Expression of TRF2 and GAPDH in the aging of the in vitro ovarian surface epithelial cells / Expresión de TRF2 y GAPDH en el envejecimiento de las células del epitelio superficial del ovario in vitro / Expressão de TRF2 e GAPDH no envelhecimento do epitélio superficial do ovário in vitro

GAPDH can bind single-strand telomere DNA both in vitro and in vivo. Thus, it was hypothesised that GAPDH has an important role in protecting the telomeres, role that could be shared with TRF2, a well-known telomeric protein involved in a myriad of functions related to telomere homeostasis. Objective: The aim of this study was to determine if there was a correlation between the expression of these genes in the in vitro ovarian surface epithelium. Materials and methods: The relative expression of each gene was established by qRT-PCR in primary cell cultures of the ovarian surface epithelium from 22 healthy mestizo Colombian donors. Results: The Kendall and Spearman non-parametric tests established a significant correlation between the levels of expression in subsequent passages of the cell line, in an age-independent way. Conclusion: Our findings suggest a synergistic effect between TRF2 and GAPDH that could counter telomere shortening in vitro.

Se ha demostrado que la proteína GAPDH se puede unir al ADN telomérico de cadena sencilla, tanto in vitro como in vivo. Por lo tanto, se ha planteado la hipótesis de que la GAPDH juega un papel importante en la protección de los telómeros, papel que podría ser compartido con la TRF2, proteína que participa en una gran variedad de funciones relacionadas con la homeostasis telomérica. Objetivo: el objetivo de este estudio fue determinar si existe una correlación entre la expresión de ambos genes en el epitelio superficial del ovario in vitro. Materiales y métodos: la expresión relativa de cada gen fue establecida mediante qRT-PCR, en cultivos primarios de células del epitelio superficial del ovario provenientes de un grupo de 22 donantes colombianas mestizas sanas. Resultados: las pruebas no paramétricas de Kendall y Spearman permitieron establecer que existe una correlación significativa entre los niveles de expresión de GAPDH y TRF2 a lo largo de la historia replicativa de los cultivos, en forma independiente de la edad de las donantes. Conclusión: nuestros resultados sugieren un efecto sinérgico entre TRF2 y GAPDH, que podría estar orientado a contrarrestar la reducción de los telómeros in vitro.

Tem se demonstrado que GAPDH pode-se unir ao DNA telomérico de cadeia simples, tanto in vitro quanto in vivo. Portanto, tem se apresentado a hipótese de que GAPDH joga um papel importante na proteção dos telómeros, papel que poderia ser compartilhado com TRF2, proteína que participa em uma grande variedade de funções relacionadas com a homeostase telomérica. Objetivo. O objetivo deste estudo foi determinar se existe uma correlação entre a expressão de ambos os genes no epitélio superficial do ovário in vitro. Materiais e métodos: A expressão relativa de cada gene foi estabelecida mediante qRT-PCR em cultivos primários de células do epitélio superficial do ovário provenientes de um grupo de 22 doadoras colombianas mestiças sanas. Resultados. As provas não paramétricas de Kendall e Spearman permitiram estabelecer que existe uma correlação significativa entre os níveis de expressão de GAPDH e TRF2 ao longe da história replicativa dos cultivos, em forma independente da idade das doadoras. Conclusão. Nossos resultados sugerem um efeito sinérgico entre TRF2 e GAPDH que poderia estar orientado a contra-arrestar a redução dos telómeros in vitro.

Actividad &beta-galactosidasa asociada con la senescencia en fibroblastos del estroma ovárico in vitro / Senescence-associated &beta-galactosidase activity in the in vitro ovarian stromal fibroblasts / Atividade &beta-galactosidase associada com a senescência em fibroblastos do estroma ovariano in vitro

Introducción: Un campo de investigación creciente de la biología es la senescencia celular, mecanismo que ha sido asociado -bajo determinadas circunstancias- con la transformación maligna. Teniendo en cuenta la elevada incidencia de cáncer ovárico y su génesis preferencial a partir del epitelio superficial del ovario, así como la posibilidad de ocurrencia de una transición epitelio-mesenquimática, se evaluó, tanto el crecimiento in vitro de los fibroblastos del estroma cortical, como la actividad a pH 6 de la β-galactosidasa, enzima cuya expresión ha sido clásicamente considerada como marcador de senescencia replicativa. Metodología: 48 muestras de fibroblastos de la corteza ovárica provenientes de donantes sin antecedentes de cáncer fueron cultivadas en forma seriada hasta el final de su vida replicativa. Mediante el método quimioluminiscente, en cada pase fue cuantificada la actividad β-galactosidasa a pH 6. Como control se utilizaron cultivos de células del epitelio superficial ovárico de las mismas donantes. La actividad enzimática fue también evaluada en fibroblastos previamente inducidos a senescencia con peróxido de hidrógeno. Resultados: Las lecturas de actividad enzimática, analizadas en conjunto con la capacidad replicativa, indican que los cultivos de fibroblastos alcanzaron el estado senescente hacia los pases 4-5, lo que también ocurrió con las células epiteliales. Los fibroblastos inducidos a senescencia mostraron valores variables de actividad enzimática. Conclusiones: La semejanza entre los fibroblastos y las células epiteliales en cuanto al inicio de la senescencia podría estar relacionado con la transición epitelio-mesenquimática que ha sido descrita como factor de riesgo de cáncer derivado del epitelio superficial ovárico. Valores bajos de actividad β-galactosidasa podrían sugerir que, en algunos casos, ocurrió inactivación de las vías de respuesta al estrés oxidativo.

