A DUF4148 family protein produced inside RAW264.7 cells is a critical Burkholderia pseudomallei virulence factor.

Burkholderia pseudomallei: is the etiological agent of the disease melioidosis and is a Tier 1 select agent. It survives and replicates inside phagocytic cells by escaping from the endocytic vacuole, replicating in the cytosol, spreading to other cells via actin polymerization and promoting the fusion of infected and uninfected host cells to form multinucleated giant cells. In this study, we utilized a proteomics approach to identify bacterial proteins produced inside RAW264.7 murine macrophages and host proteins produced in response to B. pseudomallei infection. Cells infected with B. pseudomallei strain K96243 were lysed and the lysate proteins digested and analyzed using nanoflow reversed-phase liquid chromatography and tandem mass spectrometry. Approximately 160 bacterial proteins were identified in the infected macrophages, including BimA, TssA, TssB, Hcp1 and TssM. Several previously uncharacterized B. pseudomallei proteins were also identified, including BPSS1996 and BPSL2748. Mutations were constructed in the genes encoding these novel proteins and their relative virulence was assessed in BALB/c mice. The 50% lethal dose for the BPSS1996 mutant was approximately 55-fold higher than that of the wild type, suggesting that BPSS1996 is required for full virulence. Sera from B. pseudomallei-infected animals reacted with BPSS1996 and it was found to localize to the bacterial surface using indirect immunofluorescence. Finally, we identified 274 host proteins that were exclusively present or absent in infected RAW264.7 cells, including chemokines and cytokines involved in controlling the initial stages of infection.

Combinations of early generation antibiotics and antimicrobial peptides are effective against a broad spectrum of bacterial biothreat agents.

The misuse of infectious disease pathogens as agents of deliberate attack on civilians and military personnel is a serious national security concern, which is exacerbated by the emergence of natural or genetically engineered multidrug resistant strains. In this study, the therapeutic potential of combinations of an antibiotic and a broad-spectrum antimicrobial peptide (AMP) was evaluated against five bacterial biothreats, the etiologic agents of glanders (Burkholderia mallei), melioidosis (Burkholderia pseudomallei), plague (Yersinia pestis), tularemia (Francisella tularensis), and anthrax (Bacillus anthracis). The therapeutics included licensed early generation antibiotics which are now rarely used. Three antibiotics and one 24- amino acid AMP were selected based on MIC assay data. Combinations of the AMP and tigecycline, minocycline, or novobiocin were screened for synergistic activity by checkerboard MIC assay. The combinations each enhanced the susceptibility of several strains. The tetracycline-peptide combinations increased the sensitivities of Y. pestis, F. tularensis, B. anthracis and B. pseudomallei, and the novobiocin-AMP combination augmented the sensitivity of all five. In time-kill assays, down-selected combinations of the peptide and minocycline or tigecycline enhanced killing of B. anthracis, Y. pestis, F. tularensis, and Burkholderia mallei but not B. pseudomallei. The novobiocin-AMP pair significantly reduced viability of all strains except B. mallei, which was very sensitive to the antibiotic alone. The results suggested that antibiotic-AMP combinations are useful tools for combating diverse pathogens. Future studies employing cell culture and animal models will utilize virulent strains of the agents to investigate the in vivo availability, host cytotoxicity, and protective efficacy of these therapeutics.

Seguimiento mediante prueba de ELISA para anticuerpos IgE de pacientes con equinococosis quística tratados con albendazol / Follow-up of human cystic echinococcosis by IgE antibodies after albendazole treatment

En un estudio previo, los autores estandarizaron una prueba de ELISA IgE para hidatidosis con alta sensibilidad (95,6 por ciento) y especificidad (100 por ciento) para el diagnóstico y seguimiento de pacientes tratados con albendazol, con resultados alentadores. Objetivo. Confirmar la utilidad de la medición de los niveles de los anticuerpos IgE en pacientes con equinococosis quística tratados con albendazol y considerados curados clínica y ecográficamente y en pacientes mejorados o curados que recurrieron. Diseño. Estudio retrospectivo-prospectivo, de tipo cuasi experimental, corte longitudinal, con pre prueba y post prueba en un solo grupo para evaluar el diagnóstico y seguimiento en los casos prospectivos y el seguimiento y recurrencia en ambos grupos. Institución. Instituto de Medicina Tropical "Daniel A. Carrión", Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Participantes. Pacientes con equinococosis quística. Métodos. Se incluyó 17 pacientes, 15 mujeres y 2 hombres, entre 25 y 80 años de edad (promedio 58 años), con uno más quistes hepáticos y en uno además quistes pulmonares; 16 fueron tratados con albendazol a la dosis de 12-15 mg/kg, en 3 a 5 ciclos de 28 días y uno recibió tratamiento con albendazol y cirugía por una complicación. Todos fueron seguidos entre dos y 12 años postratamiento, con evaluación clínica y ecográfica en 2 a 7 oportunidades y cuantificación de los niveles de anticuerpos IgE para equinococosis en muestras de sangre. La técnica utilizada para la detección de anticuerpos IgE mediante prueba de ELISA para IgE fue estandarizada por los autores. Principales medidas de resultados. Relación de niveles de anticuerpos IgE en sangre y comportamiento de la enfermedad. Resultados. En 10 de los 17 pacientes se mantuvieron los niveles de IgE por debajo del punto de corte, lo que se consideró como evidencia de curación, lo que además coincidía con los cambios en la ecoestructura que iba de CE1 y CE2 a CE4 y CE5, según la...

