Frecuencia y detección molecular de Gardnerella vaginalis en una institución de tercer nivel / Frequency and molecular detection of Gardnerella vaginalis in a third level institute

Resumen Antecedentes: Los padecimientos vaginales son la razón más común para que las mujeres busquen atención médica, con una prevalencia global que oscila entre el 23 y el 29% en mujeres en edad reproductiva. La vaginosis bacteriana es una de las principales causas de estos padecimientos, y el agente etiológico más frecuentemente identificado es Gardnerella vaginalis, sin embargo su diagnóstico es difícil, ya que requiere de medios artificiales selectivos enriquecidos y diferenciales. Objetivo: Determinar la frecuencia de G. vaginalis mediante la amplificación de ácidos nucleicos empleando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en muestras cervicovaginales de pacientes que asisten a un instituto de tercer nivel. Método: Se analizaron 121 muestras cervicovaginales para la detección molecular del ARN ribosomal 16S de G. vaginalis. Resultados: G. vaginalis. se detectó en 34 muestras, de estas, 23 fueron de mujeres embarazadas y 11 de no embarazadas. Conclusión: La PCR de punto final detectó tres veces más la presencia de G. vaginalis que el medio de cultivo artificial.

Abstract Background: Vaginal conditions are the most common reason for women to seek medical care, with an overall prevalence ranging from 23 to 29% in women of reproductive age. Bacterial vaginosis is one of the main causes of these conditions, and the most frequently identified etiological agent is Gardnerella vaginalis, however, its diagnosis is difficult since it requires enriched and artificial selective culture media. Objective: To determine the frequency of G. vaginalis by nucleic acid amplification using polymerase chain reaction (PCR) in cervicovaginal samples from patients attending a third level institute. Method: One hundred twenty-one cervicovaginal samples were analyzed for molecular detection of 16S ribosomal RNA from G. vaginalis. Results: G. vaginalis was detected in 34 samples, of these, 23 were from pregnant women and 11 from non-pregnant women. Conclusion: Endpoint PCR detected three times more the presence of G. vaginalis than artificial culture medium.

Análisis molecular y filogenético del genotipo F de Chlamydia trachomatis aislados en México en 2011 / Molecular and phylogenetic analysis of the F genotype of Chlamydia trachomatis isolated in Mexico in 2011

Resumen Antecedentes: Chlamydia trachomatis es la bacteria que se detecta con mayor frecuencia en las infecciones de transmisión sexual. Se han identificado 20 genotipos de C. trachomatis mediante el gen ompA y varias genovariantes mediante el análisis de polimorfismo de un solo nucleótido (SNP). En México, el genotipo F es el más frecuente. Objetivo: Identificar la existencia de subtipos del genotipo F. Método: Se analizaron siete cepas del genotipo F de C. trachomatis aisladas en 2011, mediante secuenciación de nucleótidos y mapeo con enzimas de restricción. Resultados: El análisis de SNP mostró dos cepas con el mismo SNP en el nucleótido 288 (C288T), mientras que con enzimas de restricción se identificó una variante con diferente RFLP (polimorfismo de la longitud de fragmentos de restricción) cuando se tratan con la mezcla de enzimas HinfI y TaqI. Conclusión: En México se encuentran dos subtipos del genotipo F y solo las enzimas de restricción HinfI y TaqI pueden identificar la existencia de uno de estos genotipos F.

Abstract Background: Chlamydia trachomatis is the most frequently identified bacterium in sexually transmitted infections. Twenty C. trachomatis genotypes have been determined using the ompA gene and several genovariants by single nucleotide polymorphism (SNP) analysis. In Mexico, the F genotype is the most frequent. Objective: To identify subtypes of the F genotype. Method: Seven C. trachomatis genotype F strains isolated in 2011 were analyzed by nucleotide sequencing and restriction enzyme mapping. Results: SNP analysis showed two strains with the same SNP at nucleotide 288 (C288T), while with res-triction enzymes, a variant with different RFLP (restriction fragment length polymorphism) was identified when treated with the mixture of HinfI and TaqI enzymes. Conclusion: In Mexico, there are two subtypes of F, and only with restriction enzymes HinfI and TaqI can identify one of the genovariants of the F genotype.

PCR múltiplex para el diagnóstico de microorganismos atípicos transmitidos sexualmente / Multiplex PCR testing for the atypical microorganisms diagnosis sexually transmitted

Resumen Antecedentes: Las infecciones de transmisión sexual son un problema de salud pública mundial. El análisis rutinario incluye solo pruebas microbiológicas y serológicas para el diagnóstico de patógenos. Los microorganismos atípicos como Chlamydia trachomatis y micoplasmas no son identificados debido a los requerimientos. Además, no es incluida Gardnerella vaginalis, aunque se asocia a la vaginosis bacteriana. Objetivo: Desarrollar una PCR múltiplex para el diagnóstico de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis. Método: Se estandarizó la PCR múltiplex utilizando oligonucleótidos para C. trachomatis (gen ompA, orf6 plasmídico), Mycoplasma/Ureaplasma y G. vaginalis (genes rRNA16s). Resultados: Se estandarizaron pruebas de PCR múltiplex para los microorganismos estudiados, optimizándose las concentraciones y condiciones de las reacciones múltiplex. Se obtuvieron PCR dúplex para C. trachomatis (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella y Chlamydia/micoplasmas y tríplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma. También un cuádruplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma/Gardnerella. Los resultados fueron verificados por PCR e hibridación automática (HybriSpot 12) y análisis in silico. Conclusión: Se desarrollaron pruebas de PCR múltiplex con una alta sensibilidad y especificidad para la identificación de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis.

