RESUMEN
This article aimed to discuss the protection of trans - nerolidol on vascular endothelial cells (ECs) injured by lipopolysac charides. ECs were divided into four groups: normal, model, low and high dose trans - nerolidol treatment groups. The cell survival rate and the contents of NO in the cell culture supernatant were determined. The protein expression and transcript level of pe roxisome proliferator - activated receptor - γ (PPARγ), endothelial nitric oxide synthase (eNOS), and inducible nitric oxide synthase (iNOS) were determined by western blotting and RT - PCR respectively. Compared with the normal group, cell livability, protein e xpression and mRNA transcript level of PPARγ and eNOS decreased, NO contents, protein expression and mRNA transcript tlevel of iNOS increased in model group significantly. Compared with model group, all the changes recovered in different degree in treatmen t groups. Hence, it was concluded that trans - nerolidol can alleviate the ECs injuryby the regulation of iNOS/eNOS through activating PPARγ in a dose - dependent manner
Este artículo tiene como objetivo discutir la protección del trans - nerolidol en las células endoteliales vasculares (CE) dañadas por lipopolisacáridos. Las CE se di vidieron en cuatro grupos: normal, modelo, grupos de tratamiento con trans - nerolidol de baja y alta dosis. Se determinó la tasa de supervivencia de las células y los contenidos de óxido nítrico (NO) en el sobrenadante del cultivo celular. La expresión de p roteínas y el nivel de transcripción del receptor activado por proliferadores de peroxisomas - γ (PPARγ), el óxido nítrico sint et asa endotelial (eNOS) y el óxido nítrico sint et asa inducible (iNOS) se determinaron mediante western blot y RT - PCR, respectivamen te. En comparación con el grupo normal, la viabilidad celular, la expresión de proteínas y el nivel de transcripción de PPARγ y eNOS disminuyeron, los contenidos de NO, la expresión de proteínas y el nivel de transcripción de iNOS aumentaron significativam ente en el grupo modelo. En comparación con el grupo modelo, todos los cambios se recuperaron en diferentes grados en los grupos de tratamiento. Por lo tanto, se concluyó que el trans - nerolidol puede aliviar el daño en las CE regulando iNOS/eNOS a través d e la activación de PPARγ de manera dependiente de la dosis.
Asunto(s)
Sesquiterpenos/administración & dosificación , Enfermedades Vasculares/tratamiento farmacológico , Endotelio Vascular/efectos de los fármacos , Endotelio Vascular/lesiones , Supervivencia Celular , Lipopolisacáridos/toxicidad , Western Blotting , Óxido Nítrico Sintasa , Reacción en Cadena en Tiempo Real de la PolimerasaRESUMEN
Introducción: los glucocorticoides (GC) han sido ampliamente utilizados en el tratamiento de patologías oculares debido a sus efectos antiinflamatorios y anti-angiogénicos. Se ha sugerido que el mecanismo de acción anti-angiogénico de los GC puede estar relacionado con la enzima fosfatidilinositol-3-cinasa (PI3K), la cual desempeña un papel crucial en la angiogénesis mediada por el receptor de acetilcolina nicotínico alfa 7 (α7-nAChR). La PI3K es una enzima lipoproteica heterodimérica compuesta por las subunidades; reguladora (p85) y catalítica (p110). Objetivo: esta revisión examina la evidencia de cómo los GC modulan la vía de señalización de PI3K activada por α7-nAChR en el proceso de angiogénesis in vitro. Metodología: se realizó una revisión bibliográfica utilizando los motores de búsqueda PubMed y Web of Science, relacionando los conceptos "endothelial cell", "α7-nAChR", "PI3K" y "glucocorticoid". Resultados: se seleccionaron 30 artículos que informaron sobre la expresión de α7-nAChR y PI3K en células endoteliales humanas. Además, del efecto de dexametasona sobre las subunidades de PI3K y Akt (proteína cinasa B) en modelos humano, murino y porcino. A partir de estos hallazgos, se propuso un mecanismo mediante el cual los GC ejercen su efecto anti-angiogénico a través de la modulación en la expresión de la subunidad inhibitoria p85 de PI3K activada por α7-nAChR en células endoteliales humanas. Conclusión: los antecedentes evidencian que dexametasona, ejerce su mecanismo de acción anti-angiogénico mediante el incremento de la expresión de la subunidad inhibitoria p85 de PI3K activada por α7-nAChR.
