An alternative method for purifying and detoxifying diphtheria toxin.

Infections caused by Corynebacterium diphtheriae frequently induce situations in which very small doses of antigens injected intradermally can cause strong inflammatory reactions. This bacterium secretes the diphtheria toxin (DT), a virulence factor that can be lethal to the human organism at doses below 0.1 µg/kg of body weight. The present work proposes alternative methods of DT purification using affinity chromatography and of DT detoxification through conjugating with the polymer methoxypolyethylene glycol activated (mPEG). Tests were performed to evaluate: the formation of edemas and the presence of dermonecrotic activity, in vitro cytotoxicity to Vero cells, the neutralizing activity of serum from guinea pigs immunized with the diphtheria toxoid inactivated with mPEG, and the immunogenic activity of the purified and modified toxin. The results indicated that purification with Blue Sepharose was an efficient method, yielding antigen purity equivalent to 2600 Lf/mg of protein nitrogen. The modification of the Purified Toxin with mPEG did not result in the formation of edema or necrosis although it was immunogenic and stimulated the formation of antibodies that could neutralize the Purified Toxin. The toxoid obtained from the purified toxin maintained its immunogenic characteristics, inducing antibodies with neutralizing activity; edema and necrosis were still observed, however.

An alternative method for purifying and detoxifying diphtheria toxin

Infections caused by Corynebacterium diphtheriae frequently induce situations in which very small doses of antigens injected intradermally can cause strong inflammatory reactions. This bacterium secretes the diphtheria toxin (DT), a virulence factor that can be lethal to the human organism at doses below 0.1 mg/kg of body weight. The present work proposes alternative methods of DT purification using affinity chromatography and of DT detoxification through conjugating with the polymer methoxypolyethylene glycol activated(mPEG). Tests were performed to evaluate: the formation of edemas and the presence of dermonecrotic activity, in vitro cytotoxicity to Vero cells, the neutralizing activity of serum from guinea pigs immunized with the diphtheria toxoid inactivated with mPEG, and the immunogenic activity of the purified and modified toxin. The results indicated that purification with Blue Sepharose was an efficient method, yielding antigen purity equivalent to 2600 Lf/mg of protein nitrogen. The modification of the Purified Toxin with mPEG did not result in the formation of edema or necrosis although it was immunogenic and stimulated the formation of antibodies that could neutralize the Purified Toxin. The toxoidobtained from the purified toxin maintained its immunogenic characteristics, inducing antibodies with neutralizing activity; edema and necrosis were still observed, however.

Profilaxia da raiva humana

Manual Técnico do Instituto Pasteur - n.4 de 1999, com informações sobre a situação da raiva humana no Brasil e em São Paulo, avaliação de riscos, transmissão inter-humana, vacinas, conduta em relação ao paciente, esquemas de tratamento profilático, etc.

Role of IgG(T) and IgGa isotypes obtained from arachnidic antivenom to neutralize toxic activities of Loxosceles gaucho, Phoneutria nigriventer and Tityus serrulatus venoms.

The ability of IgG(T) and IgGa subclasses--isolated by liquid chromatography from equine arachnidic antivenom (AAV)-to neutralize toxic activities of Loxosceles gaucho, Phoneutria nigriventer and Tityus serrulatus venoms as well as to remove venom toxins from circulation was investigated. These subclasses showed similar antibody titers against L. gaucho, P. nigriventer and T. serrulatus venoms, and by immunoblotting few differences were observed in the recognition pattern of venom antigens. IgG(T) and IgGa neutralized 100% lethality induced by L. gaucho and 50% of P. nigriventer venom, but IgGa failed to neutralize T. serrulatus venom, in contrast to IgG(T). Both subclasses neutralized local reactions and dermonecrosis induced by L. gaucho venom in rabbits. In mice, IgG(T) and IgGa partially neutralized the edematogenic activity induced by P. nigriventer and T. serrulatus venoms, but only IgG(T) neutralized (ca. 81%) the nociceptive activity induced by T. serrulatus venom. Both subclasses failed to neutralize nociceptive activity induced by P. nigriventer venom. IgG(T) reduced the serum venom levels of animals injected with L. gaucho, P. nigriventer or T. serrulatus venoms, while IgGa solely reduced L. gaucho and P. nigriventer venoms levels. Our results demostrate that IgG(T) and IgGa subclasses neutralize toxic activities induced by P. nigriventer, T. serrulatus and L. gaucho venoms with different efficacies, as well as depurate these venoms from circulation.