Abstract Background: Sexually transmitted infections are a global public health problem. Routine analysis includes microbiological and serological tests for the diagnosis of pathogens. Atypical microorganisms such as Chlamydia trachomatis and mycoplasmas are not determined due to the requirements for their identification. Furthermore, Gardnerella vaginalis is not included despite being associated with bacterial vaginosis. Objective: To develop a multiplex PCR to diagnose Chlamydia, mycoplasmas, and Gardnerella. Method: Standardization of multiplex PCR tests was carried out using oligonucleotides for the identification of Chlamydia (ompA gene, plasmid orf6), Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella (rRNA16s genes). Results: Multiplex PCR tests were standardized for the microorganisms studied, optimizing the concentrations and conditions of the multiplex reactions. Duplex PCR was obtained for Chlamydia (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella, and Chlamydia/mycoplasmas, and triplex PCR for Chlamydia/mycoplasmas. Also, a quadruplex for Chlamydia, Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella. PCR and automatic hybridization verified the results obtained (HybriSpot 12) and in silico analysis. Conclusion: Multiplex PCR tests with high sensitivity and specificity were developed to identify C. trachomatis, mycoplasmas, and G. vaginalis.

Identificación de genotipos de Chlamydia trachomatis en neonatos con distrés respiratorio / Identification of Chlamydia trachomatis genotypes in newborns with respiratory distress

Introducción: Cada año se notifican ciento treinta millones de infecciones por Chlamydia trachomatis en todo el mundo. Diecinueve serotipos de este patógeno pueden causar infecciones en mujeres embarazadas y recién nacidos. En México se desconoce la distribución de estos genotipos en recién nacidos con infecciones respiratorias. Material y métodos: Se analizaron mil sesenta y dos muestras de lavado bronquial de neonatos con síndrome de dificultad respiratoria para detección de infección por clamidia. El diagnóstico de clamidia se realizó mediante la detección de plásmidos con un ensayo PCR interno y los genotipos se identificaron mediante un ensayo PCR-RFLP del gen ompA. Resultados: El genotipado de 40 cepas identificó a 14 como I/Ia (35%), 13 como E (32,5%), 7 como D (17,5%), 5 como F (12,5%) y 1 como L2 (2,5%). El análisis de riesgo relativo mostró que el genotipo D se asoció con sepsis neonatal (RR=5,83; IC 95%: 1,51-25,985; p <0,02), mientras que el genotipo I/Ia mostró asociación significativa con madres que desarrollaron corioamnionitis (2,8; IC 95%: 1,4-5,5; p <0,05). Conclusiones: Si bien los genotipos I/Ia y E de Chlamydia trachomatis fueron la causa más frecuente de infección respiratoria en neonatos mexicanos, el 80% de los genotipos F produjeron este padecimiento. En cambio, el genotipo D se asoció con el desarrollo de sepsis neonatal y el genotipo I/Ia con corioamnionitis. (AU)

Introduction: One hundred thirty million Chlamydia trachomatis infections are reported worldwide each year. Nineteen serotypes of this pathogen can cause infection in pregnant women and neonates. The distribution of these genotypes in newborns with respiratory infections in Mexico is unknown. Material and methods: We tested 1062 bronchial lavage samples from neonates with respiratory distress syndrome for Chlamydia infection. The diagnosis of Chlamydia was made by plasmid detection with an in-house PCR assay, and genotypes were identified using a PCR-RFLP assay for the ompA gene. Results: The genotyping of 40 strains identified 14 as I/Ia (35%), 13 as E (32.5%), 7 as D (17.5%), 5 as F (12.5%), and 1 as L2 (2.5%). The relative risk analysis showed that genotype D was associated with neonatal sepsis (RR, 5.83; 95% confidence interval [CI], 1.51-25.985; P<.02), while the I/Ia genotype was significantly associated with chorioamnionitis in the mother (2.8; 95% CI, 1.4–5.5; P<.05). Conclusions: Although Chlamydia trachomatis genotypes I/Ia and E of were the strains involved most frequently in respiratory infections in Mexican neonates, 80% of patients with genotype F developed respiratory disease. In contrast, genotype D was associated with neonatal sepsis, and genotype I/Ia with chorioamnionitis. (AU)

Identification of Chlamydia trachomatis genotypes in Mexican men with infertile women as sexual partners / Identificación de genotipos de Chlamydia trachomatis en hombres mexicanos con mujeres infértiles como parejas sexuales

Background: Chlamydia trachomatis is considered a public health problem due to the high prevalence in sexually active women and men. The distribution of genital Chlamydia genotypes among Mexican men is unknown. Objective: To assess the prevalence of Chlamydia genotypes in men with infertile women as sexual partners. Methods: A total of 659 urine samples were collected from men whose sexual partners were infertile women; the identifying Chlamydia infection was by means of a real-time nucleic acid amplification test (qPCR). OmpA gene PCR-RFLP and sequencing were used to confirm the genotypes of C. trachomatis. The association of genotypes with age, spermatic parameters and gynecological data of sexual partners was further analyzed. Results: Forty-nine urine samples were positive infection (7.4%). The Chlamydia infection was significantly associated with teratozoospermia, azoospermia, hypospermia, and oligozoospermia. Five genotypes (F 51%; 12.2% to D; 12.2% to E; 6.1% to L2 and 4.1% Ia) were correctly identified. None genotypes identified in this comparative study were positively associated with changes in some of the spermatic values because all of them typically produce some considerable damage to these cells. Conclusions: The F genotype was the most frequent genotype identified in infertile men from Mexico City and all genotypes play an important role in the seminal alteration of Mexican men whose female partners are infertile.(AU)

