[[2-(dimethylamino) ethyl] amino]-4-(hydroxymethyl)-7-[[(4-methylphenyl) sulfonyl] oxy]-9H-xanthone 9 (XNT) was administered by daily gavage. The death of retinal ganglion cells (RGC) was evaluated in histological sections, and retinal ACE2, caspase-3, and vascular endothelial growth factor (VEGF) expressions were analyzed by immunohistochemistry. XNT treatment increased ACE2 expression in retinas of hyperglycemic (HG) rats (control: 13.81±2.71 area%; HG: 14.29±4.30 area%; HG+XNT: 26.87±1.86 area%; P<0.05). Importantly, ACE2 activation significantly increased the RCG number in comparison with HG animals (control: 553.5±14.29; HG: 530.8±10.3 cells; HG+XNT: 575.3±16.5 cells; P<0.05). This effect was accompanied by a reduction in the expression of caspase-3 in RGC of the HG+XNT group when compared with untreated HG rats (control: 18.74±1.59; HG: 38.39±3.39 area%; HG+XNT: 27.83±2.80 area%; P<0.05). Treatment with XNT did not alter the VEGF expression in HG animals (P>0.05). Altogether, these findings indicate that activation of ACE2 reduced the death of retinal ganglion cells by apoptosis in HG rats.

Activation of endogenous angiotensin converting enzyme 2 prevents early injuries induced by hyperglycemia in rat retina.

Diabetic retinopathy (DR) is a serious complication of diabetes mellitus that may result in blindness. We evaluated the effects of activation of endogenous angiotensin converting enzyme (ACE) 2 on the early stages of DR. Rats were administered an intravenous injection of streptozotocin to induce hyperglycemia. The ACE2 activator 1-[[2-(dimethylamino) ethyl] amino]-4-(hydroxymethyl)-7-[[(4-methylphenyl) sulfonyl] oxy]-9H-xanthone 9 (XNT) was administered by daily gavage. The death of retinal ganglion cells (RGC) was evaluated in histological sections, and retinal ACE2, caspase-3, and vascular endothelial growth factor (VEGF) expressions were analyzed by immunohistochemistry. XNT treatment increased ACE2 expression in retinas of hyperglycemic (HG) rats (control: 13.81±2.71 area%; HG: 14.29±4.30 area%; HG+XNT: 26.87±1.86 area%; P<0.05). Importantly, ACE2 activation significantly increased the RCG number in comparison with HG animals (control: 553.5±14.29; HG: 530.8±10.3 cells; HG+XNT: 575.3±16.5 cells; P<0.05). This effect was accompanied by a reduction in the expression of caspase-3 in RGC of the HG+XNT group when compared with untreated HG rats (control: 18.74±1.59; HG: 38.39±3.39 area%; HG+XNT: 27.83±2.80 area%; P<0.05). Treatment with XNT did not alter the VEGF expression in HG animals (P>0.05). Altogether, these findings indicate that activation of ACE2 reduced the death of retinal ganglion cells by apoptosis in HG rats.

Estudo botânico, fitoquímico e fisico-químico de Euphorbia hirta L. (Euphorbiaceae) / Botanical, phytochemical and physicochemical study of Euphorbia hirta L. (Euphorbiaceae)

Euphorbia hirta L., popularmente conhecida por erva andorinha, tem sido utilizada no tratamento de distúrbios respiratórios e como antiespasmódico. Esse trabalho foi realizado com a finalidade de determinar as características macroscópicas e microscópicas das folhas, caule e raiz dessa planta, uma vez que estas são as partes usadas popularmente. Algumas características de valor na sua diagnose foram apontadas e ilustradas por fotomicrografias. Reações de fitoquímica e a determinação do conteúdo de água e de cinzas foram realizadas no pó obtido da planta inteira, parte essa utilizada na fitoterapia Ayuverda. Na prospecção fitoquímica foram encontrados flavonóides, mucilagem, resinas e cumarinas. Na determinação do teor de água, de cinzas totais e de cinzas insolúveis em ácido, os valores encontrados foram 8,99%, 9,35%, 0,75%, respectivamente. Com o desenvolvimento deste trabalho foi possível obter parâmetros para o controle de qualidade das folhas, caule e raízes de E. hirta.

