Modulation of the immune response to DNA vaccine by co-delivery of costimulatory molecules.

We have investigated methods for modulating immune responses, against herpes simplex virus (HSV), generated from DNA vaccination by co-delivery of genes encoding costimulatory molecules. A strong delayed-type hypersensitivity (DTH) reaction was induced in mice co-injected via the intradermal (i.d.) route with a eukaryotic expression plasmid encoding the CD80 molecule (pCD80) and a plasmid encoding the glycoprotein D of the HSV-2 (pgD). Furthermore, when spleen cells from these mice were cultured in the presence of inactivated HSV, a significant increase in the expression of interleukin-2 receptor (IL-2R) was observed in the CD4 subset compared with mice immunized only with pgD. Analysis of cytokine synthesis at the single-cell level indicated that CD80 genes induce a significant increase in the number of interferon-gamma (IFN-gamma)-, IL-2- and IL-4-secreting cells in the spleen. On the other hand, co-administration of the CD80 gene via the intramuscular (i.m.) route did not induce an increase in the cell-mediated immune response. When a plasmid carrying the CD86 gene (pCD86) was co-injected via the i.m. route with the pgD plasmid, a small decrease in the number of IFN-gamma-secreting cells was observed. This down-regulation of the immune response was also observed when eukaryotic expression cassettes for CD80 and for CD86 were co-administered with the pgD plasmid via the i.d. route. However, co-injection of pCD86 via the i.m. route produced a small increase in the number of IL-4-secreting cells. When immunized mice were challenged intravaginally with 100 plaque-forming units of virus, only co-injection of the CD80 gene by the i.d. route provoked an adjuvant effect compared with mice immunized with pgD alone. A reduction in the titres of HSV in vaginal washings was observed together with a decrease in the lesion score.

Presence of a 43-kDa host-cell polypeptide in purified aphthovirions.

A 43kDa cellular polypeptide (P43), which comigrates with host-cell actin in both SDS-PAGE and isoelectrofocusing slab gels, was found associated to 140 S aphthoviral particles purified from BHK 21 cells labeled with [35S]methionine prior to infection. Ultracentrifugation analysis of disrupted virions demonstrates that polypeptide P43 is not associated to VP1-3 containing 12 S subunits but remains, like viral polypeptide VP4, at the top of the sucrose gradients. In addition, in vitro iodination or trypsin treatment show that P43 is protected from the action of both procedures and therefore supports the hypothesis that host-cell polypeptide P43 is located within the viral particles.

Molecular cloning of rotavirus genome

Los rotavirus son los principales agentes responsables de las gastroenteritis virales humanas y animales. La identificación y caracterización de su genoma es necesaria para la comprensión de esta patología así como para el desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico y, eventualmente, para la preparación de antígenos virales utilizando técnicas de DNA recombinante. Estos virus poseen un genoma formado por once fragmentos de RNA doble cadena (cd). Aquí se describe la construcción de bancos de cDNA para rotavirus bovino y humano, ambos purificados de materia fecal. Los cDNA fueron preparados por síntesis in vitro utilizando transcriptasa reversa sobre los RNAs genómicos virales, previamente poliadenilados en sus extremos 3. Los cDNAs fueron ligados a un vector plasmídico y propagados en E. coli. Se obtuvieron genotecas correspondientes a los virus bovino y humano con 500 y 100 recombinantes respectivamente. Análisis de restricción de algunos clones permitieron establecer el tamaño de los insertos correspondientes a los distintos segmentos genómicos virales. Dos de estos clones fueron caracterizados, determinándose que contienen las secuencias completas de los fragmentos 10 y 8 del virus bovino. La utilización de estos clones como sondas radioactivas nos permitió diagnosticar la presencia de rotavirus en muestras de materia fecal mediante la detección de los correspondientes RNAs. Este ensayo pudo ser utilizado para la detección viral en muestras infectadas provenientes de distintas especies

Molecular cloning of rotavirus genome

Los rotavirus son los principales agentes responsables de las gastroenteritis virales humanas y animales. La identificación y caracterización de su genoma es necesaria para la comprensión de esta patología así como para el desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico y, eventualmente, para la preparación de antígenos virales utilizando técnicas de DNA recombinante. Estos virus poseen un genoma formado por once fragmentos de RNA doble cadena (cd). Aquí se describe la construcción de bancos de cDNA para rotavirus bovino y humano, ambos purificados de materia fecal. Los cDNA fueron preparados por síntesis in vitro utilizando transcriptasa reversa sobre los RNAs genómicos virales, previamente poliadenilados en sus extremos 3. Los cDNAs fueron ligados a un vector plasmídico y propagados en E. coli. Se obtuvieron genotecas correspondientes a los virus bovino y humano con 500 y 100 recombinantes respectivamente. Análisis de restricción de algunos clones permitieron establecer el tamaño de los insertos correspondientes a los distintos segmentos genómicos virales. Dos de estos clones fueron caracterizados, determinándose que contienen las secuencias completas de los fragmentos 10 y 8 del virus bovino. La utilización de estos clones como sondas radioactivas nos permitió diagnosticar la presencia de rotavirus en muestras de materia fecal mediante la detección de los correspondientes RNAs. Este ensayo pudo ser utilizado para la detección viral en muestras infectadas provenientes de distintas especies (AU)