Monitoramento hormonal não invasivo em aves – uma revisão / Non-invasive hormonal monitoring in birds – a review

Para espécies silvestres, a coleta de amostras para monitorar o estresse e a função reprodutiva sempre foi um desafio. Coletas de sangue em animais silvestres são difíceis de serem realizadas, pois sempre exige a contenção física do animal, seguida ou não de sedação ou anestesia, que acaba dificultando ou impossibilitando coletas muito frequentes, tanto pelo estresse que causa ao animal como pelos cuidados clínicos que se dever ter no uso dessas drogas. As técnicas de dosagens hormonais não invasivas vieram como uma boa opção, realizando a análise destes hormônios ou seus metabólitos. Estes são excretados nas fezes, urina, excretas, pele, pelos ou saliva, permitindo o acompanhamento por longos períodos, pois em muitos casos, não exigem manipular o animal. As amostras mais utilizadas são fezes e urina e, no caso das aves, excretas. As técnicas mais utilizadas são os ensaios imunológicos, utilizado isótopos radioativos (radioimunoensaio) ou enzimas (enzimoimunoensaio). Nesta revisão, são apresentadas as principais vantagens da dosagem não invasiva, focando principalmente seu uso em aves, utilizando excretas e abordando também as principais técnicas de dosagem.

For wild species, sampling for monitoring stress and reproductive function has always been a challenge. Blood collections in wild animals are difficult to perform because they often require physical restraint of the animal, which causes stress, or at least sedation or anesthesia, which makes it difficult or impossible for frequent collections. Noninvasive hormone monitoring techniques came as a good option, performing analysis of these hormones or their metabolites. These are excreted in feces, urine, excreta, hair or saliva, allowing the collection for long periods, since in many cases they do not require to manipulate the animal. The most commonly used samples are feces and urine, and in the case of birds, excreta. The most commonly used techniques are immunological assays, radioactive isotopes (radioimmunoassay) or enzymes (enzymeimmunoassay). In this review, the main advantages of noninvasive hormonal monitoring are presented, focusing more on their use in birds, using excreta and also addressing the main dosage techniques.

Monitoramento hormonal não invasivo em aves uma revisão / Non-invasive hormonal monitoring in birds a review

Para espécies silvestres, a coleta de amostras para monitorar o estresse e a função reprodutiva sempre foi um desafio. Coletas de sangue em animais silvestres são difíceis de serem realizadas, pois sempre exige a contenção física do animal, seguida ou não de sedação ou anestesia, que acaba dificultando ou impossibilitando coletas muito frequentes, tanto pelo estresse que causa ao animal como pelos cuidados clínicos que se dever ter no uso dessas drogas. As técnicas de dosagens hormonais não invasivas vieram como uma boa opção, realizando a análise destes hormônios ou seus metabólitos. Estes são excretados nas fezes, urina, excretas, pele, pelos ou saliva, permitindo o acompanhamento por longos períodos, pois em muitos casos, não exigem manipular o animal. As amostras mais utilizadas são fezes e urina e, no caso das aves, excretas. As técnicas mais utilizadas são os ensaios imunológicos, utilizado isótopos radioativos (radioimunoensaio) ou enzimas (enzimoimunoensaio). Nesta revisão, são apresentadas as principais vantagens da dosagem não invasiva, focando principalmente seu uso em aves, utilizando excretas e abordando também as principais técnicas de dosagem.(AU)

For wild species, sampling for monitoring stress and reproductive function has always been a challenge. Blood collections in wild animals are difficult to perform because they often require physical restraint of the animal, which causes stress, or at least sedation or anesthesia, which makes it difficult or impossible for frequent collections. Noninvasive hormone monitoring techniques came as a good option, performing analysis of these hormones or their metabolites. These are excreted in feces, urine, excreta, hair or saliva, allowing the collection for long periods, since in many cases they do not require to manipulate the animal. The most commonly used samples are feces and urine, and in the case of birds, excreta. The most commonly used techniques are immunological assays, radioactive isotopes (radioimmunoassay) or enzymes (enzymeimmunoassay). In this review, the main advantages of noninvasive hormonal monitoring are presented, focusing more on their use in birds, using excreta and also addressing the main dosage techniques.(AU)

La imagen nuclear con anticuerpos monoclonales radiomarcados: viejas aplicaciones con nuevos enfoques / Nuclear imaging with radiolabeled monoclonal antibodies: old applications with new aproaches

Resumen Los anticuerpos monoclonales marcados con radionucleidos fueron en sus inicios ampliamente empleados para el estudio de diversas enfermedades, fundamentalmente oncológicas mediante la inmunogammagrafía. Estos fueron poco a poco sustituidos por moléculas con mejores prestaciones como los péptidos y la 18F-fluordesoxiglucosa (18F-FDG). No obstante, en el presente siglo, la amplia introducción de la inmunoterapia produjo un cambio de paradigma en cuanto al empleo de los anticuerpos monoclonales radiomarcados para la adecuada selección y seguimiento de los pacientes a ser tratados con inmunoterapia, resurgiendo la inmunotomografía por emisión de fótón único (inmuno-SPECT), la inmunotomografía por emisión de positrones (inmuno-PET) y la imagen corregistrada con la tomografía axial computarizada (TAC), como modalidades de gran valor en el manejo del cáncer. El objetivo del presente trabajo fue brindar una panorámica acerca de la evolución de la imagen nuclear con anticuerpos monoclonales radiomarcados y sus principales aplicaciones en el tiempo, fundamentalmente en el estudio de los pacientes con cáncer.

