Testis Morphometry and Stages of the Seminiferous Epithelium Cycle in an Epididymal Sperm-storing Neotropical Vespertilionid, Myotis levis (Chiroptera).

Yellowish myotis, Myotis levis, is a seasonal, epididymal sperm-storing Neotropical vespertilionid. In the dry season, males show simultaneous testis regression and sperm storage in cauda epididymis, enabling them to mate during this season. In this study, we investigated seasonal variations in body mass, diameter and height of seminiferous tubules and nuclei of Leydig cells in a population of southeastern Brazil. We also determined the frequencies of the stages of the seminiferous epithelium cycle (SEC) of mature individuals of this population. Body mass and diameter of Leydig cell nuclei showed no significant differences between dry and rainy seasons and stages of annual reproductive cycle; however, all other morphometric parameters varied significantly. The relative cumulative frequency of pre-meiotic stages of the SEC (1-3) was 51%, of meiotic stage (4) was 2% and of post-meiotic stages (5-8) was 47%. We confirmed that the yellowish myotis presents seasonal sperm production as revealed by testis regression and epididymal sperm storage during the dry season.

Fecundidade da manjuba Curimatella lepidura (CURIMATIDAE) na represa de Três Marias, rio São Francisco, MG / Fecundity of manjuba Curimatella lepidura (CURIMATIDAE) in the Três Marias reservoir, São Francisco river, MG

Foram determinados os tamanhos dos ovócitos e as fecundidades residual e relativa ao peso de corpo, ao comprimento padrão, ao peso do ovário e ao peso de corpo do líquido dos ovócitos vitelogênicos, e a fecundidade absoluta de 230 fêmeas de manjubas (Curimatellalepidura) coletadas no reservatório de Três Marias, rio São Francisco, MG durante três anos de coleta. Foi utilizado o método gravimétrico para determinar a quantidade de ovócitos vitelogênicos, que foram separados dos avitelogênicos, por diferença de peso. O diâmetro médio dos ovócitos foi de 711±44µm. O valor médio da fecundidade absoluta foi de 60.994,9±27.142,7 ovócitos por fêmea no estádio 2C de maturação (maduro). A fecundidade média relativa ao peso corporal e ao peso do ovário foi de 1.294,1±437,5 e 8.293,8±1.961,9 ovócitos por grama, respectivamente. Não houve diferença significativa (P<0,05) entre as fecundidades absolutas médias nos três anos de pesquisa. Foram encontrados elevados coeficientes de correlação, e os modelos lineares e potenciais foram os mais adequados para expressar as fecundidades absolutas e relativas, ou seja, quanto maior o grau de maturidade, maior a fecundidade dos peixes.

The sizes of vitellogenic oocytes and fecundity of 230 females of manjubas (Curimatella lepidura) from the Três Marias reservoir, river São Francisco, MG, was determined throughout three years of monthly captures. Gravimetric method was used to determine the quantities of vitellogenic oocytes, which were separated from no vitellogenics by weight difference and using water flow. The average diameter of vitellogenic oocytes was 711±44µm. The mean absolute fecundity was 60994.9±27142.7 oocytes per female in stage 2C of maturation (mature). The average fecundity relative to body weight and ovarian weight was 1294.1±437.5 and 8293.8±1961.9 oocytes per gram, respectively. There was no significant difference (P<0.05) between fecundity during the three years of research. High correlation coefficients were found, and the linear and potential models were the most appropriate to express the absolute and relative fecundities, i.e., the higher the maturity degree, higher the fecundity.

Sperm quality and cryopreservation of Brazilian freshwater fish species: a review.

The Brazilian freshwater fish diversity is the richest in the world. Only 0.7% of all Brazilian species have had any aspect of their sperm biology addressed up to this date. The majority of the fish species described in this review migrate during the spawning season (a phenomenon known as piracema). Urbanization, pollution, hydroelectric dams and deforestation are some of the causes of stock depletion or even local extinction of some of these species. The knowledge concerning sperm quality and minimum sperm:egg ratio is important to maximize the use of males without reducing hatching rates. Furthermore, sperm cryopreservation and gene banking can guarantee the conservation of genetic diversity and development of adequate breeding programs of native fish species. In this review, we present and evaluate the existing information on Brazilian fish species that have been subject to sperm quality and cryopreservation studies. The following parameters were evaluated: volume of extractable sperm, sperm motility, sperm concentration, freezing media, freezing methods, and post-thaw sperm quality. Although the existing protocols yield relatively high post-thaw motility and fertilization rates, the use of cryopreserved sperm in routine hatchery production is still limited in Brazil.

