RESUMEN
Pannexin 1 (PANX1) is expressed in many tissue types including tissues of neural origin. Neuroblastoma (NB) is a neural crest-derived malignancy mainly occurring in children. The majority of NB patients present with high-risk disease for which current therapies are ineffective. Here, we show that while PANX1 is expressed in NB of all stages, high PANX1 expression in high-risk NB is associated with a reduced survival probability. PANX1 channel inhibition using probenecid (PBN) or carbenoxolone (CBX) reduced the proliferation of our panel of high-risk NB cell lines. We show that expression of the Y10F PANX1 mutant, which cannot be phosphorylated on tyrosine 10 and acts in a dominant-negative manner, curtailed NB cell proliferation. Furthermore, PBN and CBX treatment halted the growth of NB spheroids and in some cases triggered the regression of established NB spheroids. Finally, both drugs reduced the progression of high-risk NB in vivo. Together our data indicate that PANX1 channels regulate human NB malignant properties and that the use of PBN or CBX may provide a new therapeutic approach for high-risk NB.
RESUMEN
BACKGROUNDS: The development of a canine-specific method of immunocontraception is one of the non-invasive controlling strategies for humanely decreasing the dog population. This study was aimed to investigate the potential of whole sperm in stimulating the immune system and producing specific anti-sperm antibodies (ASAs) in female dogs. Mature, mixed-breed bitches were subcutaneously immunized with high (200 × 106 cells/mL) and low (100 × 106 cells/mL) doses of sperm vaccine, emulsified with Freund's adjuvants. Booster immunizations were given at weeks 1, 2, 4, and 6, and serum samples were collected at days 0, 14, 28, 42, 63, and 84 prior to each immunization. Reproductive tract samples, including vaginal and uterine lavages, were also collected by flushing each section with sterile PBS at the end of the experiment. Canine anti-sperm antibody titer and specificity in sera and genital secretions were measured using an enzyme-linked immunosorbent assay technique. RESULTS: Specific anti-sperm antibodies were detected in the serum of both high and low dose groups and were significantly higher than those observed in the controls. A high dose of sperm induced elevated immune responses over the low dose antigen. Immunization with a high dose of sperm increased the level of ASAs in the uterine secretions and vaginal secretions significantly. Higher ASAs were observed to have transduced to the uterine lumen compared to the vagina. CONCLUSIONS: Based on the results obtained in this study, parenteral immunization with whole sperm can induce a high level of specific antibodies in the serum and genital secretions of female dogs and the response would be dose-dependent.
CONTEXTE: Le développement d'une méthode d'immunocontraception spécifique à la race canine constitue l'une des stratégies non invasives pour réduire humainement la population canine. Cette étude a pour objectif d'évaluer le potentiel du sperme entier à stimuler le système immunitaire des femelles et à produire des anticorps anti-sperme spécifiques (ASA) chez ces dernières. Des chiennes matures de race croisée sont immunisées par voir sous-cutanée avec soit de fortes doses (200 millions de cellules/mL) soit de faibles doses (100 millions de cellules/mL) de vaccin constitué de sperme entier émulsifié avec des adjuvants de Freund. Des vaccinations de rappel sont faites aux semaines 1, 2, 4 et 6, et des échantillons sanguins sont prélevés aux jours 0, 14, 28, 42, 63 et 84 avant chaque immunisation. Des échantillons de l'appareil reproducteur, incluant des lavages vaginaux et utérins, sont recueillis par flushing de chaque section avec du PBS stérile à la fin de l'expérimentation. Le titre et la spécificité des anticorps anti-sperme entier canin dans le sérum et les sécrétions génitales ont été mesurés par la technique de dosage ELISA. RÉSULTATS: Des anticorps anti-sperme entier spécifiques ont été détectés dans le sérum des femelles immunisées tant avec de faibles que de fortes doses, et de façon significativement plus élevé que chez le groupe témoin. Une dose forte de sperme entier induit des réponses immunitaires élevées par rapport à l'antigène à faible dose. L'immunisation avec une forte dose de sperme entier augmente de façon significative le niveau d'ASA dans les sécrétions utérines et dans les sécrétions vaginales. On a observé que les ASA ont plus été transduits vers la lumière utérine que vers la lumière vaginale. CONCLUSIONS: Basée sur les résultats obtenus dans la présente étude, l'immunisation parentérale par du sperme entier peut induire un taux élevé d'anticorps spécifiques dans le sérum et le sécrétions génitales de chiennes ; et la réponse serait dose-dépendante.