Abstract In the beginning, radionuclide-labeled monoclonal antibodies were widely employed for the study of various diseases, mainly oncological, by immunoscintigraphy. They were gradually replaced by molecules with better performance such as peptides and 18F-FDG. However, in the present century, the wide introduction of immunotherapy produced a paradigm shift in the use of radiolabeled monoclonal antibodies for the proper selection and follow-up of patients to be treated with immunotherapy, re-emerging of the immune-single photon emission tomography (immuno-SPECT), the immune-positron emission tomography (immuno-PET) and the co-registered image with computed tomography (CT) as imaging modalities of great value in the management of cancer. The aim of the present work was to provide an overview of the evolution of nuclear imaging with radiolabeled monoclonal antibodies and their main applications over the time, mainly in the study of patients with cancer.

Servicio de determinación de hormonas a instituciones hospitalarias en el Centro de Isótopos / Hormone determination service to hospital institutions the Center of Isotopes

RESUMEN En los marcos de la estrecha colaboración entre la Agencia de Energía Nuclear y Tecnologías de Avanzada y el Ministerio de Salud Pública, a inicios de este siglo se procedió a organizar, en el Centro de Isótopos, un servicio de determinación de hormonas por metodologías nucleares, atendiendo a necesidades de diversas instalaciones hospitalarias. El centro disponía de personal capacitado en técnicas de radioinmunoanálisis y seguridad radiológica, el equipamiento necesario y laboratorios licenciados para el trabajo con sustancias radiactivas. Para ello se hizo necesario incorporar al Sistema de Calidad las regulaciones vigentes para laboratorios clínicos y adecuar la infraestructura para el procesamiento de no menos de 1000 muestras por semana, procedentes de 16 hospitales. Se requería recogida y transportación de las muestras, recepción, inspección y registro, análisis, evaluación y entrega de los resultados. En función de la actividad se diseñó y puso en operación un sistema informático y se normalizaron acciones para asegurar competencia técnica avalada por: trazabilidad; incertidumbre; ejercicios de aptitud y otros requisitos exigidos por la regulación de Buenas Prácticas de Laboratorio Clínico vigentes en el país. A raíz de nuevas regulaciones, el servicio ha introducido de manera paulatina determinadas mejoras. En 15 años de trabajo este laboratorio ha resultado el principal del país en emplear métodos radiactivos para la cuantificación de hormonas, lo que favorece la atención de más de 70 000 pacientes como promedio al año, principalmente de la capital. Esto es parte de nuestra contribución en el 500 aniversario de La Habana.

ABSTRACT Within the framework of the close collaboration between the Agency of Nuclear Energy and Advanced Technologies and the Ministry of Public Health, at the beginning of this century, and considering the need of different hospitals, the Center of Isotopes (CENTIS), began providing service to determine hormones by nuclear methodologies,. CENTIS had qualified personnel in immune radioanalysis RIA/IRMA techniques and radiation safety, in addition to having the required equipment and accredited laboratories to work with radioactive substances. As a result, it was necessary to incorporate to CENTIS Quality System, the regulations in force for clinical laboratories , and to adapt its infrastructure for the processing of no less than 1000 samples per week from 16 hospitals. The Service required collection and transportation of the samples, reception, inspection and registration, test, evaluation and delivery of the test results. In order to fulfil this activity, a computer system was designed and set , and standards for actions were established to guarantee a high technical quality endorsed by traceability, uncertainty; proficiency tests and other requirements demanded by the Good Practices of Clinical Laboratory (BPLC 03 -2009) issued by CECMED. Due to new regulations, several improvements have been introduced. In 15 years, CENTIS laboratory has become the most important in the country using radioactive methods for the quantification of hormones, with an average testing of more than 70 000 patients per year, mainly in the capital. This is part of our contribution in the 500th Anniversary of Havana.

Characterization of the LH peak after short and long fixed-time artificial insemination protocols in sheep raised in the tropics.

The aim of this study was to evaluate the peak in luteinizing hormone (LH) and the pregnancy rate of sheep (Texel × Santa Inês) in the tropics using short- (6 days) and long-term (12 days) progesterone protocols followed by artificial insemination (AI) both in and out of the breeding season. Experiment 1 was conducted within (IN) the breeding season (autumn, n = 36), and experiment 2 was conducted outside (OUT) of the breeding season (spring, n = 43). In each experiment, the sheep were divided into two groups (6 or 12 days) according to the duration of treatment with a single-use progesterone release vaginal device (CIDR® , Pfizer, São Paulo, SP, Brazil), and blood samples were collected from 10 animals per group every 4 hr to measure the LH and progesterone concentrations. In the spring, the characteristics of the LH peak did not differ between groups; but in the autumn, there were differences between groups at the beginning (G-6 IN: 36.44 ± 5.46 hr; G-12 IN: 26.57 ± 4.99 hr) and end of the LH peak (G-6 IN: 46.22 ± 7.51 hr; G-12 IN: 34.86 ± 8.86 hr). The results showed alterations in the LH peak during the breeding season only in the sheep undergoing the short-term protocol.

Fecal glucocorticoid metabolites and assay validation: Stress response evaluation in captive brown howler monkeys (Alouatta clamitans).

BACKGROUND: The advent of non-invasive methods provides a powerful alternative to stress studies as the use of stressful handling techniques is no longer needed. However, many factors influence hormone metabolism such as sex, diet, and metabolic rate. Thus, validation should be species- and matrix-specific. METHODS: To assess stress response in brown howler monkeys Alouatta clamitans, we adopted an ACTH challenge test and parallelism to provide physiological and laboratorial validation. Radioimmunoassay was used to measure fecal levels of corticosterone. RESULTS AND CONCLUSIONS: All challenged animals presented a peak in fecal glucocorticoids levels the day after the treatment, while control animals did not. There were no significant sex differences, but females with infants had higher levels of corticosterone. Corticosterone levels showed parallelism to the standard curve of the diagnostics kit. Collectively, the data suggest that the method was validated and is useful for monitoring stress, thereby helping in conservation programs both in captivity and in the wild. Transit time information may be coupled with travel distance in seed dispersal studies.