Antecedentes: Chlamydia trachomatis se considera un problema de salud pública debido a la alta prevalencia en mujeres y hombres sexualmente activos. Se desconoce la distribución de los genotipos genitales de Chlamydia entre los hombres mexicanos.Objetivo: Evaluar la prevalencia de los genotipos de Chlamydia en hombres con mujeres infértiles como parejas sexuales. Métodos: Se recogieron 659 muestras de orina de hombres cuyas parejas sexuales eran mujeres infértiles; la identificación de la infección por Chlamydia se realizó mediante una prueba de amplificación de ácido nucleico en tiempo real (qPCR). Se utilizaron la PCR-RFLP y la secuenciación del gen OmpA para confirmar los genotipos de C. trachomatis. Se analizó en mayor profundidad la asociación de los genotipos con la edad, los parámetros espermáticos y los datos ginecológicos de las parejas sexuales. Resultados: Cuarenta y nueve muestras de orina dieron positivo para la infección (7,4 %). La infección por Chlamydia se asoció significativamente con la teratozoospermia, la azoospermia, la hipospermia y la oligozoospermia. Se identificaron correctamente cinco genotipos (F 51 %; 12,2 % para D; 12,2 % para E; 6,1 % para L2 y 4,1 % Ia). Ninguno de los genotipos identificados en este estudio comparativo se asoció positivamente con cambios en algunos de los valores espermáticos porque todos ellos suelen producir algún daño considerable en estas células. Conclusiones: El genotipo F fue el más frecuente identificado en hombres infértiles de Ciudad de México y todos los genotipos desempeñan un papel importante en la alteración seminal de los hombres mexicanos cuyas parejas femeninas son infértiles.(AU)

Detección de Chlamydia spp. en leucocitos de sangre periférica de ovinos sin aborto previo / Detection of Chlamydia spp. In Peripheral Blood Leukocytes in Ewes without any Previous Abortion

Resumen El aborto enzootico ovino es una enfermedad causada por Chlamydia abortus. Es considerada una zoonosis y una de las principales causas de pérdidas económicas en estas explotaciones. Este trabajo se enfocó en utilizar el cultivo de leucocitos de animales sin signos de abortos y la detección de anticuerpos para determinar la posible presencia de C. abortus en explotaciones de traspatio. Se obtuvieron 42 muestras de sangre periférica de ovejas de diferentes poblaciones. La detección de Chlamydia abortus se realizó mediante la tinción de Giemsa y la técnica de PCR. La detección de anticuerpos anti-C. abortus se dio mediante una técnica de ELISA comercial. Los resultados mostraron 21 muestras positivas mediante la técnica de PCR, de las cuales solo 10 fueron positivas mediante la técnica de Giemsa, mientras que 22 sueros mostraron anticuerpos anti-C. abortus. En este estudio el 38,1 % de las muestras fueron positivas a la infección por C. abortus, como se confirmó mediante PCR y serología. En conclusión, los leucocitos de sangre periférica pueden ser útiles para detectar una infección por Chlamydia spp. en explotaciones sin historial de abortos, con lo que se puede conocer la prevalencia real del aborto enzootico ovino en México.

Abstract The Ewes Enzootic Abortion is a disease caused byChlamydia abortus. It is deemed a zoonosis and one of the leading causes of financial losses in this type of business. This article focuses on using the culture of leukocytes from animals without any abortion symptoms and antibody detection to determine the potential presence ofC. abortusin backyard exploitations. Forty-two samples of peripheral blood were obtained from ewes in different populations. The detection ofChlamydia abortuswas carried out by using the Giemsa dye and PCR technique. Anti-C. Abortusantibody detection was performed through a commercial ELISA technique. Results showed 21 positive samples using the PCR, and only ten were positive according to the Giemsa dye, while 22 serum samples showed anti-C. abortusantibody. In this study, 38.1% of the samples were positive for theC. abortusinfection, as verified with the PCR and serology. In conclusion, peripheral blood leukocytes can be helpful to detect an infection caused byChlamydiaspp. Animal exploitation without any previous abortion allows knowing the real prevalence of ewes' enzootic abortion in Mexico.

Prevalencia de Chlamydia trachomatis en mujeres del Hospital General de Zona No. 29 / Chlamydia trachomatis prevalence in women from the Hospital General de Zona No. 29

Introducción: la Chlamydia trachomatis es la principal causa de infecciones bacterianas de transmisión sexual a nivel mundial. Se estima que cada año se producen 131 millones de casos. Cursa de manera asintomática, pero la infección ascendente en mujeres puede conducir a la enfermedad inflamatoria pélvica, embarazo ectópico e infertilidad. Objetivo: determinar la prevalencia de C. trachomatis en mujeres de población abierta que acuden al Hospital General de Zona No. 29. Material y métodos: se realizó la identificación de C. trachomatis por pruebas de PCR a 200 muestras de exudado vaginal y se determinó su genotipo. Paralelamente, se realizó el diagnóstico microbiológico de rutina. Resultados: la prevalencia de C. trachomatis fue del 8.5% (17/200) con una concomitancia significativa de p = 0.006 con Gardnerella vaginalis (riesgo relativo de 2.871, IC95%: 1.574-5.236). Asimismo, se identificó C. trachomatis en cinco muestras como el único agente etiológico. Dieciséis cepas de C. trachomatis pertenecieron al genotipo F. Una cepa identificada de C. trachomatis presentó motivos genéticos similares a la variante mexicana reportada en 2019. Conclusiones: la prevalencia de C. trachomatis en la población estudiada nos indica la necesidad de implementar técnicas de diagnóstico para esta bacteria. El uso de la PCR permite realizar una determinación genotípica rápida, que explicaría el comportamiento epidemiológico de la C. trachomatis y representaría una mejora significativa de la calidad de vida de la paciente.

