Investigating surface proteins and antibody combinations for detecting circulating tumor cells of various sarcomas.

Circulating tumor cells (CTCs) have gathered attention as a biomarker for carcinomas. However, CTCs in sarcomas have received little attention. In this work, we investigated cell surface proteins and antibody combinations for immunofluorescence detection of sarcoma CTCs. A microfluidic device that combines filtration and immunoaffinity using gangliosides 2 and cell surface vimentin (CSV) antibodies was employed to capture CTCs. For CTC detection, antibodies against cytokeratins 7 and 8 (CK), pan-cytokeratin (panCK), or a combination of panCK and CSV were used. Thirty-nine blood samples were collected from 21 patients of various sarcoma subtypes. In the independent samples study, samples were subjected to one of three antibody combination choices. Significant difference in CTC enumeration was found between CK and panCK + CSV, and between panCK and panCK + CSV. Upon stratification of CK+ samples, those of metastatic disease had a higher CTC number than those of localized disease. In the paired samples study involving cytokeratin-positive sarcoma subtypes, using panCK antibody detected more CTCs than CK. Similarly, for osteosarcoma, using panCK + CSV combination resulted in a higher CTC count than panCK. This study emphasized deliberate selection of cell surface proteins for sarcoma CTC detection and subtype stratification for studying cancers as heterogeneous as sarcomas.

Cytokeratin Autoantibodies: Useful Serologic Markers for Toluene Diisocyanate-Induced Asthma

To evaluate the clinical significance of autoantibodies to three major epithelial cytokeratins (CK) -- CK8, CK18, and CK19 -- we compared 66 patients with toluene diisocyanate (TDI)-induced asthma (group I) with three control groups: 169 asymptomatic exposed subjects (group II), 64 patients with allergic asthma (group III), and 123 unexposed healthy subjects (group IV). Serum IgG, specific for human recombinant CKs, were measured by ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), and ELISA inhibition tests were performed. The existence of these antibodies was confirmed by IgG immunoblot analysis. Anti-TDI-HSA (human serum albumin) IgE and IgG antibodies were measured by ELISA in the same set of the patients. The prevalence of CK8, CK18, and CK19 auotantibodies in group I was significantly higher than in the other three groups. Results of the ELISA inhibition test showed significant inhibition with the addition of three CKs in a dose-dependent manner. No significant association was found between CK autoantibodies and the prevalence of anti- TDI-HSA IgG and IgE antibodies. These results suggest that autoantibodies to CK18 and CK19 can be used as serologic markers for identifying patients with TDI-induced asthma among exposed workers.

Anticuerpos antiqueratina / Antikeratin antibodies

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Keratinas: biología celular y significado funcional normal y patológico / Keratins: cell biology and it normal and pathological functional significance

Las Keratinas (Ks), son filamentos intermedios que forman parte del citoesqueleto de las células epiteliales. Pueden expresarse en los epitelios simples (Ks. 7, 8, 19 y 20) y en epitelios estratificados (Ks. 1, 2, 5, 9, 10, 11, 16). La diferente expresión de estas proteínas multigénicas del citoesqueleto está ligada a programas de diferenciación celular específicos (OSBORN & WEBER, 1983; NAGLE, 1988); por ello, el estuio de las Ks. tiene singular importancia en el conocimiento de nuevos aspectos de la Histología e Histopatología, como también de la Biología del Desarrollo. Además, la evaluación de las Ks. mediante técnicas de inmunofluorescencia o inmunohistoquímicas es útil en la correcta identificación y caracterización de las células normales, displásicas y neoplásicas (OSBORN & WEBER, NAGLE). Los distintos patrones de expresión de las Ks. se correlacionan con el grado de diferenciación de células epiteliales inmaduras, y, pór ello, con el grado de diferenciación de los tumores malignos. (FUCHS & GREEN, 1980; FRANKE et al. 1981b; MOLL et. al. 1892a; SCHAAFSMA & RAMAEKERS, 1994). Por último, la valoración de los cambios de inmunoexpresión de Ks. es útil para el diagnóstico diferencial entre metaplasias escamosas típicas y atípicas, incluyendo las displasias epiteliales moderadas y severas y las neoplasias intraepiteliales anteriormente denominadas carcinomas in situ (MOLL et. al., 1982a; TSENG et. al., 1982; QUINLAN et. al., 1985; HUSZAR et. al., 1986; GIGI-LEITNER et. al., 1986; HEID et. al., 1988)

Caracterizaçäo imuno-histoquimica de ceratinócitos humanos epidérmicos e foliculares in vivo e in vitro / Immuno histochemistry characterization of human epidermics and follicular Keratnocytes in vivo and in culture