Estradiol and progesterone fecal metabolites analysis in crab-eating-fox (Cerdocyoun thous) / Análise de metabólitos fecais de estradiol e progesterona em cachorro-do-mato (Cerdocyoun thous)

In this study, four crab-eating fox females (Cerdocyon thous) maintained at the Federal University of Mato Grosso Zoo, Cuiabá, Brazil, were investigated for 12 months, using feces measurement of estradiol and progesterone concentrations. Fecal collections were performed three times a week for hormone extraction. Two methods of analysis, Elisa (EIA) and Radioimmunoassay (RIA), were used in the measurement of progesterone (P4) and estradiol (E2) metabolites. The aim of this study was to compare and validate two different methods of hormone measurement for C. thous. There were no differences regarding the method used. The Radioimmunoassay technique proved to be more sensitive, however, both showed similar results.(AU)

Neste estudo, quatro fêmeas de cachorros-do-mato (Cerdocyon thous) mantidas no Zoológico da Universidade Federal de Mato Grosso, Cuiabá, MT, Brasil, foram investigadas pelo período de 12 meses, mediante a mensuração de concentrações de estradiol e progesterona em fezes. Coletas de fezes foram realizadas três vezes por semana para posterior extração hormonal. Dois métodos de análise de metabólitos fecais, elisaimunoensaio (EIA) e radioimunoensaio (RIA), foram utilizados na mensuração dos metabólitos de progesterona (P4) e estradiol (E2). O objetivo deste estudo foi comparar e validar dois diferentes métodos de mensuração hormonal para C. thous. Não houve diferença significativa com relação ao método empregado. A técnica de radioimunoensaio demonstrou ser mais sensível, no entanto ambas apresentaram resultados semelhantes.(AU)

Measurement of Leptin by RIA Versus MIA in a Population of Healthy Newborns.

BACKGROUND: Assays based on multiplex immunoassay (MIA) technology have demonstrated advantages over enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and radioimmunoassay (RIA). Its acceptance depends on how well it performs in comparison to older techniques. The aim is to compare the results of leptin using RIA versus MIA. METHODS: We analyzed 81 samples of umbilical cord blood of healthy term newborns by RIA and MIA. RESULTS: The concordance correlation coefficient was 0.158 (95% CI 0.10-0.21). Pearson's correlation coefficient was 0.6651 (95% CI 0.52-0.77; P < 0.0001). In the Bland-Altman plot, concordance is acceptable because most of the measurements are within a mean of ±1.96 SD. CONCLUSIONS: As shown by the Bland-Altman plot, there is concordance by both methods, but with a weak correlation.

Estradiol and progesterone fecal metabolites analysis in crab-eating-fox (Cerdocyoun thous) / Análise de metabólitos fecais de estradiol e progesterona em cachorro-do-mato (Cerdocyoun thous)

In this study, four crab-eating fox females (Cerdocyon thous) maintained at the Federal University of Mato Grosso Zoo, Cuiabá, Brazil, were investigated for 12 months, using feces measurement of estradiol and progesterone concentrations. Fecal collections were performed three times a week for hormone extraction. Two methods of analysis, Elisa (EIA) and Radioimmunoassay (RIA), were used in the measurement of progesterone (P4) and estradiol (E2) metabolites. The aim of this study was to compare and validate two different methods of hormone measurement for C. thous. There were no differences regarding the method used. The Radioimmunoassay technique proved to be more sensitive, however, both showed similar results.(AU)

Neste estudo, quatro fêmeas de cachorros-do-mato (Cerdocyon thous) mantidas no Zoológico da Universidade Federal de Mato Grosso, Cuiabá, MT, Brasil, foram investigadas pelo período de 12 meses, mediante a mensuração de concentrações de estradiol e progesterona em fezes. Coletas de fezes foram realizadas três vezes por semana para posterior extração hormonal. Dois métodos de análise de metabólitos fecais, elisaimunoensaio (EIA) e radioimunoensaio (RIA), foram utilizados na mensuração dos metabólitos de progesterona (P4) e estradiol (E2). O objetivo deste estudo foi comparar e validar dois diferentes métodos de mensuração hormonal para C. thous. Não houve diferença significativa com relação ao método empregado. A técnica de radioimunoensaio demonstrou ser mais sensível, no entanto ambas apresentaram resultados semelhantes.(AU)

Concentração dos metabólitos de estradiol e progesterona fecais no cachorro-do-matovinagre (Speothos venaticus) (Lund, 1842) pelos métodos de radioimunoensaio e quimioluminescência / Estradiol and progesterone fecal metabolites concentration of bush dog (Speothos venaticus) (Lund, 1842) by radioimmunoassay and chemiluminescence methods

Este trabalho objetivou comparar dois métodos de dosagem hormonal (quimioluminescência eradioimunoensaio) em extratos fecais liofilizados em cachorro-do-mato-vinagre (Speothos venaticus) paraverificar qual fornece maior acurácia quanto aos resultados. Foram utilizadas 166 amostras fecais de duas fêmeas(fêmea A, n = 80 e fêmea B, n = 86) oriundas do Zoológico de Ilha Solteira/SP, coletadas no período de março adezembro de 2005. As amostras foram liofilizadas, e extraíram-se os metabólitos hormonais fecais. Asconcentrações de estradiol e progesterona foram dosadas utilizando-se kits específicos para dosagem hormonalem humanos. Os resultados de ambos os métodos foram comparados (testes estatísticos). De acordo com ostestes de Pearson e de Tukey, os métodos tiveram resultados compatíveis (P > 0,05). Não houve diferençasignificativa entre os métodos, mostrando que o monitoramento não invasivo de hormônios em extrato fecalcontribuiu na determinação da concentração dos metabólitos de cada fêmea deste estudo. Este revela aadequação e a similaridade entre os métodos de quimioluminescência e radioimunoensaio para a quantificaçãodos metabólitos fecais de estradiol e de progesterona na espécie Speothos venaticus.