In a previous study an IgE ELISA test for hydatidosis was standardized and evidenced high sensitivity (95.6 per cent) and specificity (100 per cent) and encouraging results for the diagnosis and follow up of patients treated with albendazole. Objectives: To confirm efficacy of IgE antibody level determination in patients with cystic echinococcosis treated with albendazole and considered clinically cured and ultrasonographically improved, or recurrence in patients considered improved or cured. Design: Longitudinal, retrospective-prospective, quasi-experimental study, longitudinal study, with pre- and post-test for assessing diagnosis and monitoring in the prospective group, and follow-up and recurrence in both groups. Setting: Instituto de Medicina Tropical "Daniel A. Carrión", Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru. Participants: Patients with cystic echinococcosis. Methods: Seventeen patients, 15 female and 2 male, 25-80 years old (average 58 years) carrying one or more hepatic cysts and one also lung cysts were treated with albendazole 12-15 mg/kg in 3 or 5 28-day cycles. One had also surgical treatment for a complication. They were followed for 2 to 12 years after treatment, with clinical and ultrasound evaluation 2-7 times and serum quantification of echinococcosis IgE antibody levels. IgE antibody detection method was IgG ELISA test standardized by the authors. Main outcome measures: Relation of serum IgE antibodies and disease outcome. Results: Out of the 17 patients, 10 had serum IgE below cutoff levels considered as evidence of healing. This coincided with eco structural changes from CE1 and CE2 to CE4 and CE5, according to the ultrasound imaging WHO classification, indicating high activity in the firsts and low or no recent activity in the latter. Seven patients evidencing cure or clinical and ultrasound improvement and significant decrease of IgE some below de cut-off level showed sustained increase of these levels...

Inmunogenicidad del veneno de Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) y su evaluación por métodos inmunoenzimáticos / Immunogenicity of Bothrops atrox (Ophidia: Viperidae) venom and its evaluation by immunoenzymatic methods

Se estudiarón la inmunogenicidad del veneno de la serpiente Bothrops atrox, "jergón", utilizando los métodos inmunoenzimáticos de ELISA y Western Blot, así como los patrones de reactividad cruzada empleando los venenos de las serpientes Bothrops brazili, Lachesis muta y Crotalus durissus. Para este fin se inmunizaron conejos albinos Nueva Zelanda (2 kg aprox) con cuatro dosis de 500 µg del veneno de B. atrox en un periodo de 90 días. La producción de anticuerpos fue monitoreada mediante la técnica de ELISA, determinándose el título del suero hiperinmune obtenido al final del protocolo de inmunización. Adicionalmente se analizaron los patrones electroforéticos de los venenos en estudio mediante PAGE-SDS y su reactividad frente al suero obtenido mediante ELISA y Western Blot. El esquema de inmunización utilizado permitió una producción sostenida de anticuerpos a partir del día 20 del protocolo. Finalizado este proceso, el título del suero fue calculado en 256000, lo cual mostró la eficacia y practicidad del procedimiento desarrollado. Por otro lado, los venenos estudiados mostraron una heterogeneidad en su composición proteica a partir del análisis de sus patrones electroforéticos, mientras que a partir de los estudios inmunoenzimáticos, se pudo obtener valores de reactividad cruzada entre el veneno de B. atrox y los venenos de B. brazili, L. muta y C. durissus, de 23,7%, 4,0% y 1,8%, respectivamente. Los resultados obtenidos constituyen el paso inicial para posteriores ensayos dirigidos a la optimización en la producción de inmunosueros para el tratamiento del envenenamiento, así como para el desarrollo de kits de diagnóstico e identificación de especies de serpiente.

