Evaluación de la formación de biopelículas en aislamientos bacterianos y fúngicos por el método semicuantitativo de microtitulación con cristal violeta y el cualitativo de agar con rojo Congo / Assessment of biofilms formation of bacterial and fungal isolates using qualitative Congo red agar and semiquantitative crystal violet microtiter methods

Introducción. El 65 % de las infecciones humanas son producidas por bacterias o levaduras, cuya capacidad de formar biopelículas las hace más resistentes a los antimicrobianos y antifúngicos. Objetivo. Determinar la capacidad de formación de biopelículas en aislamientos bacterianos y fúngicos por medio de los métodos cuantitativo de microtitulación con cristal violeta y cualitativo de cultivo en agar con rojo Congo. Materiales y métodos. Con el método cuantitativo, se utilizaron los medios de cultivo infusión cerebro-corazón, tripticasa de soya y Müeller-Hinton para aislamientos bacterianos; para levaduras, se usaron caldo infusión cerebro-corazón y Sabouraud dextrosa. Para el método cualitativo de cultivo en agar, se utilizaron los mismos medios de cultivo más una solución con 3 % de rojo Congo y 10 % de dextrosa. Cómo método de referencia, se utilizó la propuesta de Stepanovic et al. Resultados. Se evaluaron 103 aislamientos bacterianos y 108 de levaduras. No es recomendable sustituir el caldo infusión cerebro-corazón por los caldos tripticasa de soya y Müeller-Hinton en el método cuantitativo, para evaluar la formación de biopelículas en los aislamientos bacterianos. El medio Sabouraud dextrosa, en caldo y agar, puede sustituir al de infusión de cerebro-corazón para evaluar la formación de biopelículas en levaduras, tanto por el método cuantitativo como por el cualitativo. Conclusión. El estudio de las biopelículas en el laboratorio de microbiología, a partir del método cualitativo de cultivo en agar con rojo Congo, es un procedimiento sencillo, rápido y de bajo costo, que proporciona información útil para el diagnóstico y la terapéutica de infecciones persistentes causadas por bacterias y levaduras.

Introduction. Sixty-five percent of human infections are caused by bacteria or yeasts able to form biofilms. This feature makes them more resistant to antimicrobials and antifungals. Objective. To determine biofilm formation capacity of bacterial and fungal isolates by quantitative crystal violet microtiter and qualitative Congo red agar methods. Materials and methods. Brain-heart infusion, trypticase soy broth and Müeller-Hinton culture media were used in bacterial isolates for the quantitative method; brain-heart infusion broth and Sabouraud dextrose were used for yeasts. The same culture media plus 3% Congo red and 10% dextrose were used to apply the qualitative method in agar. The proposal by Stepanovic, et al. was used as a reference method. Results. We evaluated 103 bacterial isolates and 108 yeasts isolates. We did not recommend substitute brain-heart infusion broth for trypticase soy and Müeller-Hinton broths for biofilm formation assessment in bacterial isolates using the quantitative method. Sabouraud dextrose medium, both broth and agar, can replace brain-heart infusion to assess biofilm formation in yeasts, quantitatively and qualitatively. Conclusion. The study of biofilms in the microbiology laboratory, using Congo red agar qualitative method, is a simple, fast, and inexpensive procedure that provides precise information for the diagnosis and treatment of persistent infections caused by bacteria and yeasts.

Scedosporiosis pulmonar post COVID-19 en paciente diabético: a propósito de un caso

Las especies de Scedosporium son consideradas patógenos oportunistas emergentes, que afectan a pacientes inmunocomprometidos o con respuesta inmunológica normal. La enfermedad invasiva grave supera tasas de mortalidad del 80 %. Se describe caso con afectación pulmonar causada por el complejo de especies de Scedosporium en un paciente masculino de 75 años de edad, procedente de Caracas, Venezuela, con diabetes mellitus tipo 2, infección respiratoria baja, dos infecciones previas por enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) e imagen radiológica de lesión de ocupación de espacio pulmonar basal izquierdo. Se envió al laboratorio de microbiología porción de aproximadamente 1 cm2 de tejido pulmonar, solicitando estudios micológicos y para micobacterias. Al examen directo con KOH al 20 % se observó un fragmento de hifa hialina tabicada. A los 12 días de incubación hubo crecimiento en agar Sabouraud dextrosa más gentamicina de colonias vellosas con pigmentado difusible color amarillo pálido a mostaza. Se realizó examen directo a las colonias con azul de algodón, observándose estructuras compatibles con el complejo de especies de Scedosporium. Scedosporium spp., es el segundo hongo filamentoso, después de Aspergillus spp., causante de infecciones respiratorias bajas. El paciente fue tratado con voriconazol después del diagnóstico micológico con una evolución satisfactoria. Las infecciones por especies de Scedosporium afectan órganos internos como los pulmones, similar al caso descrito. La infección por COVID-19 es un factor predisponente para adquirir infecciones fúngicas poco frecuentes. El laboratorio de microbiología cumple un rol importante en el diagnóstico de micosis causadas por hongos inusuales.