The objective of this study was to compare two methods of hormone concentration assessment(chemiluminescence and radioimmunoassay) in lyophilized fecal extracts from bush dogs (Speothos venaticus) toverify which gives more accurate in results. One hundred and sixty-six fecal samples from two females (femaleA, n = 80 and female B, n = 86) at Ilha Solteira Zoo – SP, were collected from March through December 2005.Samples were lyophilized before fecal metabolite hormonal extraction. Estradiol and progesteroneconcentrations were assessed using commercially available kits for human hormone analyses. Both methodsresults were compared by (test statistics). According to Pearson and Tukey tests, the methods had comparableresults (P > 0,05). There was no significant difference between methods, showing the non-invasive monitoring offecal metabolite hormonal contribued to the determination of metabolites concentrations for each female in thisstudy. It demonstrates the suitability and similarity of chemiluminescence and radioimmunoassay forquantification of estradiol and progesterone fecal metabolites in Speothos venaticus species.

Concentração dos metabólitos de estradiol e progesterona fecais no cachorro-do-matovinagre (Speothos venaticus) (Lund, 1842) pelos métodos de radioimunoensaio e quimioluminescência / Estradiol and progesterone fecal metabolites concentration of bush dog (Speothos venaticus) (Lund, 1842) by radioimmunoassay and chemiluminescence methods

Este trabalho objetivou comparar dois métodos de dosagem hormonal (quimioluminescência eradioimunoensaio) em extratos fecais liofilizados em cachorro-do-mato-vinagre (Speothos venaticus) paraverificar qual fornece maior acurácia quanto aos resultados. Foram utilizadas 166 amostras fecais de duas fêmeas(fêmea A, n = 80 e fêmea B, n = 86) oriundas do Zoológico de Ilha Solteira/SP, coletadas no período de março adezembro de 2005. As amostras foram liofilizadas, e extraíram-se os metabólitos hormonais fecais. Asconcentrações de estradiol e progesterona foram dosadas utilizando-se kits específicos para dosagem hormonalem humanos. Os resultados de ambos os métodos foram comparados (testes estatísticos). De acordo com ostestes de Pearson e de Tukey, os métodos tiveram resultados compatíveis (P > 0,05). Não houve diferençasignificativa entre os métodos, mostrando que o monitoramento não invasivo de hormônios em extrato fecalcontribuiu na determinação da concentração dos metabólitos de cada fêmea deste estudo. Este revela aadequação e a similaridade entre os métodos de quimioluminescência e radioimunoensaio para a quantificaçãodos metabólitos fecais de estradiol e de progesterona na espécie Speothos venaticus.(AU)

The objective of this study was to compare two methods of hormone concentration assessment(chemiluminescence and radioimmunoassay) in lyophilized fecal extracts from bush dogs (Speothos venaticus) toverify which gives more accurate in results. One hundred and sixty-six fecal samples from two females (femaleA, n = 80 and female B, n = 86) at Ilha Solteira Zoo SP, were collected from March through December 2005.Samples were lyophilized before fecal metabolite hormonal extraction. Estradiol and progesteroneconcentrations were assessed using commercially available kits for human hormone analyses. Both methodsresults were compared by (test statistics). According to Pearson and Tukey tests, the methods had comparableresults (P > 0,05). There was no significant difference between methods, showing the non-invasive monitoring offecal metabolite hormonal contribued to the determination of metabolites concentrations for each female in thisstudy. It demonstrates the suitability and similarity of chemiluminescence and radioimmunoassay forquantification of estradiol and progesterone fecal metabolites in Speothos venaticus species.(AU)

Determination of cortisol and cortisone in human saliva by a liquid chromatography-tandem mass spectrometry method / Determinação de cortisol e cortisona na saliva por método baseado em cromatografia líquida e espectrometria de massas em tandem

Objective Salivary cortisol measurement plays an important role in the evaluation of adrenal function. Its high correlation with free serum cortisol, the easy of sampling and the limited presence of interfering steroids, generated multiple recent studies of its application, in special in the screening of adrenal hyperfunction. In this paper we present our experience in the development of a high pressure liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) method for salivary cortisol and cortisone measurement. Materials and methods For this study we used 181 saliva samples from our routine diagnostic laboratory. The HPLC-MS/MS method was based on a Waters Quattro Premier tandem mass spectrometer with an electrospray probe. After derivatization with hydroxylamine transitions monitored included cortisol and cortisone. An in-house radioimmunoassay (RIA) was used for salivary cortisol results comparison. Results Functional sensitivity was 24 ng/dL for cortisol and linearity from 24 to 1929 ng/dL. Saliva cortisol values obtained in the 181 samples presented a median of 52 ng/dL with 5‐95% percentile of 24 and 374 ng/dL. With the RIA the results were 86, 25 and 436 ng/dL, respectively, with values for RIA being significantly higher (P<0.0001) and high correlation (r=0.8312, P<0.0001). Cortisone measured in 159 samples showed a median of 278 ng/dL, with 5‐95% percentile of 100 and 1,133 ng/dL. Correlation with cortisol values was significant (r=0.820, P<0.0001). Conclusion We conclude that the HPLC-MS/MS method compares favorably with the RIA for salivary cortisol measurement, with the additional possibility of concomitant cortisone measurement and the evaluation of 11βHSD2 activity. .