Gene banking of the neotropical fish Leporinus obtusidens (Valenciennes, 1836): a protocol to freeze its sperm in the field.

A practical sperm cryopreservation protocol using a dry-shipper and a diluent of simple composition is described for the neotropical fish Leporinus obtusidens (Valenciennes, 1836). The cooling rate of the dry-shipper and its period of useful time, established under laboratory conditions, were respectively 25.7-30.8 degrees C/min (between 0 and -60 degrees C) and 9 days after charging. Sperm donors were selected on the basis of their hyperemic genital papilla and the ability to ooze milt under gentle manual pressure, during the reproductive months of November to January. Milt volume (1.3+/-0.3 mL; n=9 fish), fresh sperm motility rate (93.3+/-2.5%; n=6 fish), and sperm concentration (10.9+/-3.0 x 10(9)spermatozoa/mL of milt) were obtained. The sperm cryopreservation experiments were conducted with the following cryoprotectants (all at 10%, before mixing with milt): dimethyl sulphoxide (DMSO; n=10 fish), methanol (n=6 fish), propanediol (n=6 fish) and ethylene glycol (n=5 fish). Glucose (5%) and hen's egg yolk (10%) made up the diluents containing DMSO, ethylene glycol or propanediol. Milk powder (10%) replaced hen's egg yolk in the diluent containing methanol. Distilled water (up to 100%) completed the diluent solutions. Milt freezing (in 0.5-mL straws) was performed in the dry-shipper after 1:5 (milt:diluent) dilution. Thawed sperm cryopreserved in DMSO-containing diluent and activated by 119 mM NaHCO(3) gave the highest motility rate (62+/-14%). The fertilizing capacity of L. obtusidens sperm was tested using the combination of DMSO-containing diluent as the cryoprotectant and 119 mM NaHCO(3) as the activating solution. Oocytes were obtained from artificial spawning and fertilized with different proportions of spermatozoa. The greatest rate of fertilization (74%) occurred when the ratio of about 112,000 motile spermatozoa:oocyte was used. Thus, a protocol to freeze L. obtusidens sperm can be elaborated as follows. Milt (<1.5 mL fish(-1)) was readily available only in November to January; a simple solution, composed of 10% DMSO (concentration before adding milt), 5% glucose, and 10% hen yolk egg, in distilled water, was used as sperm diluent; cooling rate of 25-30 degrees C/min, yielded in a portable dry-shipper, was adequate to freeze diluted milt (1:5; milt:diluent), in 5-mL straws; about 112,000 thawed motile spermatozoa:oocyte activated by 119 mM NaHCO(3) assured a fertilization rate of 74%.

Determinação da razão ótima de espermatozóides por ovócitos de piabanha Brycon insignis (pisces - characidae) / Determination of the optimum ratio of spermatozoa per oocyte of the piabanha Brycon insignis

Determinou-se a razão ótima de espermatozóides por ovócitos da piabanha Brycon insignis, utilizando-se dois machos e duas fêmeas da espécie, submetidos ao procedimento de desova induzida. Os gametas foram extrusados manualmente 200 horas-grau após a aplicação do extrato bruto de hipófise. Os ovócitos foram misturados e deste pool retiraram-se amostras com 2g de ovócitos (701 ovócitos/g). O sêmen do pool foi diluído em solução de NaCL 1,2 por cento de tal forma que, após a adição de 1ml do sêmen diluído aos ovócitos, fossem obtidas as seguintes razões espermatozóides por ovócitos em cada tratamento: T1=86.662, T2=173.324, T3=259.986, T4=346.648 e T5=433.310. A taxa de fertilização do sêmen não diluído usado como controle foi de 65,3 por cento. Após ativação espermática com NaHCO3 1 por cento e fecundação, os ovos foram transferidos para as incubadoras e nelas foram observadas as seguintes percentagens de fertilização em relação à do grupo-controle: T1=35,7 por cento, T2=53,1 por cento, T3=79,1 por cento, T4=93,4 por cento e T5=87,8 por cento. A percentagem de fertilização (em relação ao controle) aumentou de forma linear, segundo a equação de regressão: Y=15,55+0,0002297X (P<0,01; R²=0,98), até a proporção de 314.481 espermatozóides por ovócitos, após o que a taxa de fertilização se estabilizou no limite de 88 por cento

