Niveles de citoquinas megacariocitopoyéticas en pacientes con trombocitemia esencial y su relación con características clínicas y bioquímicas / Megakaryopoietic cytokine levels in patients with essential thrombocythemia and their relationship with clinical and biochemical features

La megacariocitopoyesis y la producción de plaquetas están regidas por factores de transcripción y citoquinas presentes en el microambiente medular. La trombocitemia esencial (TE) es una enfermedad mieloproliferativa crónica caracterizada por aumento del recuento de plaquetas e hiperplasia megacariocítica. En el presente trabajo se evaluaron los niveles de las citoquinas que participan en el desarrollo megacariocítico en plasma de pacientes con TE que se encontraban sin tratamiento y los de trombopoyetina (TPO) antes y durante el tratamiento con anagrelide. Las determinaciones se realizaron por técnica de ELISA. Dentro de las citoquinas involucradas en la etapa de proliferación, los niveles de interleuquina 3 (IL-3) se encontraron aumentados en los pacientes (p=0.0383) respecto al grupo control. Los niveles de factor estimulante de colonias granulocito-macrofágico y stem cell factor fueron normales. Dentro de las citoquinas con acción sobre la maduración megacariocítica, tanto la interleuquina 6 como la interleuquina 11 y la eritropoyetina estuvieron normales. Los niveles de TPO antes del tratamiento no difirieron del grupo control y durante el tratamiento aumentaron de manera no significativa. Los pacientes que presentaron agregación espontánea tuvieron niveles más altos de TPO que los que no lo hicieron (p=0.049). Los niveles de las citoquinas no tuvieron relación con ninguno de los parámetros clínicos ni de laboratorio evaluados. El aumento de los niveles de IL-3 podría contribuir al incremento en la proliferación megacariocítica en este grupo. La presencia simultánea de niveles más altos de TPO y trombocitosis sería un factor predisponente para la ocurrencia de agregación espontánea en los pacientes con TE (AU)

Megakaryopoiesis and platelet production are driven by transcription factors and cytokines present in bone marrow environment. Essential thrombocythemia (ET) is a chronic myeloproliferative disorder characterized by high platelet count and megakaryocytic hyperplasia. In the present work we evaluated plasmatic levels of cytokines involved in megakaryocytic development in a group of patients with ET that were not on treatment, as well as thrombopoietin (TPO) levels before and during anagrelide treatment. The assays were carried out using ELISA techniques. Among the cytokines mainly involved in proliferation of megakaryocytic progenitors, interleukin 3 (IL-3) levels were found increased in patients compared to normal controls (p=0.0383). Granulocyte-macrophage colony stimulating factor and stem cell factor levels were normal. Interleukin 6, as well as interleukin 11 and erythropoietin (EPO), cytokines mainly related to megakaryocytic maturation, were normal. Plasma TPO levels before treatment were within the normal range and increased during treatment but the difference was not statistically significant. Patients who displayed spontaneous platelet aggregation had higher plasma TPO levels compared to those who did not (p=0.049). We did not find any relationship between cytokine levels and clinical or laboratory parameters. The high IL-3 levels seen in some patients with ET could contribute to megakaryocytic proliferation. The simultaneous occurrence of higher TPO levels and elevated platelet count could be a predisposing factor for the development of spontaneous platelet aggregation in ET patients(AU)

Niveles de citoquinas megacariocitopoyéticas en pacientes con trombocitemia esencial y su relación con características clínicas y bioquímicas / Megakaryopoietic cytokine levels in patients with essential thrombocythemia and their relationship with clinical and biochemical features

