Rapid and Sensitive Qualitative Duoplex Real-Time PCR Method for Discriminatory and Confirmatory Diagnosis of HTLV-1 and HTLV-2 Infections: Brazilian Multicentric Study.

Human T cell lymphotropic virus (HTLV) is the caustive agent of two main conditions i. e., the HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) and the adult T-cell leukemia/lymphoma (ATLL). HTLV diagnosis is based on serological and molecular approaches; however, an accurate and validated method is still needed. The objective of this study was to establish a rapid and sensitive molecular test to confirm and discriminate HTLV 1/2 types. The test validation was performed as a multicentric study involving HTLV confirmation centers throughout Brazil. Proviral DNA was extracted from whole blood and the amplification was performed using in-house designed primer and probe sets targeting the pol genomic region. An internal control to validate the extraction and amplification was also included. The limit of detection (LoD) of the assay was four copies/reaction for HTLV-1 and 10.9 copies/reaction for HTLV-2. The diagnostic sensitivity of the platform was 94.6% for HTLV-1, 78.6% for HTLV-2, and the specificity was 100% for both viruses. Cross-reactions of the test with human viruses including HAV, HBV, HCV, HIV-1/2, and parvovirus B19 were not observed. During the multicentric validation, the test was used to screen a total of 692 blood samples obtained from previously confirmed HTLV-positive individuals. From these, 91.1% tested positive being concordant with the previously obtained results. In conclusion, our duoplex-RT-PCR-HTLV1 /2 presented adequate efficiency for HTLV-1/2 differentiation showing high sensitivity and specificity. Therefore, it can be a suitable tool for confirmation of suspected and inconclusive HTLV cases, prenatal and pre-transplant diagnosis, in Brazil and in other countries HTLV-endemic countries.

Avaliação da resposta clínica dos pacientes com imunodeficiência comum variável submetidos à vacinação com antígenos proteicos e polissacarídicos / Clinical evaluation of patients with common variable immunodeficiency before and after immunization with polysaccharide and protein antigens

OBJETIVO: Avaliar a resposta clínica a imunização com antígenos proteicos e polissacarídicos após administração de vacinas de antígenos específicos (Pneumococo e Influenza H2N3 e H1N1) em pacientes com imunodeficiência comum variável (ICV) acompanhados no ambulatório de Imunodeficiências Primáriasdo Serviço de Imunologia Clínica e Alergia, Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP). MÉTODOS: Os pacientes foram diagnosticados segundo critérios da OMS, PAGID e ESID. Os pacientes foram vacinados contra Influenza H2N3, Influenza H1N1 e Pneumococo. A avaliação clínica foi realizada a partir de um escore clínico no qual os parâmetros considerados foram: pneumonias, sinusites, otite média aguda, infecções de vias aéreas superiores virais (IVAS), amigdalite, diarreia, bronquiectasias, hospitalizações, uso de antibiótico terapêutico, uso de antibiótico profilático, sepse e meningite. Avaliação do escore clínico foi realizada durante o ano que precedeu a vacinação e um ano após a administração das vacinas. RESULTADOS: Participaram do estudo 45 pacientes (51% mulheres), com idade entre 20 a 78 anos (média 36,3 anos). Observamos mediana de 7 anos de retardo no diagnóstico dos pacientes com ICV. IVAS, pneumonias e sinusites foram as manifestações infecciosas mais frequentes em mulheres (80%, 78% e 55% respectivamente). IVAS, sinusites e pneumonias foram os achados mais frequentes em homens (78%, 65% e 35% respectivamente). Houve redução significativa do escore clínico em relação ao número de sinusites e IVAS após a administração das vacinas (p < 0,001).CONCLUSÕES: Observamos redução do número de infecções, especialmente sinusites e IVAS no ano posterior à vacinação. Esta observação reforça o benefício da vacinação e sugere modificação na orientação quanto às indicações de vacinas nos pacientes com ICV.

Objective: To evaluate clinical response to immunization with polysaccharide and protein antigens following administration of specific antigen vaccines (Pneumococcus and Influenza H2N3 and H1N1) in patients with common variable immunodeficiency (CVID) treated at the Primary Immunodeficiency Outpatient Clinic of the Division of Clinical Immunology and Allergy at the Clinical Hospital of the School of Medicine of University of São Paulo (HC-FMUSP). Methods: Patients were diagnosed according to WHO, PAGID, and ESID criteria. Patients were vaccinated against Influenza H2N3, Influenza H1N1, and Pneumococcus. Clinical evaluation was performed using clinical scores for the following parameters: pneumonia, sinusitis, acute otitis media, viral upper respiratory tract infections (URI), tonsillitis, diarrhea, bronchiectasis, hospitalizations, antibiotic therapy, antibiotic prophylaxis, sepsis, and meningitis. Evaluation focused on one year prior to immunization and one year after the administration of vaccines. Results: A total of 45 patients (51% women), aged 20 to 78 years (mean 36.3 years), were evaluated. A median delay of 7 years was observed in the diagnosis of patients with CVID. URI, pneumonia, and sinusitis were the most frequent infectious conditions found in women (80%, 78%, and 55%, respectively); URI, sinusitis, and pneumonia were the most frequent findings in men (78%, 65%, and 35%, respectively). There was a significant reduction in the clinical scores assigned to the number of sinusitis and URI episodes following administration of the vaccines (p < 0.001). Conclusions: A reduction was observed in the number of infections, particularly sinusitis and URI, in the year following immunization. This finding reinforces the benefit of vaccination and suggests modifications to current recommendations for vaccines in patients with CVID.

Padronização do teste de ativação de basófilos para diagnóstico de reações adversas a medicamentos (PAP)

Uma das áreas de maior dificuldade diagnóstica é a de reação adversa a medicamentos, que tem como padrão ouro para confirmação de reações de hipersensibilidade, testes de provocação que podem desencadear no paciente uma reação tão grave quanto a utilização terapêutica da medicação. O grupo dos antiinflamatórios não esteroidais tem grande destaque, pois as reações alérgicas a eles têm sido cada vez mais freqüentes. Os basófilos humanos expressam o receptor de IgE de alta afinidade (FcεRI), que é o principal receptor ativador destas células. Após ativação ocorre a fusão dos grânulos Intracitoplasmáticos e do CD63 celular, aumentando a expressão desta molécula na superfície dos basófilos. A avaliação de marcadores de ativação na superfície celular dos basófilos, após estimulação alergênica, através da citometria de fluxo tem se mostrada eficiente para o diagnóstico das reações de hipersensibilidade, por ser utilizado para identificação de diferentes alergias. OBJETIVO: padronizar o teste de ativação de basófilos para avaliar se este teste pode ser aplicado no auxílio do diagnóstico das reações adversas a medicamentos. MÉTODOS: os pacientes foram divididos em 2 grupos: 10 indivíduos controles e 10 alérgicos a antiinflamatórios não esteroidais. Todos os pacientes eram alérgicos a Dermatophagoides pteronyssinus, controle positivo do ensaio. Primeiramente foram realizados os testes com curvas dose-resposta para a padronização do ensaio, utilizando-se diferentes concentrações dos diversos alérgenos e diferentes tempos de incubação. As células foram previamente incubadas com um tampão contendo IL-3 600 ng/mL. Posteriormente, foi feita a incubação com os alérgenos: DpT, diclofenaco, ácido acetilsalicílico e dipirona. Após a incubação, foi feita a marcação com os anticorpos: Anti-IgE (FITC), CD63 (PE) e CD45 (PERCP), para posterior leitura por citometria de fluxo. RESULTADOS: nos testes de padronização do ensaio foi identificado...