Viabilidade dos espermatozoides criopreservados de touros, colhidos do epidídimo após 12 horas a 4ºC / Viability of cryopreserved bull spermatozoa collected from the epididymis stored for 12 hours at 4ºC

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da refrigeração do epidídimo, sobre a viabilidade dos espermatozoides congelados. Foram colhidos dez pares de testículos/epidídimos de um abatedouro comercial. Um dos epidídimos foi refrigerado a 4°C durante 12 horas e o contralateral foi imediatamente processado. O epidídimo foi isolado, as células espermáticas extraídas e analisadas quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia e integridade da membrana. Após a análise, os espermatozoides foram congelados em diluente Botubov® (Botupharma Biotecnologia Animal, Botucatu, SP, Brasil) e descongelados para análise. O mesmo procedimento foi realizado com o testículo/epidídimo refrigerado. Os resultados evidenciaram maior viabilidade (p≤0,05) das células pré-congelação para os parâmetros, número total de espermatozides (1,9 ± 1,2 versus 0,9 ± 0,9 x 109 espermatozoides), motilidade (74,0 ± 15,1 versus 20,5 ± 13,8%) e vigor (3,7 ± 0,5 versus 1,7 ± 0,8), e pós-congelação, motilidade (23,5 ± 16,7 versus 8,0 ± 7,9%) e vigor (2,0 ± 0,8 versus 0,8 ± 0,8) quando os espermatozoides foram colhidos a partir de epidídimos processados imediatamente após o abate quando comparados aos mantidos 12 horas sob refrigeração, respectivamente. Conclui-se que 12 horas de refrigeração do epidídimo após o abate, prejudica a qualidade das células espermáticas, impossibilitando a congelação do sêmen

The purpose of this study was to evaluate effect of epididymis cooling on bovine frozen sperm viability. Ten pairs of testes/epididymes were collected of a commercial slaughterhouse; one epididymis from each pair was refrigerated at 4ºC for 12 hours and the other immediately proceeded. Epididymis was isolated, sperm cells collected after epididymal slicing and then analyzed regarding to motility, vigor, total number of sperm, morphology and membrane integrity. Sperm cells were frozen in Botubov® extender (Botupharma Biotecnologia Animal, Botucatu, SP, Brazil) and thawed for semen analysis. The same procedure was performed with cooled testis/epididymis. Results demonstrated higher viability (p≤0,05) of fresh cells to the total number of spermatozoa (1,9 ± 1,2 versus 0,9 ± 0,9 x 109 spermatozoa), sperm motility (74,0 ± 15,1 versus 20,5 ± 13,8%) and vigor (3,7 ± 0,5 versus 1,7 ± 0,8), and for pos-thawing motility (23,5 ± 16,7 versus 8,0 ± 7,9%) and vigor (2,0 ± 0,8 versus 0,8 ± 0,8) when spermatozoa were collected immediately post-slaughter than maintained cooling 12 hours, respectively. We conclude that 12 hours of epididymis cooling after slaughter decreases sperm cells quality.

Viabilidad de espermatozoides ovinos mantenidos a 5º y 15ºC en diferentes sistemas de refrigeración / Viability of ram sperm chilled at 5º and 15ºC in different cooling systems

El objetivo del presente estudio fue evaluar la cualidad espermática del semen refrigerado de carneros, en cajas térmicas con diferentes temperaturas. Fueron utilizados 6 eyaculados, de 2 carneros colectado con vagina artificial. En el semen se analizó volumen, movimiento en masa, motilidad, vigor, concentración espermática, test hipo-osmótico y coloración supra-vital. Las muestras fueron divididas en 2 alícuotas y diluidas en solución NaCl 0,9% o en un medio (Botubov®, Botupharma, Botucatu, SP, Brasil); después, la dilución fue mantenida a temperatura ambiente, nevera (5ºC), caja Botubox® (15ºC, Botupharma, Botucatu, SP, Brasil), caja Botutainer® (5ºC, Botupharma, Botucatu, SP, Brasil) y caja MaxSemen® (15ºC, EHG Agrofarma, Campinas, SP, Brasil). Todas las muestras fueron analizadas cada 24 horas, siguiendo los mismos parámetros. De acuerdo con los resultados, las muestras mantenidas en el diluyente presentaron viabilidad hasta 48 horas de refrigeración en las cajas térmicas y en la nevera, y la motilidad se mantuvo entorno de 30% hasta las 72 horas. Las muestras diluidas en solución NaCl 0,9% conservaron la motilidad en 30% hasta las 24 horas de refrigeración. Basado en los resultados se concluye que las tres cajas pueden ser utilizadas para transporte de semen ovino, diluido y refrigerado por un período de 24 a 48 horas.

The aim of this study was to evaluate the ovine sperm quality colled in thermal boxs. Six ejaculates from 2 rams were collectedusing artificial vagina. Samples were analyzed to volume, mass movement, motility, vigor, sperm cell concentration, hypo-osmoticswelling test and supravital stain. Ejaculates were divided into 2 aliquots and diluted in 0.9% NaCl or in the extender (Botubov®,Botupharma, Botucatu, SP, Brazil), and was kept at room temperature, refrigerator (5°C), Botubox® (15°C, Botupharma, Botucatu,SP, Brazil), Botutainer® (5ºC, Botupharma, Botucatu, SP, Brazil) and MaxSemen® (15°C, EHG Agrofarma, Campinas, SP, Brazil).All samples were analyzed each 24 hours to the same parameters. According to the results the samples diluted and cooled inextender preserved sperm viability until 48 hours in thermal boxes and in refrigerator; and the samples extended preserved inenvironment maintained motility 30% up to 72 hours. Samples diluted in 0.9% saline retained motility around 30% until 24 hours ofcooling. Based on the results it is concluded that the three boxes may be used for transport of ram semen, diluted and refrigeratedfor a period of 24 to 48 hours.