Scedosporium species are considered emerging opportunistic pathogens affecting immunocompromised patients or patients with normal immune response. Mortality rates exceed 80 % in severe invasive disease. We describe a case of lung involvement caused by Scedosporium species complex in a 75-year-old male patient from Caracas, Venezuela, with type 2 diabetes mellitus, lower respiratory tract infection, two previous coronavirus disease infections 2019 (COVID-19) and radiological findings of a left basal lung space-occupying lesion. A piece of lung tissue measuring approximately one cm2 was sent to the microbiology laboratory, requesting mycology and mycobacteria studies. Direct examination with 20 % KOH revealed a hyaline septate hyphal fragment. Growth of hairy colonies with diffusible pale yellow to mustard pigment was observed on Sabouraud dextrose plus gentamicin agar after 12 days of incubation. Structures compatible with the Scedosporium species complex were observed on direct examination of the colonies with cotton blue. Scedosporium spp. is the second most common filamentous fungus causing infections of the lower respiratory tract after Aspergillus spp. The patient was treated with voriconazole after mycological diagnosis with satisfactory outcome. Infections with Scedosporium spp. affect internal organs such as the lungs, similar to the case described. COVID-19 infection predisposes to the acquisition of uncommon fungal infections. The microbiology laboratory plays an important role in the diagnosis of mycoses caused by unusual fungi.

Assessment of biofilms formation of bacterial and fungal isolates using qualitative Congo red agar and semiquantitative crystal violet microtiter methods / Evaluación de la formación de biopelículas en aislamientos bacterianos y fúngicos por el método semicuantitativo de microtitulación con cristal violeta y el cualitativo de agar con rojo Congo

Introduction. Sixty-five percent of human infections are caused by bacteria or yeasts able to form biofilms. This feature makes them more resistant to antimicrobials and antifungals. Objective. To determine biofilm formation capacity of bacterial and fungal isolates by quantitative crystal violet microtiter and qualitative Congo red agar methods. Materials and methods. Brain-heart infusion, trypticase soy broth and Müeller­Hinton culture media were used in bacterial isolates for the quantitative method; brain-heart infusion broth and Sabouraud dextrose were used for yeasts. The same culture media plus 3% Congo red and 10% dextrose were used to apply the qualitative method in agar. The proposal by Stepanovic, et al. was used as a reference method. Results. We evaluated 103 bacterial isolates and 108 yeasts isolates. We did not recommend substitute brain-heart infusion broth for trypticase soy and Müeller-Hinton broths for biofilm formation assessment in bacterial isolates using the quantitative method. Sabouraud dextrose medium, both broth and agar, can replace brain-heart infusion to assess biofilm formation in yeasts, quantitatively and qualitatively. Conclusion. The study of biofilms in the microbiology laboratory, using Congo red agar qualitative method, is a simple, fast, and inexpensive procedure that provides precise information for the diagnosis and treatment of persistent infections caused by bacteria and yeasts.

Introducción. El 65 % de las infecciones humanas son producidas por bacterias o levaduras, cuya capacidad de formar biopelículas las hace más resistentes a los antimicrobianos y antifúngicos. Objetivo. Determinar la capacidad de formación de biopelículas en aislamientos bacterianos y fúngicos por medio de los métodos cuantitativo de microtitulación con cristal violeta y cualitativo de cultivo en agar con rojo Congo. Materiales y métodos. Con el método cuantitativo, se utilizaron los medios de cultivo infusión cerebro-corazón, tripticasa de soya y Müeller-Hinton para aislamientos bacterianos; para levaduras, se usaron caldo infusión cerebro-corazón y Sabouraud dextrosa. Para el método cualitativo de cultivo en agar, se utilizaron los mismos medios de cultivo más una solución con 3 % de rojo Congo y 10 % de dextrosa. Cómo método de referencia, se utilizó la propuesta de Stepanovic et al. Resultados. Se evaluaron 103 aislamientos bacterianos y 108 de levaduras. No es recomendable sustituir el caldo infusión cerebro-corazón por los caldos tripticasa de soya y Müeller-Hinton en el método cuantitativo, para evaluar la formación de biopelículas en los aislamientos bacterianos. El medio Sabouraud dextrosa, en caldo y agar, puede sustituir al de infusión de cerebro-corazón para evaluar la formación de biopelículas en levaduras, tanto por el método cuantitativo como por el cualitativo. Conclusión. El estudio de las biopelículas en el laboratorio de microbiología, a partir del método cualitativo de cultivo en agar con rojo Congo, es un procedimiento sencillo, rápido y de bajo costo, que proporciona información útil para el diagnóstico y la terapéutica de infecciones persistentes causadas por bacterias y levaduras.

Human Q Fever on the Guiana Shield and Brazil: Recent Findings and Remaining Questions.

PURPOSE OF REVIEW: In this review, we report on the state of knowledge about human Q fever in Brazil and on the Guiana Shield, an Amazonian region located in northeastern South America. There is a contrast between French Guiana, where the incidence of this disease is the highest in the world, and other countries where this disease is practically non-existent. RECENT FINDINGS: Recent findings are essentially in French Guiana where a unique strain MST17 has been identified; it is probably more virulent than those usually found with a particularly marked pulmonary tropism, a mysterious animal reservoir, a geographical distribution that raises questions. SUMMARY: Q fever is a bacterial zoonosis due to Coxiella burnetii that has been reported worldwide. On the Guiana Shield, a region mostly covered by Amazonian forest, which encompasses the Venezuelan State of Bolivar, Guyana, Suriname, French Guiana, and the Brazilian State of Amapá, the situation is very heterogeneous. While French Guiana is the region reporting the highest incidence of this disease in the world, with a single infecting clone (MST 117) and a unique epidemiological cycle, it has hardly ever been reported in other countries in the region. This absence of cases raises many questions and is probably due to massive under-diagnosis. Studies should estimate comprehensively the true burden of this disease in the region.

Correction to: HPV knowledge and vaccine acceptance among European adolescents and their parents: a systematic literature review.

[This corrects the article DOI: 10.1186/s40985-020-00126-5.].

