LTR point mutations in the Tax-responsive elements of HTLV-1 isolates from HIV/HTLV-1-coinfected patients.

BACKGROUND: In Virology Journal 2011, 8:535, Neto et al. described point mutations into Tax-responsive elements (TRE) of the LTR region of HTLV-1 isolates from asymptomatic carriers from Sao Paulo, Brazil, and hypothesized that the presence of the G232A mutation in the TRE-1 increase viral proliferation and consequently the proviral load (PvL), while the A184G mutation in the TRE-2 do not have such effect. FINDINGS: We performed the real-time PCR assay (pol) and sequenced LTR region of HTLV-1 isolates from 24 HIV/HTLV-1-coinfected patients without HTLV-1-associated diseases from the same geographic area. These sequences were classified as belonging to the transcontinental subgroup A of the Cosmopolitan subtype a. The frequency of G232A mutation (16/24, 66.7%) was high as much as 61.8% reported by Neto's in HTLV-1 asymptomatic carriers with high PvL. High frequency (13/24, 54.2%) of double mutations G232A and A184G was also detected in HIV/HTLV-1-coinfected patients. We did not quantify PvL, but comparative analyses of the cycle threshold (Ct) median values of the group of isolates presenting the mutated-types sequences (Ct 33.5, n = 16) versus the group of isolates with the wild-type sequences (Ct 32, n = 8) showed no statistical difference (p = 0.4220). CONCLUSION: The frequencies of mutated-type sequences in the TRE-1 and TRE-2 motifs were high in HIV/HTLV-1-coinfected patients from Sao Paulo, Brazil. If these LTR point mutations have predictive value for the development of HTLV-1-associated diseases or they correspond to the subtype of virus that circulate in this geographic area has to be determined.

Análise do custo-benefício de dois algorítmos de testes laboratoriais para o diagnóstico confirmatório de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 / Analysis on the cost-effectiveness of two laboratory testing algorithms for confirmatory diagnosis of HTLV-1 and HTLV-2 infections

Desde 1998 o Instituto Adolfo Lutz de São Paulo (IAL) tem realizado asorologia para os vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2(HTLV-1 e HTLV-2) em amostras de sangue provenientes de pacientes da rede pública de saúde. Pelas dificuldades enfrentadas e experiência adquirida, ospesquisadores da Instituição têm avaliado e adaptado diversos algoritmos de testes laboratoriais, em busca do mais apropriado. Neste estudo foi realizada aanálise de custo-benefício de dois algoritmos de testes confirmatórios paraessa infecção viral: Algoritmo A, proposto pelo IAL em 2009, que utiliza o ensaio de Western blot (WB), sendo as amostras com resultados inconclusivos e negativos analisadas pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real (pol); o Algoritmo B, proposto em 2010, que emprega primeiramente a PCR em tempo real (pol), e o WB nas amostras negativas. Os algoritmos detectaram 53 amostras positivas para HTLV-1/2 entre 73 analisadas. O Algoritmo A apresentou 19 resultados inconclusivos no WB, 37%confirmados como positivos pela PCR em tempo real. No Algoritmo B, 11 amostras de sangue resultaram falso-negativas pela PCR em tempo real. Os ensaios foram, portanto, complementares. Em função de grande número de soros com padrão indeterminado no WB e seu alto custo, o Algoritmo B parece ser o mais adequado, por apresentar redução de custos de 44%. Concluindo, nos laboratórios nacionais de referência (LACENs) que dispõem de equipamento para realizar a PCR em tempo real recomenda-se a utilização deste ensaio para efetuar o diagnóstico confirmatório de infecção por HTLV- 1/2, a fim de evitar gastos desnecessários ao SUS

Prevalence of human T-cell lymphotropic virus (HTLV-1/2) in individuals from public health centers in Mozambique.