The Euphorbia hirta L. has been used in the treatment of respiratory disorders and as an antispasmodic. This work was carried out to determine the macroscopic and microscopic characteristics of the leaves, stems and roots of this plant, as these parts are commonly used. Some features of value in their diagnosis were identified and illustrated by photomicrographs. Phytochemical reactions and determination of water and ash contents were carried out in the powder obtained from the whole plant, the part used in Ayurveda phytomedicine. In phytochemical screening, we found flavonoids, mucilage, resins and coumarins. The values of water content, total ashes and acid insoluble ashes were 8.99%, 9.35%, 0.75%, respectively. The data obtained are important for the quality control of the leaves, stems and roots of E. hirta.

Análise histológica e histoquímica de cistos intra-epiteliais de tubas uterinas de novilhas mestiças / Histological and histochemical analysis of intraepithelial cysts of the uterine tubes of crossbred heifers

Tubas uterinas de 21 novilhas mestiças Bos taurus taurus Bos taurus indicus, em diferentes fases do ciclo estral natural (estro, metaestro e diestro) ou induzido pelo tratamento superovulatório (estro e metaestro superovulados), foram avaliadas quanto à presença de cistos intra-epiteliais e à caracterização histoquímica de seu conteúdo. Verificou-se a ocorrência de cistos intra-epiteliais nas tubas uterinas em todos os animais, mais freqüentes nas regiões do infundíbulo e ampola. Eles ocorreram nos lados direito e esquerdo, ipsi- e contralateral ao ovário ativo (folículo pré-ovulatório ou corpo lúteo), nas fases estrogênica e progesterônica do ciclo. No conteúdo cístico, houve predominância de mucinas neutras e ácidas carboxiladas, sendo as mucinas sulfatadas presentes em menor intensidade, e não se observou glicogênio. Os resultados sustentam a hipótese de que esses cistos formam-se pela fusão de luminações intracitoplasmáticas e/ou vacúolos ciliados do epitélio tubário.

Atividade secretória de tubas uterinas com e sem patologia de porcas adultas nas fases folicular e luteínica / Secretory activity of uterine tubes with and without alterations of sexually mature sows in the folicular and luteal phases

Descrevem-se as características anatomopatológicas e histoquímicas de 124 tubas uterinas de porcas (matrizes) abatidas em matadouros, nas fases folicular e luteínica do ciclo estral. As tubas uterinas foram distribuídas em quatro grupos: LSP- fase luteínica sem patologia tubárica (n=45), LCP- fase luteínica com patologia tubárica (n=19), FSP- fase folicular sem patologia tubárica (n=45) e FCP- fase folicular com patologia tubárica (n=15). Para estudo histoquímico de mucossubstâncias foram utilizadas as colorações de periodic acid Schiff (PAS) com e sem digestão prévia pela amilase salivar e Alcian Blue (AB) em pH 2,5 e 0,4. Utilizou-se a coloração de Ninhidrina-Schiff para evidenciação de proteínas ricas em radicais -NH2. Foram observadas alterações em 34 tubas uterinas. Independente da fase do ciclo estral, as patologias mais comumente encontradas foram os cistos de parede e a metaplasia escamosa. Em menor número foram observados divertículo e adenomiose. A ampola e o infundíbulo foram os segmentos mais afetados. Na fase folicular, o infundíbulo apresentou maior intensidade de secreção de mucossubstâncias neutras e AB 2,5-positivas. Na ampola houve maior intensidade de secreção de mucossubstâncias AB 2,5-positivas, sulfomucinas e de proteínas ricas em radicais -NH2. As patologias não reduziram significativamente a secreção de mucossubstâncias nas regiões adjacentes em nenhum dos segmentos tubáricos, tanto na fase luteínica quanto na folicular. Nas áreas de metaplasia escamosa do epitélio tubárico e nos cistos de parede houve redução da secreção de mucossubstâncias neutras e ácidas.

Altura do epitélio da tuba uterina normal e patológica de porcas nas fases folicular e luteínica / Epithelium of the uterine tube of sows in the folicular and lutheal phases

The aim of this work was to perform a morphometric analysis of the uterine tube epithelium of sexually mature sows, with or without pathological changes. The sows were either in follicular or luteal phases. One hundred and twenty-four uterine tubes of sixty-two sows were obtained from slaughterhouses. Sections of the uterine tube, uterus and ovary were processed for morphometrical evaluation. The uterine tubes were divided into four groups. The first (LSP) group was composed by animals in luteal phase without pathological changes (n=45), the second (LCP) by animals in luteal phase with pathological changes (n=19), the third (FSP) by animals in follicular phase without pathological changes (n=45) and the fourth (FCP) by animals in follicular phase with pathological changes (n=15). In the follicular phase (FSP), the ampulla had a higher epithelium, followed by the infundibulum and the isthmus (P<0.05). Tubal epithelium was higher in the animals of FSP and FCP groups when compared to LSP and LCP, suggesting that estrogens influence epithelial height. In the isthmus, there were significant differences between FSP and LSP groups (P<0.05). These results indicate that the porcine uterine tube epithelium changes its height during the estrous cycle. The epithelial height does not appear to be influenced by tubarian pathologies