HPV knowledge and vaccine acceptance among European adolescents and their parents: a systematic literature review.

BACKGROUND: Since the introduction of HPV vaccines, several studies have been conducted in different countries to assess HPV knowledge and vaccine acceptance. The aim of this study was to perform a systematic literature review to summarize results and identify factors associated with HPV knowledge and vaccine acceptance in adolescents and their parents and to compile the measurement tools used in the published research studies performed in European countries where HPV is licensed. METHODS: A systematic literature review was conducted for studies published between January 1st 2006 and December 31st 2017. RESULTS: Seventy non-interventional studies performed in 16 European countries met the inclusion criteria. Thirty-eight of them reported data on HPV knowledge and 40 reported data on HPV vaccine acceptance. Further, 51.8% of adolescents (range 0% to 98.6%) and 64.4% of parents (range 1.7% to 99.3%) knew about HPV infection. Insufficient information and safety concerns were the main barriers to vaccination acceptance. CONCLUSION: HPV knowledge and vaccine acceptance are still modest and vary widely between studies across EU countries. Coordinated efforts should be made to provide the relevant population with information for informed decision-making about HPV vaccination.

Adoptive T-cell therapy with CD45RA-depleted donor in the treatment of cytomegalovirus disease in immunocompromised non-transplant patients.

Cytomegalovirus (CMV) infections can induce severe complications in immunosuppressed patients. Currently, ganciclovir represents the preferred treatment option; however, in patients with resistance or toxicity related to ganciclovir, the therapeutic options are limited.Cellular immunity plays an important role in the control of viral infections. Adoptive T-cell therapy can contribute to recovering immunological function in immunosuppressed patients. Selective T-cell depletion targeting CD45RA enhances early T-cell recovery and can represent a salvage therapy. In this study, an immunocompromised non-transplanted patient with CMV disease and toxicity to conventional therapy was successfully treated by adoptive transfer of CD45RA-depleted T-cells.

Histoplasma capsulatum antigen detection tests as an essential diagnostic tool for patients with advanced HIV disease in low and middle income countries: A systematic review of diagnostic accuracy studies.

INTRODUCTION: Disseminated histoplasmosis, a disease that often resembles and is mistaken for tuberculosis, is a major cause of death in patients with advanced HIV disease. Histoplasma antigen detection tests are an important addition to the diagnostic arsenal for patients with advanced HIV disease and should be considered for inclusion on the World Health Organization Essential Diagnostics List. OBJECTIVE: Our objective was to systematically review the literature to evaluate the diagnostic accuracy of Histoplasma antigen tests in the context of advanced HIV disease, with a focus on low- and middle-income countries. METHODS: A systematic review of the published literature extracted data on comparator groups, type of histoplasmosis, HIV status, performance results, patient numbers, whether patients were consecutively enrolled or if the study used biobank samples. PubMed, Scopus, Lilacs and Scielo databases were searched for published articles between 1981 and 2018. There was no language restriction. RESULTS: Of 1327 screened abstracts we included a total of 16 studies in humans for further analysis. Most studies included used a heterogeneousgroup of patients, often without HIV or mixing HIV and non HIV patients, with disseminated or non-disseminated forms of histoplasmosis. Six studies did not systematically use mycologically confirmed cases as a gold standard but compared antigen detection tests against another antigen detection test. Patient numbers were generally small (19-65) in individual studies and, in most (7/10), no confidence intervals were given. The post test probability of a positive or negative test were good suggesting that this non invasive diagnostic tool would be very useful for HIV care givers at the level of reference hospitals or hospitals with the infrastructure to perform ELISA tests. The first results evaluating point of care antigen detection tests using a lateral flow assay were promising with high sensitivity and specificity. CONCLUSIONS: Antigen detection tests are promising tools to improve detection of and ultimately reduce the burden of histoplasmosis mortality in patients with advanced HIV disease.

Gerencia de diagnóstico y vigilancia epidemiológica del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel": Una década de avances y logros / Diagnostic and epidemiological surveillance management The National Institute of Hygiene "Rafael Rangel": A decade of advances and achievements

Buscando en los registros de las principales actividades de la Gerencia de Diagnóstico y Vigilancia Epidemiológica ha sido difícil elegir entre tantas vivencias, aquellos elementos que marcaron pauta durante la década 2008 ­ 2018. No obstante, es de resaltar que los desafíos afrontados ante la aparición de brotes, epidemias y la primera pandemia del siglo XXI, trajeron consigo un cúmulo de experiencias que se presentan en este artículo. Como centro nacional de referencia en las áreas de Bacteriología, Micología y Virología, continuamos aportando soluciones a la salud pública nacional mediante la actualización profesional de nuestro personal y la formación de la generación de relevo, en la que participan profesionales de excelencia, altamente especializados y sensibilizados con la problemática y los requerimientos de nuestra población. Asimismo, a través de la coordinación, supervisión y evaluación de la Red de laboratorios de salud pública, se contribuye con el fortalecimiento del diagnóstico de enfermedades transmisibles y vigilancia epidemiológica en el país. El trabajo realizado en estos diez años ha sido excelente, crucial y prioritario para enfrentar las emergencias. Debemos seguir trabajando en dos aspectos claves: 1. Mayor integración del laboratorio con el componente epidemiológico y clínico del país para ser más útiles al sistema de salud, y 2. Consolidar la creación del edificio sede del Centro de Diagnóstico de Enfermedades Transmisibles del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" (INHRR), proyecto en el que estamos trabajando con la asesoría de la OPS/OMS.

