Separation of the four most important latex allergens from latex gloves: A potential tool for diagnosis and immunotherapy purposes

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Evaluation and Comparison of Commercially Available Latex Extracts for Skin Prick Tests

Background: Crude latex extracts are commonly used in skin prick tests (SPT) for the diagnosis of natural rubber latex (NRL) allergy. Nevertheless, variations in protein and allergen composition between latex extracts from different manufacturers can hamper a correct diagnosis. Objectives: To analyze the heterogeneity of proteins and allergens in latex extracts from 7 different manufacturers and to assess its relevance in the diagnosis of latex allergy. Methods: Seven latex SPT extracts were analyzed for protein content using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE). The 4 major allergens Hev b 1, Hev b 3, Hev b 5, and Hev b 6.02 were also quantified using enzyme immunoassay. All commercial extracts were tested for their in vitro allergenic capacity using microarray inhibition assays and for their ability to induce biological reactivity in latex-allergic patients undergoing SPT. Results: The protein content of the extracts varied widely from 8.0 μg/mL to 526.5 μg/mL. SDS-PAGE revealed broad differences in protein profiles between the extracts. Marked variability in the contents of all 4 major allergens was observed, and Hev b 3 and Hev b 5 were undetectable in some extracts. Microarray inhibition assays and SPT demonstrated relevant differences in allergenic capacity between the extracts. Conclusions: The marked heterogeneity in protein and allergen content of latex extracts from different manufacturers could explain the broad spectrum of SPT results recorded. Our fi ndings suggest that the extracts used for the diagnosis of latex allergy should be improved and standardized (AU)

Antecedentes: En el diagnóstico de la alergia a látex natural se utilizan habitualmente extractos crudos de látex en técnica de puntura. No obstante la variación que existe en el contenido proteico y de los distintos alérgenos entre los extractos comerciales procedentes de distintos fabricantes podría afectar al correcto diagnóstico de la alergia. Objetivos: Analizar la heterogeneidad proteica y de alérgenos entre siete extractos de látex de distintos fabricantes y comprobar las posibles implicaciones clínicas en el diagnóstico de la alergia al látex. Métodos: Se analizó el contenido proteico de siete extractos de látex y también el perfil mediante la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Además, se cuantificaron mediante enzimo-inmunoensayo (EIA), los cuatro alérgenos principales de látex Hev b 1, Hev b 3, Hev b 5 y Hev b 6.02. También se estudió en los siete extractos comerciales su capacidad de inhibición "in vitro", del ensayo de micromatrices y su capacidad para inducir respuestas biológicas "in vivo" en pacientes con alergia al látex, mediante pruebas cutáneas en puntura (SPT). Resultados: Los extractos presentaban una amplia variación en el contenido proteico que oscilaba entre 8.0 y 526.5 μg/mL de extracto. También se observaron importantes diferencias en el perfil proteico mediante la técnica de SDS-PAGE. El contenido de los principales cuatro alérgenos fue también muy variable, de forma que en algunos extractos los contenidos de Hev b 3 y Hev b 5 fueron prácticamente indetectables. Tanto la técnica de inhibición de micromatrices como las pruebas de puntura mostraron diferencias notables en la capacidad alergénica de los distintos extractos. Conclusiones: Los extractos de látex provenientes de distintos fabricantes presentan una importante heterogeneidad en contenido proteico y de alérgenos que podría claramente explicar las notables diferencias observadas en los resultados de las pruebas cutáneas en puntura que presentan los pacientes. Nuestros resultados apoyan la necesidad de mejora de la estandarización de los extractos de látex habitualmente utilizados en el diagnóstico clínico de la alergia al látex (AU)