Introduction: A growing biological research field is the cellular senescence, a mechanism that has been associated, under certain circumstances, with malignant transformation. Given the high incidence of ovarian cancer and its main origin from the ovarian surface epithelium, as well as the possibility that an epithelial-mesenchymal transition occurs, we evaluated both the in vitro growth of stromal fibroblasts from the ovarian cortex and their β-galactosidase activity at pH 6, enzyme whose expression is considered as a marker of replicative senescence. Methods: 48 samples of ovarian cortical fibroblasts from donors without a history of cancer were serially cultured until the end of their replicative life. β-galactosidase activity at pH 6 was quantified in each passage by the chemiluminiscent method. As control, we used ovarian epithelial cell cultures from the same donors. The enzyme activity was also evaluated in fibroblasts previously induced to senescence by exposure to hydrogen peroxide. Results: The analysis of the enzyme activity and the replicative capacity taken together showed that the fibroblast cultures reached the senescent state at passages 4-5, as what happened with the control epithelial cells. Fibroblasts induced to senescence showed high variability in the values of enzymatic activity. Conclusions: The similarity between both types of cells in reaching the senescent state deserves to be taken into account in relation to the epithelial-mesenchymal transition that has been proposed to explain their behavior in the genesis of cancer arising from ovarian surface epithelium. Low β-galactosidase activity values at pH 6 would suggest possible inactivation of the response pathways to oxidative stress.

Introdução: um campo de pesquisa crescente da biologia é a senescência celular, mecanismo que tem sido associado, sob determinadas circunstancias, com a transformação maligna. Tendo em conta a elevada incidência de câncer ovariano e sua gênese preferencial a partir do epitélio superficial do ovário, assim como a possibilidade de ocorrência de uma transição epitélio-mesenquimática, se avaliou, tanto o crescimento in vitro dos fibroblastos do estroma cortical, como a atividade a pH 6 da β-galactosidase, enzima cuja expressão tem sido classicamente considerada como marcador de senescência replicativa. Metodologia: 48 amostras de fibroblastos do córtex ovariano provenientes de doadores sem antecedentes de câncer foram cultivadas em forma seriada até o final de sua vida replicativa. Mediante o método quimioluminescente, em cada passe foi quantificada a atividade β-galactosidase a pH 6. Como controle utilizou-se cultivos de células do epitélio superficial ovariano das mesmas doadoras. A atividade enzimática foi também avaliada em fibroblastos previamente induzidos a senescência com peróxido de hidrogeno. Resultados: as leituras da atividade enzimática, analisada em conjunto com a capacidade replicativa, indicam que os cultivos de fibroblastos alcançaram o estado senescente para os passes 4-5, o que também ocorreu com as células epiteliais. Os fibroblastos induzidos a senescência mostraram valores variáveis de atividade enzimática. Conclusões:as semelhanças entre os fibroblastos e as células epiteliais em quanto ao inicio da senescência poderia estar relacionado com a transição epitélio-mesenquimática que tem sido descrita como fator de risco de câncer derivado do epitélio superficial ovariano. Valores baixos de atividade β-galactosidase poderiam sugerir que, em alguns casos, ocorreu inativação das vias de resposta ao estresse oxidativo.

Actividad de la ß-galactosidasa como marcador de senescencia en cultivos primarios del epitelio superficial del ovario / ß-Galactosidase activity as a marker of senescence in primary cultures of the ovarian surface epithelium

La actividad de la ß-galactosidasa refleja la tasa de envejecimiento celular in vitro. Mediante quimioluminiscencia se cuantificó dicha actividad a pH 6 en células epiteliales ováricas provenientes de 28 donantes sin antecedentes de cáncer. Las células fueron cultivadas en forma seriada hasta alcanzar el estado de detención permanente de crecimiento. Durante la fase de crecimiento exponencial, todos los cultivos mostraron un patrón semejante de crecimiento y una baja actividad ß-galactosidasa. Sin embargo, el inicio de la disminución de la capacidad replicativa que caracteriza el final de dicha fase, así como el inicio de la fase estacionaria o senescente presentaron un aumento significativo en la actividad enzimática. Nuestros resultados mostraron que la actividad ß-galactosidasa puede ser considerada como marcador de senescencia replicativa del epitelio superficial del ovario a pH 6.

ß-galactosidase activity reflects the rate of cellular aging in vitro. Such activity was quantified at pH 6 in ovarian epithelial cells from 28 donors without a history of cancer, by the chemoluminiscent method. The cells were serially cultured until they achieved the state of permanent growth arrest. During the exponential growth phase, all cultures showed a similar pattern of growth and low ß-galactosidase activity. However, both in the onset of decrease replicative activity, as well as in the onset of the stationary phase, there was a significant rise in the enzyme activity. Our results showed that ß-galactosidase activity can be considered as a replicative senescence marker of the ovarian surface epithelium at pH 6.