Looking at the records of the main activities of the Diagnostic and Epidemiological Surveillance Management, it has been difficult to choose between many experiences, those elements that set the standard during the 2008 ­ 2018 decade. However, it is noteworthy that the challenges faced with the emergence of outbreaks, epidemics and the first pandemic of the 21st century, brought with it a wealth of experiences that are presented in this article. As a national reference center in Bacteriology, Mycology and Virology areas, we continue to provide solutions to public health through the professional updating of our staff and formation of the relief generation, in which participate professionals of excellence, highly specialized and sensitized with the problems and requirements of our population. Likewise, through the coordination, supervision and evaluation of the public health laboratories network, it contributes to the strengthening of the communicable diseases diagnosis and epidemiological surveillance in the country. The work done in these ten years has been excellent, crucial and priority to face emergencies. We must continue working on two key aspects: 1. Greater laboratory integration with the epidemiological and clinical component of the country to be more useful to the health system, and 2. Consolidate headquarters building creation of the National Institute of Hygiene "Rafael Rangel" (INHRR) Diagnostic Center for Communicable Diseases, project in which we are working with the PAHO / WHO advice.

Identificación molecular y sensibilidad a los antifúngicos de aislamientos de sangre del complejo Candida parapsilosis en Venezuela / Molecular identification and in vitro antifungal susceptibility of blood isolates of the Candida parapsilosis species complex in Venezuela

Antecedentes. Candida parapsilosis constituye un complejo de especies formado por Candida parapsilosis sensu stricto, Candida orthopsilosis y Candida metapsilosis. Estudios a nivel mundial han descrito su epidemiología y sensibilidad a los antifúngicos. Objetivos. Los objetivos de este trabajo fueron identificar molecularmente aislamientos de sangre del complejo Candida parapsilosis y determinar su sensibilidad in vitro a los antifúngicos de uso sistémico. Métodos. Se estudiaron 86 aislamientos del complejo C. parapsilosis, provenientes de la Red de Vigilancia de Candidemia del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel, recogidos en el periodo 2008-2011. Se realizó la amplificación del gen de la deshidrogenasa alcohólica secundaria por reacción en cadena de la polimerasa y los productos fueron analizados mediante los polimorfismos de la longitud de sus fragmentos de restricción, mediante el uso de la enzima BanI. Las pruebas de sensibilidad se realizaron mediante Etest® según las instrucciones del fabricante, con modificaciones. Resultados. De los 86 aislamientos estudiados, 81 (94,2%) fueron C. parapsilosis sensu stricto, 4 (4,6%) C. orthopsilosis y uno (1,2%) C. metapsilosis. C. parapsilosis fue sensible a la anfotericina B y la caspofungina, y su porcentaje de resistencia al fluconazol y el voriconazol fue bajo. C. orthopsilosis y C. metapsilosis fueron sensibles a todos los antifúngicos probados. Conclusiones. Los resultados aportaron por primera vez en Venezuela información importante sobre la distribución del complejo C. parapsilosis en casos de candidemia, y apoyan la necesidad de continuar con los programas de vigilancia, incluyendo la discriminación molecular de las especies y las pruebas de sensibilidad a los antifúngicos, que permitirán orientar la terapia específica (AU)

Background. Candida parapsilosis is a species complex consisting of Candida parapsilosis sensu stricto, Candida orthopsilosis, and Candida metapsilosis. Studies worldwide have described its epidemiology and susceptibility to antifungal agents. Aims. The aims of this study were to carry out the molecular identification of blood isolates belonging to the Candida parapsilosis species complex, and to determine their in vitro susceptibility to antifungals of systemic use. Methods. A study of 86 strains of C. parapsilosis species complex collected in 2008-2011 and obtained from the Candidaemia Surveillance Network of Mycology Department of the Rafael Rangel National Institute of Hygiene, was made. Secondary alcohol-dehydrogenase gene amplification was performed using polymerase chain reaction, and the products were analysed by restriction fragments length polymorphisms using the enzyme BanI. Susceptibility tests were performed using Etest®, following the manufacturer's instructions with modifications. Results. Of the 86 isolates studied, 81 (94.2%) were C. parapsilosis sensu stricto, 4 (4.6%) C. orthopsilosis, and one (1.2%) C. metapsilosis. C. parapsilosis isolates were susceptible to amphotericin B and caspofungin, showing low rates of resistance to fluconazole and voriconazole. C. orthopsilosis and C. metapsilosis were susceptible to all the antifungals tested. Conclusions. The results obtained in Venezuela provide for the first time important information about the distribution of C. parapsilosis species complex in cases of candidaemia, and support the need for continuing surveillance programs, including molecular discrimination of species and antifungal susceptibility tests, which may guide specific therapy (AU)

[Molecular identification and in vitro antifungal susceptibility of blood isolates of the Candida parapsilosis species complex in Venezuela]. / Identificación molecular y sensibilidad a los antifúngicos de aislamientos de sangre del complejo Candida parapsilosis en Venezuela.