Objetivo A dosagem de cortisol salivar é uma metodologia que vem tendo crescente aceitação no estudo da função adrenocortical. Sua alta correlação com a fração livre sérica, facilidade de coleta e presença limitada de interferentes têm originado múltiplas publicações, em especial no screening de pacientes suspeitos de hiperfunção. Neste trabalho apresentamos nossa experiência no desenvolvimento de metodologia baseada em cromatografia líquida e espectrometria de massas (HPLC-MS/MS) para a medida de cortisol e cortisona salivares. Materiais e métodos Para este estudo utilizamos 181 amostras de saliva de nossa rotina diagnóstica. A metodologia de HPLC-MS/MS baseou-se num espectrômetro de massas Waters Quattro Premier. Após derivatização com hidroxilamina, as transições monitoradas incluíram cortisol e cortisona. Um radioimunoensaio (RIE) in house foi empregado para comparação. Resultados A sensibilidade funcional para cortisol foi de 24 ng/dL, com linearidade entre 24 e 1,929 ng/dL. Os valores de cortisol obtidos nas 181 amostras apresentaram mediana de 52 ng/dL, com percentis 5‐95% de 24 e 374 ng/dL. Com o RIE, os resultados foram 86, 25 e 436 ng/L, respectivamente, com os valores obtidos no RIE significativamente mais elevados (P<0,0001), e alta correlação (r=0,8312, P<0,0001). Cortisona, medida em 159 amostras, mostrou mediana de 278 ng/dL, com percentis 5‐95% entre 100 e 1.133 ng/dL. A correlação com os valores de cortisol foi significativa (r=0,820, P<0,0001). Conclusão Concluímos que o método baseado em HPLC-MS/MS compara-se favoravelmente com o RIE para a medida de cortisol salivar, com a possibilidade adicional da medida concomitante de cortisona e avaliação da atividade da enzima 11βHSD2. .

Análise de um radioimunoensaio iodado para determinação de 11-deoxicortisol / Analysis of an iodide radioimmunoassay for 11-deoxicortisol measurement

Objetivo : Nosso objetivo foi comparar duas técnicas de dosagem do 11-desoxicortisol: a técnica de radioimunoensaio iodado, a qual foi validada neste trabalho, e a cromatografia líquida de alta performance seguida por espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS), sendo a última considerada o padrão-ouro para dosagem dos hormônios esteroides. Materiais e métodos : Para a comparação entre os resultados de 11-desoxicortisol, foram selecionadas 88 amostras. Resultados : A sensibilidade analítica do radioimunoensaio foi de 0,30 ng/mL, com linearidade e perfil de precisão inadequado (34% das amostras com CV ≥ 20%). Das 88 amostras selecionadas, apenas 54 apresentaram resultados mensuráveis em ambos os métodos. A comparação desses resultados, por meio da regressão de Deming, resultou em um coeficiente de correlação de 0,610, inclinação de 3,751, intercepção de 0,145, evidenciando a pobre correlação entre os resultados e a superestimação dos resultados pelo RIA. Conclusão : Concluímos que o método de dosagem de 11-desoxicortisol por radioimunoensaio iodado apresentou resultados inadequados nos diversos parâmetros avaliados, inviabilizando sua utilização como método de dosagem do 11-desoxicortisol. Arq Bras Endocrinol Metab. 2014;58(3):232-6 .

Objective : Our aim was to correlate 11-deoxycortisol levels obtained by two currently available techniques for 11-deoxycortisol measurement: radioimmunoassay, and high performance liquid chromatography followed by tandem mass spectrometry (MS/MS). The latter is the gold standard method for steroid hormone measurement. Materials and methods : We selected 88 samples and the results of these two methods were compared by Deming regression. Results : The analytical sensitivity of the RIA was 0.30 ng/mL, with inadequate linearity and inadequate precision profile (34% of the samples had a CV ≥ 20%). From the selected samples, 54 had measurable levels of 11-deoxycortisol in both methods and were used in the comparison. The comparison of RIA with LC-MS/MS showed an overestimation of the results by RIA. The correlation coefficient was 0.610; linear regression slope was 3.751; and the intercept was 0.145, indicating a poor correlation between the two methods. Conclusion : We concluded that 11-deoxycortisol measured by radioimmunoassay, despite a good analytical sensitivity, showed very low specificity, precluding its use as a reliable method for 11-deoxycortisol measurement. Arq Bras Endocrinol Metab. 2014;58(3):232-6 .

Evaluation of the fecal steroid concentrations in Alouatta belzebul (Primates, Atelidae) in the National Forest of Tapirape-Aquiri in Pará, Brazil.

BACKGROUND: The studies on fecal steroid metabolites published with free-living primates are limited mainly by the difficulty in obtaining samples. METHODS: A radioimmunoassay was used to measure the fecal steroid concentrations in Alouatta belzebul in the National Forest of Tapirape-Aquiri in Brazil. RESULTS AND CONCLUSIONS: Androgens were significantly higher for the adult males from the Area of Influence (AI-I group) when compared to those from the Control Area (CA group) (P < 0.05). Progestin and estrogen concentrations were higher in the females from the CA group than in those from the AI-I for both the adult females and females with offspring; however, P < 0.05 was only observed in the concentrations of fecal progestins from the adult females. The physiological differences between the AI-I and CA groups suggest that the cause was a sum of factors, such as an exposure to sound waves, feeding habits, daily activity patterns, and the habituation of the animals.

Hormonas reprodcctivas de importancia veterinaria en hembras domésticas rumiantes / Reproductive hrmmones of veterinary importance in domestic ruminant females

