Linfoma de Hodgkin clássico na infância. Experiência de tratamento e fatores prognósticos / Classical Hodgkin?s lymphoma in childhood. Therapeutic experience and prognostic factors

Objetivos: Estimar as taxas de sobrevida global e livre de eventos em portadores de linfoma de Hodgkin (LH), bem como identificar fatores prognósticos. Métodos: Estudo de coorte retrospectivo, incluindo variáveis demográficas, laboratoriais, tipo histológico, estadiamento e tratamento de 107 pacientes menores de 18 anos de idade admitidos no Departamento de Pediatria do Centro de Tratamento e Pesquisa Hospital do Câncer, no período entre 1985 e 1995. Resultados: Dos pacientes, 81 (76%) eram do sexo masculino e 80% da raça branca. A média de idade foi 10 anos (2 a 18 anos). Adenomegalia cervical foi a principal queixa referida (68% dos pacientes) e 55% apresentavam tempo de queixa menor que seis meses. Os subtipos EN e CM foram encontrados em 43% e 41% dos casos, respectivamente. Os estádios clínicos II e III foram os mais frequentes (33% cada um). Os sítios metastáticos mais frequentes nos EC IV foram fígado (42%) e pulmão (38%). As taxas de SG e SLE em 10 anos foram de 82,4% e 82,5%, respectivamente. O estádio clínico se mostrou como fator prognóstico significativo para as SG e SLE. A análise univariada revelou a presença de sintomas B, nível de Hb £ 9,3 g/dl, leucócitos £ 6.100 mm3, plaquetas £ 274.000/mm3 e ocorrência de recaída como fatores de mau prognóstico, enquanto a análise múltipla mostrou como fatores prognósticos independentes a presença de sintomas B e contagem de plaquetas. Conclusões: A identificação de fatores prognósticos é valiosa para a adequada estratificação dos pacientes em grupos de risco, adequando-os a esquemas de tratamento que maximizem as taxas de cura e minimizem os efeitos colaterais tardios.

Gene expression analysis of blastemal component reveals genes associated with relapse mechanism in Wilms tumour.

Wilms tumour (WT) is a paediatric kidney tumour, composed of blastemal, epithelial and stromal cells, with a relapse rate of approximately 15%. Long-term survival for patients with relapse remains approximately 50%. Current clinical and molecular research is directed towards identifying prognostic factors to define the minimal and intensive therapy for successful treatment of children with low and high risk of relapse, respectively. Blastemal component presents a high level of aggressiveness and responsiveness to chemotherapy. To identify molecular prognostic markers that are predictive of chemotherapy sensitivity in tumour relapse, blastemal-enriched samples from stage III and IV WT, from patients with relapse or without relapse, were analysed for 4608 human genes immobilised on a customised cDNA platform. These analyses revealed 69 differentially expressed genes, and the top nine genes were further evaluated by qRT-PCR in the initial WT samples. TSPAN3, NCOA6, CDO1, MPP2 and MCM2 were confirmed to be down-regulated in relapse WT, and TSPAN3 and NCOA6 were also validated in an independent sample group. Protein expression of MCM2 and NCOA6 were observed in 38% (13 out of 34) and 28% (9 out of 32), respectively, of independent stage III and IV WT blastema samples, without association with relapse. However, a significant association between MCM2 positive staining and chemotherapy as first treatment suggests the involvement of MCM2 with drug metabolism in WT blastemal cells.

Identificação de potenciais marcadores de resposta terapêutica para o tumor de Wilms através de microarray usando plataforma de cDNA contendo genes pertencentes à via do ácido retinóico / Identification of molecular markers as predictors of adverse outcome in Wilms’ tumors using cDNA microarray platforms including retinoic acid related genes