La megacariocitopoyesis y la producción de plaquetas están regidas por factores de transcripción y citoquinas presentes en el microambiente medular. La trombocitemia esencial (TE) es una enfermedad mieloproliferativa crónica caracterizada por aumento del recuento de plaquetas e hiperplasia megacariocítica. En el presente trabajo se evaluaron los niveles de las citoquinas que participan en el desarrollo megacariocítico en plasma de pacientes con TE que se encontraban sin tratamiento y los de trombopoyetina (TPO) antes y durante el tratamiento con anagrelide. Las determinaciones se realizaron por técnica de ELISA. Dentro de las citoquinas involucradas en la etapa de proliferación, los niveles de interleuquina 3 (IL-3) se encontraron aumentados en los pacientes (p=0.0383) respecto al grupo control. Los niveles de factor estimulante de colonias granulocito-macrofágico y stem cell factor fueron normales. Dentro de las citoquinas con acción sobre la maduración megacariocítica, tanto la interleuquina 6 como la interleuquina 11 y la eritropoyetina estuvieron normales. Los niveles de TPO antes del tratamiento no difirieron del grupo control y durante el tratamiento aumentaron de manera no significativa. Los pacientes que presentaron agregación espontánea tuvieron niveles más altos de TPO que los que no lo hicieron (p=0.049). Los niveles de las citoquinas no tuvieron relación con ninguno de los parámetros clínicos ni de laboratorio evaluados. El aumento de los niveles de IL-3 podría contribuir al incremento en la proliferación megacariocítica en este grupo. La presencia simultánea de niveles más altos de TPO y trombocitosis sería un factor predisponente para la ocurrencia de agregación espontánea en los pacientes con TE (AU)

Megakaryopoiesis and platelet production are driven by transcription factors and cytokines present in bone marrow environment. Essential thrombocythemia (ET) is a chronic myeloproliferative disorder characterized by high platelet count and megakaryocytic hyperplasia. In the present work we evaluated plasmatic levels of cytokines involved in megakaryocytic development in a group of patients with ET that were not on treatment, as well as thrombopoietin (TPO) levels before and during anagrelide treatment. The assays were carried out using ELISA techniques. Among the cytokines mainly involved in proliferation of megakaryocytic progenitors, interleukin 3 (IL-3) levels were found increased in patients compared to normal controls (p=0.0383). Granulocyte-macrophage colony stimulating factor and stem cell factor levels were normal. Interleukin 6, as well as interleukin 11 and erythropoietin (EPO), cytokines mainly related to megakaryocytic maturation, were normal. Plasma TPO levels before treatment were within the normal range and increased during treatment but the difference was not statistically significant. Patients who displayed spontaneous platelet aggregation had higher plasma TPO levels compared to those who did not (p=0.049). We did not find any relationship between cytokine levels and clinical or laboratory parameters. The high IL-3 levels seen in some patients with ET could contribute to megakaryocytic proliferation. The simultaneous occurrence of higher TPO levels and elevated platelet count could be a predisposing factor for the development of spontaneous platelet aggregation in ET patients(AU)

Factores de señalización: pilares fundamentales en la regeneración ósea / Signaling factors: fundamental pillars in bone regeneration

El objetivo de este estudio es que el lector se familiarice con la biología ósea y con los aportes que ha realizado la ciencia en cuanto a regeneración ósea a partir de componentes orgánicos del propio paciente como los factores de señalización. Hoy en día, a partir de biología molecular y bioingeniería se obtienen factores de crecimiento a través de recombinaciones del DNA con el fin de generar órdenes de inducción en mecanismos biológicos óseos. La terapéutica con factores de crecimiento es una técnica específica para casos específicos (AU)

Factores de señalización: pilares fundamentales en la regeneración ósea / Signaling factors: fundamental pillars in bone regeneration

El objetivo de este estudio es que el lector se familiarice con la biología ósea y con los aportes que ha realizado la ciencia en cuanto a regeneración ósea a partir de componentes orgánicos del propio paciente como los factores de señalización. Hoy en día, a partir de biología molecular y bioingeniería se obtienen factores de crecimiento a través de recombinaciones del DNA con el fin de generar órdenes de inducción en mecanismos biológicos óseos. La terapéutica con factores de crecimiento es una técnica específica para casos específicos (AU)

Accion del Clonoxinato de lisina sobre la funcion plaquetaria comparacion con otras drogas antiinflamatorias no esteroideas / Effects of lysine clonixinate on platelet function. Comparison with other non-steroidal anti-inflammatory agents