Effect of pinealectomy, adrenalectomy, pinealectomy plus adrenalectomy upon the quantification of spermatogenic cells of adult rats

The objectives of this study were to evaluate the effects of pinealectomy, adrenalectomy and pinealectomy-adrenalectomy upon the quantification of spermatogenic cells of rats. As such, 32 adult Wistar rats with a mean body weight of 331.7± 15.5g were assigned into one of the following treatments: (a) a sham-operated control group, consisting of nine animals; (b) ten pinealectomized animals; (c) seven adrenalectomized animals and (d) six pinealectomized plus adrenalectomized animals. No significant differences were observed between groups for the following parameters: body, testes, prostate and seminal vesicle weights, seminiferous tubular diameter, number of cells per seminiferous tubular cross sections (primary spermatocytes at pachytene, round spermatids, Sertoli cells) and numbers of germ cells per Sertoli cell (primary spermatocytes at pachytene and round spermatids ). Although no increase in testicular weight was observed following pinealectomy, a significant (P<0.05) increase of approximately 11.5 percent in the number of round spermatids per Sertoli cell (Sertoli cell ratio) occurred thus suggesting that short-term pinealectomy abolishes the antigonadal effect of the pineal gland upon adult Wistar rat testes

Argyrophilic and glucagon-immunoreactive cells in the ileum and colon of the developing opossum Didelphis albiventris (Marsupialia).

The ontogenesis of glucagon-producing cells of the ileum and colon of pouch young and of weaned and adult opossums Didelphis albiventris was studied in comparison with the endocrine argyrophilic cell population development. In the ileum, the mean population of argyrophilic cells/mm(2) increased with ontogenesis from 122.9 +/- 18.7 in the pouch young to 211.4 +/- 48.9 in adult animals, while the number of glucagon-immunoreactive cells/mm(2) remained practically constant, i.e. 29.2 +/- 7.3 in the pouch young and 28.1 +/- 5.0 in the adult animal. In the colon, the population of argyrophilic cells/mm(2) remained constant throughout ontogenesis, i.e. 45.8 +/- 6.2 in the pouch young and 48.9 +/- 10.4 in the adult animals. In turn, the enteroglucagon-producing cells increase in number from 4.5 +/- 2.9 to 14.6 +/- 5.2 cells/mm(2) from the pouch young to the adult. We conclude that the intestinal glucagon-producing cells of D. albiventris present a differentiated development in the ileum and colon. This fact suggests that glucagon-immunoreactive cells may play a distinct role in these segments of the intestine during ontogenesis.

Aspectos morfológicos e patológicos da rete ovarii em ovinos - Ovis aries / Morphological and pathological aspects of the rete ovarii in sheep (Ovis aries)

Foram analisados histologicamente 64 ovários de ovelhas lanadas adultas, procedentes do Centro de Pesquisa dos Campos Sul Brasileiros-Embrapa, Bagé-RS. Constatou-se, em 55 dos 64 ovários (85,9 por cento), a presença da rete ovarii, localizada no tecido periovariano, no hilo, na medular ou na cortical. A semelhança do observado em outros mamíferos, a rete ovarii na ovelha é morfologicamente dividida em três porçöes: rete intra-ovárica, rete conectante e rete extra-ovárica. Em cinco ovários (7,8 por cento) foi possível verificar uma continuidade entre a rete extra-ovárica e a tuba uterina sugerindo uma conexäo tubo-retial, de maneira similar à descrita para bovinos e para a corça. Quanto à patologia da rete, observaram-se a formaçäo de cistos envolvendo a rete conectante e/ou extra-ovárica em sete casos (10,9 por cento) e um caso de hiperplasia da rete extra-ovárica (1,6 por cento)

Níveis de glicogênico, frutose e ácido cítrico na próstata do gambá Didelphis albiventris nos períodos de acasalamento e näo acasalamento / Glicogen, fructose and citric acid levels in the prostate of the Brazilian opossum Didelphis albiventris, Marsupialia, during mating and non-mating periods