The immunogenicity of Bothrops atrox, “jergon”, venom was studied using ELISA and Western Blot methods, as well as cross-reactivity patterns against venoms of Bothrops brazili, Lachesis muta and Crotalus durissus. For this purpose, New Zealand white rabbits (2 kg aprox) were immunized with four 500 µg doses of B. atrox venom in a period of 90 days. Antibody production was followed using ELISA technique, and title of hiper-immune serum was determined at the end of immunization protocol. Additionally, electrophoretic patterns of venoms were analyzed by SDS-PAGE and venom reactivity against obtained serum by ELISA and Western Blot. Immunization schedule allowed a pronounced antibody production since day 20 of protocol. At the end of process, serum title was 256000, which demonstrated both efficacy and usefulness of the developed procedure. On the other hand, studied venoms showed a heterogenic protein composition according to their electrophoretic patterns, whereas cross-reactivity values of 23,7%, 4,0% and 1,8% were obtained between B. atrox venom and B. brazili, L. muta and C. durissus venoms, respectively, using immunoenzymatic methods. According to our results, this procedure constitutes an initial step for further assays directed to optimization in immunoserum production for envenoming treatment and development of kits for diagnosis and species identification of snakes.

Infección experimental del hámster (Mesocricetus auratus) con metacercarias de paragonimus mexicanus (peruvianus) / Experimental infection in hamsters (Mesocricetusauratus) by Paragonimus mexicanus peruvianus) metacercariae

Un hámster hembra adulta infectada oralmente con 11 metacercarias de paragonimus mexicanus (peruvianus) murió a los 10 días de ser infectado. A la autopsia del animal, se observaron y recuperaron 5 ejemplares juveniles de paragonimus mexicanus (peruvianus) aún móviles: 2 en tejido pulmonar, 2 en cavidad toráxica y 1 en tejido graso del peritoneo abdominal.

An adult female hamster orally infected with 11 Paragonimus mexicanus (peruvianus) metacercariae spontaneously died after 10 days. When the autopsy was performed, 5 young and still mobile Paragonimus mexicanus (peruvianus) forms were recovered: 2 were found in lung tissue, two in the thoracic cavity, and one in the fat tissue from abdominal peritoneum.

Infección de Hypolobocera chilensis eigenmanni por metacercarias de Paragonimus mexicanus (=peruvianus) en el distrito de Condebamba (Cajamarca, Perú) / Paragonimus mexicanus (=peruvianus) metacercariae infection Hypolobocera chilensis eigenmanni in Condebamba district (Cajamarca, Peru)

Cangrejos de rió, Hypolobocera chilensis eigenmanni fueron colectados de acequias durante el año 1997 en estación seca (mayo a diciembre) en Chaquicocha, área que pertenece al distrito de Condebamba (departamento de Cajamarca) en la parte norte del Perú. Ciento treinta y un cangrejos colectados fueron transportados al Laboratorio de Parasitología y examinados por diseccion, 27 de 131 (20,6 por ciento) estaban infectados por metacercarias de Paragonimus mexicanus (=peruvianus). La intensidad de la infección fue de 1 a 5 en la mayoría de los casos (81,5 por ciento) con un promedio de 4,85 por cangrejo. Estos datos son diferentes a los de estudios anteriores en la misma área donde fueron más altos, lo que indica una tendencia al crecimiento del número de cangrejos infectados.

Tétanos neonatal en Cartagena ¿existe control y profilaxis?: experiencia con 196 casos

Objetivos: Identificar las características clínicas del tétano neonatal y verificar la eficacia de los programas de vacunación como profilaxis para esta entidad. Materiales y métodos: Se ralizó un estudio descriptivo retrospectivo analítico de corte longitudinal con 196 pacientes con diagnóstico de tétano neonatal. Resultados: Se revisaron 196 neonatos con tétano, de procedencia en un 75 por ciento del área rural. Las madres en el 94 por ciento no tuvieron control prenatal y en el 100 por ciento de los pacientes pertenecieron al estrato socioeconómico bajo. La letalidad fue del 60 por ciento con un máximo de muertes al quinto día de la enfermedad. Conclusiones: El tétano neonatal afecta al estrato social bajo y a la población rural, quizás producto de la falta de educación y/o déficit en los programas de vacunación, en el área ruaral especialmente.