O tumor de Wilms (TW) é a neoplasia renal maligna mais freqüente na população pediátrica e apresenta atualmente, altos índices de cura mesmo para os casos de doença metastática, mostrando que estes tumores são, na maioria das vezes, sensíveis ao tratamento. Entretanto, cerca de 20% dos pacientes são refratários aos esquemas terapêuticos disponíveis, sendo a resistência quimioterápica a principal responsável pelas falhas terapêuticas. Neste sentido, os atuais protocolos terapêuticos têm sido desenhados com o objetivo de reduzir o tratamento e, com isso, os riscos de complicações secundárias para os pacientes que cursam com bom prognóstico, restringindo as terapias mais intensas ao pequeno grupo de maus respondedores. Para isto, a identificação de pacientes potencialmente bons e maus respondedores ao tratamento quimioterápico no momento do diagnóstico torna-se de grande importância por permitir uma estratificação destes indivíduos em grupos de risco de falha terapêutica e, com isso, o desenvolvimento de um tratamento mais individualizado. Dentre os tipos histológicos que compõem o TW, o componente blastematoso é o que melhor se aplica ao estudo da resposta terapêutica uma vez que é responsável pelo potencial invasivo destes tumores e pode ser tanto sensível quanto resistente à quimioterapia. No entanto, existem poucos estudos moleculares sobre a resposta terapêutica dos TW enfocando o componente blastematoso isoladamente. Estudos têm mostrado um importante envolvimento de genes relacionados ao processo de diferenciação celular e à sensibilidade ao Ácido Retinóico (AR) nos TW, o que aponta para uma possível utilização do AR no tratamento destes tumores. Desta maneira, este projeto teve como objetivo ampliar a busca por genes diferencialmente expressos em amostras de TW de componente blastematoso com diferentes perfis de resposta terapêutica, dando ênfase ao perfil de expressão de genes envolvidos com o metabolismo do AR. ...

Análise da expressão gênica do componente blastematoso do tumor de Wilms: comparação entre sensibilidade e resistência à quimioterapia / Molecular Characterization of Chemo Sensitive and Chemo Resistant Wilms` Tumor Blastemal Type Using SAGE Libraries

O tumor de Wilms (TW), apesar de raro, corresponde à neoplasia maligna primária do rim mais freqüente da infância. Exemplo de neoplasia que tem se beneficiado com a evolução do tratamento, o TW pode, atualmente, ser curado em 80 a 90% dos casos, sendo que o importante aumento da sobrevida dos portadores desse tipo de neoplasia deve-se à introdução da terapia adjuvante à remoção cirúrgica. Uma vez que os índices de cura são bastante satisfatórios, é muito provável que existam pacientes que estejam sendo expostos desnecessariamente aos efeitos deletérios de um tratamento muitas vezes excessivo, quando poderiam se beneficiar com uma terapêutica mais branda, com um menor risco de complicações secundárias sem, contudo, que isso comprometa sua sobrevida. Neste contexto, os atuais protocolos terapêuticos têm sido desenhados com o objetivo de aumentar os índices de sobrevida através da redução do tratamento para os pacientes que cursam com bom prognóstico e já vivenciam uma expectativa de cura superior a 80%, restringindo as terapias mais intensas ao pequeno grupo (10 a 20%) de maus respondedores. Algumas características histo-patológicas fazem do TW um modelo interessante para diversos estudos, pois fornecem informações sobre seu desenvolvimento e comportamento. Dentre os componentes celulares do TW, o componente blastematoso é o que melhor se aplica ao estudo da resposta terapêutica. Apesar de ser caracterizada por uma alta agressividade, esta variante apresenta, na grande maioria das vezes, uma alta sensibilidade à quimioterapia (QT), o que a associa a um ótimo prognóstico. Entretanto, em alguns casos, o componente blastematoso mostra-se resistente à quimioterapia e, por associar agressividade tumoral à resistência quimioterápica, tumores com estas características são responsáveis por grande parte das falhas terapêuticas, sendo considerados como tumores de alto risco. Neste contexto, a quimioterapia pré-operatória ganha importância, pois funciona como um teste in vivo da resposta quimioterápica para a definição do tratamento pós-operatório. No entanto, o conhecimento da resposta quimioterápica só pode ser obtido no momento cirúrgico, após a realização da quimioterapia pré-operatória, o que faz com que os portadores de tumores resistentes à quimioterapia fiquem expostos, até esse momento, à um maior risco de disseminação da doença quando poderiam receber um tratamento mais adequado já de início, seja com a utilização de outros agentes quimioterápicos ou com a ressecção tumoral. Logo, a identificação ao diagnóstico, de pacientes potencialmente bons e maus respondedores ao tratamento torna-se de grande importância por possibilitar a implementação, o mais precoce possível, de uma terapêutica mais individualizada. As diferenças entre sub-tipos tumorais, principalmente quanto ao seu comportamento, são geralmente acompanhadas por mudanças no perfil de expressão de diferentes genes, o que faz da análise de expressão gênica uma ferramenta de grande interesse, uma vez que possibilita a identificação de um perfil de expressão único para cada tumor. Nesse projeto buscamos, através da construção de bibliotecas de SAGE, a identificação de diferenças na expressão gênica entre as variantes sensíveis e resistentes à quimioterapia do componente blastematoso do TW, que possam estar relacionadas à resistência quimioterápica. Para isto, foram construídas duas bibliotecas de SAGE de tecido microdissecado de TW de componente blastematoso, uma delas proveniente de tumor com características de quimiosensibilidade e outra de tumor com características de quimioresistência, tendo sido geradas 64.365 e 62.317 tags, respectivamente. Uma segunda biblioteca de TW quimioresistente foi utilizada na análise da expressão diferencial dos genes em relação à biblioteca de TW quimiosensível. A análise dos genes diferencialmente expressos e de suas características biológicas, possibilitou a identificação de 11 genes hiper-expressos e 3 hipo-expressos nos TW quimioresistentes, envolvidos em processos biológicos relacionados, direta ou indiretamente, à resposta quimioterápica como apoptose, manutenção do citoesqueleto, proliferação e diferenciação celular, replicação e reparo do DNA e regulação do ciclo celular. A diferenciação ao diagnóstico entre blastema sensível e resistente à QT pode ser de grande utilidade na abordagem terapêutica dos TW por permitir um maior conhecimento dos mecanismos moleculares envolvidos na resposta quimioterápica destes tumores e com isso possibilitar, não só uma estratificação destes indivíduos em grupos de risco baseados na resposta quimioterápica individual para um direcionamento terapêutico precoce, como também o desenvolvimento de estratégias terapêuticas mais individualizadas e de novos alvos terapêuticos

