Development of a Novel Non-invasive Metabolomics Assay to Predict Implantation Potential of Human Embryos.

Can a set of metabolites present in embryo culture media correlate with embryo implantation? Case-control study in two phases: discovery phase (101 samples) and validation phase (169 samples), collected between 2018 and 2022, with a total of 218 participants. Culture media samples with known implantation outcomes were collected after blastocyst embryo transfer (including both PGT and non-PGT cycles) and were analyzed using chromatography followed by mass spectrometry. The spectra were processed and analyzed using statistical and machine learning techniques to identify biomarkers associated with embryo implantation, and to develop a predictive model. In the discovery phase, 148 embryo implantation biomarkers were identified using high resolution equipment, and 47 of them were characterized. Our results indicate a significant enrichment of tryptophan metabolism, arginine and proline metabolism, and lysine degradation biochemical pathways. After transferring the method to a lower resolution equipment, a model able to assign a Metabolite Pregnancy Index (MPI) to each embryo culture media was developed, taking the concentration of 36 biomarkers as input. Applying this model to 20% of the validation samples (N=34) used as the test set, an accuracy of 85.29% was achieved, with a PPV (Positive Predictive Value) of 88% and a NPV (Negative Predictive Value) of 77.78%. Additionally, informative results were obtained for all the analyzed samples. Metabolite concentration in the media after in vitro culture shows correlation with embryo implantation potential. Furthermore, the mathematical combination of biomarker concentrations using Artificial Intelligence techniques can be used to predict embryo implantation outcome with an accuracy of around 85%.

Traducción al español y validación lingüística de la escala North Star Ambulatory Assessment para la evaluación funcional de la distrofia muscular de Duchenne / Spanish translation and linguistic validation of the North Star Ambulatory Assessment for Duchenne muscular dystrophy functional evaluation

Introducción: En la distrofia muscular de Duchenne son necesarias medidas de evaluación fiables y validadas para el seguimiento del deterioro funcional y de los efectos de los nuevos tratamientos. Objetivo: Se realizó una traducción, seguida de validación lingüística, de la escala North Star Ambulatory Assessment al español. Materiales y métodos: Se utilizó un proceso estructurado, de múltiples etapas, basado en las guías internacionales, con los siguientes pasos: traducción (preparación, traducción directa, reconciliación, retrotraducción, revisión de la retrotraducción y revisión por médicos clínicos), validación lingüística mediante una prueba piloto (entrevista cognitiva, revisión médica, revisión de resultados y ajustes finales) y finalización (revisión de pruebas e informe final). Resultados: No surgieron dificultades importantes durante los pasos de traducción. La reconciliación de las traducciones directas requirió pocos cambios. En la validación lingüística fueron precisas varias reuniones para resolver dificultades de comprensión, en matices sutiles, en el significado de algunas palabras. El estudio piloto se realizó con 10 especialistas clínicos de diferentes lugares de España (fisioterapeutas y especialistas o residentes de medicina física y rehabilitación). Hubo seis comentarios, dos de ellos sobre las posiciones de partida en los ítems 4-5 (de pie sobre un solo pie) y 13 (de pie sobre los talones), y dos sobre las instrucciones de puntuación para los ítems 3 (levantarse de la silla) y 14 (saltar). Conclusión: Nuestro estudio ha proporcionado un instrumento cómodo y fiable para cuantificar las capacidades funcionales en niños con distrofia muscular de Duchenne en España. Las innovaciones en el método y nuestros resultados podrían usarse como modelo para la validación lingüística en otros idiomas.(AU)