El grupo de los antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) posee como uno de sus mecanismos de acción la inhibición de la síntesis de prostaglandinas. Este efecto explica muchas de las acciones farmacológicas y de los eventos adversos observados en el uso clínico. La administración de AINEs a pacientes con trastornos de la hemostasia o en estados perioperatorios incrementan el riesgo de hemorragias por inhibición de las funciones plaquetarias. En este trabajo se estudian las modificaciones plaquetarias inducidas por el clonixinato de lisina comparadas con las del diclofenac, ibuprofeno y aspirina, mediante pruebas clásicas (recuento de plaquetas, producción de factor 3 plaquetario, agregación con diversos inductores) y procedimientos más recientes (medición de P-selectina por citometría de flujo). El clonixinato de lisina no produjo modificaciones en el número ni en la función plaquetaria cuando fue administrado a voluntarios sanos en las dosis terapéuticas usuales, cosa que sí ocurrió con las drogas control. (Au)

Activación plaquetaria por trombina / Platelet activation by thrombin

Cuando un agonista se une a su receptor específico sobre la membrana plaquetaria se inician una serie de cambios morfológicosy metabólicos que llevan al cambio de forma, agregación y secreción de contenidos granulares. La trombina, serinoproteasa multifuncional y fuerte agonosta plaquetario, tiene dos tipos de receptores sobre la membrana plaquetaria: de alta y de moderada afinidad. Este último pertenece a la familia de receptores ß2 adrenérgicos que presentan siete dominios de intramembrana, e inician la activación a través de G proteínas específicas. De esta manera se desencadenan diversos pasos metabólicos a través de varias enzimas claves. La actividad de la fosfolipasa Cß (PLCß) origina dos segundos mensajeros: Inositol 3 fosfato (IP3) que promueve la movilización de calcio del sistema tubular denso al citosol y el diacilglicerol (DG) que activa proteína quinasa C (PKC). Si bien la plaqueta no prolifera se han detectado enzimas relacionadas a oncogenes. De esta manera se han estudiado y comprendido nuevos caminos de activación. La familia de la tirosina quinasas, relacionas a la proliferación celular y oncogenes, fosforilan residuos tirosinas; en su mayoría son quinasas del tipo no receptor que se encuentran en el citosol como ser: Scr, Syk y FAK. La fosfolipasa Cy necesita la presencia de RasGAP, Rap 1b para hidrolizar fosfoinosítidos de membrana. La formación de este complejo trimérico se induce por trombina. La fosfoinositol-3-quinasa fosforila la posición 3 del anillo del inositol generando nuevos compuestos. La regulación completa de estos mecanismos de activación llevan a la respuesta hemostática plaquetaria. Su conocimiento hace posible el desarrollo de moléculas inhibitorias como terapéutica en los procesos trombóticos y tromboembólicos (AU)

Agregados de plaquetas y PMN en pacientes con reemplazo mecánico de válvula cardíaca / Circulating platelet/PMN aggregates in patients with mechanical heart valve replacement

El estudio de 50 pacientes con reemplazo mecánico de válvula cardíaca (MHVR), 50 pacientes control y 20 voluntarios sanos demostró que los pacientes MHVR presentan: a) aumento en la cantidad de agregados de plaquetas y leucocitos (MCA) en circulación, b) aumento en la expresión plaquetaria de P-selectina; c) aumento de la cantidad de fibrinógeno ligado a la superficie de plaquetas y de PMN; d) la proporción de MCA presentes en sangre entera aumentó luego de ser estimuladas con fMLP y e) la proporción de MCA formados in vitro por el estímulo con fMLP no se modificó al remover el calcio del medio. En conclusión, los resultados demuestran que los pacientes con MHVR presentan mayor MCA circulantes; que MCA parecerían ser dependientes de puentes de fibrinógeno y que los PMN de pacientes MHVR son capaces de incrementar y promover la formación y crecimiento de los MCA in vitro. (AU)

Premio "Carlos Reussi" 1996: Modificaciones de la hemostasia en la hipertensión pulmonar primaria y secundaria / Prize "Carlos Reussi" 1996: Hemostasis modifications in the primary and secondary pulmonary hypertension