Tratamiento de la neuralgia del trigémino con gabapentin; correlación experimental

Gabapentin fue evaluado en pacientes con diagnóstico de neuralgia trigeminal y correlacionando sus efectos en un modelo experimental animal. Estos animales fueron estimulados a nivel de la pulpa dental a través de microelectrodos de acero inoxidable implantados a permanencia con acrílico dental para precipitar crisis paroxísticas de dolor. Registros unitarios, y potenciales evocados obtenidos fueron evaluados durante las crisis de dolor y bajo el efecto de Gabapentin o la combinación de carbamazepina-Gapentin. Los pacientes incluidos en este trabajo habían permanecidos por varios años bajo tratamiento con carbamazepina-Gabapentin y presentando remisión de las crisis. Estos fueron divididos en dos grupos A y B de seis pacientes cada uno. El grupo A recibió Gabapentin monoterapia y el grupo B la combinación de Gabapentin-carbamazepina. Los animales del modelo de neuralgia experimental tambien fueron divididos en dos grupos A y B de tres animales cada uno. La correlación neurofisiológica clínica experimental demostró el efecto de los medicamentos utilizados junto con el sitio de acción a nivel del sistema trigeminal y de las organizaciones celulares del Sistema Nervioso Central. Ambos medicamentos fueron eficaces en el tratamiento de la neuralgia trigeminal, pero más marcado fue el tratamiento combinado. Gabapentin actúa a nivel sináptico iniciandose en el primer retardo sináptico del sistema trigeminal incrementando el mecanismo básico de la inhibición, en cambio la carbamazepina actúa por interacción con los canales iónicos de sodio y potasio deprimiendo el mecanismo básico de la excitación iniciandose al nivel de los mecanoreceptores de bajo umbral

Síndrome de Landry-Guillain-Barré-Strohl, características neuroepidemiológicas y clínicas

Se realizó un estudio descriptivo retrospectivo analítico de corte longitudinal para determinar las características epidemiológicas del Sindrome de Guillain Barré, en el Hospital Universitario de Cartagena entre enero de 1984 y junio de 1998. Se tomaron 116 casos con este síndrome de los cuales el 59 por ciento eran hombres, el 41 por ciento mujeres; entre los cuales el 51 por ciento eran niños del total. El año con mayor número de casos fue 1987 con 28. La forma de presentación más frecuente fue el compromiso motor que se presentó en el 75 por ciento de los casos. La enfermedad más asociada a su diagnóstico fueron las infecciones respiratorias con el 45 por ciento. Los casos de recidiva fueron 32. La utilización de la Unidad de Cuidados Intensivos fue del 46 por ciento, y la intubación fue necesaria en el 46 por ciento. La positividad del líquido cefaloraquídeo fue de 85 por ciento de 97 estudios. La velocidad de conducción nerviosa mostró retardo en el 84 por ciento de 31 exámenes realizados. La estancia en la unidad de cuidados intensivos promedio fue de 15 días con disviación estándar de 19 días. La estancia hospitalaria promedio fue de 36 días con una desviación estándar de 41 días. La letalidad en este estudio fue del 20 por ciento. Los datos fueron comparados con los publicados por otros autores nacionales e internacionales. Este estudio concluye que el Sindrome de Guillain Barré en nuestro medio afecta más a los niños, que la letalidad es alta, y que su compromiso predominante es motor, además de la estrecha relación que guarda con las infecciones del tracto respiratorio

Estudio parasitológico realizado en la población infantil del distrito de Pacaraos, provincia de Lima, Departamento de Lima, 1992 / Parasitological study conducted in children Pacaraos district, province of Lima, Lima, 1992

Se han efectuado un estudio de enteroparasitosis en 239 niños de 0 a 14 años perteneciente a las Comunidades de Santa María de Ravira, Santa Lucía de Pacaraos, San Miguel de Vichaycocha y San Juan de Vicas del distrito de Pacaraos, Provincia de Lima, durante los meses de noviembre y diciembre de 1992. Se han utilizado los métodos: directo con lugol y sedimentación rápida en copa, y se ha encontrado un parasitismo del 82.84% con una prevalencia a protozoos de 73.23%, correspondiente el 31.81% a Giardia lamblia y Entamoeba histolytics 16.16. Hymenolepis nana, fue el helminto de mayor frecuencia con un 22.72%. La prevalencia por Ascaris lumbricoides 1.01% y Trichuris trichiura 1.01% resultó significativamente menor a los esperado para estas comunidades localizadas entre las regiones quechua y Suni a pesar de las condiciones deficientes de salubridad.

We have executed an investigation of intestinal parasites on 239 children of 0 to 14 years old of the Community of Santa Maria de Ravira, Santa Lucia de Pacaraos, San Miguel de Vichaycocha and san Juan de Viscas, from Pacaraos District, Province of Lima, during the months of November to December 1992. We have used the following methods: direct with lugol and cup quick sedimentation and we have found a parasitism of 82.84% with a prevalence of protozoarian of 73.23% corresponding 31.81% to Giardia lamblia and entomoeba histolytics 16.16%. Hymenolepis nana was the helmint more frequent with 22.72%. Prevalence for Ascaris lumbricoides 1.01% and Trichuris tichiura 1.01% was much least to the expected for these communities located between the regions Quechua and Suni despites the deficient conditions of salubrity.