RESUMEN
The present study aimed to compare two different methods of extracting RNA from formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) specimens of diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL). We further aimed to identify possible influences of variables--such as tissue size, duration of paraffin block storage, fixative type, primers used for cDNA synthesis, and endogenous genes tested--on the success of amplification from the samples. Both tested protocols used the same commercial kit for RNA extraction (the RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Optimized for FFPE Samples from Ambion). However, the second protocol included an additional step of washing with saline buffer just after sample rehydration. Following each protocol, we compared the RNA amount and purity and the amplification success as evaluated by standard PCR and real-time PCR. The results revealed that the extra washing step added to the RNA extraction process resulted in significantly improved RNA quantity and quality and improved success of amplification from paraffin-embedded specimens.
Asunto(s)
Fijadores , Formaldehído , Linfoma de Células B Grandes Difuso/química , Adhesión en Parafina , ARN Neoplásico , ARN , Humanos , Linfoma de Células B Grandes Difuso/metabolismo , Linfoma de Células B Grandes Difuso/patología , ARN/química , ARN/aislamiento & purificación , ARN Neoplásico/química , ARN Neoplásico/aislamiento & purificación , Reacción en Cadena en Tiempo Real de la Polimerasa/métodosRESUMEN
A determinação do iodo urinário é o marcador bioquímico mais utilizado para avaliação de suas concentrações, auxiliando em estudos epidemiológicos e na clínica médica. Neste trabalho, foi avaliado o efeito do uso de conservante na coleta de urina em frasco coletor, nos períodos antes (A) e após (B) o almoço, e nas amostras distribuídas em tubos com (C) e sem (S) conservante para determinar as concentrações de iodo e creatinina. A dosagem de creatinina foi utilizada para aferir a função renal. Foram analisadas amostras de 20 indivíduos entre 18 a 40 anos de ambos os sexos. Houve concordância nas concentrações de iodo no (A), sendo o coeficiente de correlação intraclasse (CCI) = 0,769 nos tubos (C) e CCI = 0,724 nos tubos (S), assim como entre (A) CCI = 0,941 e (B) CCI = 0,983. Não houve concordância nas concentrações de creatinina nos tubos (C) CCI = 0,369 e (S) CCI = 0,264 nos dois períodos e, também, entre (A) (CCI =0,916) e (B) (CCI = 0,998). Por não terem sido detectadas variações nas concentrações de iodo nas amostras de urina, ambos os tubos, (C) ou (S), podem ser utilizados com igual confiabilidade. Não foi detecta da variabilidade na determinação de iodo na amostras de urina coletadas nos períodos (A) e (B).