The prevalence of human T-cell lymphotropic viruses types 1 and 2 (HTLV-1/2) in Mozambique is not known. The present study examined blood samples from 208, 226, and 318 individuals from Northern, Central, and Southern Mozambique, respectively, of all socioeconomic and demographic strata attending public health centers in Mozambique for HTLV-1/2-specific antibodies. Serum samples were assessed for HIV- and HTLV-1/2-specific antibodies by using enzyme immunoassays, and infections with HTLV-1 and -2 were confirmed by using Western blot. An overall HTLV-1/2 prevalence of 2.3% (2.9% in female and 1.1% in male subjects) was observed, and the prevalence of infection increased with age. Regional variation in the prevalence of HIV and HTLV-1/2 was observed; 32.2%, 65.5%, and 44% of individuals tested HIV positive in Northern, Central, and Southern Mozambique, respectively, and 2.4%, 3.9%, and 0.9% tested HTLV-1/2 positive in the same regions. HTLV-1 infection was confirmed in these individuals. No association between HTLV-1 infection and sociodemographic variables or HIV status was detected, although the low number of HTLV-1-positive cases did not allow robust statistical analyses. The results obtained suggest different risk factors and epidemiologic correlates of HIV and HTLV-1 transmission in Mozambique. Furthermore, our results suggested that North and Central Mozambique should be considered endemic regions for HTLV-1 infection. As no cases of HTLV-2 were detected, HTLV-2 appears to have not been introduced into Mozambique.

Introdução da reação em cadeia da polimerase em tempo real no algoritmo de testes laboratoriais para o diagnóstico de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 / Use of the real-time polymerase chain reaction in the HTLV-1 and HTLV-2 infections diagnostic testing algorithm

Em vista das dificuldades encontradas no diagnóstico de infecção por vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV-2) no Instituto Adolfo Lutz (IAL) de São Paulo, foi proposto o presente estudo que objetivou avaliar o valor do cut-off dos testes de triagem sorológica e os algoritmos de testes laboratoriais, dando ênfase ao emprego da reação em cadeia da polimerase (PCR) como teste confirmatório. Do total de 3.271 amostras de sangue provenientes da rotina diagnóstica dos anos de 1998 a 2010: (a) 2.312 amostras de soro (1998-2006) foram empregadas para estabelecer o melhor valor de cut-off para os ensaios imunoenzimáticos (EIAs) usando a análise ROC (receiving operating characteristics); (b) 313 amostras de sangue (2009) foram analisadas por algoritmo de duas coletas seqüências de sangue; (c) 73/959 amostras de sangue reagentes na triagem sorológica (2007-2010) foram empregadas no estudo comparativo de sensibilidade e custo dos testes confirmatórios de Western blot (WB), PCR convencional (tax e pol) e PCR em tempo real (pol). As PCRs foram otimizadas usando DNA extraído de linhagens celulares infectadas por HTLV-1 (C91-PL) e por HTLV-2 (BBF) e realizada pesquisa de gene da albumina humana como controle endógeno. Os resultados da análise ROC mostraram que um ajuste no valor do cut-off dos EIAs de 3ª geração aumentou a especificidade desses ensaios em 7,8%, sem alterar significativamente a sua sensibilidade. O algoritmo de coleta seqüencial de sangue se mostrou inadequado sendo mais apropriada a coleta única em tubo contendo anticoagulante. Os resultados do ensaio confirmatório de WB mostraram que este foi mais sensível (90,56%) do que a PCR convencional (77,36%) e a PCR em tempo real (79,25%), provavelmente pela pequena carga proviral de HTLV-1 e HTLV-2 presente no sangue, principalmente de portadores assintomáticos. Todavia, as técnicas de PCR se mostraram úteis na elucidação de amostras com padrão indeterminado à...

Introdução da reação em cadeia da polimerase em tempo real no algoritmo de testes laboratoriais para o diagnóstico de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 / Use of the real-time polymerase chain reaction in the HTLV-1 and HTLV-2 infections diagnostic testing algorithm

