Defining the clinical relevance of red blood cell autoantibodies by Monocyte Monolayer Assay.

BACKGROUND: The Monocyte Monolayer Assay (MMA) is an in vitro simulation of red blood cell (RBC) alloantibody behavior. It has been classically applied to predict the risks of post-transfusion hemolytic reactions when transfusing incompatible RBC units. Quantifying erythrophagocytosis by MMA may be an interesting option for situations where there is doubt whether a RBC autoantibody is mediating significant hemolysis. Here, we present three situations involving RBC autoantibodies in which the MMA was decisive for clarifying the diagnosis and choosing the best clinical treatment. CASE REPORT: Case 1. Pregnant patient with severely anemic fetus exhibited warm autoantibody without signs of hemolysis. MMA revealed 30% of monocyte index (MI) highlighting that fetal hemolysis was caused by maternal autoantibody. Prednisone was prescribed with fetal clinical improvement. Cases 2 and 3. Two patients with the diagnosis of mixed auto-immune hemolytic anemia and poor response to corticosteroids were evaluated using MMA. The resulting MI was less than 10% in both cases, suggesting that the cold-agglutinin rather than the warm auto-IgG was responsible for overt hemolysis. Treatment with rituximab was begun, with good clinical response. CONCLUSION: MMA can be used to evaluate the ability of RBC autoantibodies to mediate overt hemolysis. It can be especially useful to determine the role played by cold and warm auto-antibodies in mixed auto-immune hemolytic disease, helping to define the best treatment option.

Padrozação de estratégia molecular custo-efetiva para rastreamento de fenótipos eritrocitários e plaquetários raros em doadores de sangue visando à organização de banco de doadores raros no estado de São Paulo / Cost-effective molecular strategy standardization for screening of erythrocyte phenotypes and rare platelet in blood donors aiming at the organization of a rare donor bank in the state of São Paulo

OBJETIVOS: 1- Padronizar a genotipagem em larga escala para determinação de antígenos eritrocitários e plaquetários pela plataforma de OpenArray®em doadores de sangue. 2- Elaboração de software para registro destes doadores, com interface com o equipamento de genotipagem. METODOLOGIA: Extração automatizada de DNA e genotipagem através demicroarranjos líquidos (OpenArray®) para 32 alelos codificantes de antígenos eritrocitários e plaquetários. RESULTADOS: Foi realizada a genotipagem de 5487 doadores para os antígenos propostos, de forma completamente interfaceada e automatizada. O ensaio customizado de Open Array® mostrou-se acurado e de rápida execução. Elaborou-se software próprio para interfaceamento dos resultados da genotipagem e busca dos genótipos. CONCLUSÃO: Padronizou-se estratégia efetiva para rastreamento de doadores de sangue com fenótipos raros. A automação de todas as etapas experimentais e o interfaceamento completo dos dados minimizaram os erros humanos e aumentaram a rapidez do processo descrito, que pode ser aplicado como estratégia de genotipagem de doadores de todo o Estado de São Paulo.