Introduction: glucocorticoids (GC) have been widely used in the treatment of ocular pathologies due to their anti-inflammatory and anti-angiogenic effects. It has been suggested that the anti-angiogenic mechanism of GC may be related to the enzyme phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K), which plays a crucial role in angiogenesis mediated by the alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor (α7-nAChR). PI3K is a heterodimeric lipoprotein enzyme composed of regulatory (p85) and catalytic (p110) subunits. Objective: this review examines the evidence of how the GC modulate the PI3K signaling pathway activated by α7-nAChR in the process of in vitro angiogenesis. Methodology: a literature search was conducted using the PubMed and Web of Science search engines, relating the concepts of "endothelial cell," "α7-nAChR," "PI3K," and "glucocorticoid." Results: thirty-two articles were selected that reported on the expression of α7-nAChR and PI3K in human endothelial cells. Furthermore, the effect of dexamethasone on PI3K and Akt (protein kinase B) subunits was documented in human, murine, and porcine models. Based on these findings, a mechanism was proposed whereby GC exert their anti-angiogenic effect through modulation of the expression of the inhibitory p85 subunit of PI3K activated by α7-nAChR in human endothelial cells. Conclusion: background evidence suggests that dexamethasone exerts its anti-angiogenic mechanism of action by increasing the expression of the α7-nAChR-activated PI3K inhibitory subunit p85
RESUMEN
Introducción y objetivos La reperfusión coronaria produce un daño en la microcirculación y, en concreto, las células endoteliales. Este estudio evalúa el efecto del suero aislado tras la revascularización de pacientes con un infarto agudo de miocardio con elevación del segmento ST (IAMCEST) en la viabilidad celular, el grado de permeabilidad endotelial in vitro y la asociación de estos parámetros con una mayor extensión de los índices de resonancia magnética cardiaca (RMC) relacionados con el daño por reperfusión (edema, hemorragia y obstrucción microvascular). Métodos Se incubaron células endoteliales de arteria coronaria humana con suero aislado 24 h tras la revascularización de 43 pacientes con IAMCEST evaluados mediante RMC y 14 sujetos de control. Se testó el efecto del suero de pacientes con IAMCEST en la pérdida de viabilidad celular por activación de la apoptosis y la necrosis, así como en la permeabilidad y la estructura de la monocapa endotelial. Resultados El suero de pacientes con IAMCEST aumentó la apoptosis (p <0,01) y la necrosis (p <0,05) de células endoteliales de arteria coronaria humana y causó un incremento de la permeabilidad de la monocapa endotelial in vitro (p <0,01) debido a mayores espacios intercelulares (p <0,05 frente a los controles). Una mayor necrosis inducida por suero se asoció con más permeabilidad endotelial in vitro (p <0,05) y con una mayor extensión de los principales índices de daño tras reperfusión y mayor tamaño de infarto. Conclusiones El suero tras la reperfusión de pacientes con IAMCEST induce la apoptosis y la necrosis in vitro de las células endoteliales y la permeabilidad endotelial. Cuanto más potente sea el efecto inductor de necrosis, más deletéreas son las consecuencias en cuanto al daño estructural resultante. (AU)
Introduction and objectives Clinical and experimental studies have shown that, in patients with reperfused ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI), abnormalities in the endothelial monolayer are initiated during ischemia but rapidly intensify upon restoration of blood perfusion to the ischemic area. We aimed to evaluate the effect of serum isolated after revascularization from STEMI patients on the degree of endothelial permeability in vitro, by promoting endothelial cell apoptosis and necrosis in vitro. We also investigated the association between the percentage of serum-induced endothelial cell apoptosis or necrosis in vitro and the extent of cardiovascular magnetic resonance (CMR)-derived parameters of reperfusion injury (edema, hemorrhage, and microvascular obstruction). Methods Human coronary artery endothelial cells were incubated with serum isolated 24hours after revascularization from 43 STEMI patients who underwent CMR and 14 control participants. We assessed the effect of STEMI serum on activation of apoptosis and necrosis, as well as on the permeability and structure of the endothelial monolayer. Results Serum from STEMI patients increased apoptosis (P <.01) and necrosis (P <.05) in human coronary artery endothelial cells and caused increased permeability of the endothelial monolayer in vitro (P <.01), due to enlarged intercellular spaces (P <.05 vs control in all cases). Higher serum-induced necrosis was associated with greater endothelial permeability in vitro (P <.05) and with more extensive CMR-derived indices of reperfusion injury and infarct size. Conclusions Postreperfusion serum activates necrosis and apoptosis in endothelial cells and increases the degree of endothelial permeability in vitro. The more potent the necrosis-triggering effect of serum, the more deleterious the consequences in terms of the resulting cardiac structure. (AU)
Asunto(s)
Humanos , Infarto del Miocardio , Daño por Reperfusión , Suero , Pacientes , Células Endoteliales , Espectroscopía de Resonancia Magnética , Edema , HemorragiaRESUMEN
INTRODUCTION AND OBJECTIVES: Clinical and experimental studies have shown that, in patients with reperfused ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI), abnormalities in the endothelial monolayer are initiated during ischemia but rapidly intensify upon restoration of blood perfusion to the ischemic area. We aimed to evaluate the effect of serum isolated after revascularization from STEMI patients on the degree of endothelial permeability in vitro, by promoting endothelial cell apoptosis and necrosis in vitro. We also investigated the association between the percentage of serum-induced endothelial cell apoptosis or necrosis in vitro and the extent of cardiovascular magnetic resonance (CMR)-derived parameters of reperfusion injury (edema, hemorrhage, and microvascular obstruction). METHODS: Human coronary artery endothelial cells were incubated with serum isolated 24hours after revascularization from 43 STEMI patients who underwent CMR and 14 control participants. We assessed the effect of STEMI serum on activation of apoptosis and necrosis, as well as on the permeability and structure of the endothelial monolayer. RESULTS: Serum from STEMI patients increased apoptosis (P <.01) and necrosis (P <.05) in human coronary artery endothelial cells and caused increased permeability of the endothelial monolayer in vitro (P <.01), due to enlarged intercellular spaces (P <.05 vs control in all cases). Higher serum-induced necrosis was associated with greater endothelial permeability in vitro (P <.05) and with more extensive CMR-derived indices of reperfusion injury and infarct size. CONCLUSIONS: Postreperfusion serum activates necrosis and apoptosis in endothelial cells and increases the degree of endothelial permeability in vitro. The more potent the necrosis-triggering effect of serum, the more deleterious the consequences in terms of the resulting cardiac structure.
Asunto(s)
Intervención Coronaria Percutánea , Daño por Reperfusión , Infarto del Miocardio con Elevación del ST , Humanos , Infarto del Miocardio con Elevación del ST/diagnóstico , Infarto del Miocardio con Elevación del ST/cirugía , Infarto del Miocardio con Elevación del ST/etiología , Células Endoteliales , Imagen por Resonancia Magnética/métodos , Necrosis/etiología , Daño por Reperfusión/etiología , Intervención Coronaria Percutánea/efectos adversos , Resultado del TratamientoRESUMEN
Abstract This study aimed to compare the effects of diet and exercise of different intensities on antioxidant function, aortic endothelial cell function and serum lipids in NAFLD (nonalcoholic fatty liver disease) rats. Fifty Sprague-Dawley (SD) rats (180-220g) were randomly divided into two experimental groups and fed either a standard rodent chow diet (CON; n=10) or a high-fat diet (HFD; n=40). After 16 weeks, the animals that received the HFD were randomly separated into a high-fat control group (HFC; n=10) or three exercise training groups: HFD and low-intensity exercise (LE; n=10), HFD and moderate-intensity exercise (ME; n=10), and HFD and incremental intensity exercise (IE; n=10). These experimental rats keep sedentary or trained for the next six weeks. A detection kit was used to detect nitric oxide synthase (NOs), nitric oxide (NO), malondialdehyde (MDA) and other markers of aortic oxidative stress. The expression levels of endothelial nitric oxide synthase (e-NOS) and endothelin-1 (ET-1) were detected by immunohistochemistry. TC, TG, and other lipid metabolism parameters were detected by an automatic analyzer. Exercise with different intensities could improve lipid metabolism, enhance antioxidant function, reduce MDA (P<0.01), increase NO (P<0.01), and improve the expression of e-NOS and ET-1 (P<0.01) protein levels in NAFLD rats. Decreased blood lipids were exhibited in all exercise groups. Notably, the moderate-intensity exercise demonstrated more effect on increasing glutathione (GSH) contents (P<0.01) and decreased the expression of ET-1 protein levels (P<0.01). The results showed that exercise at different intensities improved lipid metabolism and enhanced anti-oxidation function. Moderate exercise could improve the function of aortic endothelial cells.
