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Unexpected regioselectivity of Humicola insolens Cel7B glycosynthase mutants.

Blanchard, Sophie; Armand, Sylvie; Couthino, Pedro; Patkar, Shamkant; Vind, Jesper; Samain, Eric; Driguez, Hugues; Cottaz, Sylvain.

Carbohydr Res ; 342(5): 710-6, 2007 Apr 09.

Artículo en Inglés | MEDLINE | ID: mdl-17224137

RESUMEN

Four Humicola insolens Cel7B glycoside hydrolase mutants have been evaluated for the coupling of lactosyl fluoride on O-allyl N(I)-acetyl-2(II)-azido-beta-chitobioside. Double mutants Cel7B E197A H209A and Cel7B E197A H209G preferentially catalyze the formation of a beta-(1-->4) linkage between the two disaccharides, while single mutant Cel7B E197A and triple mutant Cel7B E197A H209A A211T produce predominantly the beta-(1-->3)-linked tetrasaccharide. This result constitutes the first report of the modulation of the regioselectivity through site-directed mutagenesis for an endoglycosynthase.

Asunto(s)

Ascomicetos/enzimología , Glicósido Hidrolasas/genética , Glicósido Hidrolasas/metabolismo , Ascomicetos/genética , Ascomicetos/metabolismo , Azidas/síntesis química , Azidas/química , Secuencia de Carbohidratos , Catálisis , Cromatografía Líquida de Alta Presión , Disacáridos/síntesis química , Disacáridos/química , Disacáridos/metabolismo , Glicósido Hidrolasas/química , Glicósidos/biosíntesis , Glicósidos/química , Lactosa/análogos & derivados , Lactosa/química , Mutagénesis Sitio-Dirigida , Oligosacáridos/química , Oligosacáridos/metabolismo , Estereoisomerismo

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