Wilms' Tumor (WT) is the most common primary malignant neoplasia of the kidney in childhood. WT is one of the best examples of malignant tumor in which effectiveness of treatment has markedly progressed, being, nowadays, cured in 80 to 90% of all the cases. Since cure rates are satisfactory, the current treatment protocols have been designed aiming a therapy and risk of secondary effects reduction for patients undergoing good prognosis and who are experiencing cure expectancies above 80%, focusing the most severe treatment only on the smaller group (10 to 20%) of poor responders. Wilms' Tumor is an embryonal tumor classically composed of three cellular components, from whitch the blastemal component is the most suitable for therapeutic response studies. Although highly aggressive, this component usually presents great sensibility to chemotherapy leading to good prognosis. Nevertheless, the blastemal component is found in some cases to be resistant to chemotherapy and, for associating tumor aggressiveness to chemotherapic resistance, tumors of this type have been associated to most therapeutic failures, being probably responsible for a bad prognosis. Thus, to identify good and bad chemo-responders becomes of great importance for early implementation of individualized therapeutics. Differences among tumor subtypes are generally accompanied by changes in the expression profile of a variety of genes, what makes the analysis of gene expression a tool of great interest. In this study we used SAGE analysis to identify differences in gene expression among sensitive and resistant to chemotherapy variants of blastemal WT. Two SAGE libraries were constructed from microdissected blastemal WT tissues, one originated from a tumor characterized as chemo-sensitive and the other one, from a tumor characterized as chemo-resistant, from which 64,365 and 62,317 tags were generated, respectively. Data from a second chemo-resistant library, constructed by another group, were added to the analysis of differentially expressed genes in comparison to the chemosensitive library. The analysis of gene expression based on bioinformatic data and their biological characteristics allowed us to identify 11 over-expressed genes (GNG2, GNA13, CRABP2, GAS6, RNF130, IGFBP4, SPARC, MAT2A, RAP1B, HSPA8 and SERPINH1) and 3 under-expressed genes (MCM7, FSCN1 and EI24) in chemo-resistant tumors. These genes are involved in different biologic processes that could be, directly or indirectly, related to chemotherapy response as apoptosis, cytosqueleton maintenance, cellular proliferation and differentiation, DNA replication and repair and cell cycle regulation

Association of CYP3A4 genotype with detection of Vgamma/Jbeta trans-rearrangements in the peripheral blood leukocytes of pediatric cancer patients undergoing chemotherapy for ALL.

Cancer patients receiving chemotherapy are exposed to high doses of cytotoxic and genotoxic drugs which, in some cases, can lead to treatment related leukemia. Since this only occurs in a minority of patients, however, it is possible some individuals are predisposed due to genetic polymorphisms in genes for enzymes that mediate drug metabolism. To address this possibility we measured the genotoxicity of chemotherapeutic agents in patients receiving treatment for ALL by the frequency of the Vgamma/Jbeta trans-rearrangement in their peripheral blood leukocytes and compared this with CYP3A4 genotype. CYP3A4 is the most abundant of the cytochrome P450 (CYP) enzyme in the liver and intestine which contains a common -392A>G substitution in the promoter region (CYP3A4*1B allele). We found a significant increase in the frequency of rearrangements during chemotherapy only in patients homozygous for the wild type CYP3A4*1A allele. This provides a direct link between CYP3A4 genotype and susceptibility to drug genotoxicity thus strengthening the possibility that predisposition to treatment related leukemia may be measurable by simple genetic testing.