El endotelio vascular reacciona frente a diferentes estímulos fisiológicos y patológicos liberando diversas sustancias junto a marcadores de la coagulación y la fibrinólisis. La patología de la hipertensión pulmonar no está dilucidada y las diferencias entre la hipertensión primaria y secundaria es un límite que depende, seguramente, de los conocimientos fisiopatológicos y de las limitaciones de los métodos de diagnósticos. Los mecanismos de la coagulación y de la fibrinólisis pueden estar implicados en la etiología de la hipertensión pulmonar y el estudio de diversos marcadores relacionados con la hemostasia pueden orientar hacia la etiología de esta entidad nosológica. Para investigar el comportamiento del endotelio vascular en condiciones basales y luego de realizar la prueba de la oclusión venosa durante 20 minutos, se midieron varios marcadores en 22 pacientes con hipertensión pulmonar primaria (11 pacientes) o secundaria (11 pacientes) y se compararon con los hallados en 15 voluntarios sanos, sin antecedentes personales o familiares de tromboembolismo. En 16 de los pacientes se determinó además, la presión de la aurícula derecha y se la correlacionó con los valores de los marcadores de trombosis según la presión de la aurícula derecha estuviera por debajo o fuera mayor de 9 mmHg. Existe un déficit fibrinolítico en los pacientes con hipertensión primaria o secundaria demostrable por la prolongación del tiempo de lisis de las euglobulinas tanto en condiciones basales (pacientes 240ñ50 minutos; normales 171ñ58 minutos; p<0,001) como luego de la prueba de la oclusión venosa, luego de una estasis de 10 ó 20 minutos. Este defecto se debe en parte, a una disminución en la producción endotelial del activador tisular del plasminógeno (t-PA) que si bien no fue estadísticamente significativa en los valores basales, pudo observarse que su liberación fue menor a los 20 minutos de la estasis venosa (pacientes 34,4ñ21,2 ng/dl; normales 54,1ñ25,8 ng/dl; p<0,02). Pero el defecto fibrinolítico se debió principalmente a un aumento en la producción por el endotelio vascular, del inhibidor 1 del activador tisular del plasminógeno (PAI-1) (concentración plasmática en pacientes 59,8ñ22,3 AU/ml; en normales 30,3ñ14,5, p=0,05)...(AU)

Rol de las plaquetas en la hemostasia / The role of the platelets in hemostasis

Luego de la injuria del vaso sanguíneo, las plaquetas son activadas, cambian su forma discoide a esférica y se adhieren al endotelio expuesto por un proceso denominado adhesión. Este proceso involucra la interacción de un componente plasmático, el FvW, y una glicoproteína específica de membrana, la GPIb, sobre la superficie plaquetaria. La adhesión es seguida por el reclutamiento de plaquetas adicionales que se adhieren entre sí (proceso denominado agregación). Este proceso comprende, entre otros elementos, la unión del fibrinógeno a receptores plaquetarios específicos GP IIb y IIIa. La adhesión y agregación comprometen la interacción con las proteínas (FG y FvW) que están presentes en el plasma y en los gránulos alfa. Las plaquetas activadas liberan el contenido de sus gránulos, por un proceso llamado secreción. Esto libera sustancias como el ADP, que pueden causar activación adicional de plaquetas. La interacción de las plaquetas con sus agonistas produce una serie de fenómenos que preceden a respuestas como la agregación o secreción. Una de las respuestas plaquetarias más tempranas es la activación de la fosfolipasa C, llevando a la hidrólisis del fosfatidilinositol y a la generación de mensajeros moleculares como el IP3y el DG. El IP3 media el aumento de la concentración del calcio ionizado en la plaqueta, lo cual se considera un factor regulador en varias respuestas plaquetarias como la movilización mediada por fosfolipasa A2 de AA libre, desde los fosfolípidos unidos a la membrana y la fosforilación de la cadena liviana de miosina, que está involucrada en la secreción plaquetaria. El DG activa a la proteinquinasa C, la cual produce la fosforilación de una proteína de 47 kD. Esta se sabe que tiene un rol sinérgico con la movilización de calcio intracelular. Otra respuesta a la estimulación plaquetaria es la liberación de AA de los fosfolípidos de la membrana y su oxigenación a tromboxano A2 por las enzimas cicloxigenasa y tromboxano sintetasa. De este modo la activación plaquetaria termina en la formación y liberación de sustancias activantes (ejemplos: ADP y TXA2), los cuales producen un mecanismo de feed-back positivo, que amplifica el proceso de activación. El rol más importante de las plaquetas en la hemostasia es su contribución a la activación de la cascada de coagulación y los fenómenos que conducen a la generación de trombina. Varias reacciones enzimáticas de la coagulación ocurren sobre la superficie plaquetaria... (AU)