Resumen Este estudio tuvo como objetivo comparar los efectos de la dieta y el ejercicio a diferentes intensidades sobre la función antioxidante, la función de las células endoteliales aórticas y los lípidos séricos en ratas NAFLD (con enfermedad del hígado graso no alcohólico) y alimentados con una dieta estándar para roedores (CON; n = 10) o con una dieta alta en grasas (HFD; n = 40). Después de 16 semanas, los animales que recibieron HFD se separaron aleatoriamente en un grupo de control alto en grasas (HFC; n=10) o tres grupos de entrenamiento físico: HFD y ejercicio de baja intensidad (LE; n=10), HFD y ejercicio de intensidad moderada (ME; n=10), y HFD y ejercicio de intensidad incremental (IE; n=10). Estas ratas experimentales se mantuvieron sedentarias o entrenadas durante las próximas seis semanas. Se utilizó un kit de detección para determinar óxido nítrico sintetasa (NO), óxido nítrico (NO), malondialdehído (MDA) y otros marcadores de estrés oxidativo aórtico. Los niveles de expresión de la óxido nítrico sintetasa endotelial (e-NOS) y endotelina-1 (ET-1) se detectaron mediante inmunohistoquímica. El analizador automático detectó TC, TG y otros parámetros del metabolismo de los lípidos. El ejercicio con diferente intensidad mejoró el metabolismo de los lípidos, mejoró la función antioxidante, redujo la MDA (P <0,01), aumentó el NO (P <0,01) y mejoró la expresión de los niveles de proteína e-NOS y ET-1 (P <0,01) en ratas NAFLD. Se observó una disminución de los lípidos en sangre en todos los grupos de ejercicio. En particular, el ejercicio de intensidad moderada demostró un mayor efecto en el aumento del contenido de glutatión (GSH) (P<0,01) y disminuyó la expresión de los niveles de proteína ET-1 (P<0,01). Los resultados mostraron que el ejercicio a diferentes intensidades mejoró el metabolismo de los lípidos y mejoró función antioxidante. El ejercicio moderado podría mejorar la función de las células endoteliales aórticas.
RESUMEN
BACKGROUND: Stroma, mainly composed by fibroblasts, extracellular matrix (ECM) and vessels, may play a role in tumorigenesis and cancer progression. Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) is an independent risk factor for LC. We hypothesized that markers of fibroblasts, ECM and endothelial cells may differ in tumors of LC patients with/without COPD. METHODS: Markers of cultured cancer-associated fibroblasts and normal fibroblasts [CAFs and NFs, respectively, vimentin and alpha-smooth muscle actin (SMA) markers, immunofluorescence in cultured lung fibroblasts], ECM, and endothelial cells (type I collagen and CD31 markers, respectively, immunohistochemistry) were identified in lung tumor and non-tumor specimens (thoracotomy for lung tumor resection) from 15 LC-COPD patients and 15 LC-only patients. RESULTS: Numbers of CAFs significantly increased, while those of NFs significantly decreased in tumor samples compared to non-tumor specimens of both LC and LC-COPD patients. Endothelial cells (CD31) significantly decreased in tumor samples compared to non-tumor specimens only in LC patients. No significant differences were seen in levels of type I collagen in any samples or study groups. CONCLUSIONS: Vascular endothelial marker CD31 expression was reduced in tumors of non-COPD patients, while type I collagen levels did not differ between groups. A rise in CAFs levels was detected in lung tumors of patients irrespective of airway obstruction. Low levels of CD31 may have implications in the overall survival of LC patients, especially in those without underlying airway obstruction. Identification of CD31 role as a prognostic and therapeutic biomarker in lung tumors of patients with underlying respiratory diseases warrants attention.
Asunto(s)
Neoplasias Pulmonares , Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica , Biomarcadores , Células Endoteliales , Matriz Extracelular , HumanosRESUMEN
INTRODUCTION: The endotoxin lipopolysaccharide (LPS)-induced pulmonary endothelial barrier disruption is a key pathogenesis of acute lung injury (ALI) and acute respiratory distress syndrome (ARDS). However, the molecular mechanisms underlying LPS-impaired permeability of pulmonary microvascular endothelial cells (PMVECs) are not fully understood. METHODS: Rat PMVECs were isolated and monolayered cultured, then challenged with different doses of LPS (0.1mg/L, 1mg/L, and 10mg/L). Trans-endothelial electrical resistance (TER) was utilized to measure the integrity of the endothelial barrier. Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1 (Rac1) activity and the phosphorylation of Ezrin/Radixin/Moesin proteins (ERM) were assessed by pulldown assay and Western Blotting. Small interfering RNA (siRNA) inhibition of Rac1 and Moesin were applied to evaluate the effect of PMVEs permeability and related pathway. RESULTS: LPS induced dose and time-dependent decreases in TER and increase in ERM threonine phosphorylation, while inactivated Rac1 activity in PMVEC. siRNA study demonstrated that both Rac1 and Moesin were involved in the mediation of the LPS-induced hyperpermeability in PMVECs monolayers, and Rac1 and Moesin could regulate each other. CONCLUSION: Phosphorylated ERM mediates LPS induced PMVECs permeability through negatively regulating Rac1 activity.