En el presente trabajo se revisan las principales hormonas reproductivas en hembras domésticas rumiantes, considerando sus características e interacciones, además de los métodos de determinación y las concentraciones que se reportan de cada una de dichas hormonas, durante las diferentes fases del ciclo estral. El eje hipotálamo-pituitario-ovárico controla la actividad reproductiva, principalmente, a través de las interacciones entre la Hormona Folículo Estimulante (FSH), la Hormona Luteinizante (LH), el Estradiol (E2) y la Progesterona (P4). Durante la fase folicular, las gonadotropinas estimulan el desarrollo de los folículos, promoviendo la proliferación de las células de la granulosa por parte de la FSH; su pico está asociado al surgimiento de la onda folicular, después de la cual decrece la concentración plasmática de FSH, y da inicio a la desviación folicular. Esto permite al folículo dominante expresar receptores para la LH, además de producir inhibina y E2. El alto nivel circulante de E2 induce la liberación de la Hormona Liberadora de Gonadotropinas (GnRH) desde el hipotálamo, resultando en un pico de LH, de amplitud y frecuencia suficiente para estimular la maduración final del folículo y la posterior ovulación. Las altas concentraciones de E2 influyen también sobre la presentación de los cambios fisiológicos y comportamentales durante el estro. La fase luteal está caracterizada por el predominio de la P4, cuya concentración se relaciona con el desarrollo del cuerpo lúteo. Esta hormona es indispensable para el reconocimiento y mantenimiento de la preñez y sus perfiles pueden llegar a determinar si existe la predisposición de un animal a sufrir pérdidas embrionarias tempranas. Se considera que los incrementos o disminuciones en las concentraciones séricas de cada hormona marcan cambios en las fases del ciclo estral, y es fundamental conocer la actividad de dichas hormonas mediante la determinación de su concentración sanguínea normal para cada una de las etapas reproductivas.

The main reproductive hormones in domestic female ruminants are reviewed in this paper, including their characteristics, interactions and concentrations besides the determination methods and concentrations reported in each hormone during the different phases of the estrous cycle. The hypothalamus-pituitary-ovarian axis, controls reproductive activity, mainly, through interactions between the Follicle-stimulating Hormone (FSH), Luteinizing Hormone (LH), Progesterone (P4) and Estradiol (E2). During the follicular phase, gonadotropin hormones stimulate follicle development, promoting the proliferation of granulosa cells on the FSH side. The FSH peak is associated with the emergence of the follicular wave after which, its plasmatic concentration decreases and the follicular deviation begins. This allows the dominant follicle to express LH-receptors and to produce inhibine and E2. The high level of flowing E2 induces the release of Gonadotropin Releasing Hormone (GnRH) from the hypothalamus, resulting in a LH of enough amplitude and frequency to stimulate the final maturation of the follicle and the subsequent ovulation. High plasma concentrations of E2, also influence the appearance of physiological and behavioral changes during estrous. The luteal phase is characterized by the dominance of P4, whose concentration is related to the development of the luteal body. This hormone is essential for pregnancy and its profiles recognition and maintenance, and it can even determine if there exist predisposition of an animal to suffer early embrionary loss. It is considered that increase or decrease in plasma concentration of each hormone, determine changes in the estrous cycle phases and, it is fundamental to know the activity of such hormones, by determining their normal blood concentration for each of the reproductive stages.

Desenvolvimento de um radioimunoensaio de dexametasona no soro como subsídio para o diagnóstico da síndrome de Cushing / Development of serum dexamethasone radioimmunoassay to corroborate Cushing's syndrome diagnosis

INTRODUÇÃO: O teste de supressão com 1 mg de dexametasona (TSDx) é amplamente empregado no rastreamento da síndrome de Cushing (SC) dada sua elevada acurácia diagnóstica. A SC é um distúrbio endocrinometabólico resultante do hipercortisolismo crônico com característica de ausência de supressão do cortisol no TSDx. OBJETIVO: Desenvolver um radioimunoensaio (RIE) para a dosagem de dexametasona (Dx) no soro para complementar o TSDx. MÉTODOS: Foram imunizados três coelhos com o conjugado dexametasona-21-hemissuccinato-BSA para escolha do melhor anticorpo e o RIE foi desenvolvido de acordo com as recomendações da RE 899/2003 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Analisamos 96 voluntários, sendo 67 submetidos ao TSDx e 29 não, e 12 pacientes com SC, estudados na Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) e na Santa Casa de Misericórdia de São Paulo. RESULTADOS: O anticorpo contra Dx selecionado mostrou boa especificidade, coeficiente de variação (CV por cento) intra e interensaio < 20 por cento, exatidão de 93,8 por cento e dose mínima detectada de 19,5 ng/dl. A concentração de Dx no soro foi semelhante nos voluntários e pacientes com SC (ausência/supressão do cortisol): 205 a 703 ng/dl e 174 a 661 ng/dl (intervalo de confiança [IC] 95 por cento), respectivamente; os valores foram indetectáveis naqueles que não se submeteram ao teste. DISCUSSÃO: O anticorpo empregado apresenta boa afinidade e especificidade para quantificar a Dx no soro. O RIE mostrou reprodutibilidade e eficiência na determinação dos níveis séricos de Dx durante o TSDx. CONCLUSÃO: O presente RIE para a dosagem de Dx no soro é acurado e confiável, permitindo estabelecer uma faixa de referência de valores para subsidiar a interpretação do TSDx.

INTRODUCTION: The 1 mg dexamethasone suppression test (DxST) is widely used to screen Cushing's syndrome (CS) due to its high diagnostic accuracy. CS is an endocrine-metabolic disorder caused by hypercorticism, which is characterized by the absence of cortisol suppression in DxST. OBJECTIVE: To develop a radioimmunoassay (RIA) for the measurement of serum dexamethasone (Dx) to complement DxST. METHODS: Three rabbits were inoculated with dexamethasone-21-hemisuccinate-BSA in order to choose the best antibody. Serum Dx RIA was performed according to RE 899/2003 (Agência Nacional de Vigilância Sanitária [ANVISA]) regulations. Serum samples from 96 volunteers from Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) and Santa Casa de Misericórdia de São Paulo were analyzed, 67 of which were submitted to DxST and 29 were not. There were 12 patients with CS. RESULTS: The Dx antibody chosen showed good specificity. Intra- and interassay CV were < 20 percent with 93.8 percent accuracy and the lowest detection limit was 19.5 ng/dl. Serum Dx concentration was similar among both volunteers and CS patients (absence of cortisol suppression): 205 to 703 ng/dl and 174 to 661 ng/dl (95 percent CI), respectively. Values were undetectable among those that were not submitted to the test. Discussion: The anti-Dx antibody shows high specificity and reliability to quantify serum Dx in DxST. The Dx RIA presented reproducibility and reliability in the determination of serum Dx levels during DxST. CONCLUSION: The current RIA for serum Dx is accurate and reliable, which permits to establish a reference value range to substantiate DxST interpretation.