Introduction: There is a need for reliable and properly validated outcome measures in Duchenne muscular dystrophy, both to monitor functional impairment and to assess the impact of new therapies.Objective: We aimed to perform a translation of the North Star Ambulatory Assessment scale into Spanish and a linguistic validation of the resulting Spanish version. Materials and methods. A structured multistage process based on international guidelines was used, with the following steps: translation (preparation, forward translation, reconciliation, back translation, back translation review, clinicians’ review), linguistic validation though pilot testing (cognitive interviewing, medical review, review of results and final changes), and finalization (proofreading, final report). Results: No major difficulties were found during translation steps. Few changes were needed to reconcile forward translations. The linguistic validation process required several meetings to solve comprehension difficulties due to subtle nuances in the meaning of some words. The pilot study was carried out in 10 practitioners from different places in Spain, including both physiotherapists and specialists and registrars in physical medicine and rehabilitation. A total of 6 comments were obtained, including 2 comments on starting positions for items 4-5 (stand on one leg) and item 10 (stand on heels) and 2 comments on scoring instructions for item 3 (stand up from chair) and item 14 (jump). Conclusion: Our study has resulted in a convenient and reliable instrument for the quantification of functional abilities in boys with Duchenne muscular dystrophy in Spain. Our innovations in methods and our results could be used as a suggested template for the North Star Ambulatory Assessment linguistic validation in other languages.(AU)

Amaranthaceae pollens: review of an emerging allergy in the mediterranean area

The Amaranthaceae family is composed of about 180 genera and 2500 species. These common weeds have become increasingly relevant as triggers of allergy in the last few years, as they are able to rapidly colonize salty and arid soils in extensive desert areas. The genera Chenopodium, Salsola, and Amaranthus are the major sources of pollinosis from the Amaranthaceae family in southern Europe, western United States, and semidesert areas of Saudi Arabia, Kuwait, and Iran. In Spain, Salsola kali is one of the most relevant causes of pollinosis, together with olive and grasses. To date, 9 Amaranthaceae pollen allergens from Chenopodium album, Salsola kali, and Amaranthus retroflexus have been described and are listed in the International Union of Immunological Societies allergen nomenclature database. The major allergens of Amaranthaceae pollen belong to the pectin methylesterase, Ole e 1-like, and profilin panallergen families, whereas the minor allergens belong to the cobalaminindependent methionine synthase and polcalcin panallergen families. These relevant allergens have been characterized physicochemically, and immunologically at different levels. Recombinant forms, allergenic fusion recombinant proteins, and hypoallergenic derivatives of these allergens have been expressed in bacteria and yeast and compared with their natural proteins from pollen. In this review, we provide an extensive overview of Amaranthaceae pollen allergens, focusing on their physicochemical, and immunological properties and on their clinical significance in allergic patients. We also review studies where these recombinant allergens and their hypoallergenic derivatives have been used in clinical diagnosis and their potential use in personalized therapy (AU)

La familia Amaranthaceae se compone de alrededor de 180 géneros y 2500 especies vegetales. En los últimos años, el polen de estas malezas está adquiriendo una relevancia cada vez mayor como inductor de alergia, ya que estas plantas son capaces de colonizar rápidamente los suelos salinos y áridos de zonas desertificadas. El polen de los géneros Chenopodium, Salsola y Amaranthus es el causante del mayor número de casos de polinosis asociados a la familia Amaranthaceae en países del sur de Europa, oeste de Estados Unidos, y en las zonas semi-desérticas de Arabia Saudí, Kuwait o Irán. En España, el polen de Salsola kali es una de las causas más relevantes de polinosis junto con los pólenes de olivo y gramíneas. Hasta la fecha, se han descrito un total de nueve alérgenos del polen de Chenopodium album, Salsola kali y Amaranthus retroflexus, los cuales se han depositado en la base de datos de nomenclatura de alérgenos IUIS. Los alérgenos principales del polen de la familia Amaranthaceae pertenecen a las familias pectin metilesterasa, Ole e 1, o a la familia de panalérgenos -profilina-, mientras que los alérgenos secundarios descritos pertenecen a la familia de panálergenos -polcalcina-, o bien, corresponden a la metionina sintasa independiente de cobalamina. Estos relevantes alérgenos se han caracterizado fisicoquímica e inmunológicamente en mayor o menor profundidad. Las formas recombinantes, y sus variantes recombinantes o derivados hipoalergénicos fusionados a un tag, se han expresado en bacteria o levadura y se ha comparado su funcionalidad con sus correspondientes homólogos naturales presentes en el polen. En esta revisión, ofrecemos una extensa descripción de los alérgenos del polen de la familia Amaranthaceae, centrándonos en sus propiedades físico-químicas e inmunológicas, y en su importancia clínica en los pacientes alérgicos. Por otra parte, también hemos revisado aquellos estudios en donde se han utilizado estos alérgenos recombinantes y sus derivados hipoalergénicos en el diagnóstico clínico, o bien, en donde se describe su potencial uso en la terapia personalizada (AU)