Asunto(s)
Células Endoteliales/efectos de los fármacos , Lipopolisacáridos/farmacología , Pulmón/irrigación sanguínea , Proteínas de Microfilamentos/fisiología , Proteína de Unión al GTP rac1/fisiología , Animales , Permeabilidad de la Membrana Celular/efectos de los fármacos , Células Cultivadas , Proteínas del Citoesqueleto/fisiología , Masculino , Proteínas de la Membrana/fisiología , Microcirculación , Proteínas de Microfilamentos/antagonistas & inhibidores , Proteínas de Microfilamentos/química , Proteínas de Microfilamentos/genética , Fosforilación , Fosfotreonina/metabolismo , Procesamiento Proteico-Postraduccional , Interferencia de ARN , ARN Interferente Pequeño/genética , Ratas , Ratas Sprague-Dawley , Factores de Tiempo , Proteína de Unión al GTP rac1/antagonistas & inhibidores , Proteína de Unión al GTP rac1/genéticaRESUMEN
INTRODUCTION: Vascular endothelial growth factor (VEGF) plays an essential role in development of diabetic macular edema (DME). While there is evidence suggesting that silymarin, a flavonoid extracted from Silybum marianum, could be useful for prevention and treatment of diabetic nephropathy, no studies have been conducted in diabetic retinopathy (DR). The aim of this study was to assess the effect of silymarin on disruption of inner blood retinal barrier (BRB), the primary cause of DME. MATERIALS AND METHODS: Human retinal endothelial cells (HRECs) were cultured under standard (5.5mM D-glucose) and diabetogenic conditions (25mM D-glucose and 25mM D-glucose + recombinant vascular endothelial growth factor [rVEGF, 25mg/mL]). To assess cell viability, three concentrations of silymarin were tested (2, 4 and 10µg/mL). The effect of silymarin on HREC disruption was determined using a dextran (70kD) permeability asssay. RESULTS: No differences were found in the viability of HRECs treated with 2 or 4µg/mL of silymarin as compared to untreated cells, but viability significantly decreased after using 10µg/mL. The concentration of 4 µg/mL was therefore selected. Silymarin (4µg/mL) caused a significant decrease in VEGF-induced permeability in both media with 5.5nM (422±58 vs. 600±72 ng/mL/cm2; p<0.03) and 25nM of D-glucose (354 ± 28 vs. 567 ± 102 ng/mL/cm2; p<0.04). DISCUSSION: Our results show that silymarin is effective for preventing hyperpermeability induced by diabetic conditions in HRECs. Further studies are needed to assess whether silymarin could be useful to treat DME.
Asunto(s)
Antioxidantes/uso terapéutico , Barrera Hematorretinal/efectos de los fármacos , Permeabilidad de la Membrana Celular/efectos de los fármacos , Retinopatía Diabética/prevención & control , Células Endoteliales/efectos de los fármacos , Edema Macular/prevención & control , Retina/citología , Retina/efectos de los fármacos , Silimarina/uso terapéutico , HumanosRESUMEN
Se realizó un estudio descriptivo y transversal desde julio hasta octubre de 2017, por especialistas de la Universidad de Oriente y de la Universidad de Sao Paulo, Brasil, para analizar desde el punto de vista morfológico células endoteliales de venas del cordón umbilical humano, presentes en imágenes digitales de cultivos in vitro 2D, tratadas con la ß2GPI. . Se propuso la clasificación supervisada celular considerando 3 clases: circulares, deformadas alargadas y deformadas poco alargadas, según los coeficientes de formas elíptico y circular, todo lo cual permitió identificar formas celulares relevantes. Para comparar los resultados de las muestras de control y las tratadas, se calcularon los intervalos de confianza para cada una de las clases, con un nivel de confianza de 95 por ciento. Se concluye que el análisis de las alteraciones morfológicas in vitro puede ser utilizada en cultivos 2D precoces (de 24 y 48 horas) para la cuantificación de la angiogénesis
A descriptive and cross-sectional study was carried out from July to October, 2017, by specialists of the Oriente University and the University of Sao Paulo, Brazil, to analyze from the morphological point of view endothelial cells of the human umbilical cord veins, which were present in digital images of 2D in vitro cultures, treated with the ß2GPI. The cellular supervised classification was proposed considering 3 classes: circular, distorted elongated and distorted not very elongated, according to the coefficients of elliptic and circular shapes, all that allowed to identify outstanding cellular forms. To compare the results of the control and treated samples, the intervals of confidence were calculated for each of the classes, with a 95 percent level of confidence. It was concluded that the analysis of the morphological disorders in vitro can be used in early 2D cultures (24 and 48 hours) for the quantification of the angiogenesis
Asunto(s)
Humanos , Cordón Umbilical/ultraestructura , Neovascularización Fisiológica , Células Endoteliales/ultraestructura , Hallazgos Morfológicos y Microscópicos , Neovascularización Patológica , Epidemiología Descriptiva , Estudios Transversales , Biología CelularRESUMEN
Se realizó un estudio descriptivo y transversal desde julio hasta octubre de 2017, por especialistas de la Universidad de Oriente y de la Universidad de Sao Paulo, Brasil, para analizar desde el punto de vista morfológico células endoteliales de venas del cordón umbilical humano, presentes en imágenes digitales de cultivos in vitro 2D, tratadas con la β2GPI. Se propuso la clasificación supervisada celular considerando 3 clases: circulares, deformadas alargadas y deformadas poco alargadas, según los coeficientes de formas elíptico y circular, todo lo cual permitió identificar formas celulares relevantes. Para comparar los resultados de las muestras de control y las tratadas, se calcularon los intervalos de confianza para cada una de las clases, con un nivel de confianza de 95 por ciento. Se concluye que el análisis de las alteraciones morfológicas in vitro puede ser utilizada en cultivos 2D precoces (de 24 y 48 horas) para la cuantificación de la angiogénesis(AU)
