RESUMEN
Escherichia coli strains of serogroup O26 comprise two distinct groups of pathogens, characterized as enteropathogenic E. coli (EPEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC). Among the several genes related to type III secretion system-secreted effector proteins, espK was found to be highly specific for EHEC O26:H11 and its stx-negative derivative strains isolated in European countries. E. coli O26 strains isolated in Brazil from infant diarrhea, foods, and the environment have consistently been shown to lack stx genes and are thus considered atypical EPEC. However, no further information related to their genetic background is known. Therefore, in this study, we aimed to discriminate and characterize these Brazilian O26 stx-negative strains by phenotypic, genetic, and biochemical approaches. Among 44 isolates confirmed to be O26 isolates, most displayed flagellar antigen H11 or H32. Out of the 13 nonmotile isolates, 2 tested positive for fliCH11, and 11 were fliCH8 positive. The identification of genetic markers showed that several O26:H11 and all O26:H8 strains tested positive for espK and could therefore be discriminated as EHEC derivatives. The presence of H8 among EHEC O26 and its stx-negative derivative isolates is described for the first time. The interaction of three isolates with polarized Caco-2 cells and with intestinal biopsy specimen fragments ex vivo confirmed the ability of the O26 strains analyzed to cause attaching-and-effacing (A/E) lesions. The O26:H32 strains, isolated mostly from meat, were considered nonvirulent. Knowledge of the virulence content of stx-negative O26 isolates within the same serotype helped to avoid misclassification of isolates, which certainly has important implications for public health surveillance.
Asunto(s)
Escherichia coli Enterohemorrágica/aislamiento & purificación , Escherichia coli Enteropatógena/aislamiento & purificación , Fenotipo , Adhesinas Bacterianas/genética , Adhesión Bacteriana/genética , Brasil , Células CACO-2 , Escherichia coli Enterohemorrágica/clasificación , Escherichia coli Enterohemorrágica/genética , Escherichia coli Enteropatógena/clasificación , Escherichia coli Enteropatógena/genética , Proteínas de Escherichia coli/genética , Marcadores Genéticos , Células HeLa , Proteínas Hemolisinas/genética , Humanos , Filogenia , Reacción en Cadena de la Polimerasa , Polimorfismo de Longitud del Fragmento de Restricción , Análisis de Secuencia de ADN , Factores de Virulencia/genéticaRESUMEN
Cerca de 1/3 das consultas de emergência em crianças menores de 2 anos deve-se a casos de diarréia aguda, dos quais até 30 por cento dos causados por Escherichia coli enteropatogênica evoluem para diarréia persistente. Este estudotem como objetivo analisar a associação entre os diferentes padrões de adesão de E coli às células Hep-2 com diarréia aguda e persistente. Foram analisadas fezes de 34 crianças, internadas para terapia de reidratação nos Hospitais São Paulo e Darcy Vargas, em São Paulo, SP. Como controle, foram utilizadas fezes de 34 crianças pareadas por faixa etária, internadas nos mesmos hospitais, sem apresentarem quaisquer sintomas gastrointestinais nos 30 dias que precederam a coleta de fezes. Foram pesquisados os seguintes enteropatógenos: E coli causadoras de diarréia, Shigella, Salmonella, Yersinia enterocolitica, Campylobacter, Rotavirus, Adenovirus entérico e protoparasitas. Dentre as E coliisoladas foram pesquisados os padrões de adesão (adesão localizada-AL, adesão difusa-AD, adesão agregativa-AA e adesão localizada-like-ALL) às células Hep-2 e homologia com as sondas de DNA para AL (sondas EAF, eaeA), AA (sonda AA) e AD (sondas F184 e AIDA-I). Dos 34 casos, 24 apresentaram diarréia aguda (tempo máximo de duração de 14 dias) e 10, diarréia persistente (tempo de duração acima de 14 dias). Os padrões AL e AA foram detectados nos casos de diarréia aguda e persistente com freqüência semelhante, não sendo observados nos controles. 23,5 por cento das amostras de E coli isoladas foram Escherichia coli enteropatogênicas típicas (AL+, EAF+ e eaeA+); 8,8 por cento foram EAggEC (AA+) e hibridizaram com a sonda AA. As E coli produtoras de AD (DAEC) não hibridizaram com as sondas para AD e sua freqüência foi semelhante tanto em casos, quanto em controles. Neste estudo de caráter preliminar; E coli eaeA+ apresentando o padrão ALL foi mais freqüente em casos do que em controles, sugerindo que este grupo de bactérias possa realmente ter um potencial efeito enteropatogênico.