BACKGROUND: Candida parapsilosis is a species complex consisting of Candida parapsilosis sensu stricto, Candida orthopsilosis, and Candida metapsilosis. Studies worldwide have described its epidemiology and susceptibility to antifungal agents. AIMS: The aims of this study were to carry out the molecular identification of blood isolates belonging to the Candida parapsilosis species complex, and to determine their in vitro susceptibility to antifungals of systemic use. METHODS: A study of 86 strains of C. parapsilosis species complex collected in 2008-2011 and obtained from the Candidaemia Surveillance Network of Mycology Department of the Rafael Rangel National Institute of Hygiene, was made. Secondary alcohol-dehydrogenase gene amplification was performed using polymerase chain reaction, and the products were analysed by restriction fragments length polymorphisms using the enzyme BanI. Susceptibility tests were performed using Etest®, following the manufacturer's instructions with modifications. RESULTS: Of the 86 isolates studied, 81 (94.2%) were C. parapsilosis sensu stricto, 4 (4.6%) C. orthopsilosis, and one (1.2%) C. metapsilosis. C. parapsilosis isolates were susceptible to amphotericin B and caspofungin, showing low rates of resistance to fluconazole and voriconazole. C. orthopsilosis and C. metapsilosis were susceptible to all the antifungals tested. CONCLUSIONS: The results obtained in Venezuela provide for the first time important information about the distribution of C. parapsilosis species complex in cases of candidaemia, and support the need for continuing surveillance programs, including molecular discrimination of species and antifungal susceptibility tests, which may guide specific therapy.

[Superficial mycoses: casuistry of the Mycology Department of the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel", Caracas, Venezuela (2001-2014)]. / Micosis superficiales: casuística del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel", Caracas, Venezuela (2001-2014).

The superficial mycoses are very common infectious diseases and therefore are a frequent reason for medical consultation. The aim of this study was to determine the diagnostic frequency of superficial mycoses in the Mycology Department of the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" during 14 years (2001-2014). A retrospective cross-sectional study was performed to review the mycological records of patients with presumptive diagnosis of superficial mycosis. Nails, hairs and epidermal scales were the processed samples. The identification of fungi was performed by macro and microscopic observation of colonies and biochemical and physiological tests, as required of the isolated agent. For the investigation of Malassezia spp. only direct examination was performed. Of the 3 228 samples processed, 1 098 (34%) were positive and their distribution according to the etiological agent was: dermatophytes 79.5%; 10.9% yeasts; non-dermatophytes fungi 5.1% and 4.5% Malassezia spp. The most frequently isolated dermatophyte was Trichophyton rubrum Complex (70.1%), followed by T mentagrophytes complex (15.1%), Microsporum canis (9.4%) and Epidermophyton floccosum (4%). The most frequent ringworms Were: Tinea unguium (66.8%), followed by Tineapedis (16.4%) and Tinea capitis (8.1%). Candida parapsilosis complex (37.5%) was the most frequently isolated yeast and Fusarium spp. (53.6%) was the most isolated among non-dermatophyte fungi, followed by Aspergillus spp. (19.6%) and Acremonium spp. (10.7%). The identification of the etiological agent is essential to guide appropriate treatment. This study constitutes an important contribution to the knowledge of the epidemiology of superficial mycoses in our country.

Micosis superficiales: casuística del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel”, Caracas,Venezuela (2001-2014) / Superficial mycoses: casuistry of the Mycology Department of the Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel”, Caracas, Venezuela (2001-2014)

Las micosis superficiales son muy comunes y por ello son motivo de consulta médica frecuente. El objetivo de este trabajo fue conocer la frecuencia de diagnóstico de las micosis superficiales en el Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” en Caracas, Venezuela, durante 14 años (2001-2014). Se realizó un estudio transversal y retrospectivo de revisión de historias micológicas de pacientes con diagnóstico presuntivo de micosis superficial. Las muestras procesadas fueron uñas, pelos y escamas epidérmicas. La identificación de los hongos se realizó mediante observación macro y microscópica de las colonias y pruebas de identificación bioquímicas y fisiológicas, según requerimiento del agente aislado. Para la investigación de Malassezia spp. solo se realizó examen directo. De las 3228 muestras procesadas, 1098 (34%) resultaron positivas y su distribución según el agente etiológico fue: 79,5% dermatofitos; 10,9% levaduras; 5,1% hongos no dermatofitos y 4,5% Malassezia spp. El dermatofito más aislado fue el Complejo Trichophyton rubrum (70,1%), seguido del Complejo T. mentagrophytes (15,1%), Microsporum canis (9,4%) y Epidermophyton floccosum (4%). Las tiñas más frecuentes fueron: Tinea unguium (66,8%), seguida de Tinea pedis (16,4%) y Tinea capitis (8,1%). En el grupo de levaduras el Complejo Candida parapsilosis (37,5%) fue el más aislado y entre los hongos no dermatofitos el más frecuente fue Fusarium spp. (53,6%), seguido de Aspergillus spp. (19,6%) y Acremonium spp. (10,7%). La identificación del agente etiológico es fundamental para orientar un tratamiento adecuado. Esta casuística constituye un aporte importante para el conocimiento de la epidemiología de las micosis superficiales en nuestro país.

The superficial mycoses are very common infectious diseases and therefore are a frequent reason for medical consultation. The aim of this study was to determine the diagnostic frequency of superficial mycoses in the Mycology Department of the Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” during 14 years (2001-2014). A retrospective cross-sectional study was performed to review the mycological records of patients with presumptive diagnosis of superficial mycosis. Nails, hairs and epidermal scales were the processed samples. The identification of fungi was performed by macro and microscopic observation of colonies and biochemical and physiological tests, as required of the isolated agent. For the investigation of Malassezia spp. only direct examination was performed. Of the 3 228 samples processed, 1 098 (34%) were positive and their distribution according to the etiological agent was: dermatophytes 79.5%; 10.9% yeasts; non-dermatophytes fungi 5.1% and 4.5% Malassezia spp. The most frequently isolated dermatophyte was Trichophyton rubrum Complex (70.1%), followed by T. mentagrophytes complex (15.1%), Microsporum canis (9.4%) and Epidermophyton floccosum (4%). The most frequent ringworms were: Tinea unguium (66.8%), followed by Tinea pedis (16.4%) and Tinea capitis (8.1%). Candida parapsilosis complex (37.5%) was the most frequently isolated yeast and Fusarium spp. (53.6%) was the most isolated among non-dermatophyte fungi, followed by Aspergillus spp. (19.6%) and Acremonium spp. (10.7%). The identification of the etiological agent is essential to guide appropriate treatment. This study constitutes an important contribution to the knowledge of the epidemiology of superficial mycoses in our country.