A descriptive and cross-sectional study was carried out from July to October, 2017, by specialists of the Oriente University and the University of Sao Paulo, Brazil, to analyze from the morphological point of view endothelial cells of the human umbilical cord veins, which were present in digital images of 2D in vitro cultures, treated with the β2GPI. The cellular supervised classification was proposed considering 3 classes: circular, distorted elongated and distorted not very elongated, according to the coefficients of elliptic and circular shapes, all that allowed to identify outstanding cellular forms. To compare the results of the control and treated samples, the intervals of confidence were calculated for each of the classes, with a 95 percent level of confidence. It was concluded that the analysis of the morphological disorders in vitro can be used in early 2D cultures (24 and 48 hours) for the quantification of the angiogenesis(AU)
Asunto(s)
Humanos , Neovascularización Fisiológica , Neovascularización Patológica , Biología Celular , Hallazgos Morfológicos y Microscópicos , Forma del Núcleo Celular , Células Endoteliales , Epidemiología Descriptiva , Estudios TransversalesRESUMEN
El embarazo es un reto para el sistema cardiovascular materno, necesitando de adaptación sistémica y marcados cambios locales en el útero. La adaptación cardiovascular materna al embarazo involucra una respuesta fisiológica compleja a la presencia de un feto en crecimiento, incluyendo alteraciones de las células endoteliales vasculares que contribuyen a la marcada disminución de la resistencia vascular sistémica. El descubrimiento de las células progenitoras endoteliales ha generado un considerable interés en el campo de la biología vascular. Estas células pueden ser movilizadas hacia la circulación por factores de crecimiento y pueden apoyar la salud del endotelio vascular por varios mecanismos. Estas células se originan de una población de células mononucleares circulantes y tienen la capacidad de formar nuevos vasos y contribuyen a la reparación vascular. Patologías del embarazo, como la preeclampsia, incrementan el riesgo de complicaciones y están asociadas con disfunción endotelial.
Pregnancy is a challenge to the maternal vascular system, requiring systemic adaptation and pronounced local changes in the uterus. The maternal cardiovascular adaptation to pregnancy involves a complex physiologic response to the presence of the growing fetus, including alterations in maternal vascular endothelial cells that contribute to a profound fall in total systemic vascular resistance. The discovery of endothelial progenitor cells has generated considerable interest in the field of vascular biology. These cells can be mobilized into the circulation by growth factors and can then support the health of the vascular endothelium by several mechanisms. These cells arise from a population of circulating mononuclear cells and have the capacity to form new blood vessels and contribute to vascular repair. Diseases of pregnancy, such as preeclampsia, increase the risk of complications and are associated with endothelial dysfunction.
RESUMEN
resumen Introducción: El microambiente tumoral influye en el comportamiento de las células cancerosas. Especialmente, el estímulo de agentes estresantes, como la hipoxia, se convierte en un factor crítico para la evolución y el tratamiento del cáncer. La reacción celular frente a diversos estímulos se manifiesta en la activación de vías de señalización como la JAK/STAT, una de las más importantes por sus efectos en la diferenciación y proliferación celular. Objetivo: Evaluar el estado de la vía JAK/STAT mediante la expresión o activación de la proteína STAT3 en células de cáncer de cuello uterino (HeLa) y en células endoteliales (EA.hy926) sometidas a hipoxia. Materiales y métodos: Las líneas celulares se sometieron a condiciones de hipoxia física (1 % de O2) o química (100 μM de deferoxamina, DFO) durante dos, seis y 24 horas. Mediante Western blot se determinó el cambio en la expresión y activación de STAT3, y mediante inmunofluorescencia indirecta su localización subcelular. Resultados:. La hipoxia se evidenció por la activación y translocación al núcleo del HIF-1. Ni la hipoxia física ni la química alteraron la expresión de STAT3, pero sí la activación, según se comprobó por su fosforilación y su translocación al núcleo en los dos modelos bajo estudio. Conclusiones: Se evidenció la importancia de la hipoxia como un estímulo que modifica la activación de la proteína STAT3 en las células HeLa y EA.hy926, lo cual la convierte en un elemento importante en el diseño de estrategias terapéuticas contra el cáncer.
Abstract Introduction: The biological behavior of cancer cells is influenced by the tumor microenvironment in which they develop. In this context, stressor stimuli such as hypoxia are considered critical for tumor development and therapeutic management. Cellular response to various stimuli is evidenced in the activation of intracellular signaling pathways such as JAK/STAT, which is one of the most important for its effects in differentiation and cell proliferation. Objective: To evaluate the condition of the JAK/STAT pathway through the expression/activation of the STAT3 protein in cervix cancer cells (HeLa) and endothelial cells (EA.hy926) subjected to ypoxia. Material and methods: Cell lines were subjected to physical (1% O2) or chemical (deferoxamine, DFO, 100 μM) hypoxia for 2, 6 and 24 hours. Changes in the expression and activation of STAT3, and its subcellular localization by indirect immunofluorescence, were determined by western blot. Results: Hypoxia was evidenced by the activation and translocation to the nucleus of HIF-1. Neither physical nor chemical hypoxia altered STAT3 expression, but it did affect its activation, as seen in its phosphorylation and translocation to the nucleus in the two models under study. Conclusions: The present study highlights the importance of hypoxia as a stimulus that modifies the activation of the STAT3 protein in HeLa and EA.hy926 cells, which makes it an important factor in the design of therapeutic strategies against cancer.