Characterization of profilin and polcalcin panallergens from ash pollen

Background: Ash ( Fraxinus excelsior ) is an important source of allergenic pollen in temperate areas of Europe. Profilin and polcalcin are 2 important panallergens involved in cross-reactivity between different sources. Objective: To clone and produce Fra e 2 (profilin) and Fra e 3 (polcalcin) as recombinant proteins and evaluate their immunological properties using the natural forms obtained from ash pollen. Methods: Total RNA from ash pollen was used as a template to obtain the specific complementary DNA (cDNA) sequences of the 2 panallergens. The cDNA-encoding sequences were cloned into the pET11b expression vector and used to transform BL21 (DE3) Escherichia coli cells. Proteins were expressed, purified by chromatography, and characterized structurally by circular dichroism, mass spectrometry, and immunologically by western blot and ELISA using profilin and polcalcin polyclonal antibodies and human sera from ash pollen-sensitized patients. Results: Profilin and polcalcin amino acid sequences from ash pollen showed a high degree of identity with homologous allergens from different sources. The cDNA-encoding allergen sequences were expressed as nonfusion recombinant proteins and purified to homogeneity. Secondary structure values were similar to those obtained from other members of these families. Allergenic properties of the recombinant allergens were observed to be equivalent to those of the natural counterparts of F excelsior pollen. Conclusions: Fra e 2 and Fra e 3 recombinant allergens might be used in clinical diagnosis to determine profilin- and polcalcin-specific IgE levels present in the sera of ash pollen-sensitized patients, thus facilitating the finding of the sensitizing source in areas with complex sensitization profiles (AU)

Antecedentes: El polen de fresno (Fraxinus excelsior ) es una importante fuente alergénica en zonas cálidas de Europa. La profilina y polcalcina son 2 panalérgenos implicados en reactividad cruzada. Objetivos: Clonar y producir Fra e 2 (profilina) y Fra e 3 (polcalcina) como alérgenos recombinantes. Comparar sus propiedades inmunológicas con sus formas naturales del polen de fresno. Métodos: El RNA total de polen de fresno se utilizó como molde para obtener los cDNAs específicos de ambos panalérgenos. Dichos cDNAs se clonaron en el vector de expresión pET11b y se transformaron células de Escherichia coli BL21(DE3). Las proteínas se caracterizaron mediante dicroísmo circular, espectrometría de masas, inmunodetección en membrana y ELISA utilizando anticuerpos policlonales frente a profilina y polcalcina y sueros de pacientes alérgicos al polen de fresno. Resultados: Las secuencias de aminoácidos de la profilina y polcalcina de polen de fresno presentaban una identidad de secuencia elevada con alérgenos homólogos. Dichos alérgenos se expresaron como proteínas recombinantes independientes y se purificaron a homogeneidad. Los valores de estructura secundaria fueron similares a los de otros miembros de estas familias. Las propiedades alergénicas de los alérgenos recombinantes resultaron ser equivalentes a los de sus homólogos naturales del polen. Conclusiones: Los alérgenos recombinantes Fra e 2 y Fra e 3 podrían usarse en diagnóstico clínico para determinar los niveles de IgE específicos para profilina y polcalcina en los sueros de los pacientes sensibilizados al polen de fresno, facilitando así la identificación de la fuente sensibilizante en áreas donde los pacientes presentan perfiles alergénicos complejos (AU)