Frecuencia y perfil de sensibilidad in vitro de aislamientos del Complejo Candida parapsilosis provenientes de pacientes con candidemias / Frequency and in vitro susceptibility profile of Candida parapsilosis Complex isolates from patients with candidemia

El objetivo de este trabajo fue conocer la frecuencia y el perfil de sensibilidad in vitro de aislamientos del Complejo Candida parapsilosis provenientes de casos de candidemias. Se estudiaron 754 cepas (Periodo 2008-2011), de la Red de Vigilancia de Candidemia del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel”. La identificación de las cepas se realizó por pruebas fenotípicas. La sensibilidad in vitro a los antifúngicos se evaluó por el método de Etest® y se determinó la concentración mínima inhibitoria a anfotericina B (AB), caspofungina (CS), fluconazol (FZ), y voriconazol (VZ). Se calcularon los puntos de corte epidemiológicos (PCE) y los rangos de cepas salvajes (PS) para cada antifúngico. El 43,6% de las cepas (n=328) fueron identificadas como Complejo C. parapsilosis; todas fueron sensibles a AB y presentaron bajos porcentajes de resistencia a FZ (4,3%), VZ (1,2%) y CS (0,6%). Los PCE y los rangos de PS (en µg/mL) fueron: FZ: 2/0,03-2; VZ y AB: 0,06/0,002-0,06 y CS: 0,5/0,002-0,5 respectivamente. Los resultados de este estudio aportaron información importante sobre el comportamiento del Complejo C. parapsilosis frente a los antifúngicos más utilizados en el tratamiento de las candidemias.

The aim of this study was to determine the frequency and in vitro susceptibility profile of Candida parapsilosis Complex isolates from patients with candidemia. Seven hundred and fifty four (754) strains (Period 2008-2011), from the Candidemia Surveillance Network of the Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” were studied. The strains identification was performed by phenotypic methods. In vitro antifungal susceptibility was evaluated by the Etest® method and minimum inhibitory concentration for amphotericin B (AB), caspofungin (CS), fluconazole (FZ), and voriconazole (VZ) was determined. Epidemiological cut off values (ECV) and ranges for wild type strains (WT) were also calculated for each antifungal. Forty three point six (43.6%) of the isolates (n=328) belonged to C. parapsilosis Complex; all of them were susceptible to AB and showed low resistance percentages to FZ (4.3%), VZ (1.2%) and CS (0.6%). The ECV and WT strains ranges (in mcg/mL) were: FZ: 2/0.03-2; VZ and AB: 0.06/0.002-0.06 and CS: 0.5/0.002-0.5 respectively. The results of this study provided important information about the behavior of the C. parapsilosis Complex against the most commonly antifungal agents used for the treatment of candidemias.

Micoteca del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel”: 60 años preservando la biodiversidad fúngica de interés médico / Fungal collection of the National Institute of Hygiene “Rafael Rangel”: 60 years preserving fungal biodiversity of medical interest in Venezuela

La Micoteca del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” (INHRR) fue creada en el año 1955 y es la colección de hongos microscópicos autóctonos más grande y representativa del país. Cuenta con 2.500 cepas pertenecientes a 77 géneros y 165 especies de hongos y actinomicetos, de importancia médica, epidemiológica, industrial e histórica, preservados por duplicado bajo los métodos de agua por Castellani y aceite mineral. La colección tiene presencia a nivel internacional a través del catálogo y la página web del Centro Venezolano de Colecciones de Microorganismos (CVCM), que a su vez está afiliada a la Federación Mundial de Colecciones de Cultivos (WFCC). Además, a través de su membresía a la Federación Latinoamericana de Colecciones de Cultivos (FELACC), sus datos están disponibles en la página web de la Asociación Argentina de Microbiología (AAM). La conservación de hongos microscópicos es fundamental, debido a su importancia en el funcionamiento de los ecosistemas y a su impacto en la vida del hombre. Esta Micoteca garantiza la preservación ex situ de la biodiversidad fúngica. Sus características la consolidan como una unidad cónsona con las exigencias de los ámbitos científico, tecnológico y docente, para el desarrollo de investigaciones científicas, particularmente en el área de medicina.

The fungal collection (Mycothec) of the National Institute of Hygiene “Rafael Rangel” (INHRR) was created in 1,955 and is the largest and more representative collection of the country’s indigenous microscopic fungi. It has 2,500 strains belonging to 77 genera and 165 species of fungi and actinomycetes retaining medical, epidemiological, industrial and historical importance, preserved by duplicate under water by Castellani and mineral oil methods. The collection has international presence through the catalog and the website of the Venezuelan Center of Microorganism Collections (CVCM), which in turn belongs to the World Federation of Culture Collections (WFCC). In addition, through its membership to the Latin American Federation of Culture Collections (FELACC) the data are accessible on the website of the Argentinian Association of Microbiology (AAM). The conservation of microscopic fungi is essential, due to its importance in the ecosystems functioning and their impact on human life. This Mycothec guarantee the ex situ conservation of fungal biodiversity. Its characteristics consolidate it as a consonant unit with the requirements of scientific, technological, and educational areas for the development of scientific research, particularly in the ​​medicine area.