Asunto(s)
Femenino , Humanos , Transducción de Señal/efectos de los fármacos , Neoplasias del Cuello Uterino/patología , Células Endoteliales/patología , Factor de Transcripción STAT3/metabolismo , Hipoxia/metabolismo , Fosforilación/fisiología , Factor de Transcripción STAT3/químicaRESUMEN
OBJECTIVE: To evaluate the efficacy and safety of an angle-supported foldable phakic intraocular lens (pIOL) for the correction of moderate to high myopia after 5 years follow-up. METHODS: Prospective and retrospective, observational, longitudinal, non-randomised consecutive series of cases conducted on a total of 100 eyes of 67 patients with moderate to high myopia implanted with an Acrysof Cachet pIOL (Alcon Laboratories Inc.) with the aim of minimising the refractive error. The ages ranged between 18 to 60years. Uncorrected distance visual acuity (UDVA), manifest refraction, corrected distance visual acuity (CDVA), endothelial cells density, pIOL position, intraocular pressure, and complications were recorded preoperatively and during the 5 year follow-up. RESULTS: Five years after implantation, the mean manifest spherical equivalent refraction reduced significantly from -11.62±3.35 dioptres (D) to -0.33±0.85D. UDVA was 20/20 or better in 5 of 25 cases (20%), and 20/40 or better in 22 cases (88%). CDVA was 20/20 or better in 17 cases (68%), and 20/32 or better in 23 cases (92%) of eyes. The residual refractive error was within ±0.50D of emmetropia in 12 cases (48%), and within ±1.00D in 19 cases (76%). Mean endothelial cell loss at 5 years was 11.8% central, and 13.7% peripheral. Mean endothelium-pIOL distance was 2.11±0.18mm, and mean pIOL-crystalline distance was 0.88±0.20mm. CONCLUSIONS: This angle supported pIOL provided a favourable refractive correction and predictability, as well as acceptable safety in patients with moderate to high myopia. Although endothelial cell density decreased over 5years, the results are within the range reported in previous studies with other pIOLs.
Asunto(s)
Miopía/cirugía , Lentes Intraoculares Fáquicas , Adolescente , Adulto , Endotelio Corneal/ultraestructura , Diseño de Equipo , Femenino , Estudios de Seguimiento , Humanos , Implantación de Lentes Intraoculares , Masculino , Persona de Mediana Edad , Docilidad , Complicaciones Posoperatorias/epidemiología , Complicaciones Posoperatorias/etiología , Estudios Prospectivos , Refracción Ocular , Errores de Refracción , Estudios Retrospectivos , Tomografía de Coherencia Óptica , Resultado del Tratamiento , Agudeza Visual , Adulto JovenRESUMEN
Vascular endothelium play an essential role in regulating endothelial functions by maintaining normal vascular tone, modulating hemostasis, and preventing thromobogenesis. The aim of present study was to reveal ultrastructure features of coronary artery endothelium in Bactrian Camels by means of scanning electron microscope (SEM) technology. The results showed that the endothelial cells distribute along the direction of blood flow. Their morphology and protuberant degree towards luminal surface vary for different parts of the coronary artery. The luminal surface of a.c oronaria sinistra and a. coronaria dextra was covered by impaired and intact endothelium, respectively. Platelets and leukocytes sticking to the endothelium were found.
Las células endoteliales de los vasos sanguíneos juegan un rol esencial en la regulación de las funciones endoteliales manteniendo el tono vascular, modulando la homeostasis y previniendo la trombogénesis. En la investigación se utilizó un microscopio electrónico de barrido, revelando las características estructurales de las células endoteliales de los vasos coronarios de los camellos bactrianos. Los resultados indican que las células endoteliales estaban distribuidas a lo largo de la dirección de flujo. En distintas partes de la arteria coronaria existen diferencias en el grado de proyección de la morfología y de la superficie de la cavidad de dichas células. La superficie luminal de la arteria coronaria izquierda y la arteria coronaria derecha estaban cubiertas por endotelio deteriorado e intacto, respectivamente. Se observó adhesión de leucocitos y plaquetas en la superficie de las células endoteliales.
Asunto(s)
Animales , Masculino , Camelus/anatomía & histología , Vasos Coronarios/ultraestructura , Endotelio Vascular/ultraestructura , Células Endoteliales/ultraestructura , Microscopía Electrónica de RastreoRESUMEN
INTRODUCTION: Fatty acid binding protein (FABP4) is an adipose tissue-secreted adipokine implicated in the regulation of the energetic metabolism and inflammation. High levels of circulating FABP4 have been described in people with obesity, atherogenic dyslipidemia, diabetes and metabolic syndrome. Recent studies have demonstrated that FABP4 could have a direct effect on peripheral tissues and, specifically, on vascular function. It is still unknown how the interaction between FABP4 and the endothelial cells is produced to prompt these effects on vascular function. The objective of this work is studying the interaction between FABP4 and the plasma membrane proteins of endothelial cells. METHODOLOGY: HUVEC cells were incubated with and without FABP4 (100 ng/ml) for 5 minutes. Immunolocalization of FABP4 was studied by confocal microscopy. The results showed that FABP4 colocalizates with CD31, a membrane protein marker. A strategy which combines 6XHistidine-tag FABP4 (FABP4-His), incubations with or without FABP4-His (100 ng/ml), formaldehyde cross-linking, cellular membrane protein extraction and western blot, was designed to study the FABP4 interactions with membrane proteins of HUVECs. RESULTS: The results showed different western blot profiles depending of the incubation with or without FABP4-His. The immunoblot revelead three covalent protein complexes of about 108, 77 and 33 kDa containing FAPB4 and its putative receptor. DISCUSSION: The existence of a specific binding protein complex able to bind FABP4 to endothelial cells is supported by these results. The obtained results will permit us advance in the molecular knowledge of FABP4 effects as well as use this protein and its receptor as therapeutic target to prevent cardiovascular.