Background: Chlamydia trachomatis is the main cause of sexually transmitted bacterial infections worldwide. An estimated of 131 million cases occur each year. It is asymptomatic, but ascending infection in women can lead to pelvic inflammatory disease, ectopic pregnancy, and infertility. Objective: To determine the prevalence of C. trachomatis in open population women who attend the Hospital General de Zona No. 29. Material and methods: Identification of C. trachomatis was carried out by PCR testing of 200 vaginal exudate samples and its genotype was determined. In parallel, a routine microbiological diagnosis was carried out. Results: The prevalence of C. trachomatis was 8.5% (17/200) with a significant concomitance of p = 0.006 with Gardnerella vaginalis (relative risk of 2.871, 95%CI: 1.574- 5.236). Likewise, C. trachomatis was identified in 5 samples as the only etiological agent. Sixteen strains of C. trachomatis belong to genotype F. An identified strain of C. trachomatis presented genetic motifs similar to the Mexican variant repor- ted in 2019. Conclusions: The prevalence of C. trachomatis in the studied population indicates the need to implement diagnostic techniques for this bacterium. The use of PCR allows a rapid genotypic determination that would explain the epidemiological behavior of C. trachomatis and would represent a sig- nificant improvement in the quality of life of the patient.

Detección atípica de Chlamydia pneumoniae no humana en una muestra endocervical. Reporte de caso / Atypical detection of non-human Chlamydia pneumoniae in an endocervical sample. Case Report

Resumen ANTECEDENTES: Chlamydia trachomatis es uno de los principales microorganismos de trasmisión sexual asociado de manera importante con infertilidad femenina. La detección de genotipos y nuevas variantes de Chlamydia trachomatis permite conocer su prevalencia, distribución geográfica, identificar la aparición de resistencia antimicrobiana y las asociaciones clínicas o comportamientos sexuales y desarrollar vacunas. Este caso clínico es el primer informe de infección endocervical por una cepa diferente a C trachomatis. CASO CLÍNICO: Paciente de 25 años, con diagnóstico de infertilidad primaria de 2 años de evolución por factor endocrino-ovárico (sobrepeso e hipotiroidismo subclínico) y por factor masculino de hipospermia y teratozoospermia. El cultivo microbiológico endocervical detectó la infección por Ureaplasma spp y Chlamydia spp. La identificación de la cepa de Chlamydia mediante secuenciación del gen 16S del ARNr informó que era Chlamydia pneumoniae. La existencia de un plásmido en esta cepa de C pneumoniae confirmó que la infección endocervical fue por una cepa de Chlamydia pneumoniae no humana. CONCLUSIÓN: Este caso clínico sugiere la posibilidad de que una cepa de C pneumoniae no humana sea capaz de trasmitirse sexualmente a los humanos, estar circulando en la población mexicana y causar infertilidad, aunque aún se desconocen el origen y la dirección de la trasmisión.

Abstract BACKGROUND: Chlamydia trachomatis is one of the leading sexually transmitted microorganisms that is significantly associated with the development of female infertility. The detection of genotypes and new variants ofChlamydia trachomatisallows us to know their prevalence and geographic distribution, identify the appearance of antimicrobial resistance, clinical associations, or sexual behaviors, and develop vaccines. This clinical case reports for the first time endocervical infection by a strain other thanC. trachomatis. CLINICAL CASE: A 25-year-old woman with primary infertility of 2 years of evolution due to endocrine-ovarian factor (overweight and subclinical hypothyroidism) and male factor characterized by hypospermia and teratozoospermia. Endocervical microbiological culture detected infection byUreaplasma urealyticumandChlamydiaspp. Identification of theChlamydiastrain by sequencing the 16S rRNA gene reported that it wasChlamydia pneumoniae. The presence of plasmid in this strain ofC. pneumoniaeconfirmed that the endocervical infection was by a non-humanChlamydia pneumoniaestrain. CONCLUSION: This clinical case suggests that a non-human strain ofC. pneumoniaecan be sexually transmitted to humans, circulating in the Mexican population, and causing infertility, although the origin and direction of transmission are still unknown.

Riesgo de infección en recién nacidos expuestos a la colonización vaginal por Chlamydia trachomatis / Risk of infection in newborns exposed to vaginal colonisation by Chlamydia trachomatis

No disponible

Obtaining an ELISA test based on a recombinant protein of Chlamydia trachomatis

Chlamydia trachomatis is considered as a public health problem due to its high prevalence and increased rates of gynecological disorders. The major outer membrane protein (MOMP) of this bacterium is the most abundant protein in its membrane and has been evaluated not only as a vaccine development candidate but also is used in many diagnostic tests. The MOMP weighs 69 kDa and contains four variable segments (VS 1-4) separated by constant regions. Several research groups have developed recombinant single-variable segments of MOMP expressed in Escherichia coli cytoplasm. But, all variable segments have been used minimally for the diagnosis of a chlamydial infection. In this experiment, the authors obtained the recombinant MOMP of C. trachomatis (rMOMP) in E. coli rMOMP and extracted, purified, and partially characterized it. This was later used to identify anti-Chlamydia trachomatis antibodies in sera of infertile patients by immunodetection assays, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and indirect immunofluorescence tests. The ELISA test showed high sensitivity and low specificity of 100 and 58.3%, respectively. The above results obtained were linked to the cross-reactivity of antibodies against C. pneumoniae or C. psittaci. Hence, an evaluation was performed to obtain an optimized test for the diagnosis of C. trachomatis infection

No disponible

Identification of a new variant of Chlamydia trachomatis in Mexico / Identificación de nueva variante de Chlamydia trachomatis en México