The optimum spermatozoa:oocyte ratio of piabanha Brycon insignis was studied. Two males and two females were induced to spawn, and the gametes were stripped after 200 hourgrades starting from the application of carp pituitary gland. Oocytes from two females were mixed, and samples of 2g (701 oocytes/g) were collected from the obtained pool and placed into plastic cups. The semen from the two males, after mixed to compose a pool, was diluted in NaCl solution (1.2 percent) so that, after the addition of 1ml of diluted sperm into the oocytes, the following spermatozoa:oocyte ratios (tri-replicated) were obtained: T1=86,662, T2=173,324, T3=259,986, T4=346,648 and T5=433,310. After the activation using 1 percent NaHCO3 and fertilization, the eggs were transferred to incubators, and observed the percentages of fertilization relative to the control. T1=35.7 percent, T2=53.1 percent, T3=79.1 percent, T4=93.4 percent and T5=87.8 percent. Undiluted semen was used as "control", which showed 65 percent of fertilization. The percentage of fertilization (relative to the control) increased linearly according to the regression Y= 15.55 + 0.0002297X (P<0.01; R²=0.98), until the proportion of 314,481 spermatozoa per oocyte, and, from this point, the fertilization rate maintained at 88 percent

Evaluation of fish sperm concentration using two counting chambers

A concentraçäo espermática do sêmen do peixe anostomídeo Leporinus elongatus (Valenciennes, 1849) foi estimada nas câmaras de Makler e de Neubauer, tendo-se obtido, respectivamente, 10,9 ± 2,8 ´ 10(9) e 11,9 ± 3,7 ´ 10(9) espermatozóides/ml de sêmen sem que ocorresse diferença significativa entre essas médias (P > 0,05). A estimativa da concentraçäo espermática do sêmen na câmara de Makler apresentou vantagens em relaçäo à da câmara de Neubauer. A contagem na câmara de Makler pôde ser feita sem a necessidade de se esperar pela deposiçäo dos espermatozóides no seu fundo. A baixa diluiçäo do sêmen (1:1.000) necessária para se estimar a concentraçäo espermática pode ser considerada também como vantagem pois altas diluiçöes (como na câmara de Neubauer) säo fontes consideráveis de erro. Dessa forma, a câmara de Makler pode ser utilizada na determinaçäo da concentraçäo espermática do sêmen de peixes e, possivelmente, de outros vertebrados, incluindo a de animais domésticos

Criopreservaçäo do sêmen testicular do teleósteo piau-açu Leporimus macrocephalus / Testicular sperm cryopreservation of the teleost 'piau-açu' Leporinus macrocephalus

Avaliaram-se metodologias de criopreservaçäo para o sêmen do piau-açu Leporinus macrocephalus (Teleostei, Anostomidae). O volume de sêmen coletado diretamente dos testículos de seis peixes (446,7±165,1g de peso corporal) foi de 0,4±0,2 ml. Testou-se a toxicidade dos crioprotetores dimetilsulfóxido (DMSO), dimetilacetamida, propilenoglicol, etilenoglicol e metanol nas concentraçöes de 5 por cento, 10 por cento e 15 por cento. DMSO, dimetilacetamida e propilenoglicol foram os menos tóxicos e, por isso, utilizados na criopreservaçäo do sêmen. Para este teste, o sêmen foi diluído 1:8 (v:v) em soluçöes de cada crioprotetor(8,9 por cento, concentraçäo final) às quais adicionaram-se gema de ovo de galinha (8,9 por cento, concentraçäo final), glicose (5 por cento) e água destilada (75 por cento). A mistura foi entäo envasada em palhetas de 5ml de capacidade e imediatamente colocada em botijäo de vapor de nitrogênio líquido. A taxa de motilidade espermática pós-descongelamento mais alta (40,8± 13,6 por cento) foi obtida com sêmen criopreservado em diluente contendo DMSO e ativado em soluçäo de NaHCO3 119mM. A taxa de fertilizaçäo, correspondente a 84,3±9,4 por cento do controle, foi obtida com ovócitos de piau-açu fertilizados com sêmen congelado em soluçäo de DMSO (8 por cento, concentraçäo final)

Hipofisaçäo do peixe Prochilodus affinis da bacia do Rio Säo Francisco / Hypophysation of the fish Prochilodus affinis from the Rio Sao Francisco basin, Brazil