Asunto(s)
Membrana Celular/metabolismo , Proteínas de Unión a Ácidos Grasos/metabolismo , Células Endoteliales de la Vena Umbilical Humana/metabolismo , Proteínas de la Membrana/metabolismo , Western Blotting , Humanos , Microscopía Confocal , Molécula-1 de Adhesión Celular Endotelial de Plaqueta/metabolismoRESUMEN
O processo de angiogênese envolve uma sequência complexa de estímulos e respostas integradas, como estimulação das células endoteliais (CE) para sua proliferação e migração, estimulação da matriz extracelular, para atração de pericitos e macrófagos, estimulação das células musculares lisas, para sua proliferação e migração, e formação de novas estruturas vasculares. Angiogênese é principalmente uma resposta adaptativa à hipóxia tecidual e depende do acúmulo do fator de crescimento induzido pela hipóxia (FIH-1 α) na zona do miocárdio isquêmico, que serve para aumentar a transcrição do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e seus receptores VEGF-R, pelas CE em sofrimento isquêmico. Esses passos envolvem mecanismos enzimáticos e proteases ativadoras do plasminogênio, metaloproteinases (MMP) da matriz extracelular (MEC) e cinases que provocam a degradação molecular proteolítica da MEC, bem como pela ativação e a liberação de fatores de crescimento, tais como: fator básico de crescimento dos fibroblastos (FCFb), VEGF e fator de crescimento insulínico-1 (FCI-1). Posteriormente, vem a fase intermediária de estabilização do novo broto neovascular imaturo e a fase final de maturação vascular da angiogênese fisiológica. Como conclusões generalizáveis, é possível afirmar que a angiogênese coronária em adultos é, fundamentalmente, uma resposta parácrina da rede capilar preexistente em condições fisiopatológicas de isquemia e inflamação.
The process of angiogenesis involves a complex sequence of stimuli and integrated responses, such as stimulation of endothelial cells (ECs) for their proliferation and migration, stimulation of the extracellular matrix (ECM) for the attraction of pericytes and macrophages, stimulation of smooth muscle cells for their proliferation and migration, and formation of new vascular structures. Angiogenesis is mainly an adaptive response to tissue hypoxia and depends on the accumulation of the hypoxia-inducible factor (HIF-1α) in the ischemic myocardial area, which increases the transcription of the vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors VEGF-R by the ECs undergoing ischemia. Those steps involve enzymatic mechanisms and plasminogen activator proteases, metalloproteinases (MMP) of the ECM, and kinases that cause proteolytic molecular degradation of the ECM and activation and release of growth factors, such as: basic fibroblast growth factor (bFGF), VEGF, and insulin growth factor-1 (IGF-1). In the intermediate phase, stabilization of the immature neovascular sprout occurs. The final phase is characterized by vascular maturation of the physiological angiogenesis. In conclusion, coronary angiogenesis in adults is fundamentally a paracrine response of the preexisting capillary network under pathophysiological condition of ischemia and inflammation.
El proceso de angiogénesis involucra una serie compleja de estímulos y de respuestas integradas, como la estimulación de las células endoteliales (CE), para su proliferación y migración, estimulación de la matriz extracelular, para la atracción de pericitos y macrófagos, estimulación de las células musculares lisas, para su proliferación y migración, y formación de nuevas estructuras vasculares. La angiogénesis es principalmente una respuesta adaptativa a la hipoxia tisular y depende de la acumulación del factor de crecimiento inducido por la hipoxia (FIH-1 α) en la zona del miocardio isquémico, que sirve para aumentar la transcripción del factor de crecimiento endotelial vascular (con sus siglas en inglés: VEGF vascular endotelial growth factor), y sus receptores VEGF-R, por las CE en el sufrimiento isquémico. Esos pasos aglutinan mecanismos enzimáticos y proteasas activadoras del plasminógeno, metaloproteinasas (MMP) de la matriz extracelular (MEC), y cinasas que provocan la degradación molecular proteolítica de la MEC, como también la activación y la liberación de factores de crecimiento, tales como: factor básico de crecimiento de los fibroblastos (FCFb), VEGF y factor de crecimiento insulínico-1 (FCI-1). Posteriormente, viene la fase intermedia de estabilización del nuevo brote neovascular inmaduro y la fase final de maduración vascular de la angiogénesis fisiológica. Como conclusiones generales, podemos afirmar que la angiogénesis coronaria en adultos es fundamentalmente, una respuesta paracrina de la red capilar preexistente en condiciones fisiopatológicas de isquemia e inflamación.
Asunto(s)
Adulto , Humanos , Hipoxia/fisiopatología , Vasos Coronarios , Isquemia Miocárdica/fisiopatología , Neovascularización Fisiológica/fisiología , Células Madre/fisiología , Factores de Crecimiento Endotelial Vascular/fisiología , Adaptación Fisiológica/fisiologíaRESUMEN
La Medicina Regenerativa es una novedosa terapéutica de amplio potencial en diferentes enfermedades para la cual se utilizan células madre procedentes de la médula ósea (MO), cuya caracterización fenotípica es limitada. En nuestro trabajo se estudió la expresión de diferentes marcadores de la membrana celular en células mononucleares (CMN) de la MO de 14 pacientes a quienes se les realizó terapia celular autóloga, obtenidas por punción medular y movilización a la sangre periférica, con el objetivo de caracterizar los diferentes tipos de células presentes en esta población celular heterogénea e identificar las moléculas de adhesión implicadas en su adhesión. Se observó mayor presencia de células madre adherentes del estroma medular en las CMN obtenidas directamente de la MO; una mayor población de células CD90+ en las CMN procedentes de sangre periférica CD34-/CD45- con una elevada expresión de las moléculas CD44 y CD62L, lo que sugiere mayor presencia de células madre mesenquimales (CMM) en las células movilizadas del estroma medular. Los valores más elevados de células CD34+ en las células madre procedentes de sangre periférica con baja expresión de las moléculas CD117- y DR- sugiere la presencia de células madre hematopoyéticas, hemangioblastos y células progenitoras endoteliales movilizadas a la circulación periférica. Se demostró que tanto las CMN procedentes de MO como de sangre periférica, muestran una elevada expresión de células madre con expresión de la molécula de adhesión CD44 (marcador de CMM), probablemente implicadas en su migración, asentamiento y diferenciación