Introduction: Chlamydia trachomatis is one of the main etiological agents of sexually transmitted infections worldwide. In 2006, a Swedish variant of C. trachomatis (Swedish-nvCT), which has a deletion of 377bp in the plasmid, was reported. In Latin America, Swedish-nvCT infections have not been reported. We investigated the presence of Swedish-nvCT in women with infertility in Mexico. Methods: Swedish-nvCT was searched in 69 C. trachomatis positive samples from 2339 endocervical specimens. We designed PCR primers to identify the deletion in the plasmid in the ORF1, and the presence of a repeated 44 bp in the ORF3. The sample with the deletion was genotyped with the genes of the major outer membrane protein A (ompA) and the polymorphic membrane protein (pmpH). Results: The deletion was detected in one of the 69 samples positive C. trachomatis of 2339 endocervical exudates. The nucleotide sequence analysis of the ompA shows a high degree of similarity with the Swedish nvCT (98%), however the variant found belongs to serovar D. The nucleotide sequence of the pmpH gene associates to the variant found in the genitourinary pathotype of the Swedish-nvCT but in different clusters. Conclusions: Our results revealed the presence of a new variant of C. trachomatis in Mexican patients. This variant found in Mexico belongs to serovar D based on the in silico analysis of the ompA and pmpH genes and differs to the Swedish-nvCT (serovars E). For these variants of C. trachomatis that have been found it is necessary to carry out a more detailed analysis, although the role of this mutation has not been demonstrated in the pathogenesis

Introducción: Chlamydia trachomatis es una de las principales bacterias que causan infecciones de transmisión sexual en todo el mundo. En 2006 se informó de una variante sueca de C. trachomatis (nvCT-sueca), que tiene una deleción de 377 bp en su plásmido. En América Latina no se ha informado de infecciones por la nvCT-sueca. El propósito de esta investigación fue la búsqueda de la nvCT-sueca en mujeres mexicanas con infertilidad. Métodos: Se analizaron 69 muestras positivas para C. trachomatis de 2.339 muestras endocervicales. Se diseñaron cebadores que identificaron la deleción de 377 pb en ORF1, y detección de un tándem de 44 pb repetidos en ORF3, como ocurre en la nvCT-sueca. Las muestras con la deleción fueron genotipificadas mediante los genes de la proteína principal de la membrana externa A (ompA) y de la proteína polimórfica de membrana H (pmpH). Resultados: La deleción se detectó en una de las 69 muestras (1,44%). El análisis de la secuencia del gen ompA mostró un alto grado de similitud con la nvCT-sueca (98%). Sin embargo, la variante encontrada perteneció al serovar D. La secuencia del gen pmpH se asoció al patotipo genitourinario, pero en diferentes clusters al de la nvCT-sueca. Conclusiones: Los resultados revelaron la presencia de una nueva variante de C. trachomatis en México con delección y que pertenece al serovar D con base al análisis in silico de los genes ompA y pmpH, y que difiere de la nvCT-sueca (serovares E). Se requiere conocer su prevalencia en México y en América Latina

Prevalencia de la infección genital por Chlamydia trachomatis en mujeres que asisten al Instituto Nacional de Perinatología de la Ciudad de México / Prevalence of genital Chlamydia trachomatis infection in women attending in the National Institute of Perinatology from Mexico City

Resumen Introducción: La infección endocervical por Chlamydia trachomatis es considerada una de las principales causas de infertilidad en todo el mundo. Durante el embarazo puede conducir a complicaciones graves como la ruptura prematura de membranas y los partos prematuros. Objetivo: Determinar la prevalencia de infección genital por C. trachomatis en mujeres embarazadas e infértiles de la Ciudad de México. Métodos: La detección de C. trachomatis fue mediante reacción de polimerasa en cadena tiempo real (RPC-TR) con el kit comercial COBAS® TaqMan CT Test v2,0 (Roche Molecular System). Resultados: Se analizaron 2.352 muestras; 102 fueron positivas (4,3%). La prevalencia por edad mostró que las adolescentes embarazadas (15 a 19 años) fueron las de mayor riesgo de infección (10,9%, RR = 3,23 [IC 95%: 1,79-5,84]), seguido de mujeres jóvenes de 20 a 24 años, con prevalencia de 5,6% (RR = 1,65 [IC 95%: 0,82-3,34]). Discusión: Los resultados indican que la prevalencia está dentro del rango reportado en el concierto mundial. Sin embargo, las adolescentes embarazadas tuvieron mayor prevalencia que las mujeres infértiles. Conclusión: Es imperioso realizar un rastreo sistemático de infección por C. trachomatis en mujeres bajo 24 años de edad, y en mujeres embarazadas para disminuir los casos de infertilidad y las complicaciones perinatales.

Background: Endocervical infection by Chlamydia trachomatis is considered one of the leading causes of infertility worldwide. During pregnancy, it can lead to serious complications such as premature rupture of membranes and premature births. Aim: To determine the prevalence of genital infection by C. trachomatis in pregnancy and infertile women from Mexico City. Methods: The detection of C. trachomatis was performed by real-time PCR with the commercial kit COBAS® TaqMan CT Test v2.0 (Roche Molecular System). Results: We analyzed 2,352 endocervical swabs; 102 were positive (4.3%). Age prevalence showed that pregnant adolescents (15 to 19 years of age) had the highest risk of infection (10.9%, RR = 3.23 [95% IC: 1.79-5.84]), followed by young women aged 20 to 24 years, with a prevalence of 5.6% (RR = 1.65 [95% IC: 0.82-3.34]). Discussion: The results indicate that the prevalence is within the range reported worldwide. However, pregnant adolescents were those with a higher prevalence than infertile women were. Conclusion: A systematic screening of C. trachomatis infection in women younger than 24 years of age, and in pregnant women is necessary to reduce the incidence of infertility and perinatal complications.