O presente trabalho relata os níveis teciduais de glicogênio, frutose e ácido cítrico na próstata do gambá (Didelphis albiventris) com o objetivo de verificar possível variaçäo sazonal na atividade secretora dos diferentes segmentos glandulares (cranial, médio e caudal). O peso da próstata dos animais do período de acasalamento é maior que aquele dos animais no período de näo acasalamento. As concentraçöes de ácido cítrico nos segmentos prostáticos médio e caudal diferem nos dois períodos. As concentraçöes de glicogênio e frutose no segmento caudal säo mais altas no período de acasalamento, sugerindo uma atividade secretora sazonal

Ultrastructural pattern of glucagon producing-cells in the gastric mucosa of the developing opossum Didelphis albiventris (Marsupialia).

Gastric glucagon-producing cells of the pouch young, weaned and adult opossum Didelphis albiventris were investigated by immunocytochemical and ultrastructural methods. In sections of the oxyntic mucosa stained by immunoperoxidase it was observed that glucagon-immunoreactive cells increased in number during pouch development (from 7.9 +/- 4.7 to 35.4 +/- 5.9 cells/mm2), decreasing progressively to weaned (14.2 +/- 4.8 cells/mm2) and adult animals (10.4 +/- 3.0 cells/mm2). The glucagon-immunoreactive cells presented numerous electrondense, round cytoplasmic granules surrounded by a membrane. Frequently, the dense core of the granules was separated from the enveloping membrane by a delicate electronlucent halo or by a less electrondense peripheral halo. This pattern of the granular component was similar to the ultrastructural morphology observed in pancreatic islet glucagon-producing cells and A-like cells of the gastric mucosa of those eutherian mammals studied so far.

Sequential order of appearance of ossification centers in the opossum Didelphis albiventris (Didelphidae) skeleton during development in the marsupium.

Pouch-young of the opossum Didelphis albiventris were studied. They were removed from the marsupium at a crown-rump length (CRL) of 9.0 to 100.0 mm and submitted to differential staining of the bone and cartilage. Newborn D. albiventris of 9.0 to 10.0 mm CRL have a cartilaginous skeleton, with no macroscopic evidence of ossification. In 10.5 to 13.0 mm CRL pouch-young, ossification occurs in the bones surrounding the oral cavity, clavicle, ribs, cervical and thoracic vertebrae and thoracic limbs, structures necessary to ensure the survival and maintenance of the newborn in the marsupium. Ossification of most of the skull begins in 15.5 to 16.0 mm CRL pouch-young. The ossification in the pelvis and the pelvic limbs is observed at 18.0 mm CRL and in the sternum and the epipubic bone at 25.0 to 28.0 mm CRL. Most of the skeleton is ossified in 45.0 to 58.0 mm CRL pouch-young, except in the carpus, tarsus and epiphyses of the long bones where ossification occurs in 60.0 to 100.0 mm CRL pouch-young. In the skeleton of D. albiventris the omosternum, haemal arches, prepollex, prehallux and parafibula, are present. These are inconstant or absent elements in eutherian mammals.

Cultivo in vitro de ovócitos bovinos em diferentes sistemas: I- efeito na maturaçäo nuclear / In vitro cultivation of bovine oocytes under different conditions: I-Effect on nuclear maturation

Foram utilizados ovócitos com o cumulus compacto, distribuídos em três tratamentos: I - meio de cultivo constituído de meio de cultura de tecido (TCM) acrescido de FSH (20µg/ml) e soro inativado de vaca em estro (10 por cento); II - meio de cultivo acrescido de células da granulosa em suspensäo (2 x 10 elevado a sexta potência/ml); III - monocamada de células da granulosa em meio de cultivo. As formas foram obtidas em zero, 12, 18, 24 e 30 horas de cultivo in vitro, para exame da configuraçäo cromossômica. Foram utilizados 1251 ovócitos com os seguintes resultados de maturaçäo nuclear, para os tratamentos I, II e III, respectivamente: 12 horas de cultivo, 1 (1,08 por cento), 1 (1,08 por cento) e 2 (2,17 por cento); 18 horas, 70 (76,92 por cento), 50 (56,82 por cento) e 46 (54,12 por cento); 24 horas, 93 (89,42 por cento), 81 (93,10 por cento) e 71 (85,54 por cento); 30 horas, 77 (89,53 por cento), 78 (91,76 por cento) e 63 (90,00 por cento). Os resultados foram elevados e significativos (P<0,01) na taxa de maturaçäo com 18 horas de cultivo, para os ovócitos cultivados segundo o tratamento I. Eles sugerem a fecundaçäo in vitro após 18 horas de cultivo, no caso da maturaçäo em meio sem células da granulosa, diferenciando do tempo usualmente utilizado de 24 horas, quando se utiliza o co-cultivo com células da granulosa