Role of IgG(T) and IgGa isotypes obtained from arachnidic antivenom to neutralize toxic activities of Loxosceles gaucho, Phoneutria nigriventer and Tityus serrulatus venoms

The ability of IgG(T) and IgGa subclasses—isolated by liquid chromatography from equine arachnidic antivenom (AAV)—to neutralize toxic activities of Loxosceles gaucho, Phoneutria nigriventer and Tityus serrulatus venoms as well as to remove venom toxins from circulation was investigated. These subclasses showed similar antibody titers against L. gaucho, P. nigriventer and T. serrulatus venoms, and by immunoblotting few differences were observed in the recognition pattern of venom antigens. IgG(T) and IgGa neutralized 100% lethality induced by L. gaucho and 50% of P. nigriventer venom, but IgGa failed to neutralize T. serrulatus venom, in contrast to IgG(T). Both subclasses neutralized local reactions and dermonecrosis induced by L. gaucho venom in rabbits. In mice, IgG(T) and IgGa partially neutralized the edematogenic activity induced by P. nigriventer and T. serrulatus venoms, but only IgG(T) neutralized (ca. 81%) the nociceptive activity induced by T. serrulatus venom. Both subclasses failed to neutralize nociceptive activity induced by P. nigriventer venom. IgG(T) reduced the serum venom levels of animals injected with L. gaucho, P. nigriventer or T. serrulatus venoms, while IgGa solely reduced L. gaucho and P. nigriventer venoms levels. Our results demostrate that IgG(T) and IgGa subclasses neutralize toxic activities induced by P. nigriventer, T. serrulatus and L. gaucho venoms with different efficacies, as well as depurate these venoms from circulation.

Effect of beta-propiolactone treatment on the complement activation mediated by equine antisera

A reducao da ativacao do complemento atraves de uma alteracao do fragmento Fc das imunoglobulinas pela beta-propiolactona foi obtida em soros hiperimunes equinos antivirus rabico, venenos Bothrops e toxina difterica. Os resultados foram avaliados por teste de anafilaxia em cobaias, e comparados com aqueles obtidos com os mesmos soros purificados por precipitacao salina (sulfato de amonio), seguidos ou nao por digestao enzimatica com pepsina. Os niveis de pureza proteica foram para o soro antibotropico de 184,5 mg/g e 488,5 mg/g tratado pela beta-propiolactona e digeridos pela pepsina, respectivamente...(au)

Isolamenteo de mutacinas em extratos livres de células e análise de algumas propriedades físicas e biológicas / Isolation of mutacins cell free extracts and analyses of some phisical and biological properties

Resumo: É sugerido que as mutacinas, bacteriocinasproduzidas por S. mutans, exercem influência na colonizaçäo inicial e seleçäo de bactérias na cavidade oral. Para o seu estudo, as mutacinas foram obtidas em soluçäo livre de células, a partir do sobrenadante d cultura de duas cepas de S. mutans. Após precipitaçäo com sulfato de amônia, seguida de diálise , as soluçöes foram submetidas, in vitro, a vários agentes, para determinar a estabilidade da sua açäo inibitória. Estas preparaçöes foram sensíveis a enzimas proteolíticas e lipolíticas, mas resistentes a açäo da sliva e da linzoma. Houve um aumento do título inibitório após tratamento com detergentes. Mostraram estabilidade a 100 graus C e a pH entre 2,2 e 7,0, com máximo de atividade em pH entre 3,0 e 5,0. A atividde destas lipoproteínas em pH baixo indica uma possível açäo no ecossistema da placa dental (au)

Produçäo de anticorpos antiveneno total de Crotalus durissus terrificus em cavalos por fosfolipase A2 / Antigens antivenom's total production of Crotalus durissus terrificus in horses by phospholipase A2

Fosfolipases A2 purificada de veneno de Crotalus durissus terrificus ou veneno integral foram usados, como antígenos, para imunizar cavalos e burros. A imunizaçäo de base foi feita injetando os animais, pela via subcutânea, com 5mg do antígeno emulsionado em adjuvante de Freund completo. Quatro meses depois, os animais foram reimunizados injetando-se os antígenos correspondentes, dissolvidos em salina, ao redor dos granulomas resultantes da imunizaçäo primária. Esta injeçäo foi repetida por mais cinco vezes a intervalos de uma semana..