Analysis of the ultrastructure of the platelets during the process of aggregation, with emphasis in the cytoskeleton and membranous changes

In this paper we presetn our findings in relation to the ultrastructural changes that are produced in the platelets during the hemostatic activation process. When the platelets are in the resting stage they have a discoid form with are a peripheral microtubular structure that encloses numerous granules, showing an open canalicular system spreading throughout the cytoplasm. Once they are activated, sequential morphological changes take place. First of all, the microtubular structure desintegrates and is replaced by a membranous pseudotubular membranous complex which fuses itself to the granules enhancing the open canalicular system which grows until it takes a sacular-canalicular appearance. Degranulation takes place at the same time. The from of the platelets becomes spherical and irregular. Later on, a microfilament organization appears, specially in the peripheral zozne projecting into the pseudopodical prolongations which are formed in the surface, giving the platelets a very irregular filopoidal form. Finally they loose all their structure becoming hyaline and vacuolated. We believe that the pseudopodical stage is the last step of the activation, prvious to the final vacuolization and destruction (AU)

Reacción de liberación en tromboastenia de Glanzmann / Release reaction in Glanzmanns thrombasthenia

Se estudiaron siete pacientes con tromboastenia de Glanzmann. Se realizó agregación plaquetaria con reacción de liberación en un agregómetro Lumi. No se observó agregación con ADP, adrenalina o colágeno. El ácido araquidónico indujo una agregación de sólo 14,9%. Con ristocetina y con factor VIII bovino la aglutinación fue marcadamente disminuida. La liberación de ATP estuvo ausente con todos los agentes agregantes excepto con ácido araquidónico que provocó una liberación normal. Se realizó curva dosis respuesta con análogo de PGH2. Con dosis de 1 micronM a 100 micronM sólo se obtuvo una mínima agregación mientras que la liberación de ATP fue normal. Los resultados confirmarían la independencia de los mecanismos de agregación y liberación. La liberación de ATP inducida por ácido araquidónico o análogo de endoperóxido no parece requerir la exposición y fijación del fibrinógeno a su receptor (AU)

Influencia de ciertas moléculas en la renovación parcial de fosfolípidos plaquetarios en Aymarás, Quechuas y europeos / Effects of certain molecules on the partial renewal of phospholipids in the platelets of Aymarás, Quechua and european population

La hipoagregabilidad plaquetaria en presencia de ciertos inductores de la agregación, hipolipidemia, hipoglicemia, la relativa disminución de magnesio y la poca predisposición a las trombosis arteriales de aymarás y quechuas, habitantes de grande alturas parecen estar relacionadas con el metabolismo fosfolipídico. En este trabajo se realizaron estudios comparativos (composición fosfolipídica e intercambio de biomoléculas polares fosfolipídicas con sus homólogas de su medio ambiente) en plaquetas de aymarás, quechuas y europeos. En efecto, se evidenció que los principales fosfolípidos se encuentran en cantidades similares en las plaquetas de estas tres poblaciones; sin embargo, la lisofosfatidilcolina está en concentraciones mayores y la esfingomielina en concentraciones menores en aymarás y quechuas en relación a las poblaciones europeas. Las moléculas marcadas colina, serina y etanolamina intercambian con sus homólogas que se encuentran en los fosfolípidos en proporciones semejantes en las tres poblaciones; la fosfatidilcolina intercambia su base con la homóloga del medio externo en mayor porcentaje que la fosfatidiletanolamina y esta última en mayor porcentaje que la fosfatidilserina. El calcio y magnesio favorecen el intercambio de moléculas fosfolipídicas incrementándose más esta renovación con el calcio que con el magnesio; el ácido etilendiamino-tetraacético, glucosa y cianuro de potasio inhiben parcialmente esta renovación (AU)