Em vista das dificuldades encontradas no diagnóstico de infecção por vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV-2) no Instituto Adolfo Lutz (IAL) de São Paulo, foi proposto o presente estudo que objetivou avaliar o valor do cut-off dos testes de triagem sorológica e os algoritmos de testes laboratoriais, dando ênfase ao emprego da reação em cadeia da polimerase (PCR) como teste confirmatório. Do total de 3.271 amostras de sangue provenientes da rotina diagnóstica dos anos de 1998 a 2010: (a) 2.312 amostras de soro (1998-2006) foram empregadas para estabelecer o melhor valor de cut-off para os ensaios imunoenzimáticos (EIAs) usando a análise ROC (receiving operating characteristics); (b) 313 amostras de sangue (2009) foram analisadas por algoritmo de duas coletas seqüências de sangue; (c) 73/959 amostras de sangue reagentes na triagem sorológica (2007-2010) foram empregadas no estudo comparativo de sensibilidade e custo dos testes confirmatórios de Western blot (WB), PCR convencional (tax e pol) e PCR em tempo real (pol). As PCRs foram otimizadas usando DNA extraído de linhagens celulares infectadas por HTLV-1 (C91-PL) e por HTLV-2 (BBF) e realizada pesquisa de gene da albumina humana como controle endógeno. Os resultados da análise ROC mostraram que um ajuste no valor do cut-off dos EIAs de 3ª geração aumentou a especificidade desses ensaios em 7,8%, sem alterar significativamente a sua sensibilidade. O algoritmo de coleta seqüencial de sangue se mostrou inadequado sendo mais apropriada a coleta única em tubo contendo anticoagulante. Os resultados do ensaio confirmatório de WB mostraram que este foi mais sensível (90,56%) do que a PCR convencional (77,36%) e a PCR em tempo real (79,25%), provavelmente pela pequena carga proviral de HTLV-1 e HTLV-2 presente no sangue, principalmente de portadores assintomáticos. Todavia, as técnicas de PCR se mostraram úteis na elucidação de amostras com padrão indeterminado à análise pelo WB, sendo os ensaios sorológicos e moleculares complementares. Concluindo, em vista da PCR em tempo real ser um teste rápido, seguro, de menor custo e de fácil execução, ele pode ser aplicado como primeiro teste confirmatório de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 seguido do WB (AU).

Taking into account the difficulties in diagnosing the human T-cell lymphotropic virus type 1 and type 2 (HTLV-1 and HTLV-2) in Instituto Adolfo Lutz of São Paulo, the present study was conducted aiming at evaluating the cut-off values of screening enzyme immunoassays (EIAs) and the tests algorithms, emphasizing the use of polymerase chain reaction (PCR) as confirmatory assay. Of 3,271 blood samples routinely analyzed from 1998 to 2010: (a) 2,312 serum samples (1998-2006) were assessed for the best cutoff value by using the receiving operating characteristics analyses (ROC); (b) 313 blood samples (2009) were tested following the algorithm which employs two sequential blood collection, and (c) 73/959 blood samples (2007-2010) showing reactive results on screening testing were employed for comparative analysis of serologic (Western blot ­ WB) and molecular confirmatory assays [PCR (tax and pol) and real time PCR (pol)]. The PCRs were optimized using the cells lines infected with HTLV-1 (C91-PL) and HTLV-2 (BBF), and the human albumin gene. The ROC analysis showed that an adjustment of the cut-off value in the third generation EIAs increased their specificity in 7.8%. The use of the sequential blood collection algorithm for serological diagnosis was completely inefficient and a unique blood collection in an anticoagulantcontaining tube seems to be the most appropriate. The WB confirmatory assay resulted to be more sensitive (90.56%) than the standard PCRs (77.36%) and the real-time PCR (79.25%), probably owing to the low HTLV-1 and HTLV-2 proviral load in asymptomatic carriers' blood. However, the PCRs were able in elucidating the samples with indeterminate WB profile, thereby standing the serologic and molecular assays as complementary tests. In conclusion, because of the low cost, rapidity, reliability and easiness to perform, the real-time PCR could be used as the first confirmatory assay for performing the HTLV-1 and HTLV-2 diagnosis, followed by the WB technique (AU).

Falha na implantação de um novo algoritmo de testes laboratoriais para o diagnóstico de infecção por HTLV-1 e HTLV-2 em população de risco / Lack in introducing a new algorithm of laboratorial tests for detecting HTLV-1 and HTLV-2 infections in at-risk population

Em vista dos problemas detectados no diagnóstico de infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e -2 (HTLV-1 e HTLV-2) em casuística encaminhada ao Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, foi proposto um novo algoritmo de testes laboratoriais que utiliza duas amostras de sangue seqüenciais. Na primeira o sangue é coletado em tubo seco e feita triagem sorológica com dois ensaios imunoenzimáticos (EIAs). Na segunda, o sangue é coletado em tubo contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra acético (EDTA) para a repetição dos EIAs e para os testes confirmatórios de Western blot (WB) e reação em cadeia da polimerase (PCR). Os resultados obtidos com 313 amostras de sangue mostraram ineficiência do algoritmo, pois nos casos EIA reagentes, apenas 25% tiveram uma segunda amostra de sangue coletada e destas, apenas três em EDTA. Portanto, não foi possível comparar o desempenho da PCR em relação ao WB. Um algoritmo simples, de coleta única de sangue em tubo contendo EDTA foi proposto e vem sendo utilizado para a triagem e para os testes confirmatórios.