FUNDAMENTO - As citoqueratinas säo excelentes marcadores da diferenciaçäo das células epiteliais. OBJETIVO. Caracterizar a expressäo de citoqueratinas e filagrina em ceratinócitos in vivo e em cultura. MATERIAL E MÉTODOS - Ceratinócitos epidérmicos e foliculares (da bainha radicular externa), cultivados sob as mesmas condiçöes, e criocortes de couro cabeludo normal foram corados mediante a técnica APAAP, com 13 anticorpos monoclonais anticitoqueratinas e um antifilagrina. RESULTADOS In vivo, os ceratinócitos epidérmicos expressam as citoqueratinas 1,2,5,10 e 14, e os ceratinócitos foliculares, as citoqueratinas 5,6,14,16,17 e 19. Por outro lado, in vitro, ambas as subpopulaçöes de ceratinócitos demonstraram as mesmas citoqueratinas 2,5,6,14,16,17,19, embora a expressäo de 2 tenha sido mais intensa nos ceratinócitos epidérmicos. Em cultura, ambos expressam citoqueratinas que näo estavam presentes in vivo. O anticorpo monoclonal antifilagrina demarcou ambas as subpopulaçöes in vitro, e, in vivo, estava presente somente nos ceratinócitos epidérmicos. CONCLUSäO - Ceratinócitos de diferentes origens, da epiderme e do folículo piloso, adotam, em cultura, estágio intermediário de diferenciaçäo

A importancia da fixacao em imuno-histoquimica: a distribuicao de vimentina e citoqueratinas em amostras fixadas em alcool e formol / The importance of fixation in immunohistochemistry: vimentin and cytokeratin distribution in ethanol and formaldehyde sample

O efeito da fixacao em alcool absoluto ou formol e da digestao proteolitica por tripsina na pesquisa imuno-histoquimica dos filamentos intermediarios citoqueratinas e vimentina foi estudado em cortes continguos de um caso de carcinossarcoma (cistadenofibrocarcinoma) de ovario. Reatividades superiores foram obtidas, para ambos os marcadores, quando da fixacao em alcool, mesmo em amostras estocadas ate 60 dias. A pesquisa de citoqueratinas em material fixado em formol foi beneficiada pela digestao proteolitica. Inversamente, tal procedimento mostrou-se deleterio na coloracao para vimentina. A apresentacao destes dados visa alertar os cirurgioes e oncologistas para a importancia da fixacao na preservacao de epitopos em casos de neoplasias cujo estudo possa requerer analises imuno-histoquimicas.

Citoqueratinas y filagrina en psoriasis del cuero cabelludo: estudio inmunohistoquímico del folículo píloso en anágeno / Cytokeratins and philagrins in scalp psoriasis: inmunohistochemical study in the anagen hair follicles

Moderada a severa caída del cabello en psoriasis del cuero cabelludo se ha reportado. Sin embargo, la etiología de la alopecia en esta enfermedad aún no se conoce. El objetivo de nuestro estudio fue investigar, mediante inmunohistoquímica (técnica de APAAP), si el folículo piloso anágeno de cuero cabelludo afectado de psoriasis presenta cambios en la distribución de citoqueratinas y filagrina comparado con el folículo piloso de sujetos normales. La porción infraseboglandular del folículo piloso anágeno psoriático no presenta diferencias en la expresión de citoqueratina y filagrina en relación a los controles. En la porción supraseboglandular, el acrofundíbulo psoríatico muestra marcadas diferencias, similares a aquellas de la epidermis interfolicular. Los anticuerpos monoclonales anticitoqueratinas CK 8.12 Y PKK 2 marcan las capas suprabasales en la epidermis interfolicular como también en el acroinfundículo, mientras que normalmente se expresan sólo en la capa basal. Los anticuerpos monoclonales KL-1 U y CK 8.60 que marcan la capa basal y las citoqueratinas 1 y 2 (RPN 1161) no presentaron cambios en su patrón normal de marcaje de las capas suprabasales. Filagrina se mostró parcial totalmente ausente en las áreas paraqueratósicas de la epidermis interfoliar como también en la porción distal del acroinfundículo psoriático, mientras que la porción proximal se mostró prácticamente normal. De nuestros resultados concluimos que: 1) la porción no-permanente del folículo piloso anágeno psoriático no presenta cambios en la expresión de citoqueratinas y filagrina en comparación con los controles; 2) la caída del cabello en psoriasis debe atribuirse, por ejemplo, a efectos traumáticos de procedimientos terapéuticos y/o por la inflamación crónica que afecta a la porción permanente del folículo piloso