P. affinis é um peixa da bacia do Rio Säo Francisco de importância na pesca comercial. Ele é iliófago, de piracema e pode atingir cerca de 6 kg de peso corporal (PC). Os dados aqui apresentados referem-se à hipofisaçäo de 154 fêmeas e 225 machos na Estaçäo de Hidrobiologia e Piscicultura de Três Marias, CODEVASF, Três Marias, MG, Brasil. Utilizou-se extrato bruto de hipófise de carpa (EBHC) em duas doses para as fêmeas (0,8 mais ou menos 0,2 mg de EBHC/kg de PC e 5,7 mais ou menos 0,4 mg de EBHC/kg de PC), com intervalo de 16,5 mais ou menos 2,3 h entre doses, e uma dose para os machos (2,8 mais ou menos 0,4 mg de EBHC/kg de PC). Cerca de 76 por cento das fêmeas tratadas liberaram ovos viáveis a 219 mais ou menos 12 horas-grau, à temperatura da água de 23,9 mais ou menos 0,8§C. Os ovos eram livres, demersais e de cor cinza. Eles mediram 1,4 mais ou menos 0,1 mm de diâmetro e aumentaram cerca 9,8 vezes seu volume após a hidrataçäo. A razäo entre peso da ova: peso corporal = 22,1 mais ou menos 4,1 por cento, o número de ovos/g de ova = 1222 mais ou menos 119 e a taxa de fertilizaçäo (estimada por ocasiäo do fechamento do blastóporo) = 71 mais ou menos 16 por cento. A fertilidade inicial relativa (número de ovos extruídos/kg PC) = 269,9 x 103 mais ou menos 53,7 x 10 ao cubo e a fertilidade final relativa (número de ovos viáveis por ocasiäo do fechamento do blastóporo/kg PC) = 201,3 x 10 elevado ao cubo mais ou menos 52,9 x 10 elevado ao cubo. As relaçöes entre PC e fertilidades inicial (FI) e final (FF) foram expressas, respectivamente, por: FI = 33.085 + 227.231 PC e FF = 25.852 + 169.987 PC. Quando estes valores de FI, FF e PC foram acumulados (a), as equaçöes foram: Fla = 162.066 + 269.042 PCa e FFa = 95.567 + 204.173 PCa

Hipofisaçäo do peixe anostomídeo piau-branco Schizodon knerii da bacia do Rio Säo Francisco / Hypophysation of the anostomid fish white-piau Schizodon knerii from the Rio Sao Francisco basin

Schizodon knerii é um peixe importante na pesca profissional na represa de Três Marias onde ele pode atingir cerca de 1,2kg de peso corporal (PC). Quatorze fêmeas e 14 machos foram hipofisados com extrato bruto de hipófise de carpa (EBHC). As fêmeas receberam 2 doses de EBHC (1a. dose = 0,7 mais ou menos 0,2mg de EBHC/kg de PC; segunda dose = 5,6 mais ou menos 0,5mg de EBHC/kg de PC; intervalo entre doses = 18,6 mais ou menos 0,5h) e os machos receberam dose única de EBHC (2,6 mais ou menos 0,2 mg de EBHC/kg de PC). Nove fêmeas produziram ovos viáveis sob massagem abdominal 210 mais ou menos 7,9 horas-grau após a 2a. dose, estando a temperatura da água a 23,9 mais ou menos 1§C. Os ovos eram opacos, cinza ou marrom-claro e adesivos. Eles mediram 1,1 mais ou menos 0,1 mm antes de se hidratarem e 1,3 mais ou menos 0,1 mm após hidrataçäo. A razäo peso da ova: peso corporal (porcentagem) = 8,5 mais ou menos 1,4, o número de ovos/g de ova = 2448 mais ou menos 59 e a taxa de fertilizaçäo (estimada por ocasiäo do fechamento do blastóporo, em porcentagem) = 69 mais ou menos 9,4. Fertilidade inicial (i.e., o número de ovos extruídos x 10 elevado ao cubo) = 118,9 mais ou menos 33,5 enquanto que fertilidade final (i.e., o número de ovos viáveis por ocasiäo do fechamento do blastóporo x 10 elevado ao cubo) = 82,8 mais ou menos 28,6. As relaçöes entre PC e fertilidade inicial (FI) e final (FF) foram expressas, respectivamente, por: FI = -72010 + 340 PC (r ao quadrado = .88; n=9) e FF = -71442 + 274 PC (r ao quadrado = .79; n=9)