Estimacion pronostica en enfermos criticos. Validacion de un nuevo y muy sencillo sistema de estimación pronóstica de supervivencia en pacientes ingresados en una Unidad de Cuidados Intensivos / Prognostic estimation in critical patients. Validation of a new and very simple system of prognostic estimation of survival in an Intensive Care Unit

Objetivo. Realizar la validación de un nuevo sistema de estimación pronóstica de supervivencia de enfermos críticos (EPEC) atendidos en una Unidad de Cuidados Intensivos (UCI) polivalente. Diseño y ámbito. Análisis prospectivo de una cohorte de pacientes atendidos en la UCI de un Servicio de Medicina Intensiva polivalente de un hospital docente de referencia, dotado de 19 camas. Pacientes y método. Cuatrocientos ochenta y cuatro pacientes ingresados consecutivamente durante 6 meses de 2003. Recogida de datos de un conjunto mínimo básico de datos (CMBD) propio que incluye datos de identificación de pacientes (género, edad, etc.), motivo de ingreso y procedencia del mismo, estimación pronóstica de supervivencia mediante EPEC, MPM II 0 y SAPS II (considerados estos dos como gold standard). La mortalidad fue evaluada al alta hospitalaria. La validación de EPEC fue realizada mediante análisis de su capacidad discriminante (curvas ROC); la calibración de su capacidad pronóstica (test de Hosmer Lemeshow C) y resolución de las tablas de contingencia 2 x 2 alrededor de distintos valores de probabilidad (20, 50, 70 y valor medio de la estimación pronóstica). Se calculó la tasa estandarizada de mortalidad (SMR) para cada uno de los métodos. Se estableció la regresión lineal de EPEC respecto de MPM II 0 y SAPS II y se realizaron análisis de concordancia (test de Bland-Altman) de la predicción de mortalidad por los tres sistemas. Resultados. A pesar de una aparentemente buena correlación lineal, una exactitud de predicción y una capacidad de discriminación similares, EPEC no está bien calibrado (ninguna probabilidad de muerte superior al 50%) y los análisis de concordancia demuestran que más del 10% de los pares están fuera del intervalo de confianza del 95%. Conclusión. A pesar de su sencillez de aplicación y cálculo y de incorporar como variable el retraso de ingreso en UCI, EPEC no ofrece ninguna ventaja predictiva sobre MPM II 0 o SAPS II, y sus predicciones se ajustan peor a la realidad

Objective. To make the validation of a new system of prognostic estimation of survival in critical patients (EPEC) seen in a multidisciplinar Intensive care unit (ICU). Design and scope. Prospective analysis of a patient cohort seen in the ICU of a multidisciplinar Intensive Medicine Service of a reference teaching hospital with 19 beds. Patients and method. Four hundred eighty four patients admitted consecutively over 6 months in 2003. Data collection of a basic minimum data set that includes patient identification data (gender, age), reason for admission and their origin, prognostic estimation of survival by EPEC, MPM II 0 and SAPS II (the latter two considered as gold standard). Mortality was evaluated on hospital discharge. EPEC validation was done with analysis of its discriminating capacity (ROC curve), calibration of its prognostic capacity (Hosmer Lemeshow C test), resolution of the 2 x 2 Contingency tables around different probability values (20, 50, 70 and mean value of prognostic estimation). The standardized mortality rate (SMR) for each one of the methods was calculated. Linear regression of the EPEC regarding the MPM II 0 and SAPS II was established and concordance analyses were done (Bland-Altman test) of the prediction of mortality by the three systems. Results. In spite of an apparently good linear correlation, similar accuracy of prediction and discrimination capacity, EPEC is not well-calibrated (no likelihood of death greater than 50%) and the concordance analyses show that more than 10% of the pairs were outside the 95% confidence interval. Conclusion. In spite of its ease of application and calculation and of incorporating delay of admission in ICU as a variable, EPEC does not offer any predictive advantage on MPM II 0 or SAPS II, and its predictions adapt to reality worse