ADN de Chlamydia trachomatis en leucocitos de sangre periférica de neonatos / Chlamydia trachomaatis DNA in leukocytes of peripheral blood from neonates

INTRODUCCIÓN: El diagnóstico de infección por Chlamydia trachomatis es difícil en recién nacidos; sin embargo, este se realiza mediante el cultivo celular o por la detección de anticuerpos IgM anti-C. trachomatis (anti-CT). La detección de ADN de C. trachomatis en leucocitos de sangre mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) podría ser una mejor herramienta para el diagnóstico de infección por este patógeno. MATERIAL Y MÉTODOS: Se analizaron 44 recién nacidos, todos ellos prematuros y con peso menor de 2.500 g. De cada paciente se obtuvieron muestras de sangre y de lavado nasofaríngeo. El ADN de los leucocitos fue obtenido mediante la técnica de fenol-cloroformo. La detección de C. trachomatis fue llevada a cabo mediante la amplificación del gen ompA utilizando el PCR de punto final. Además, se realiza- ron las pruebas de cultivo celular y la detección de anticuerpos IgM anti-CT mediante la técnica de microinmunofluorescencia. RESULTADOS: Veinte pacientes fueron PCR-positivo (45,5%), y la prueba se asoció significativamente con la presencia de neumonía (RR = 2,28; IC 95%: 1,01-5,17; p = 0,035). El cultivo celular de lavado nasofaríngeo solo fue positivo en 7 muestras y no hubo asociación significativa con algún dato clínico o de laboratorio. El título de anticuerpos anti-CT asociado al PCR-positivo fue 1:32 (RR = 2,74; IC 95%: 1,21-6,23; p = 0,008); sin embargo, este título no se asoció a la presencia de neumonía. CONCLUSIÓN: La detección de ADN en leucocitos de sangre periférica podría ser útil para el diagnóstico de infección por C. trachomatis

INTRODUCTION: Diagnosis of Chlamydia trachomatis infection in newborns is difficult; however, this diagnosis is performed by cell culture or by detection of IgM antibodies against C. trachomatis. Detection of C. trachomatis DNA in peripheral blood leukocytes using polymer chain reaction (PCR) may be a better tool for the diagnosis of infection by this pathogen. MATERIAL AND METHODS: A total of 44 premature newborns, all weighing less than 2500 g, were included in the study. A blood sample and nasopharyngeal lavages were obtained from each newborn. Leukocyte DNA was obtained by phenol-chloroform extraction technique. Detection of C. trachomatis was performed by amplifying the ompA gene using the PCR endpoint. Cell culture tests and the detection of IgM antibodies against C. trachomatis by microimmunofluorescence assay were also performed. RESULTS: Twenty newborns were PCR-positive (45.5%), with this test being significantly associated with the presence of pneumonia (RR = 2.28; 95% CI: 1.01 to 5.17; P = .035). The cell culture of nasopharyngeal lavage was positive in only 7 samples and no significant association was observed with any clinical or laboratory data. The titer of IgM antibodies against C. trachomatis associated with PCR-positive was 1:32 (RR = 2.74; 95% CI: 1.21 to 6.23; P = .008), however this titer was not associated with the presence of pneumonia. CONCLUSION: DNA detection in peripheral blood leukocytes could be useful for diagnosis of C. trachomatis infection

Reporting detection of Chlamydia trachomatis DNA in tissues of neonatal death cases / Relato de detecção de DNA de Chlamydia trachomatis em tecidos de casos de óbito neonatal

OBJECTIVE: to determine whether C. trachomatis was present in neonates with infection, but without an isolated pathogen, who died during the first week of life. METHODS: early neonatal death cases whose causes of death had been previously adjudicated by the institutional mortality committee were randomly selected. End-point and real-time polymerase chain reaction of the C. trachomatis omp1 gene was used to blindly identify the presence of chlamydial DNA in the paraffinized samples of five organs (from authorized autopsies) of each of the dead neonates. Additionally, differential diagnoses were conducted by amplifying a fragment of the 16S rRNA of Mycoplasma spp. RESULTS: in five cases (35.7%), C. trachomatis DNA was found in one or more organs. Severe neonatal infection was present in three cases; one of them corresponded to genotype D of C. trachomatis. Interestingly, another case fulfilled the same criteria but had a positive polymerase chain reaction for Mycoplasma hominis, a pathogen known to produce sepsis in newborns. CONCLUSION: the use of molecular biology techniques in these cases of early infant mortality demonstrated that C. trachomatis could play a role in the development of severe infection and in early neonatal death, similarly to that observed with Mycoplasma hominis. Further study is required to determine the pathogenesis of this perinatal infection. .

OBJETIVO: determinar se a C. trachomatis está presente em neonatos com infecção, porém sem patógeno isolado, que morreram durante a primeira semana de vida. MÉTODOS: casos de óbito neonatal precoce cujas causas de óbito haviam sido anteriormente determinadas pelo Comitê de Mortalidade da instituição foram aleatoriamente selecionados. Foram utilizadas as reações em cadeia da polimerase convencional e em tempo real do gene omp1 da C. trachomatis, para identificar, às cegas, a presença de DNA de clamídia nas amostras desparafinizadas de cinco órgãos (de autópsias autorizadas) de cada um dos neonatos mortos. Além disso, foram realizados diagnósticos diferenciais por amplificação de um fragmento do rRNA 16S de Mycoplasma ssp. RESULTADOS: em cinco casos (35,7%) a presença de DNA de C. trachomatis foi detectada em um ou mais órgãos. Havia infecção neonatal grave em três casos; um deles correspondente ao genótipo D de C. trachomatis. Curiosamente, outro caso preencheu os mesmos critérios, porém possuía uma reação em cadeia da polimerase positiva para Mycoplasma hominis, um patógeno conhecido por causar sepse em recém-nascidos. CONCLUSÃO: a utilização de técnicas de biologia molecular nos casos de mortalidade infantil precoce mostrou que a C. trachomatis poderia desempenhar um papel no desenvolvimento de infecção grave e no óbito neonatal precoce semelhante ao observado com a Mycoplasma hominis. São necessários estudos adicionais para determinar a patogênese dessa infecção perinatal. .