Ontogênese e comportamento natatório larvais do peixe leporíneo Leporinus elongatus (Valenciennes, 1874) sob condiçöes experimentais / Larval ontogeny and swimming behaviour of the leporin fish Leporinus elongatus (Valenciennes, 1874) under experimental conditions

Estudaram-se, sob condiçöes experimentais, o desenvolvimento e o comportamento natatório das larvas de L. elongatus durante o período decorrido entre a eclosäo e a absorçäo quase total do saco vitelino ocorrida no quinto dia

Morfogênese e comportamento larvais do surubim (Pseudoplatystoma coruscans Agassiz, 1829) sob condiçöes experimentais / Larval morphogenesis and behaviour of the \"surubim\" (Pseudoplatystoma coruscans Agassiz, 1829) under experimental conditions

Investigou-se, sob condiçöes experimentais, a morfogênese e o comportamento larvais do surubim, da eclosäo até a absorçäo quase total do vitelo. As larvas, à eclosäo, apresentam corpo alongado, apigmentado e transparente. A partir do 2§ dia, elas exibem cromatóforos puntiformes, esboços de arcos branquais, barbilhöes maxilares e boca aberta. A pigmentaçäo da retina inicia-se pela sua regiäo central. A exaustäo quase total do vitelo ocorreu no 4§ dia. Imediatamente após a eclosäo, as larvas permanecem em decúbito lateral no fundo da cuba. Movimentam-se pouco e, quando o fazem, progridem no sentido vertical e, entäo, descem passivamente. A partir do 3§ dia, elas passam a deslocar-se em sentido horizontal. Aparentemente, os barbilhöes maxilares e mentonianos auxiliam no equilíbrio corporal

Irrigaçäo arterial do escroto de zebu, Bos indicus / The arterial supply to the scrotum of the zebu, Bos indicus

Foram estudados a distribuiçäo e o comportamento das artérias que participam da irrigaçäo do escroto e dos outros envoltórios testiculares do zebu. De acordo com a origem e posiçäo topográfica destes vasos propöe-se agrupá-los em sistemas arteriais superficial e profundo

Gonadal and extragonadal sperm reserves of the Brazilian Nelore zebu (Bos indicus).

Gonadal and extragonadal sperm reserves were estimated through hemocytometric method in six Nelore zebu bulls, aging 4-6 years, with normal spermatogenesis, and kept at sexual rest. Gonadal sperm reserve was estimated to be 47.8 +/- 5.8 X 10(6) sperm cells/g testis parenchyma and 9.8 +/- 1.7 X 10(9) sperm cells/testis. Using a time divisor of 4.94 days the daily sperm production was estimated to be 10.0 +/- 0.9 X 10(6) sperm cells/g testis parencyma/day and 2.0 +/- 0.3 X 10(9) sperm cells/testis/day. Epididymal sperm reserve amounted 11.9 +/- 1.6 X 10(9) spermatozoa/organ, distributed as follows: 35.3 +/- 3.6% in the head, 16.9 +/- 1.7% in the body and 47.7 +/- 3.7% in the tail.

Frequency and duration of the stages of the cycle of the seminiferous epithelium of the nine-banded armadillo (Dasypus novemcinctus).

The majority of the cross-sections of seminiferous tubules of nine-banded armadillos show only one type of cellular association as in most eutherian and metatherian mammals with scrotal testes. The spermatogenic cycle was divided into 8 stages, in relation to the shedding of the spermatozoa. The relative frequencies (%) of stages 1-8 were, respectively: 16.6, 7.5, 12.9, 9.1, 9.7, 18., 11.7 and 13.6. The duration of the cycle was 8.15 days, as determined by intratesticular injection of [3H]thymidine and removing the tissue at different times after injection.

Histology and mucosubstances histochemistry of the duodenum in suckling, prepuberal and puberal zebus (Bos indicus).

The histological and morphometric changes as well as the mucosubstances histochemistry of the zebu duodenum were studied in suckling, prepuberal and puberal zebus. The morphometric data indicate that this organ reaches maturity at 13 months of age. The duodenal glands are simple or ramified tubular presenting cells of various morphological types. They secrete less sialomucin associated to neutral mucosubstances in the glandular body than at base and ducts. The goblet cells elaborate neutral mucosubstances and sialomucin. No qualitative changes in the secretion of the goblet cells and duodenal glands were found in the duodenum of zebus suggesting that the production of mucosubstances is not associated to age or feeding habits.