Cultivo in vitro de ovócitos bovinos em diferentes sistemas: II - aspectos ultra-estruturais / In vitro cultivation of bovine oocytes, under different conditions: II - ultrastructural aspects

Para avaliar o efeito de sistemas de cultivo in vitro na ultra-estrutura celular, foram cultivados ovócitos com o cumulus compacto distribuídos em três tratamentos: I - meio de cultivo constituído de meio de cultura de tecido (TCM) acrescido de FSH (20µg/ml) e soro inativado de vaca em estro (10 por cento); II - meio de cultivo acrescido de células da granulosa em suspensäo (2 x 10 elevado a sexta potência/ml); III - monocamada de células da granulosa em meio de cultivo. As amostras foram obtidas em zero, 12, 18, 24 e 30 horas de cultivo e submetidas aos procedimentos para a análise ultra-estrutural. As características verificadas nos ovócitos foram caracterizadas em cinco configuraçöes (C1 a C5), levando em consideraçäo vários estádios de maturaçäo. Para esta classificaçäo foram consideradas as modificaçöes ultra-estruturais no interior do ovócito, sendo C1 um ovócito sem alteraçäo indicativa de reativaçäo da meiose, C2, C3 e C4 estádios intermediários e C5 um ovócito maduro caracterizado principalmente pela configuraçäo cromossômica em metáfase II e pela distribuiçäo dos grânulos corticais em posiçöes solitárias nas proximidades da membrana citoplasmática. Foram verificados os seguintes resultados, para os tratamentos I, II e III, respectivamente: zero hora (C1 e C2, C1 e C2, C1 e C2), 12 horas (C4, C3 e C3), 18 horas (C5, C4 e C4), 24 horas (C5, C5 e C5) e 30 horas (C5, C5 e C5). No cultivo sem células da granulosa, as características que configuram um ovócito maduro sob aspecto ultra-estrutural já ocorrem com 18 horas de cultivo

Cultivo in vitro de ovócitos bovinos em diferentes sistemas: III - capacidade de desenvolvimento após a fecundaçäo / In vitro cultivation of bovine oocytes under different conditions: III - development after fecundation

Para avaliar o efeito de sistemas de maturaçäo in vitro, na capacidade de desenvolvimento após a fecundaçäo, foram cultivados ovócitos com o cumulus compacto, distribuídos em três tratamentos: I - meio de cultivo constituído de meio de cultura de tecido (TCM) acrescido de FSH (20µg/ml) e soro inativado de vaca em estro (10 por cento); II - meio de cultivo acrescido de células da granulosa em suspensäo (2 x 10 elevado a sexta potência/ml); III - monocamada de células da granulosa em meio de cultivo. Após 18 horas de maturaçäo no tratamento I e 24 horas nos tratamentos II e III, os ovócitos foram fecundados in vitro, com sêmen congelado. Dezoito horas após o início da inseminaçäo, os zigotos foram cultivados in vitro por sete dias, em monocamada de células da tuba uterina. No sétimo dia, uma amostragem de zigotos foi submetida à hipotonizaçäo e coloraçäo, para avaliar o número de células. Os resultados da taxa de fecundaçäo, da clivagem e do número de células foram 92,96, 59,86 e 87,16; 85,39, 61,43 e 104,00; 79,37, 60,00 e 131,16, para ovócitos maturados pelos tratamentos I, II, III, respectivamente. A análise pelo qui quadrado da taxa de fecundaçäo e de clivados e a análise de variância do número de células näo apresentaram diferenças (P>0,05) entre tratamentos. Os resultados demonstram que näo há diferenças na taxa de fecundaçäo e capacidade de desenvolvimento dos ovócitos, quando a fecundaçäo é realizada com 18 horas no caso de maturaçäo sem células e com 24 horas quando a maturaçäo é realizada em co-cultivo de células da granulosa