Susceptibilidad in vitro a cinco antifúngicos de aislamientos del Complejo Fusarium solani provenientes de úlceras corneales / In vitro susceptibility to five antifungals of Fusarium solani Complex isolates obtained from corneal ulcers

El Complejo Fusarium solani (CFS) se encuentra distribuido en la naturaleza, causando un amplio espectro de infecciones en los humanos, desde superficiales, como la queratitis, hasta infecciones fúngicas invasoras, caracterizándose por su resistencia a los antimicóticos. El objetivo de esta investigación fue determinar la susceptibilidad in vitro del CFS frente a cinco antifúngicos. Se utilizaron 30 aislados obtenidos de úlceras corneales provenientes de la colección de cultivos del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” y se siguió el protocolo descrito en el documento M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI), determinando las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CMI) por microdilución en caldo para anfotericina B, itraconazol, posaconazol, voriconazol y fluconazol. En general, todas las drogas presentaron CMI elevadas, siendo voriconazol y anfotericina B los antifúngicos que exhibieron mejor actividad, mientras que itraconazol, posaconazol y fluconazol mostraron actividad nula. Los resultados de este estudio aportaron información importante sobre el comportamiento del CFS frente a los antifúngicos de uso común en la práctica clínica por primera vez en Venezuela. Es imprescindible que el médico conozca la actividad de estas drogas para poder tomar decisiones y orientar una conducta terapéutica adecuada.

The Fusarium solani Complex (FSC) is distributed in nature, producing a wide spectrum of infections in humans, from superficial ones such as keratitis, to invasive fungal infections, characterized by their resistance to antimycotics. The purpose of this investigation was to determine the in vitro susceptibility of the FSC to five antifungals. We used 30 isolates obtained from corneal ulcers kept at the culture collection of the Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” and we followed the protocol described in the M38-A2 document of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) determining the Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) by broth microdilution for amphotericin B, itraconazole, posaconazole, voriconazole and fluconazole. In general, all the drugs presented high MICs, voriconazole and amphotericin B being the antifungals which showed the best activity, while itraconazole, posaconazole and fluconazole showed a null activity. The results of this study provided, for the first time in Venezuela, important information about the behavior of the FSC towards commonly used antifungals. It is mandatory that physicians know the activity of these drugs in order to be able to take decisions and devise an guide an appropriate therapeutic management.

Estudio comparativo entre los sistemas automatizados Vitek YBC® y Microscan Walk Away RYID® con los métodos fenotípicos convencionales para la identificación de levaduras de interés clínico / A comparative study between the Vitek YBC® and Microscan Walk Away RYID® automated systems with conventional phenotypic methods for the identification of yeasts of clinical interest

El objetivo de este trabajo fue comparar la identificación de levaduras de interés clínico por los métodos automatizados Vitek YBC® y Microscan Walk Away RYID® con los métodos fenotípicos convencionales. Se utilizaron 193 aislamientos de levaduras provenientes de muestras clínicas y cinco cepas controles. Todas las levaduras fueron identificadas por los métodos automatizados antes nombrados y los métodos fenotípicos convencionales de asimilación de carbohidratos, visualización de la morfología microscópica con agar harina de maíz y el uso de agar cromogénico. Para evaluar las variables se utilizaron tablas de contingencia de 2×2, Chi cuadrado de Mc Nemar, el índice Kappa, y se calcularon los valores de concordancia, así como los errores mayores y menores de los métodos automatizados. Las levaduras se dividieron en dos grupos: 1) de aislamiento frecuente y 2) de aislamiento poco frecuente. Los sistemas Vitek YBC® y Microscan Walk Away RYID® fueron concordantes en un 88,4 y 85,9% respectivamente, cuando se compararon con los métodos fenotípicos convencionales. Aunque ambos sistemas automatizados se pueden utilizar para la identificación de levaduras, la presencia de errores mayores y menores indica la posibilidad de identificaciones incorrectas, por lo tanto, el operador de estos equipos debe utilizar paralelamente pruebas fenotípicas como la visualización de la morfología microscópica en agar harina de maíz y el agar cromogénico, sobre todo frente a levaduras de aislamiento poco frecuente. Los sistemas automatizados son una herramienta valiosa, sin embargo, la experiencia y el criterio del microbiólogo son una fortaleza importante para asegurar la calidad de los resultados.

The aim of this study was to compare the identification of clinically relevant yeasts by the Vitek YBC® and Microscan Walk Away RYID® automated methods with conventional phenotypic methods. One hundred and ninety three yeast strains isolated from clinical samples and five controls strains were used. All the yeasts were identified by the automated methods previously mentioned and conventional phenotypic methods such as carbohydrate assimilation, visualization of microscopic morphology on corn meal agar and the use of chromogenic agar. Variables were assessed by 2×2 contingency tables, McNemar’s Chi square, the Kappa index, and concordance values were calculated, as well as major and minor errors for the automated methods. Yeasts were divided into two groups: 1) frequent isolation and 2) rare isolation. The Vitek YBC® and Microscan Walk Away RYID® systems were concordant in 88.4 and 85.9% respectively, when compared to conventional phenotypic methods. Although both automated systems can be used for yeasts identification, the presence of major and minor errors indicates the possibility of misidentifications; therefore, the operator of this equipment must use in parallel, phenotypic tests such as visualization of microscopic morphology on corn meal agar and chromogenic agar, especially against infrequently isolated yeasts. Automated systems are a valuable tool; however, the expertise and judgment of the microbiologist are an important strength to ensure the quality of the results.