Cross - reactivity of horse monovalent antivenoms to venoms of ten bothrops species

Horses were immunized with B. alternatus, B. atrox, B. cotiara, B. erythromelas, B. insularis, B. jararaca, B. jararacussu, B, moojeni, B. neuwiedi and B. pradoi venoms. Antibodies recognizing the venom antigenic components were either immunochemically detected by the precipattion methods or biologically by the assays measuring the venomns indirect hemolytic and lethal toxic activities . Specific and cross - reacting antivenoms.Modifications in the serum electrophoretic patterns characterized by a reduction of the albumin peak and by a correspondent increase of the y-globulins with a pattent or no modification of the α or β globulins were found in these sera.

Cavalos foram imunizados com veneno de B. alternatus, B. atrox, B. cotiara, B. erythromelas, B. insularis, B. jararaca, B. jararacussu, B, moojeni, B. neuwiedi and B. pradoi. Anticorpos específicos para componentes antigênicos dos venenos foram detectados pelos métodos imuno- enzimático, dupla-difusão e precipitação quantitativa enquanto que os anticorpos neutralizantes foram analisados pelos métodos da hemólise indireta em placas e pela neutralização de seus efeitos letais. Anticorpos, tanto específicos como dando reações cruzadas com venenos botrópicos foram encontrados em todos os dez soros monovalentes. Modificações nos padrões eletroforéticos, caracterizadas por uma redução no pico da albumina e por um correspondente aumento das γ. globulinas com modificações ora acentuadas ora pouco perceptíveis nas frações das α e β globolinas, foram detectadas todos esses soros.

Esterilizaçäo de soros e vacinas por radiaçäo gama de cobalto / Sterilization of sera and vaccines by cobalt gamma radiation

Os soros antitetânico, antidiftérico e antibotrópico-crotálico e, ainda, a vacina diftérica-pertussis-tetânica foram submetidos a diferentes intensidades de radiaçäo gama, com os seguintes intuitos: verificaçäo da resistência das atividades específicas destes produtos à açäo dos raios gama; avaliaçäo das possibilidades de utilizaçäo deste tipo de energia radiante para a esterilizaçäo de alguns soros hiperimunes heterólogos e vacinas, mais comumente utilizados em saúde pública. Os resultados obtidos, segundo os parâmetros empregados, mostraram a possiblidade de esterilizaçäo sem alteraçöes das atividades específicas, de ordem biológica ou química, dos produtos experimentados.

Soro anti-rábico heterólogo de uso humano: anticorpos inespecíficos / The heterogeneous anti-rabies serum for human use: no specific antibodies

O soro anti-rábico heterólogo de uso humano é constituído de imunoglobinas, que podem ser obtidas do plasma de equídeos hiperimunizados com suspensäo de cérebros de coelhos infectados com o vírus rábico fixo. As imunoglobinas säo purificadas e concentradas por digestäo péptica. Entre as provas efetuadas para a liberaçäo do produto encontra-se a de pirogenicidade, avaliada pela inoculaçäo do soro por via intravenosa em coelhos. Durante a execuçäo desta prova tem-se verificado, em algumas partidas, a morte súbita de coelhos. Pela técnica de imunodifusäo dupla anticorpos antitecido nervoso, anti-soro e de antimaterial extraído de hemácias de coelhos, foram detectados no plasma e também no soro purificado e concentrado, levando os autores à conclusäo de que as mortes dos coelhos estariam ligadas à presença desses anticorpos inespecíficos. Face aos resultados e para a avaliaçäo dos testes de pirogenicidade, recomendam que a hiperimunizaçäo dos animais produtores seja feita, preferencialmente, com vírus rábico desenvolvido em cultivos celulares