Validação de radioimunoensaio para quantificação de leptina plasmática bovina / Imunoradioassay validation to plasmatic bovine leptin quantification

Devido à necessidade de compreender melhor as interações entre leptina e reprodução, um ria específico para a leptina bovina foi validado. Primeiro, um protocolo para produção de anticorpos foi desenvolvido por meio da inoculação de leptina recombinante equina em um coelho, que resultou em 28,05% de ligação máxima (MB) 105 dias após o inicio do protocolo. Os testes de validação verificaram paralelismo entre a curva padrão e as diluições dos controles alto e baixo (p<0,01). O anticorpo contra leptina equina mostrou especificidade para a leptina bovina (p<0,01). A taxa de recuperação da leptina bovina pelo anticorpo contra leptina recombinante equina foi de 98,4 a 101,6% (p < 0, 01). Quando as amostras foram armazenadas em temperatura ambiente ou refrigeradas à 4°c, foi verificado estabilidade de ligação (p > 0,2), no entanto temperaturas acima de 37°C interferiram negativamente na recuperação da leptina bovina. O uso do tampão de ensaio com ou sem a adição de plasma não apresentou diferenças (p > 0,3). Esses resultados demonstraram que o anticorpo produzido em coelho contra leptina equina foi capaz de detectar a leptina plasmática bovina, e que o ria para a quantificação da leptina bovina apresentou características adequadas para o desenvolvimento de um ensaio válido.(AU)

Due necessity of better understanding leptin and reproduction relations, a specific radioimmunoassay (RIA) to bovine leptin was validated. First, an antibody production protocol was developed using recombinant equine leptin inoculated in a rabbit, that results in 28,05% of maximum binding (MB) 105 days after the protocol beginning. The tests of validations verified parallelism between standard curve and dilutions of high and low controls (P < 0,01). Antibody against equine leptin showed specificity to bovine leptin (P < 0,01). The recuperation tax of bovine leptin by antibody against recombinant equine leptin was from 98,4 to 101,6% (P < 0, 01). When the samples were stored in ambient temperature or refrigerated to 4°C, ligation stability was verified (P > 0,2), howether, temperatures above 37°C impaired the bovine leptin recuperation. The use of assay buffer with or without bovine plasma did not show difference (P > 0,3). These results showed that the antibody produced in rabbit against equine leptin were able to detect plasmatic bovine leptin, and that the RIA to bovine leptin quantification had adequate characteristics to the development of a valid assay.(AU)

Validação de conjuntos diagnósticos comerciais para dosagem sérica de progesterona e estradiol em jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-matopequeno (Leopardus tigrinus) / Progesterone and estradiol commercial kits validation in serum of ocelots (Leopardus pardalis) and tigrina (Leopardus tigrinus)

Este estudo teve como objetivo validar os conjuntos diagnósticos m comerciais DPC (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA), em fase sólida, para dosagem de progesterona e DSL (Diagnostic System Laboratories INC/USA), em fase líquida, para dosagem de estradiol, por radioimunoensaio, em soro de Leopardus pardalis (n=5)e Leopardus tigrinus (n=4), antes (15-30 dias) e após (24-28 horas) tratamento com gonadotropinas exógenas (hCG/ Novormon® eeCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® e pLH/Lutropin-V®). A concentração sérica para Leopardus pardalis variou 0,005 a 0,151ng/ml para estradiol e 0,15-37,22ng/ml para progesterona. A concentração sérica para Leopardus tigrinus variou 0,012-0,147ng/ml para estradiol e 0,06-34,09ng/ml para progesterona. A sensibilidade mínima detectada foi 0,004 ng/ml para progesterona e 0,00014ng/ml para estradiol. Para progesterona o coeficiente intra-ensaio baixo foi 2,58% e alto6,36%, já o coeficiente inter-ensaio baixo foi 0,67% e alto 5,55%. Para o estradiol o coeficiente intra-ensaio baixo foi 0,69% e alto 4,15%,sendo o coeficiente inter-ensaio baixo 1,40% e alto 3,00%. Paralelismo foi encontrado para progesterona e conjunto comercial DPC com r = 0,96 para Leopardus pardalis e r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Para estradiol em conjunto comercial DSL paralelismo foi encontrado com r = 0,98 para Leopardus pardalis e com r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Com estes resultados podemos concluir que o conjunto diagnóstico comercial DPC para dosagem de progesterona e DSL para dosagem de estradiol foram validados para utilização em soro de Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus, podendo ser utilizado como ferramenta no manejo reprodutivo destas espécies visando à conservação.(AU)

DPC commercial kit (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA) and DSL commercial kit (Diagnostic System Laboratories INC/USA) were used for progesterone and estradiol radioimmunoassay validation in serum of two endangered Brazilian felids: Leopardus pardalis (n=5) and Leopardus tigrinus (n=4) before (15-30 days) and after (24-28 hours) exogenous gonadotrophins treatment(hCG/ Novormon® and eCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® andpLH/Lutropin-V®). Variation of estradiol concentration was 0.005 -0.151 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus pardalis. Variation of estradiol concentration was 0.012 -0.147 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus tigrinus. Minimum sensibility detected for progesterone was 0.004 ng/ml and for estradiol was 0.00014 ng/ml. Progesterone intra-assay coefficient was 2.58% and 6.36% and inter-assay was 0.67% and 5.55%. Estradiol intra-assay coefficient was 0.69% and 4.15%,and inter-assay was 1.40% and 3.00%. Parallelism was used for kits validation. Progesterone and DPC commercial kit Parallelism wasr = 0.96 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. Estradiol and DSL commercial kit Parallelism was r = 0.98 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. In conclusion, these results showed that DPC commercial kit for serum progesterone dosages and DSL commercial kit for serum estradiol dosages can be used for Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus. These findings are potentially valuable for the reproductive management and conservation of endangered felid populations.(AU)

