RESUMEN
Complete dissociation into subunits was attained by incubating Chinese hamster ovary (CHO)-derived or native human thyrotropin, follitropin and lutropin overnight at 37 degrees C in acetic acid. The alpha-and beta-subunits of the pituitary glycoprotein hormones were rapidly and quantitatively isolated by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). A dissociation efficiency of > 98% was obtained on the basis of mass determinations of the heterodimers and subunits carried out via mass spectrometry. CHO-derived or native subunits were isolated on a C4 column (80-90% total recovery) and characterized comparatively for purity, hydrophobicity, molecular mass and charge distribution by HPLC, mass spectrometry, sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and isoelectric focusing. Thyrotropin was used as a model for showing that, after subunit reassociation, the in vivo bioactivity of the hormone was completely restored. The method described is mild, practical, flexible, and can be adapted to dissociate microgram amounts of native or recombinant glycoprotein hormones, allowing characterization of each subunit.
Asunto(s)
Cromatografía Líquida de Alta Presión/métodos , Hormonas Glicoproteicas de Subunidad alfa/aislamiento & purificación , Hormonas Adenohipofisarias/aislamiento & purificación , Subunidades de Proteína/aislamiento & purificación , Proteínas Recombinantes/aislamiento & purificación , Espectrometría de Masa por Láser de Matriz Asistida de Ionización Desorción/métodos , Animales , Células CHO , Cricetinae , Cricetulus , Hormonas Glicoproteicas de Subunidad alfa/metabolismo , Humanos , Interacciones Hidrofóbicas e Hidrofílicas , Focalización Isoeléctrica , Hormonas Adenohipofisarias/metabolismo , Subunidades de Proteína/metabolismo , Proteínas Recombinantes/metabolismoRESUMEN
Dos explotaciones del estado de Tlaxcala (uno productor de ganado de lidia y otro productor de leche), se utilizaron para evaluar dos tipos de hormonas, la gonadotropina de suero de yegua gestante (PMSG) y la hormona folículo estimulante (FSH), en relación con la cantidad y calidad de embriones que se obtuvieron por superovulación en el programa de transferencia de embriones. Para la superovulación, se formaron dos grupos de cinco hembras de lidia; administrando al primero, FSH en dosis descendentes de 100 U.I. a 37.5 U.I. durante cuatro días consecutivos, y al segundo grupo con la administración de PMSG, en una sola dosis de 2,000 U.I. Se obtuvieron con FSH, 25 embriones transferibles, 20 degenerados o inmaduros y 15 ovocitos no fertilizados, sin embargo con PMSG, se obtuvieron cinco embriones transferibles, cinco degenerados o inmaduros y cinco ovocitos no fertilizados, lo que indica que el tratamiento con FSH, es más efectivo que el de PMSG para superovular a hembras de lidia con una probabilidad estadísticamente significativa (P < 0.05).Los 30 embriones que se obtuvieron para ser transferidos, fueron transportados a la explotación de leche, donde se llevó a cabo la transferencia de los mismos a 30 vaquillas respectivamente, mismas que fueron consideradas como receptoras. Del total de las transferencias, sólo cinco vaquillas se diagnosticaron como gestantes (16.6 por ciento), coincidiendo con embriones obtenidos de hembras superovuladas con FSH; cinco (16.6 por ciento) repitieron el estro a los 21 días de ciclo; otras cinco vaquillas (16.6 por ciento) repitieron el estro hasta los 37 días de ciclo; diez (33.3 por ciento) sólo presentaron un cuerpo lúteo en el ovario derecho y las cinco restantes (16.6 por ciento) además de presentar también un cuerpo lúteo en el ovario derecho, presentaban infección uterina. Esto se corroboró estadísticamente con una probabilidad estadística (P < 0.05).