Regenerative medicine is a novel therapeutic method with broad potential for the treatment of various illnesses, based on the use of bone marrow (BM) stem cells, whose phenotypic characterization is limited. The paper deals with the expression of different cell membrane markers in mononuclear BM cells from 14 patients who underwent autologous cell therapy, obtained by medullary puncture and mobilization to peripheral blood, with the purpose of characterizing the different types of cells present in that heterogeneous cellular population and identifying the adhesion molecules involved in their adhesion. A greater presence was observed of adherent stem cells from the marrow stroma in mononuclear cells obtained directly from the BM; a larger population of CD90+ cells in mononuclear cells from CD34-/CD45- peripheral blood with a high expression of molecules CD44 and CD62L, which suggests a greater presence of mesenchymal stem cells (MSC) in mobilized cells from the marrow stroma. The higher levels of CD34+ cells in peripheral blood stem cells with a low expression of molecules CD117- and DR- suggests the presence of hematopoietic stem cells, hemangioblasts and progenitor endothelial cells mobilized to peripheral circulation. It was found that mononuclear cells from both the BM and peripheral blood show a high presence of stem cells with expression of adhesion molecule CD44 (MMC marker), probably involved in their migration, settling and differentiation
RESUMEN
La Medicina Regenerativa es una novedosa terapéutica de amplio potencial en diferentes enfermedades para la cual se utilizan células madre procedentes de la médula ósea (MO), cuya caracterización fenotípica es limitada. En nuestro trabajo se estudió la expresión de diferentes marcadores de la membrana celular en células mononucleares (CMN) de la MO de 14 pacientes a quienes se les realizó terapia celular autóloga, obtenidas por punción medular y movilización a la sangre periférica, con el objetivo de caracterizar los diferentes tipos de células presentes en esta población celular heterogénea e identificar las moléculas de adhesión implicadas en su adhesión. Se observó mayor presencia de células madre adherentes del estroma medular en las CMN obtenidas directamente de la MO; una mayor población de células CD90+ en las CMN procedentes de sangre periférica CD34-/CD45- con una elevada expresión de las moléculas CD44 y CD62L, lo que sugiere mayor presencia de células madre mesenquimales (CMM) en las células movilizadas del estroma medular. Los valores más elevados de células CD34+ en las células madre procedentes de sangre periférica con baja expresión de las moléculas CD117- y DR- sugiere la presencia de células madre hematopoyéticas, hemangioblastos y células progenitoras endoteliales movilizadas a la circulación periférica. Se demostró que tanto las CMN procedentes de MO como de sangre periférica, muestran una elevada expresión de células madre con expresión de la molécula de adhesión CD44 (marcador de CMM), probablemente implicadas en su migración, asentamiento y diferenciación(AU)
Regenerative medicine is a novel therapeutic method with broad potential for the treatment of various illnesses, based on the use of bone marrow (BM) stem cells, whose phenotypic characterization is limited. The paper deals with the expression of different cell membrane markers in mononuclear BM cells from 14 patients who underwent autologous cell therapy, obtained by medullary puncture and mobilization to peripheral blood, with the purpose of characterizing the different types of cells present in that heterogeneous cellular population and identifying the adhesion molecules involved in their adhesion. A greater presence was observed of adherent stem cells from the marrow stroma in mononuclear cells obtained directly from the BM; a larger population of CD90+ cells in mononuclear cells from CD34-/CD45- peripheral blood with a high expression of molecules CD44 and CD62L, which suggests a greater presence of mesenchymal stem cells (MSC) in mobilized cells from the marrow stroma. The higher levels of CD34+ cells in peripheral blood stem cells with a low expression of molecules CD117- and DR- suggests the presence of hematopoietic stem cells, hemangioblasts and progenitor endothelial cells mobilized to peripheral circulation. It was found that mononuclear cells from both the BM and peripheral blood show a high presence of stem cells with expression of adhesion molecule CD44 (MMC marker), probably involved in their migration, settling and differentiation(AU)
Asunto(s)
Humanos , Tratamiento Basado en Trasplante de Células y Tejidos/métodos , Trasplante de Células Madre/métodosRESUMEN
Se presentan los conceptos actuales sobre las células madre provenientes de la médula ósea y la importancia de las células estromales en la Medicina Regenerativa. Se describen, en particular, las características fenotípicas de las células madre mesenquimales y endoteliales, así como las de diferentes tipos celulares relacionados, sus propiedades funcionales y la importancia dada al uso de estas células en diversas aplicaciones terapéuticas. Se refieren los resultados de su estudio en distintos estados patológicos, las variaciones por la acción de drogas y de los factores de crecimiento, y su potencialidad futura en el diagnóstico y tratamiento de diferentes enfermedades
The current concepts on the stem cells from bone marrow and the significance of the stromal cells in Regenerative Medicine are showed. In particular, the phenotypical features of mesenchymal and endothelial stem cells are described, as well as the different related types of cells, its functional and the significance properties given to use of these cells in different therapeutic applications. The results of study in different pathologic states, the variations due to drugs action and of the growth factors are recounted as well as its future potential in diagnosis and treatment of different diseases
Asunto(s)
Humanos , Células Endoteliales/fisiología , Células de la Médula Ósea/fisiología , Células Madre Mesenquimatosas/fisiología , Medicina Regenerativa/tendenciasRESUMEN
Se presentan los conceptos actuales sobre las células madre provenientes de la médula ósea y la importancia de las células estromales en la Medicina Regenerativa. Se describen, en particular, las características fenotípicas de las células madre mesenquimales y endoteliales, así como las de diferentes tipos celulares relacionados, sus propiedades funcionales y la importancia dada al uso de estas células en diversas aplicaciones terapéuticas. Se refieren los resultados de su estudio en distintos estados patológicos, las variaciones por la acción de drogas y de los factores de crecimiento, y su potencialidad futura en el diagnóstico y tratamiento de diferentes enfermedades(AU)
The current concepts on the stem cells from bone marrow and the significance of the stromal cells in Regenerative Medicine are showed. In particular, the phenotypical features of mesenchymal and endothelial stem cells are described, as well as the different related types of cells, its functional and the significance properties given to use of these cells in different therapeutic applications. The results of study in different pathologic states, the variations due to drugs action and of the growth factors are recounted as well as its future potential in diagnosis and treatment of different diseases(AU)