Diagnóstico de neumocistosis a través de la inmunofluorescencia directa y la PCR anidada en pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica / Diagnosis through pneumocystosis direct immunofluorescence and nested PCR in patients with chronic obstructive pulmonary disease

La asociación EPOC- neumocitosis está descrita y existe la necesidad de optimizar la diferenciación entre enfermedad y colonización. Demostrar la presencia del Pneumocistys Jirovecci, como patógeno y/o colonizador. Estudio descriptivo, analítico, de cohorte de pacientes con diagnóstico de EPOC del Hospital General del Oeste (Caracas, Venezuela) durante el periodo de abril – julio 2012 con seguimiento hasta julio de 2013 y aplicación de la técnica de inmunofluorescencia directa (IFD) y/o PCR anidada (PCRa) en muestra de esputo (espontáneo – inducido) durante los periodos asintomáticos o durante la exacerbación del EPOC en seguimiento de un año. Se incluyeron 20 pacientes en el reclutamiento, con seguimiento al primer control de 5 pacientes; de estos solo 2 cumplieron la medición de esputo. Para la tercera evaluación una paciente había fallecido y la otra no cumplió con el seguimiento. Se demostró IFI+ en 10% de los reclutados, todos con clínica de exacerbación de la EPOC. La PCRa se demostró en 45%, 2 con exacerbación y el resto sin exacerbación. De los dos pacientes de seguimiento, una fue positiva para PCRa y no tenía exacerbación, la otra negativa por ambos métodos. Se demostró infección por Pj en los pacientes con EPOC exacerbado a través de IFI y la PCRa señala su positividad en infección pero también en aquellos sin infección o exacerbación documentando así la colonización y potencial fuente de infección para neumocistosis. Se demostró infección por Pj en paciente con exacerbación y colonización a través de la evidencia del genoma del hongo en pacientes sin exacerbación.

Pneumocistosis and COPD association is described and there is a need to differenciate between disease and colonization. To document the presence of Pnemocistys jirovecci as pathogenic or colonizer by direct immunofluoresencence technique (DIF) and/or nested polymerase chain reaction (nPCR) in sputum (spontaneous-induced) during asymptomatic periods or exacerbation of COPD during a year of follow-up. This is a a descriptive, analytic cohort of patients with COPD of the Hospital General del Oeste (Caracas, Venezuela) . They were studied during April - July 2012, with follow-up until July 2013. 20 patients were included. The first control follow up was in 5 patients with only two measures of IFI - PCRa. For the third evaluation one patient had died and the other did not comply with control. IFI + was demonstrated in 10 % of the recruits, all had COPD, exacerbation. PCRa + was demonstrated in 45%, 2 with exacerbation and all other without exacerbation. From the two followed patients one was positive for PCRn and had no exacerbation, the other was negative by both methods. Pj infection was demonstrated in patients with exacerbated COPD by IFI+ and the PCRa positivity in infection but also in those without infection or exacerbation documenting the colonization and potential source of infection for Pj. Pj infection wasdiagnosed in patients with exacerbation COPD and colonization through the evidence of the genome of the fungus in patients without exacerbation.

Condiciones de cultivo que fomentan la producción de sustancias antimicrobianas en actinomicetos patógenos y del suelo / Culture conditions that enhance the production of antimicrobial substances from pathogenic and soil actinomycetes

En el presente estudio fueron evaluadas 300 cepas de actinomicetos (140 de origen clínico y 160 del suelo). La producción de sustancias antimicrobianas del total de las cepas de actinomicetos fue evaluada utilizando los siguientes caldos: Bennett (M1), (M2), y el caldo levadura extracto de malta-dextrosa YMD (M3). Se ajustaron las condiciones óptimas de cultivo para lograr altas concentraciones de los metabolitos bioactivos. El proceso de fermentación fue utilizado en tiempos de incubación que variaron entre 5 hasta 10 días. La mayor producción de metabolitos bioactivos se obtuvo cuando se utilizó el medio de producción M2. La actividad antimicrobiana se vio favorecida con la adición de dextrosa, peptona proteosada y extracto de levadura y fosfato de potasio (K2P04), sulfato de magnesio (MgSO4) x 7H2O y carbonato de calcio (CaCO3). Se relacionaron los patrones de crecimiento, la actividad antimicrobiana y la producción de biomasa en las cepas de actinomicetos en los tres medios de cultivo utilizados. Las cepas que presentaron fuerte actividad antimicrobiana contra la mayoría de las bacterias grampositivas, gramnegativas y hongos, fueron seleccionadas para futuros estudios donde se realizará la extracción, purificación y caracterización de los metabolitos bioactivos producidos.

The present study evaluated 300 actinomyces strains (140 from clinical samples and 160 from soil samples). The production of antimicrobial substances by the total actinomyces strains was evaluated using the following broths: Bennet (M1), (M2), and malt-dextrose yeast extract broth YMD (M3). Cultures were adjusted to optimal conditions in order to obtain high bioactive metabolite concentrations. The fermentation process was used with incubation periods which varied between 5 and 10 days. The highest bioactive metabolite production was obtained when the M2 medium was used. Antimicrobial activity was favored with the addition of dextrose, proteose peptone, yeast extract, potassium phosphate (K2PO4), magnesium sulfate (MgSO4) x 7H2O and calcium carbonate (CaCO2). Growth patterns, antimicrobial activity, and biomass production of the actinomyces were related to the three culture media used. The strains which showed strong antimicrobial activity against most gram positive and gram negative bacteria and fungi were selected for future studies where the bioactive metabolites produced will be extracted, purified, and characterized.