Emprego da cromatografia líquida de alta eficiência na determinação de cortisol sérico em substituição à técnica de radioimunoensaio / High-performance liquid chromatography application for serum cortisol quantification as a substitute for radioimmunoassay

Introdução: A determinação de cortisol nos diferentes fluídos orgânicos tem sido aplicada como auxílio diagnóstico em distintas condições nosológicas em humanos, bem como empregada em estudos envolvendo pesquisa clínica. No intervalo de aplicação clínica, rotineiramente é determinado pela técnica de radioimunoensaio (RIE). Na determinação do cortisol urinário livre essa técnica vem sendo substituída peloemprego da cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), principalmente no diagnóstico da síndrome de Cushing. Já para a determinação do cortisol sérico não se têm evidências do emprego da cromatografia líquida em substituição a outras técnicas analíticas. Objetivos: O desenvolvimento de metodologia analítica empregando HPLC no modo fase reversa (RP-HPLC) para a determinação de cortisol sérico em substituição ao RIE visando à redução da geração de resíduos radioativos. Material e métodos: O cortisol foi quantificado diretamente empregando-se RP-HPLC em amostras de soro previamente extraídas com éter utilizando-se acetonido de triancinolona como padrão interno (PI). Utilizou-se coluna analítica BDS-Hypesil-C18® (125 x 4 mm, 5 μm), fase móvel composta de água e acetonitrila (72:28; v/v) a 1 ml/min e detecção a 243 nm. Resultados: O cortisol e o PI apresentaram tempo de retenção de 3,4 e 7,1 min, respectivamente. O coeficiente de variação (CV%) obtido no estudo da precisão foi menor que 10%, e a exatidão apresentou um desvio inferior a 4%. Discussão: O método mostrou-se eficaz e eficiente, com sensibilidade e linearidade na faixa estudada de 2,5 a 60 μg/dl. Conclusão: O método proposto substitui o RIE no intervalo de sua aplicação clínica.

Background: The quantification of cortisol in different organic fluids has not only been applied to different humannosological conditions as a diagnostic aid but it has also been used in clinical research. In clinical application, cortisolis routinely measured by radioimmunoassay (RIA). In the determination of free urinary cortisol this technique has been replaced by the high-performance liquid chromatography mainly in the diagnosis of Cushing syndrome. As to serum cortisol determination, there is no evidence of the application of liquid chromatography as a substitute for other analytical techniques. Objective: The development of an analytical methodology using reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) to determine serum cortisol levels as a substitute for RIA in order to reduce radioactive waste. Material and methods: Cortisol was directly quantified by RP-HPLC in previouslyether-extracted serum samples. Triamcinolone acetonide was used as internal standard (IS). The chromatographic separation was developed in a BDS-Hypersil-C18® column (125 x 4 mm, 5μm) using water-acetonitrile (72:28; v/v) as mobile phase at 1 ml/min and steroid peaks were measured at 243 nm. Results: Cortisol and IS presented retention time of 3.4 and 7.1 min, respectively. The precision was less than 10% and accuracy was less than 4%. Discussion: The method was effective and efficient, with good sensitivity and linearity in the concentration range of 2.5 to 60.0μg/dl. Conclusion: The present methodology substitutes RIA at clinical application.

Aplicação da cromatografia a líquido em substituição à técnica de radioimunoensaio como auxílio diagnóstico visando ao gerenciamento de resíduos de serviço da saúde em laboratório de pesquisa / Application of liquid chromatography in substitution of the radioimmunoassay technique in order to reduce residues generated in health services in research laboratory

A elaboração do Plano de Gerenciamento dos Resíduos dos Serviços de Saúde, normatizado na RDC nº 306/2004, é de responsabilidade de todos os geradores. Sendo o radioimunoensaio (RIE) uma das técnicas mais empregadas, estudou-se o impacto da substituição dessa técnica por cromatografia líquida (HPLC), no aspecto da redução na geração de resíduos radioativos na rotina do Laboratório de Esteróides da Universidade Federal de São Paulo (Unifesp). Os resíduos gerados nas determinações de cortisol e 17α-hidroxiprogesterona séricos foram classificados, e aqueles pertencentes aos grupos B e C foram avaliados. Observou-se que no emprego de RIE há geração de resíduos químicos (grupo B) e rejeitos radioativos (grupo C), enquanto no HPLC gerou-se apenas resíduos químicos. A adequação dessas técnicas teve vantagem de redução significativa no tempo de análise e, sobretudo, a eliminação e/ou a diminuição na geração de rejeitos radioativos, estimulando a sua aplicação para outras metodologias, bem como a implantação em outras unidades de pesquisas.

Designing a Health Care Service Waste Management Plan, according to the RDC 306 rules, is a responsibility of all those who produce such waste. Since radioimmunoassay (RIA) is one of the most employed techniques, we studied the impact of replacing this technique by liquid chromatography (HPLC) with regard to the reduction of the radioactive residues routinely produced by the Unifesp steroid laboratory. The residues produced by the determination of serum cortisol and 17 α-hydroxyprogesterone were classified, and those belonging to groups B and C were evaluated. We observed that, when RIA is used, chemical residues (group B) and radioactive waste (group C) are produced, whereas HPLC generates only chemical residues. Adequation of these techniques showed to be advantageous, by significantly reducing the time of analysis and mainly by eliminating and/or reducing the generation of radioactive waste, encouraging its application to other methodologies, as well as its adoption by other research units.