Tipos morfológicos de ovócitos bovinos / Morphological types of bovine oocytes

Foram utilizados ovários de vacas abatidas em matadouro para estudar o tipo de envoltório celular em 14.583 ovócitos. Após aspiraçäo dos folículos, os complexos "cumulus-ovócitos" foram lavados e classificados da seguinte maneira: 1-corona radiata intacta e mais de três camadas compactas de células do cumulus oophorus; 2-uma a três camadas de células envolvendo o ovócito; 3-parcialmente recoberto por células da corona radiata e o cumulus oophorus; 4-células do cumulus oophorus apresentando expansäo; 5-desnudo; 6-ovócitos apresentando características que näo configuram em nenhuma classificaçäo anteriormente citada. As freqüências encontradas foram 69,3; 7,8; 6,7; 11,1; 4,7 e 0,3 por cento, para as categorias 1, 2, 3, 4, 5 e 6 respectivamente. Ficou caracterizada a importância de estudos de maturaçäo e fecundaçäo in vitro, com ovócitos apresentando o cumulus compacto, devido à sua elevada incidência em ovários de vacas

Técnica simplificada para desnudamento rápido de ovócitos bovinos / A simplified technic for rapid denudation of bovine oocytes

Foram utilizados ovócitos com cumulus compactos cultivados in vitro, oriundos de 1.854 ovários de vacas abatidas em matadouro. O cultivo foi realizado em meio de cultura de tecido (TCM) acrescido de FSH (20µg/ml) e soro inativado de vaca em estro (10 por cento), acrescido de células da granulosa em suspensäo (2 x 10 elevado a sexta potência/ml). As amostras foram obtidas em 0, 12, 18, 24 e 30 horas de cultivo, para o procedimento da desnudaçäo. O desnudamento foi realizado através de pipeta automática de 100µl utilizando ponteira com medidas específicas e placa escavada de vidro com capacidade de 1,5ml, onde eram colocados os ovócitos com 1 ml de Meio Talpes. Os movimentos de aspiraçöes e injeçöes do meio com os ovócitos possibilitaram o desnudamento após um período máximo de cinco minutos. Foram desnudados 3.450 ovócitos, sendo 690 para cada tempo de cultivo. Raramente foi verificada a permanência de ovócito näo desnudado totalmente após o uso da técnica

Técnica para avaliaçäo do estádio de maturaçäo nuclear de ovócitos bovinos cultivados in vitro / Technic for evaluating nuclear maturation of bovine oocytes cultured in vitro

Foi desenvolvida uma técnica para avaliaçäo do estádio de maturaçäo nuclear de ovócitos de bovinos, que permitisse clara visualizaçäo das configuraçöes cromossômicas. Após aspiraçäo de folículos oriundos de ovários de vacas abatidas em matadouro, os complexos "cumulus-ovócitos" foram lavados e em seguida classificados em categorias quanto ao tipo de envoltório celular. Ovócitos com cumulus compacto foram cultivados em diferentes tempos, em meio de cultura de tecido (TCM) acrescido de FSH (2µg/ml), soro inativado de vaca em estro (10 por cento) e células de granulosa em suspensäo (2 x 10 elevado a sexta potência/ml). Foram analisadas 1.371 lâminas confeccionadas de ovócitos cultivados por 0, 12, 18, 24 e 30 horas. A técnica permitiu clara visualizaçäo dos bivalentes na metáfase I e dos monovalentes na metáfase II, mantendo ainda a integridade da configuraçäo cromossômica típica na anáfase I e metáfase II, apesar da hipotonizaçäo realizada. Além disso, manteve a disposiçäo dos cromossomos do primeiro corpúsculo polar, quando presente

Immunocytochemical study of the ontogeny of the marsupial Didelphis albiventris immune system.

Marsupials have considerable merits as models for studying the developmental dynamics of the mammalian immune system, but until recently there has been a conspicuous lack of specific immune probes to facilitate such studies. To begin a precise study of the ontogeny of the marsupial Didelphis albiventris we have used cross-reactive polyclonal antibodies raised against evolutionarily highly conserved peptides which form part of the antigen specific receptor complexes of human differentiated lymphocytes. Moreover, because of antigen receptor conservation, the antibodies also recognise specifically the immunocompetent T and B lymphocytes of other species including those in the organs of the opossum. Use of the antipeptide antibodies together with other cross-reacting antibodies has allowed us to study the cellular immunology of T and B cells and antigen presenting cells (APC) during the development of thymus, skin, lymph nodes and spleen in the Brazilian white-belly opossum. The molecular nature and identity of the T cell antigens detected in opossum tissues were confirmed by immunoblotting. These findings indicate that it is now possible to exploit these antibody probes for comparative mammalian studies, and indeed to investigate interesting features of the opossum, such as reaction of the immature immune system of the pouch young to antigenic stimulation.