Genotyping of Chlamydia trachomatis from endocervical specimens of infertile Mexican women

Introduction It has been reported in several countries that Chlamydia trachomatis genotypes D, E, and F are the ones more frequently associated with urogenital infections. In Mexico, the prevalence of serovars and genotypes is unknown. Material and Methods One hundred and fifty-two endocervical swabs were collected from infertile women to test for C. trachomatis. The PCR-based RFLP and automated-sequencing methods of ompA gene was used to identify the C. trachomatis genotypes. Sequences of 891 pb obtained were aligned with currently available chlamydial sequences from GenBank to identify the corresponding genotype. Results Twenty-four women with infertility (15.8%) were positive for C. trachomatis. According to the RFLP and nucleotide sequences results the most prevalent ompA genotype corresponded to serovar F (n=13 [54.2%]), followed by serovars E (n=2 [8.7%]), G (n=2 [8.7%]), K (n=2 [8.7%]) and LGV (n=2 [8.7%]), while serovars D, H and Ia were less prevalent (all n=1 [4.2%]). None of the patients who were positive to genovar L2 had symptoms of lymphogranuloma venereum (LGV). Nucleotide sequences analysis showed a new genovariant of L2, which was different to L2b to L2f. Mutation points were observed in VS1 domain of Omp A.Conclusions In this study the most common genotypes were F. Furthermore, the L2 genovariants were demonstrated in infertile women without signs and symptoms of LGV disease. Presence of point mutations in L2 genotype sequences were seen by which there is a need for further research in order to identify new L2 genetic variants that exist in Latin America (AU)

Introducción En diversos países se ha informado que los genotipos de Chlamydia trachomatis más frecuentes y que están asociados a infecciones urogenitales son: D, E y F. En México, la prevalencia de los serotipos y genotipos no se conoce. Material y métodos Se obtuvieron ciento cincuenta y dos hisopos de muestras endocervicales de mujeres infértiles para detectar C. trachomatis. La identificación de los genotipos de C. trachomatis se realizó mediante la técnica de PCR basado en RFLP y en el método automatizado de secuenciación para el gen ompA. Para identificar el genotipo, la secuencia de 891 pb obtenida se alineó con secuencias del gen ompA de Chlamydia disponibles en el GenBank. Resultados Veinticuatro mujeres con infertilidad (15,8%) fueron positivas para C. trachomatis. De acuerdo con los métodos de RFLP y de secuencición de nucleótidos, el genotipo más frecuente correspondió al serotipo F (n=13 [54,2%]), seguida por el serotipo E (n=2 [8,7%]), G (n=2 [8,7%]), K (n=2 [8,7%]) y L2 (n=2 [8,7%]), mientras que los serotipos D, H e Ia fueron menos frecuentes (todos, n=1 [4,2%]). Ninguno de los pacientes con resultado positivo para el serotipo L2 tuvo síntomas de linfogranuloma venéreo (LGV). El análisis de las secuencias nucleotídicas del serotipo L2 mostró una nueva genovariante diferente de la L2b a la L2F. Los puntos de mutación en esta nueva genovariante se observaron en el dominio VS1 del gen ompA. Conclusiones En este estudio el genotipo más frecuente fue el F. Además, se demostró la presencia del genotipo L2 en mujeres infértiles que no mostraron signos y síntomas de la enfermedad de LGV. Se evidenciaron mutaciones puntuales en las secuencias nucleotídicas del genotipo L2 por lo cual hay necesidad de una mayor investigación para identificar la existencia de nuevas genovariantes L2 en América Latina (AU)

Infección por Chlamydia trachomatis en varones y su asociación con las alteraciones ginecológicas de su compañera sexual / Chlamydia trachomatis infection in men and its association to gynecologic alterations of his sexual mate

Objective.To determinate the frequency of Chlamydia trachomatis infection in male partners of infertile couples who attend to the infertility clinic at Instituto Nacional de Perinatologia, as well as to compare the clinical data and lifestyle between C. trachomatis-inifected and uninfected men to establish a possible association with gynecological damage in their sexual female partners. Methods. An open prospective study was performed in infertile couples, whose follow up was carried out at Instituto Nacional de Perinatologia between June 2000 and April 2001. Urethral and cervical swabs were obtained from each couple and the specimens were subjected to a C. trachomatis-specific liquid-phase hibridization test (PACE-2) and routine microbiological analysis. Semen analysis were also included. A relative risk (RR) test was done to analyze variables and square chi test was used to analize clinical and gynecological data from female partners and data from semen examination. Statistical differences were considered as significant when the p value was below 0.05. Results. C. trachomatis active infection was found in 14 out of 384 urethral swabs (3.6%). No significant alterations were observed in semen samples of C. trachomatis-infected men, as compared to non-infected individuals. Microbiological analyses of semen showed a significant isolation o/Mycoplasma sp (RR = 5.87, IC95% 1.4-24.7). Eight out of fourteen female partners of C. trachomatis-infected men were also infected with C. trachomatis (RR= 10.57, IC95% 5.67-19.7), Candida albicans was other pathogen isolated from 8/14 of those women (RR = 1.89, IC95% 1.17-3.05). Gynecological and obstetrical associations found among female partners of C. trachomatis-infected men were as follows: tubal adhesions in 10/14 (RR = 1.54, IC95% 1.08-2.18), salpingitis in 2/14 (RR = 2.2), history of ectopic pregnancies in 11/14 (RR =2.94, IC95% 1.01-8.53) and abnormal pregnancy loss in 9/14 (RR = 1.5). Conclusion. A low prevalence of C. trachomatis infection was observed among male partners of infertile couples as compared with other reports, but this discrepancy could be attributable to the specimen collection and diagnostic assay used. Otherwise, this data suggests that a chronic pathogen's antigenic stimulation may result in an increased formation of tubal adhesions and/or in ectopic pregnancies among female partners of C. trachomatis-infected individuals. Thus, preventive and control measures must be introduced into men's healthcare services, through laboratory and clinical examination, since these subjects are the main reservoirs of C trachomatis.

Objetivo. Determinar la frecuencia de infección por Chlamydia trachomatis y comparar la información clínica y el estilo de vida de varones con y sin infección por este patógeno, así como su asociación con las alteraciones ginecológicas que presenta su compañera sexual en un grupo de parejas que asisten a la Clínica de Infertilidad del Instituto Nacional de Perinatologia de la Ciudad de México. Métodos. Se realizó un estudio abierto, longitudinal y prospectivo en un grupo de parejas con diagnóstico de infertilidad, que fueron tratadas en el Instituto Nacional de Perinatologia durante el periodo de junio del 2000 a abril del 2001. Se recolectaron muestras uretrales y cervicales de cada pareja para el diagnóstico de C. trachomatis mediante la prueba de hibridación en fase líquida (PACE-2). También se recolectaron muestras de semen para el análisis de espermatobioscopia y se hicieron cultivos microbiológicos de rutina a las muestras cervicales y de semen. Los datos microbiológicos, clínicos y ginecológicos de los participantes fueron comparados por %z, el análisis de tendencia para proporciones fue usado para establecer el nivel de riesgo en las variables (RR). Las diferencias fueron consideradas estadísticamente significativas si p < 0.05. Resultados. Se analizaron un total de 384 muestras uretrales de varones, 14 presentaron infección activa por C. trachomatis (3.6%), Los datos de espermatobioscopia de los individuos positivos a C. trachomatis no mostraron alteraciones significativas con respecto al de varones no infectados con esta bacteria. El análisis microbiológico del semen mostró un número de aislamientos significativos de infección por Mycoplasma sp. (RR = 5.87, IC95% 1.40-24.70). En cuanto a las muestras cervicovaginales de mujeres con compañero sexual infectado por C. trachomatis, los patógenos aislados con mayor frecuencia fueron: Candida albicans en ocho de 14 (RR = 1.89, IC95% 1.17-3.05) y C. trachomatis en ocho de 14 (RR = 10.57, IC95% 5.67-19.7). Las asociaciones ginecológicas y obstétricas de la compañera sexual de varones positivos a C. trachomatis fueron adherencias tubáricas en 10 de 14 (RR = 1.54, IC95% 1.08-2.18), salpingitis en dos de 14 (RR = 2.2), antecedentes de embarazos ectópicos en 11 de 14 casos (RR = 2.94, IC95% 1.01-8.53) y abortos previos en nueve de 14 (RR = 1.5). Conclusión. Se observó una baja prevalencia de infección por C. trachomatis en los varones de mujeres infértiles en comparación con lo reportado por otros autores, esta diferencia puede estar dada por el método de diagnóstico y la toma del producto. Estos resultados sugieren que el estímulo constante del patógeno produce un aumento de adherencias tubáricas y embarazos ectópicos en las compañeras sexuales de los varones infectados con C. trachomatis. Por lo que una evaluación diagnóstica y de laboratorio deberá ser llevada a cabo en el varón como una medida de prevención y control para la infección por este patógeno, ya que estos individuos actúan como reservónos importantes de infección.

Factores de riesgo y secuelas reproductivas asociados a la infección por Chlamydia trachomatis en mujeres infértiles / Risk factors and reproductive sequelae associated with Chlamydia trachomatis infection in infertile women

OBJETIVO: Comparar la información clínica y el estilo de vida sexual en dos grupos de mujeres con y sin infección por Chlamydia trachomatis que asisten a la clínica de infertilidad del Instituto Nacional de Perinatología, de la Ciudad de México. MATERIAL Y MÉTODOS: De febrero a noviembre de 1998, se realizó un estudio prospectivo en pacientes con diagnóstico de infertilidad. En el estudio se incluyó a pacientes con diagnóstico de infertilidad, tratados en el Instituto Nacional de Perinatologia, de la Ciudad de México, durante 1988. Las muestras endocervicales de 309 mujeres, que incluyeron a 77 con infección y a 232 sin infección, fueron examinadas para Chlamydia trachomatis, usando inmunofluorescencia directa. Los cultivos vaginales fueron obtenidos antes de iniciar el tratamiento. También se investigó la presencia de otros agentes infecciosos de transmisión sexual y la información demográfica, de conducta sexual, histórica y clínica fue recopilada de cada paciente. Los datos clínicos y ginecológicos de ambos grupos fueron comparados por ji2. La magnitud de las asociaciones fueron establecidas por razón de momios en análisis bivariados. Se realizó un análisis de regresión logística para establecer los efectos confusores en relación con los factores analizados. Las diferencias fueron consideradas estadísticamente significativas si p<0.05. RESULTADOS: Para el estudio 309 mujeres fueron elegibles, 77 (24.9 por ciento) cursaron con infección por C trachomatis, de éstas, 70 (90.9 por ciento) mencionaron tener un compañero sexual, 58 (75.3 por ciento) estaban casadas, 19 (24.7 por ciento) eran solteras o vivían en concubinato, 15 (19.5 por ciento) utilizaron el dispositivo intrauterino para el control de la natalidad, 41 (53.2 por ciento) presentaron coinfección con otros agentes infecciosos de transmisión sexual, y 19 (24.7 por ciento) cursaron con infertilidad por obstrucción tubárica. Las secuelas reproductivas observadas en las pacientes con infección por C trachomatis mostraron que 24 (31.2 por ciento) tuvieron abortos, 50 (64.9 por ciento), gestaciones previas, 26 (33.8 por ciento) anormalidades en el cérvix y 50 (64.9 por ciento) secreciones vaginales purulentas, con dolor (18.1 por ciento). El análisis bivariado mostró que los factores de riesgo asociados significativamente con la infección por C trachomatis fueron la presencia de un compañero sexual (OR= 2.96, IC 95 por ciento 1.22-7.5, p=0.008), concubinato (RM=3.68, p=0.03) y uso de...